OBSERVACIN DE LA MITOSIS EN

CLULAS VEGETALES

OBJETIVO.

Observacin e identificacin de las distintas fases de la mitosis en clulas vegetales.

FUNDAMENTO TERICO.

La mitosis es un proceso de reproduccin celular por el que, a partir de una clula madre,

se originan dos clulas que tienen exactamente el mismo nmero y tipo de cromosomas que la

madre. Es un proceso cuya caracterstica ms importante es la duplicacin del material gentico y

en el que se pueden diferenciar cuatro fases: profase, metafase, anafase y telofase. Cada una de

estas fases viene determinada por un estado y posicin diferente de los cromosomas durante el

proceso.

Fases de la mitosis.

INTERFASE: Ncleos en interfase. La cromatina aparece bastante homognea, a excepcin de zonas ms claras que corresponden a los nucleolos.

PROFASE: La cromatina comienza a condensarse. A medida que avanza este estadio desaparece el nucleolo. Loscromosomas aparecen como filamentos

delgados.

METAFASE: Cada cromosoma, integrado por dos cromtidas hermanas, se dispone con su centrmero en el plano ecuatorial.

ANAFASE: Las cromtidas hermanas se separan y comienzan a migrar hacia los polos opuestos de la clula. Ahora los cromosomas se observan formados por una

sola cromtida, con los centrmeros dispuestos hacia los polos y los telmeros

hacia el centro de la clula.

TELOFASE: No es posible individualizar los cromosomas. La cromatina comienza a descondensarse en ambos ncleos hijos.

Para observar la mitosis en clulas vegetales se utilizan tejidos meristemticos, en los que

las clulas se multiplican constantemente, por lo que ser fcil "sorprender" algunas clulas en

distintas fases mitticas.

MATERIAL

Material de

laboratorio

Microscopio.

Mechero de alcohol.

Vidrio de reloj.

Portaobjetos y cubreobjetos.

Pinzas de madera. Cuchilla o escalpelo. Aguja enmangada. Un vaso de precipitado (para enraizar la cebolla).

Reactivos

cido actico al 45 % (preparar 100 ml en frasco cuentagotas)

Orcena actica (preparar 100 ml en frasco cuentagotas)

cido clorhdrico 1 N ( preparar 50 ml en frasco cuentagotas)

Material

biolgico Cebolla (tambin se podran utilizar las races obtenidas a partir de

otros bulbos: ajos, puerros, jacintos, tulipanes, etctera).

MTODO

1. Para conseguir races en crecimiento, se coloca el bulbo de cebolla (al que previamente se habrn eliminado las races secas) sobre un vaso de precipitados (si es necesario se sujeta

mediante unos palillos). Se llena el vaso con agua hasta que toque superficialmente la zona

donde van a crecer las raicillas. Al cabo de 2 o 3 das empezarn a crecer las races.

Tambin se pueden germinar semillas, para ello, se ponen en una placa de Petri con unos discos de

papel de filtro empapados de agua. Las placas se introducen en la estufa a 23-25C hasta que se

produzca la germinacin. Cuando las races tengan 1 cm se retiran de la estufa y se eligen las

semillas no contaminadas por hongos.

2. Elige una raz joven (de unos 2 cm), lvala con agua y corta la punta a 5 mm del extremo.

3. Coloca la punta de la raz en un vidrio de reloj. Para ablandar los tejidos e iniciar la tincin, se cubre la raz con orcena actica y clorhdrico 1 N en la proporcin de 9:1, es decir, 9 gotas de

orcena por cada gota de HCI.

4. La hidrlisis debe hacerse en caliente, a unos 60 C. Para ello, calienta el vidrio de reloj a la llama del mechero, justo hasta que empiecen a desprenderse tenues vapores, TENIENDO

MUCHO CUIDADO DE QUE NO HIERVA!!. Retralo para que se enfre durante 8

minutos y repite esta operacin 3 veces, aadiendo ms orcena si hiciera falta, de modo que el

lquido cubra en todo momento la punta de la raz.

5. Saca la raicilla con la aguja enmangada y colcala sobre el portaobjetos. Con la cuchilla corta el pice a unos 2 mm. El resto se descarta ya que las clulas meristemticas se encuentran en el

extremo, bajo la cofia.

6. Aade una gota de cido actico al 45% para terminar de ablandar los tejidos.

7. Limpia con papel de filtro los posibles residuos del colorante. Coloca el cubreobjetos y realiza un squash o aplastamiento. Para ello sita la preparacin debajo de un papel de filtro doblado

y presiona con el dedo pulgar para aplastar el tejido y eliminar el exceso de colorante. Si al

retirar el papel de filtro se ve que la muestra no queda suficientemente aplastada, se puede

presionar el cubre en la zona donde est la raicilla con la parte posterior de la aguja

enmangada. En cualquier caso hay que evitar que el cubreobjetos se deslice sobre el

portaobjetos en el curso de la presin, y se debe conseguir una monocapa de clulas a travs de

la que pase la luz.

8. Observar al microscopio. Al principio con un aumento pequeo, para localizar las clulas meristemticas mejor teidas y en un solo plano. Luego, con mayor aumento, tratar de

identificar clulas en cada una de las fases mitticas.

ANLISIS Y DISCUSIN DE LOS RESULTADOS.

Has observado clulas en mitosis? Realiza un dibujo coloreado todas las fases mitticas que has observado, anotando los aumentos y explicando lo que sucede en cada una de ellas.

Qu significa estrictamente la palabra mitosis.

Por qu se ha elegido para esta prctica el pice de las races de cebolla?.

Observar al da siguiente y hallar el tanto por crecimiento de clulas que est en mitosis y el tanto por ciento de clulas que estn en las diferentes fases.

Para calcular el tanto por ciento de clulas que estn en mitosis, contaremos 50 clulas y de

esas 50 contaremos las que estn en alguna fase de la mitosis, de manera:

(Clulas que estn en alguna fase de la mitosis/50 )x 100 %

Para calcular el tanto por ciento de clulas que estn en las distintas fases de la mitosis,

contaremos unas 30 clulas que estn en alguna fase de la mitosis y procederemos de la

siguiente manera :

* Clulas que estn en profase / clulas que estn en alguna fase de la mitosis x 100

* Clulas que estn en metafase / clulas que estn en alguna fase de la mitosis x 100

* Clulas que estn en anafase / clulas que estn en alguna fase de la mitosis x 100

* Clulas que estn en telofase / clulas que estn en alguna fase de la mitosis x 100

Has observado alguna clula en proceso de citocinesis? En caso afirmativo, dibuja estas

clulas tal y como las ves con el objetivo de ms aumentos.

Has observado clulas en el proceso inicial de la divisin mittica? (Estas clulas presentan

un ncleo de aspecto reticulado y relativamente grande) En caso afirmativo, dibuja estas

clulas tal y como las ves con el objetivo de ms aumentos.