Nombre del Procedimiento

LANASEVERige a partir de:

20/09/10Cdigo:

IA-MBA-PT- 015

Recuento Total de Hongos y LevadurasVersin 01Pgina 2 de 4

Elaborado por: Jefe de SeccinRevisado por: Encargada de Calidad de SeccinAprobado por: Jefe de Seccin

1. Objetivo

Disponer de un mtodo para realizar un recuento total de hongos y levaduras.

2. Alcance

Para aplicar en muestras de alimentos.

3. Responsabilidad y autoridadJefe de Seccin: debe velar por el cumplimiento de las normas establecidas en este procedimiento.

Analistas de laboratorio: deben realizar el ensayo segn lo descrito en este procedimiento.

4. Definiciones

No aplica

5. Abreviaturas y/o Siglas

ufc: unidad formadora de colonia

6. Referencias y/o BibliografaAOAC Official Method 997.02: Yeast and Mold Counts in Foods, Dry Rehydratable Film Method (Petrifilm for Yeast and Molds)Instrucciones 3M Petrifilm Recuento Hongos y LevadurasIA-MBA-PE-009-RE- 008 Hoja de trabajo 7. Descripcin del procedimiento

7.1 Fundamento Terico

Diluciones seriadas de la muestra son sembradas en las placas Petrifilm hongos y levaduras, que es un medio de cultivo deshidratado listo para usar, el cual tiene elementos nutritivos con suplemento de antibiticos, un agente gelificante soluble en agua y un indicador que facilita el recuento.7.2 Equipo, materiales y medios de cultivo7.2.1 Equipo

Incubadora 22 C 1 C

Balanza sensibilidad 0,1 gContador de Colonias Quebec

Stomacher

Vortex

7.2.2 Materiales

Bolsas plsticas para stomacher 7 x 11 pulg (ancho x largo) con cierre de alambre

Pipetas estriles de 1 ml o 2 mlEsparcidor de Petrifilm 7.2.3 Medios de cultivoPlacas de Petrifilm 3M para recuento hongos y levadurasBuffer Butterfield7.3 Procedimiento

7.3.1 En una bolsa de stomacher estril, pesar 25 gramos de la muestra.7.3.2 Agregar 225 ml de buffer Butterfield para realizar una dilucin 1/10 (10-1)

7.3.3 Homogenizar en stomacher por 2 minutos.

7.3.4 Hacer diluciones seriadas de la muestra, tomar 1 ml de dilucin 10-1 y agregar a un tubo de 9 ml de buffer Butterfield para obtener una dilucin 10-2, realizar as sucesivamente dilucin hasta 10-3 (esto segn el tipo de alimento )7.3.5 A partir de las diluciones anteriores y sin pasarse de los 3 minutos despus de la agitacin, sembrar placas de Petrifilm Recuento Hongos y Levaduras rotuladas con la identificacin de la muestra, dilucin y la fecha del anlisis.7.3.6 Poner las placas en una superficie plana y lisa. Levantar la lmina superior y colocar 1 ml de la dilucin en el centro de la placa de Petrifilm sin hacer burbujas, tocar suavemente la superficie de la placa con la pipeta para depositar la ltima gota. Dejar caer la lmina superior suavemente7.3.7 Colocar el esparcidor en el centro de la placa y presionar suavemente para distribuir la muestra de manera uniforme. Esperar por 1 minuto para permitir que solidifique el gel.

7.3.8 Dentro de los 10 minutos posteriores a la inoculacin de las placas, incubar en posicin horizontal con el lado transparente hacia arriba; de 20 C a 25 C durante 5 das. Se puede colocar hasta 20 placas de Petrifilm una sobre otra.7.3.9 Haciendo uso del Contador Quebec, contar las colonias independientemente de su tamao, el color es variable, tener en cuenta las siguientes consideraciones:

el rango contable es de 10 ufc a 150 ufc, Si el conteo de colonias es menor de 10 en todas las diluciones, registre el conteo en la dilucin menor. Si las placas no muestran colonias reportar como menos de 1 X 101 ufc/ g o ml Si el conteo de colonias en las placas de todas las diluciones es mayor de 150 ufc puede realizar estimaciones contando el nmero de colonias en uno o ms cuadros representativos y obtener el promedio, multiplicar dicho nmero por 30 (ya que el rea de crecimiento de la placa es de 30 cm2) para obtener el recuento total por placa. Si se observa un rea de crecimiento azul en toda la placa indica que a la muestra debe de realizarse ms diluciones.NOTA:

a) Durante el pipeteo se debe ajustar el volumen poniendo la punta de la pipeta en contacto con la pared del contenedor y no dentro de la muestra. b) La pipeta se debe insertar no ms de 2,5 cm dentro de la muestra. c) Se debe agitar los tubos en vortex por 15 segundos antes de hacer cada dilucin y antes de tomar la alcuota para realizar el anlisis.7.4 Reporte de resultados7.4.1 El resultado obtenido y los clculos realizados se registran en el formulario IA-MBA-PE-009-RE- 008 Hoja de trabajo.7.4.2 Si el conteo es entre 10 y 150, reportar el nmero de colonias contadas por mililitro o gramo por el recproco de la dilucin; reportar con dos cifras significativas.8. AnexosNo aplicaPAGE Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versin impresa es una copia no controlada