nada en el mundo de las cosas vivientes es permanentemente

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Dr.C. María Isabel González GonzálezInvestigador Titular/ Profesor AuxiliarLaboratorio de Microbiología de AguasINHEM, CubaEmail: [email protected], [email protected]

Guías de la OMS y métodos de ensayo para la evaluación de la calidad microbiológica del agua.

Buenos Aires, Argentina 22-26 de septiembre, 2008

""""Nada en el mundo de las cosas vivientes es Nada en el mundo de las cosas vivientes es Nada en el mundo de las cosas vivientes es Nada en el mundo de las cosas vivientes es permanentemente constante.permanentemente constante.permanentemente constante.permanentemente constante.""""

Hans Hans Hans Hans ZinnserZinnserZinnserZinnser, 1953, 1953, 1953, 1953

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•Las consecuencias de las infecciones causadas por los microorganismos patógenos han afectado seriamente a la humanidad por ej. la peste, el cólera, la influenza.

•En el 2001, una revisión científica identificó 1 415 especies de organismos infecciosos patógenos para el hombre que incluían:

•217 viruses y priones•538 bacterias y rickettsias•307 hongos•66 protozoos•287 helmintos

• La emergencia de una enfermedad infecciosa es un complejo proceso que involucra factores sociales, biológicos y ecológicos(se han identificado 13 factores claves para esta emergencia:

1. Adaptación microbiana y mutación.

2. Vulnerabilidad humana.

3. Tiempo y clima.

4. Cambios en el ecosistema.

5. Desarrollo económico y uso de la tierra.

6. Comportamiento humano y demográfico.

7. Tecnología e industria.

8. Viajes internacionales y comercio.

9. Deterioro de las medidas de salud pública.

10.Pobreza y desigualdad social.

11.Guerras y hambrunas.

12. Pérdida de voluntad política.

13. Intento de daño.

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• A pesar de la inherente complejidad de los sistemas biológico y social involucrados en la emergencia, algunos estudios revelan lo siguiente:

� Virus , priones, bacterias y protozoos están más asociados a la emergencia de enfermedades.

� Patógenos zoonóticos comprenden el 75% de las enfermedades emergentes.

� Patógenos que están sujetos a una frecuencia relativa de mutaciones o eventos asociados al genoma (por ej. RNA virus y virus con segmentos de genoma).

� Patógenos que infectan múltiples hospederos o que infectan especies que pueden ser portadoras de agentes estrechamente relacionados, proveen una oportunidad para la recombinación (por ej. síndrome respiratorio agudo en gatos).

� Agentes transmitidos por más de una ruta o contacto indirecto (ej. agua, alimentos, contaminación ambiental, vectores).

Ejemplos de enfermedades emergentes y reemergentes.

1973: Rotavirus (diarrea infantil)1975: Astrovirus (diarrea)1976: Crytosporidium parvum (diarrea aguda y crónica)1977: Legionella pneumophila (legionelosis)1977: virus de Ebola (fiebre hemorrágica con un 80% d e letalidad)1977: Campylobacter jejuni (diarrea)1982: virus HTLV-2 (virus causante de la tricoleucemia)1983: Helicobacter pylori (úlcera péptica, cáncer gástrico)1983: Escherichia coli O157:H71983: Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH): SIDA1988 y 1989: Virus de la hepatitis E y hepatitis C1991: Virus de Guanarito (fiebre hemorrágica venezolana)1992: Vibrio cholerae O1391994: virus Sabiá (fiebre hemorrágica de Brasil)1995: virus del Herpes Humano tipo 81997: enterovirus 71 (encefalitis epidémica)1999: virus de la Influenza A (influenza

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Factores en la emergencia de enfermedades infecciosas.

•Cambios ecológicos: agricultura, represas, cambios en ecosistemas acuáticos, deforestación, reforestación, inundaciones, sequías, cambios climáticos.

Ej. Schistosomiasis (represas), fiebre del Valle, hantavirosis pulmonar

•Comportamiento humano: eventos sociales, crecimiento y migración de la población, guerras, hacinamiento, conflictos civiles, conducta sexual.

Ej. Introducción y diseminación de VIH, brotes de dengue

•Viajes y comercio internacional: viajes aéreos, transportación de personas y mercancías.

Ej. Malaria, diseminación de vectores, roedores transmisores de hantavirus, cólera, diseminación de Vibrio cholerae O139.

Factores en la emergencia de enfermedades infecciosas (Cont…)

•Desarrollo tecnológico e industrial: globalización de suministros de alimentos, transporte de tejidos y órganos, amplio uso de antibióticos, drogas inmunosupresoras.

Ej. Síndrome urémico hemolítico causado por Escherichia coli O157:H7 , hepatitis asociada a transfusiones, enfermedades oportunistas enpacientes inmunodeprimidos.

•Cambios y adaptaciones microbianas: evolución microbiana como respuesta de selección en el ambiente.

Ej. Resistencia antimicrobiana, células viables pero no cultivables.

•Crisis en las medidas de salud pública: programas de prevención reducidas o críticas, saneamiento y medidas inadecuadas en el control de vectores.

Ej. Reemergencia de tuberculosis en E. U. , cólera en campamentos de refugiados en África, reemergencia de difteria en Rusia.

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Base ambiental de la transmisión de agentes infecciosos según Feachem et al. (1983)

Propiedades relacionadas a la supervivencia ambiental

Concentración LATENCIA Dosis de patógenos ⇒⇒⇒⇒ PERSISTENCIA ⇒⇒⇒⇒ Infectivaexcretados MULTIPLICACIÓN

⇒⇒⇒⇒ IMPORTANTES PARA CONOCER EL MODO DE TRANSMISIÓN DE UN MICROORGANISMO PATÓGENO Y ESTABLECER EL CONTROL

AMBIENTAL

LATENCIA:El tiempo entre la excreción del patógeno y el tiempo en que infecta a un nuevo hospedero.

DOSIS INFECTIVA:Dosis mínima requerida de un organismo para causar la enfermedad.

SUPERVIVENCIA:Conservación de la viabilidad del organismo bajo condiciones adversas.

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PERSISTENCIA:Capacidad de un patógeno de sobrevivir en el medio por un período de tiempo.

VIABILIDAD: Propiedad que posee una parte de una población bacteriana capaz de multiplicarse cuando existan óptimas condiciones para su crecimiento.

MULTIPLICACIÓN:Posibilidad de crecimiento microbiano bajo determinadas condiciones.

Las enfermedades emergentes trasmitidas por el agua están estrechamente asociadas con su calidad microbiológica.

Ejemplos de infecciones entéricas:

Cryptosporidium parvum y Giardia lambliaFoto: HDA Lindquist, USEPA

RotavirusFoto: FP Williams, USEPA

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GastrointestinalGastrointestinalGastrointestinalGastrointestinal

BacteriaBacteriaBacteriaBacteria VirusesVirusesVirusesViruses Protozoos y helmintosProtozoos y helmintosProtozoos y helmintosProtozoos y helmintos

Ruta de Ruta de Ruta de Ruta de infeccióninfeccióninfeccióninfección

Campylobacter jejuniCampylobacter jejuniCampylobacter jejuniCampylobacter jejuniEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliSalmonella sp.Salmonella sp.Salmonella sp.Salmonella sp.Shigella sp.Shigella sp.Shigella sp.Shigella sp.Vibrio choleraeVibrio choleraeVibrio choleraeVibrio choleraeYersinia enterocoliticaYersinia enterocoliticaYersinia enterocoliticaYersinia enterocoliticaAeromonas sp.Aeromonas sp.Aeromonas sp.Aeromonas sp.Helicobacter pyloriHelicobacter pyloriHelicobacter pyloriHelicobacter pylori

AdenovirusAdenovirusAdenovirusAdenovirusEnterovirusEnterovirusEnterovirusEnterovirusAstrovirusAstrovirusAstrovirusAstrovirusRotavirusRotavirusRotavirusRotavirusNorovirusNorovirusNorovirusNorovirusSapovirusSapovirusSapovirusSapovirusVirus de Hepatitis AVirus de Hepatitis AVirus de Hepatitis AVirus de Hepatitis AVirus de Hepatitis EVirus de Hepatitis EVirus de Hepatitis EVirus de Hepatitis E

Crystoporidium parvumCrystoporidium parvumCrystoporidium parvumCrystoporidium parvumEntamoeba hystoliticaEntamoeba hystoliticaEntamoeba hystoliticaEntamoeba hystoliticaGiardia intestinalisGiardia intestinalisGiardia intestinalisGiardia intestinalisCyclospora cayetanensisCyclospora cayetanensisCyclospora cayetanensisCyclospora cayetanensisToxoplasma gondiiToxoplasma gondiiToxoplasma gondiiToxoplasma gondiiIsospora Isospora Isospora Isospora bellibellibellibelliDracunculus medinensisDracunculus medinensisDracunculus medinensisDracunculus medinensisFasciolaFasciolaFasciolaFasciola sp.sp.sp.sp.

Vías de transmisión de algunos microorganismos patógenos en aguas.

Por ingestión de agua.

RespiratoriaRespiratoriaRespiratoriaRespiratoria

BacteriaBacteriaBacteriaBacteria VirusesVirusesVirusesViruses Algunos otros agentes en Algunos otros agentes en Algunos otros agentes en Algunos otros agentes en situaciones de alta exposiciónsituaciones de alta exposiciónsituaciones de alta exposiciónsituaciones de alta exposición


LegionellaLegionellaLegionellaLegionella pneumophilapneumophilapneumophilapneumophilaMycobacteriumMycobacteriumMycobacteriumMycobacterium sp.sp.sp.sp.(no tuberculoso)(no tuberculoso)(no tuberculoso)(no tuberculoso)

EnterovirusEnterovirusEnterovirusEnterovirusDiversas infecciones Diversas infecciones Diversas infecciones Diversas infecciones viralesviralesviralesvirales


Por inhalación y aspiración de bioaerosoles

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Piel, membranas de las mucosas, heridas, ojosPiel, membranas de las mucosas, heridas, ojosPiel, membranas de las mucosas, heridas, ojosPiel, membranas de las mucosas, heridas, ojos

BacteriaBacteriaBacteriaBacteria VirusesVirusesVirusesViruses ProtozoosProtozoosProtozoosProtozoos y y y y helmintoshelmintoshelmintoshelmintos


BurkholderiaBurkholderiaBurkholderiaBurkholderia pseudomalleipseudomalleipseudomalleipseudomalleiMycobacteriumMycobacteriumMycobacteriumMycobacterium sp. (no sp. (no sp. (no sp. (no tuberculoso)tuberculoso)tuberculoso)tuberculoso)Aeromonas sp.Aeromonas sp.Aeromonas sp.Aeromonas sp.Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosaLeptospiraLeptospiraLeptospiraLeptospira sp.sp.sp.sp.


Por contacto

AdenovirusAdenovirusAdenovirusAdenovirusEnterovirusEnterovirusEnterovirusEnterovirus

AcanthamoebaAcanthamoebaAcanthamoebaAcanthamoeba sp.sp.sp.sp.SchistosomaSchistosomaSchistosomaSchistosoma mansoniimansoniimansoniimansoniiNaegleriaNaegleriaNaegleriaNaegleria fowlerifowlerifowlerifowleri

Cianobacterias tóxicas de importancia actual en aguas de consumoCianobacterias tóxicas de importancia actual en aguas de consumoCianobacterias tóxicas de importancia actual en aguas de consumoCianobacterias tóxicas de importancia actual en aguas de consumo....

Especies tóxicasEspecies tóxicasEspecies tóxicasEspecies tóxicas

Microcystis , Anabaena , Planktothrik Microcystis , Anabaena , Planktothrik Microcystis , Anabaena , Planktothrik Microcystis , Anabaena , Planktothrik Nostoc, Hapalosiphon, Anabaenopsis Nostoc, Hapalosiphon, Anabaenopsis Nostoc, Hapalosiphon, Anabaenopsis Nostoc, Hapalosiphon, Anabaenopsis

MicrocystinasMicrocystinasMicrocystinasMicrocystinasHígadoHígadoHígadoHígado

Fuente: Cyanosite

Órgano primarioÓrgano primarioÓrgano primarioÓrgano primario Tipo de cianotoxinasTipo de cianotoxinasTipo de cianotoxinasTipo de cianotoxinas

NodulariaNodulariaNodulariaNodularia HígadoHígadoHígadoHígado NodularinaNodularinaNodularinaNodularina

Anabaena, Planktothrik, AphanizomenonAnabaena, Planktothrik, AphanizomenonAnabaena, Planktothrik, AphanizomenonAnabaena, Planktothrik, AphanizomenonAnabaenaAnabaenaAnabaenaAnabaenaLyngbya, Schizothrix, PlanktothrikLyngbya, Schizothrix, PlanktothrikLyngbya, Schizothrix, PlanktothrikLyngbya, Schizothrix, PlanktothrikCylindrospermopsis, Aphanizomenon, Cylindrospermopsis, Aphanizomenon, Cylindrospermopsis, Aphanizomenon, Cylindrospermopsis, Aphanizomenon, Umezakia, Raphidiosis curvataUmezakia, Raphidiosis curvataUmezakia, Raphidiosis curvataUmezakia, Raphidiosis curvataLyngbyaLyngbyaLyngbyaLyngbyaAnabaena, Aphanizomenon, Lyngbya, Anabaena, Aphanizomenon, Lyngbya, Anabaena, Aphanizomenon, Lyngbya, Anabaena, Aphanizomenon, Lyngbya, CylindrospermopsisCylindrospermopsisCylindrospermopsisCylindrospermopsis

Sistema nerviosoSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nervioso

PielPielPielPielHígadoHígadoHígadoHígado

Piel, tracto intestinalPiel, tracto intestinalPiel, tracto intestinalPiel, tracto intestinalSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nervioso

AnatoxinaAnatoxinaAnatoxinaAnatoxina----aaaaAnatoxinaAnatoxinaAnatoxinaAnatoxina----a (S)a (S)a (S)a (S)AplysiatoxinaAplysiatoxinaAplysiatoxinaAplysiatoxina

CylindrospermopsinaCylindrospermopsinaCylindrospermopsinaCylindrospermopsina

LyngbyatoxinaLyngbyatoxinaLyngbyatoxinaLyngbyatoxina----aaaaSaxotoxinasSaxotoxinasSaxotoxinasSaxotoxinas

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Calidad del agua:

La calidad del agua se define con relación su uso o actividad en que se emplee (por ej. aguas de consumo, aguas recreativas, aguas residuales y grises para la agricultura o acuicultura, aguas envasadas, aguas mineromedicinales para hidrología médica, aguas para hemodiálisis).

Para evaluar los cambios que las diferentes aplicaciones del agua pueden originar en su calidad, se emplean parámetros físicos, químicos y biológicos, también llamados indicadores de calidad de agua.

Criterio de calidad de agua:

Es la relación cuantificable de exposición-efecto basada en evidencias científicas entre el nivel de algún indicador de calidad de agua y los riesgos potenciales para la salud asociados con su uso.

Guía de calidad del agua:

Es una densidad máxima sugerida del indicador en el agua que está asociada con riesgos inaceptables para la salud.

Norma:

Obtenida de los criterios y las guías nacionales e internacionales y es de obligatorio cumplimiento.

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Organismos Valor guíOrganismos Valor guíOrganismos Valor guíOrganismos Valor guíaaaa

•Toda agua de consumo Toda agua de consumo Toda agua de consumo Toda agua de consumo

Escherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coli o bacterias No debe detectarse eno bacterias No debe detectarse eno bacterias No debe detectarse eno bacterias No debe detectarse encoliformescoliformescoliformescoliformes termotolerantes ninguna muestra de 100mltermotolerantes ninguna muestra de 100mltermotolerantes ninguna muestra de 100mltermotolerantes ninguna muestra de 100ml

•Agua tratada que entra al sistema de distribuciónAgua tratada que entra al sistema de distribuciónAgua tratada que entra al sistema de distribuciónAgua tratada que entra al sistema de distribución

Escherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coli o bacterias No debe detectarse en o bacterias No debe detectarse en o bacterias No debe detectarse en o bacterias No debe detectarse en coliformes termotolerantes ninguna muestra de coliformes termotolerantes ninguna muestra de coliformes termotolerantes ninguna muestra de coliformes termotolerantes ninguna muestra de 100ml100ml100ml100ml

•Agua tratada en el sistema de distribuciónAgua tratada en el sistema de distribuciónAgua tratada en el sistema de distribuciónAgua tratada en el sistema de distribución

Escherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coli o bacterias No debe ser detectado en o bacterias No debe ser detectado en o bacterias No debe ser detectado en o bacterias No debe ser detectado en coliformes termotolerantes coliformes termotolerantes coliformes termotolerantes coliformes termotolerantes ninguna muestra de 100mlninguna muestra de 100mlninguna muestra de 100mlninguna muestra de 100ml

Valores Guías en agua potable para verificar la calidad microbiológica

Escherichia coli por 100 mL de agua = 0

Muy difícil en estas situaciones por lo que se aplica esta clasificación según el grado de afectación a la salud. Por ejemplo:

�0 Escherichia coli/100ml, valor aceptable

�1-10 Escherichia coli/100ml, valor tolerable

�10-100 Escherichia coli/100ml, requiere tratamiento

�>100 Escherichia coli/100ml, inadecuado para el consumo sin

tratamiento apropiado.

Valor guía recomendado para la evaluación de lacalidad del agua en situaciones de emergencias y desastres.

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Límites permisibles para aguas de hemodiálisis

¿Que son los indicadores microbiológicos?

Microorganismos cuyas densidades o concentraciones en el agua pueden ser cuantitativamente relacionadas con el riesgo a la salud que implica ésta.

Un indicador microbiológico de la calidad del agua es generalmente (no necesariamente bacteria) el que ha entrado al agua al mismo tiempo que las heces, pero es más fácil de medir que el amplio rango de microorganismos de riesgo para la salud.

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�Debe ser empleado para la evaluación de la eficacia de los procesos del tratamiento.

Ej. indicador de un proceso, indicador de la desinfección, turbiedad como un indicador de la filtración.

�Debe ser usado con la finalidad que en sus orígenes jugaron los indicadores, como medida de la contaminación fecal.

Ej. índice de la contaminación fecal, conductividad en aguas subterráneas como un índice de deterioro.

Término Indicador

Término Índice

Características que debe tener un indicador:

• Estar ausente en aguas no contaminadas y presentes cuando la fueEstar ausente en aguas no contaminadas y presentes cuando la fueEstar ausente en aguas no contaminadas y presentes cuando la fueEstar ausente en aguas no contaminadas y presentes cuando la fuente de nte de nte de nte de microorganismos patógenos está presente.microorganismos patógenos está presente.microorganismos patógenos está presente.microorganismos patógenos está presente.

•No deben multiplicarse en el ambiente.No deben multiplicarse en el ambiente.No deben multiplicarse en el ambiente.No deben multiplicarse en el ambiente.

•Estar presentes en mayor número que los microorganismos patógenoEstar presentes en mayor número que los microorganismos patógenoEstar presentes en mayor número que los microorganismos patógenoEstar presentes en mayor número que los microorganismos patógenos.s.s.s.

•Responder a las condiciones del ambiente natural y a los procesoResponder a las condiciones del ambiente natural y a los procesoResponder a las condiciones del ambiente natural y a los procesoResponder a las condiciones del ambiente natural y a los procesos de tratamiento s de tratamiento s de tratamiento s de tratamiento de manera similar que los microorganismos patógenos.de manera similar que los microorganismos patógenos.de manera similar que los microorganismos patógenos.de manera similar que los microorganismos patógenos.

•Fáciles de aislar, identificar y enumerar por métodos convencionFáciles de aislar, identificar y enumerar por métodos convencionFáciles de aislar, identificar y enumerar por métodos convencionFáciles de aislar, identificar y enumerar por métodos convencionales.ales.ales.ales.

•Incrementar su número al aumentar el grado de contaminación en eIncrementar su número al aumentar el grado de contaminación en eIncrementar su número al aumentar el grado de contaminación en eIncrementar su número al aumentar el grado de contaminación en el medio.l medio.l medio.l medio.

•Aplicables a cualquier tipo de agua.Aplicables a cualquier tipo de agua.Aplicables a cualquier tipo de agua.Aplicables a cualquier tipo de agua.

•Mayor y más predecible el tiempo de supervivencia que los patógeMayor y más predecible el tiempo de supervivencia que los patógeMayor y más predecible el tiempo de supervivencia que los patógeMayor y más predecible el tiempo de supervivencia que los patógenos.nos.nos.nos.

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Características que debe tener un indicador:

Actualmente se adicionan los siguientes:Actualmente se adicionan los siguientes:Actualmente se adicionan los siguientes:Actualmente se adicionan los siguientes:

•Las pruebas para su determinación deben ser baratas para el procLas pruebas para su determinación deben ser baratas para el procLas pruebas para su determinación deben ser baratas para el procLas pruebas para su determinación deben ser baratas para el procesamiento de esamiento de esamiento de esamiento de numerosas muestras.numerosas muestras.numerosas muestras.numerosas muestras.

•No deben ser microorganismos patógenos (reducir el riesgo a la sNo deben ser microorganismos patógenos (reducir el riesgo a la sNo deben ser microorganismos patógenos (reducir el riesgo a la sNo deben ser microorganismos patógenos (reducir el riesgo a la salud de los alud de los alud de los alud de los analistas).analistas).analistas).analistas).

Los resultados negativos del indicador empleado en una muestra dLos resultados negativos del indicador empleado en una muestra dLos resultados negativos del indicador empleado en una muestra dLos resultados negativos del indicador empleado en una muestra de agua no e agua no e agua no e agua no garantizan que la ausencia de microorganismos patógenos.garantizan que la ausencia de microorganismos patógenos.garantizan que la ausencia de microorganismos patógenos.garantizan que la ausencia de microorganismos patógenos.

La detección de un microorganismo patógeno no está normalmente aLa detección de un microorganismo patógeno no está normalmente aLa detección de un microorganismo patógeno no está normalmente aLa detección de un microorganismo patógeno no está normalmente asociado a un sociado a un sociado a un sociado a un indicador ni tampoco indica la ausencia o presencia de otros patindicador ni tampoco indica la ausencia o presencia de otros patindicador ni tampoco indica la ausencia o presencia de otros patindicador ni tampoco indica la ausencia o presencia de otros patógenos.ógenos.ógenos.ógenos.

Ejemplos de varios métodos relacionados con el análisis de microorganismos.

Crecimiento selectivo en agar, conteo de unidades formadoras de colonias

Filtración pormembrana

Bacteria

Tinción inmunológica/conteo de quistes fluorescentes

Filtración porpor cartuchos/Separación inmunomagnética

Protozoosparásitos

Viruses

Cultivo de células/efecto citopático, conteo de unidades formadoras de placa

Detección/Enumeración

Adsorción-eluciónConcentración

Grupos de microorganismos

Métodos

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Métodos para la identificación y cuantificación de indicadores y patógenos bacterianos en aguas.

MÉTODOS CONVENCIONALES

* CUALITATIVO Ausencia/ Presencia { Hisopo de Moore{ Cultivo directo a) Volumen/volumen

b) Dilucionesc) Concentración

* CUANTITATIVO Tubos Múltiples: NMP { a) Diluciones decimalesb) Concentración por

Filtro de membranaTierra de diatomeas

Filtro de membrana: UFC { Concentración

10-1 10-2Peptonasalina

20 ml

Diluciones

0,01 ml

0,1 ml1 ml10 ml100 ml

1 ml1 ml 1 ml10 ml100 ml

FILTRACIÓN POR MEMBRANA (FM)

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Podría ser mejor el recobrado de microorganismos dañados o estresados en algunas circunstancias

El costo de los recursos es alto en algunos paísesLos recursos están disponibles en la mayoría de los países

No es aplicable a aguas turbiasAplicable a todo tipo de agua

Capaz de ser adaptado en el campoNo se puede adaptar a trabajo de campo

Los resultados son obtenidos directamente por conteo de colonias (alta precisión)

Los resultados son obtenidos indirectamente por aproximación estadística (baja precisión)

Menos sensibleMás sensible

Requiere menos cristaleríaRequiere más cristalería

Requiere menos medio de cultivoRequiere más medio de cultivo.

Menos laboriosoMás laborioso

Más rápida, resultados cuantitativos o presuntivos alrededor de 8 horas.

Más lenta, requiere 48 horas para observar la positividad

Técnica de Filtración por membranaTécnica de tubos múltiples

Comparación de dos métodos de ensayo más utilizados en la vigilancia de la calidad microbiológica del agua.

Conteo total de bacterias heterótrofas.

�Bacterias que requieren el carbono orgánico para su crecimiento. Incluyen la flora autóctona y la alóctonapresente.

�Se utiliza fundamentalmente la efectividad del proceso de tratamiento de agua.

�Es una medida del número de organismos con posible importancia sanitaria por ej. en aguas de hemodiálisis

�Podría ser una medida de la interferencia posible a la técnica de coliformes fecales con medios de cultivo con lactosa.

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Biofilm o biopelicula

Colonias de bacterias asentadas sobre las superficies de los circuitos hidráulicos, protegidas por un ecosistema de precipitados minerales y una matriz polisacárida mucosa extracelular, que se reproducen y generan en lugares de estancamiento. Su presencia se asocia a fuerte contaminación bacteriana >1000 UFC/ml. Es fuente activa de endotoxinas y otros derivados bacterianos biológicamente activos. Es resistente a la mayoría de los

desinfectantes.


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Son comunidades bacterianas englobadas en una matriz de exopolisacáridos producida por las bacterias y adheridas a una superficie viva o inerte.

En la naturaleza constituyen un modo de crecimiento protegido que permite la supervivencia de las bacterias en un medio hostil.

Las estructuras que forman estas microcolonias contienen canales por los que circulan los nutrientes, y en las distintas partes del biofilm las células expresan diferentes genes, como si fueran un tejido organizado.

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Conteo de bacterias heterótrofas

�Verificar efectividad de los procedimientos de limpieza y desinfección.

� Determinar el origen de la contaminación durante el proceso de diálisis.

�Verificar condiciones óptimas de almacenamiento y transporte del agua utilizada para alimentar el sistema de diálisis.

Grupo Coliforme

�El término coliforme fue usado por primera vez en los años 1980 y descrito como bacilos curvos aislado de heces humanas.

�Pertenecen taxonómicamente a la familia Enterobacteriaceae y comprende algunos géneros y especies.

�De los coliformes normalmente presentes en el intestino de los animales de sangre caliente, las bacterias de la especie E.coli son la mas numerosas y las que raramente crecen en el ambiente.

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Distribución del grupo coliforme en heces de humanos y animales.

4.0 (A)

7.4 (B)

2.0 (A)94.0 (A)

92.6 (B)

Heces animales

1.7 (A)1.5 (A)94.1 (A)

96.8 (B)

Heces humanas

Enterobacter/Citrobacter

Klebsiella sp.E.coli

Porcentaje de coliformes totalesTipo de muestra

(A) Dufour (1977)(B) Allen y Edberg (1995)

Coliformes totales

Representación gráfica del grupo coliforme

Coliformes fecales (actualmente termotolerantes)

Escherichia coli(≈95% de los coliformes en las heces)

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Coliformes totales (CT)

No son un grupo taxonómico

Bacterias Gram Negativas

No esporulados

Anaerobios facultativos

Fermentadores de la lactosa con producción de ácido y

gas a 36±1º C en 24-48h

Hábitat: Tracto gastrointestinal de animales de sangre

caliente (son bacterias entéricas,) además son comunes en

otros ambientes como en suelos, vegetales, etc.

Ej.: Escherichia coli, Enterobacter spp., Citrobacter spp.,

Klebsiella spp.

Coliformes termotolerantes o fecales (CF)

No son un grupo taxonómico (Subgrupo de lo CT)


No esporulados


Fermentadores de la lactosa con producción de ácido y gas

a 36±1º C en 24-48h y a 44.5 ±0.2 º C en 24 h

Hábitat: bacterias entéricas propias de las heces (E. coli,...)

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Escherichia coli

Especie bien definida taxonómicamente


No esporulados


Fermentadores de la lactosa con producción de ácido y gas

a 36±1º C en 24-48h y a 44.5 ±0.2 º C en 24 h

Característica de heces de animales homeotermos

Crecimiento (Turbidez)

Crecimiento (Turbidez)

Caldo Dextrosa azida (Presuntiva)Medio de Pfizer(Confirmativa)

Enterococos(Incubar 35°C ± 0.5°C)

Producción de gas y ácido

Caldo EC (Confirmativa)

Coliformes termotolerantes(Incubar 44.5°C ± 0.2°C)



Caldo Lactosado o Caldo Lauril Sulfato (Presuntiva)

Caldo Bilis verde Brillante(Confirmativa)

Coliformes totales(Incubar 35°C ± 0.5°C)

Reacción PositivaMedio de CultivoIndicador Bacteriano

Coliformes y enterococos-Tubos múltiples de ferment ación

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100,10,1m-Enterococos(Slanetz –Bartley)

Enterococos(Incubar 35°C ± 0.5°C)

24- 48 h

100,10,1m-FCColiformes termotolerantes

(Incubar 44.5°C ±0.2°C)

100,10,1Agar Endo LES o Medio m-Endo

Coliformes totales(Incubar 35°C ± 0.5°C)

Volumen inoculado (mL)

Medio de CultivoIndicador Bacteriano

Coliformes y enterococos-Filtración por membrana

� m-FC

� m-Enterococos

� m-Endo LES

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Ejemplos de género y especies del Grupo Coliforme dentro de la familia Enterobacteriaceae

Citrobacter diversusCitrobacter freundii

Citrobacter

Enterobacter cloacaeEnterobacter aerogenes

Enterobacter

Klebsiella pneumoniaeKlebsiella oxytoca

Kebsiella

Escherichia coliEscherichia

EspecieGénero

Estreptococos fecales y Enterococos

No forman un grupo taxonómico bien definido

Incluyen especies de los géneros Enterococcus y Streptococcus

Ej.: E. faecalis, E. faecium, E. durans, E. hiriae, E. avium,

E.gallinarum, E. cecorum y Streptococcus bovis, S. equinus,

S.intestinalis, S. alactolyticus, S. hyointestinalis y S.acidominimus

Los Enterococos según el criterio de Sherman´s

� Crecimiento a 35-45º C en 48h en medios estandarizados

� Capacidad de crecer a 10 y 45 ºC, a pH 9,6, en presencia de 6,5%

NaCl y de resistir a 60º C durante 30 min

� Crecimiento a pH 9.6

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�Están aún en etapa de desarrollo.

�La baja concentración de patógenos en el agua dificultan la sensibilidad de los métodos de detección.

�Sólo una pequeña parte del gran número de patógenos presentes son detectados.

�El análisis de las muestras de aguas para patógenos requiere de un laboratorio especializado con personal altamente calificado yentrenado y apropiadas medidas de bioseguridad.

�Aunque algunos patógenos pueden ser examinados rápidamente, la mayoría de los métodos de muestreo y detección necesitan varios días para verificar el resultado.

Métodos para detección de microorganismos patógenos.

1. Métodos de filtración.Adsorción/ elución de virusUltrafiltración

2. Métodos inmunológicosSeparación inmunomagnética (IMS)

3. Floculación.Adsorción de virus con hidróxido de aluminio.Floculación de quistes de Cryptosporidium con carbonato de calcio.

4. CentrifugaciónFlujo continuo de centrifugado Separación/aislamiento por densidad de gradiente

5. Citometría de flujo.6. Técnicas de preenriquecimiento y enriquecimiento.7. Otra técnicas (hidroextracción, extracción por solventes).

Métodos para el análisis de microorganismos patógenos.

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1. Cultivo de bacterias.� Técnica del Número Más Probable (NMP) en medio líquido.� Prueba de Presencia/Ausencia en medio líquido.� Placa vertida.� Filtración por membrana.� Enriquecimiento en medio líquido +confirmación o aislamiento

en medio sólido.

2. Cultivo en células hospederas.� Cultivo de fagos.� Cultivo de virus (ej. Enterovirus)� Cultivo de protozoos sobre medios artificiales (ej. Entamoeba

hystolitica y Giardia lamblia).

Técnicas de cultivo de patógenos (más convencionales).

Género Salmonella

•Microorganismos pertenecientes a la familia Enterobacteriaceaeque tienen las siguientes características:

•Bacilos Gram Negativos, catalasa y oxidasa negativo.

•Anaerobios facultativos, usualmente fermentan la glucosa con producción de gas y de sulfuro de hidrógeno.

•Citrato es utilizado como única fuente de carbono.

•Decarboxilan la lisina y la ornitina.

•La mayoría de los diferentes serotipos (más de 2 000) están presentes en animales domésticos y salvajes y pueden ser reservorios de la salmonelosis humana

Patógenos bacterianos más frecuentes determinados en aguas.

26

Flujograma de la técnica de Salmonella sp.

Muestra de agua

Siembra directa Hisopo de Moore Filtración por membrana

Agua peptonada bufferada (APB)

18-24h/35-37 °C

Caldo Rappaport Vassiliadis (RV) radio inóculo: 1/100Caldo Tetrationato Muller Kauffmann radio inóculo: 10/100

24h/42 °C

Agar Verde BrillanteAgar Salmonella Shigella

Agar XLD

18-24h/37 °C

Agar Kligler

18-24h/37 °CCultivos con imagen presuntiva

Pruebas bioquímicas y serológicas


Género Vibrio.

•Microorganismos pertenecientes a la familia Vibrionaceae que

tienen las siguientes características:

•Bacilos Gram negativos, no esporulados, rectos o curvos de

0.5-0.8 µµµµm de ancho y 1.5-3.0 µµµµm de largo.

•Aerobios y anaerobios facultativos.

•Móviles por flagelos monotricos o lofotricos.

•La mayoría de las especies son oxidasa y catalasa positiva y

fermentan la glucosa con producción de ácido (sin gas).

•Generalmente halofílicos y su hábitat natural en ambientes

marinos y estuarinos.

27

Modelo hipotético de transmisión de Vibrio cholerae en la naturaleza.

Características físicasy químicas del agua

•temperatura•luz solar•tensión de O2 disuelto•pH•lluvia•salinidad y otros•nutrientes químicos

Características biológicas

•afloramiento de algas•afloramiento de fitoplancton

Afloramiento de zooplancton(¿entra en los no cultivables ?)

V. cholerae V. cholerae V. cholerae V. cholerae viable pero no cultivable en lacolumna de agua adherido a partículas.(¿relación de simbiosis o comensal?)

Transmisión de V. cholerae V. cholerae V. cholerae V. cholerae al hombre poringestión de agua con copépodoscolonizados u otros vectores.

Retorno de V. cholerae V. cholerae V. cholerae V. cholerae alagua por vía fecal.

Características físicasy químicas del agua

•temperatura•luz solar•tensión de O2 disuelto•pH•lluvia•salinidad y otros•nutrientes químicos

Características biológicas

•afloramiento de algas•afloramiento de fitoplancton

Afloramiento de zooplancton(¿entra en los no cultivables ?)

V. cholerae V. cholerae V. cholerae V. cholerae viable pero no cultivable en lacolumna de agua adherido a partículas.(¿relación de simbiosis o comensal?)

Transmisión de V. cholerae V. cholerae V. cholerae V. cholerae al hombre poringestión de agua con copépodoscolonizados u otros vectores.

Retorno de V. cholerae V. cholerae V. cholerae V. cholerae alagua por vía fecal.

La fisiología y ecología de Vibrio cholerae en aguas

está estrechamente ligada a tres factores principales:

(1)la relación de temperatura y salinidad,

(2) adherencia a superficies

(3) colonización de la macrobiota con quitina.

28

Flujograma de la técnica de Vibrio cholerae.

Muestra de agua

Siembra directa Hisopo de Moore Filtración por membrana

Agua peptonada alcalina (APA)6-8 h y 18-24h/35-37 °C

Agar TCBSAgar MacConkey

18-24h/37 °C

Agar Kligler

18-24h/37 °CCultivos con imagen presuntiva

Pruebas bioqu²<<<as y serológicas

Flujograma para el aislamiento de Vibrio cholerae en plantas acuáticas.

Plantas acuáticas

Pesar 10gr de la muestra (porción apropiada) yHomogeneizar con 90ml de solución salina estéril

Enriquecimiento de 10ml en 5ml de APA (3X)

Incubar por 6-4 horas

Estriar sobre agar TCBS y agar TTGA

Incubar por 18-24 horas a 37ºC

Picar colonias sospechosas y subcultivar sobre placa s de AG

Identificación preliminar por la prueba de oxidasa

Pruebas bioquímicas y serológicas para Vibrio cholerae

29

Género Aeromonas (Familia Aeromonadaceae)

•Bacterias en forma de bacilos Gram negativos, no esporulados, de


•Aerobios - anaerobios facultativos.

•Móviles por flagelos monotricos o lofotricos.


fermentan la glucosa con producción de ácido.

•Tienen requerimientos nutricionales simples.

•Su hábitat natural es en ambiente dulceacuícola.


Infecciones asociadas al género Aeromonas

•Causa infecciones en animales de sangre fría y caliente.

•En humanos son agentes causales de infecciones intestinales (diarrea, la más frecuente manifestación clínica) y extraintestinales (infecciones en heridas).

•En peces y algunos animales de sangre fría, pueden causar infecciones severas tales como la furunculosis.

30

Taxonomía.•Género: Aeromonas (Stanier 1943)•Familia: Aeromonadaceae (Colwell et al. 1986)•Orden: Aeromonadales (Martin-Carnahan y Joseph, 2005)•Especies: •Aeromonas allosaccharophila (Martinez-Murcia et al. 1992, sp. nov.)•Aeromonas caviae (ex Eddy 1962, Popoff 1984, sp. nov.) A. punctata subsp. caviae (Scherago, 1936)•Aeromonas culicicola (Pidiyar et al. 2002, sp. nov.) Aeromonas veroniibiovar sobria (Hickman-Brenner et al. 1988).•Aeromonas encheleia (Esteve et al. 1995).•Aeromonas enteropelogenes (Schubert et al. 1991 sp. nov.) Aeromonas trota (Carnahan et al. 1992).•Aeromonas eucrenophila (Schubert y Hegazi 1988, sp. nov.)•Aeromonas hydrophila (Chester 1901, Stanier 1943)•Aeromonas hydrophila subsp. anaerogenes (Schubert 1964)•Aeromonas hydrophila subsp. dhakensis (Huys et al. 2002)A•Aeromonas hydrophila subsp. hydrophila (Chester, 1901)•Aeromonas hydrophila subsp. proteolytica (Merkel et al. 1964)•Aeromonas hydrophila subsp. ranae (Huys et al. 2003 subsp. nov.)•Aeromonas ichthiosmia (Schubert et al. 1991, subsp. nov.)•Aeromonas jandaei (Carnahan et al. 1992, sp. nov.)•Aeromonas media (Allen et al. 1983, sp. nov.)•Aeromonas molluscorum (Minana-Galbis et al. 200, sp. nov.)•Aeromonas popoffii (Huys et al. 1997, sp. nov.)

Flujograma de la técnica de Aeromonas sp.

Muestra de agua

Hisopo de Moore Filtración por membrana

Agua peptonada alcalina

6-8h,18-24h/35-37°CAgar BBGS según Nishikawa o agar ADA

Agar MacConkey

18-24h/37°C

Agar Kligler

18-24h/37°CCultivos con imagen presuntiva

Pruebas bioquímicas

31

Género Plesiomonas

•Bacterias en forma de bacilos Gram negativos, no esporulados, de


•Aerobios y anaerobios facultativos.

•Móviles por flagelo polar.


fermentan la glucosa con producción de ácido (sin gas)

•Tienen requerimientos nutricionales simples.



Taxonomía.

Plesiomonas shigelloides corrig. (Bader 1954) Habs y Schubert 1962

Anteriormente perteneciente a la familia Vibrionaceae, propuesta actualmente dentro de la familia Enterobacteriaceae como un miembro del género Proteus o como un género solo con una única especie (Plesiomonas shigelloides).

Conocida también como:

Pseudomonas shigelloidesAeromonas shigelloidesFergusonia shigelloides

32

Algunas pruebas de diferenciación de los géneros Vibrio , Aeromonas y Plesiomonas .

--NT+dddd6% de NaCl

++NT+++++3% de NaCl

++---dddCrecimiento en:

0% de NaCl

dR&NTSSSSSO/129 150µµµµg � disco

+------dOrnitina decarboxilasa

+d---d-+Lisina decarboxilasa

++---++-Arginina dihidrolasa

++--+-++Nitrato

++-++-++Oxidasa

87654321PRUEBAS

GRUPOS

Simbolos : + todas las cepas son positivas,- todas las cepas son negativas, d diferentes características de cepa a cepa, S sensible, R resistente, NT no probada.Grupo 1 : V. cholerae , V. mimicus , V. parahaemolyticus , V. alginolyticus , V. harveyi , V. campbellii , V. fischeri y V. marinus .Grupo 2: V. fluvialis, V. furnissii, V. anguillarum, V. diazotrophicus, V. splendidus biovar 1, V. tubiashii, V. costicola, V. nereis, V. damsela, V. proteolyticus, V.orientalis y V. aestuarianus.Grupo 3 : V. metschnikovii .Grupo 4 : V. hollisae , V. natriegens , V. splendidus biovar II, V. nigripulchritudo y V. logei.Grupo 5 : V. ordalii .Grupo 6 : V. gazogenes .Grupo 7 : A. hydrophila , A. caviae , A. sobria y A. salmonicida .Grupo 8 : P. shigelloides .& algunas cepas de A. salmonicida son sensibles.Nota: Todas las cepas de Aeromonas fermentan la glucosa.Fuente : Lee JV, DonovanTJ. Vibrio , Aeromonas and Plesiomonas . En: Isolation and Identification of Microorganisms of Medical and Veterinary Importance. United Kingdom: Society for Applied Bacteriology, 1985:13-33.

Género Legionella

•Bacterias en forma de bacilos.


•Se multiplica entre 20-45°C y se destruye a 70 °C.

•Comprende 40 especies, siendo Legionella pneumophila la

mas común asociada a enfermedad.

•Posee una característica biológica importante que es la de

crecer intracelularmente en protozoos y en macrófagos

humanos.

33

Características de la enfermedad de los Legionarios y la fiebre de Pontiac.

No se conocen factores de riesgo

Factores de riesgo: fumadores, cáncer, enfermedades renales, diabetes mellitus

Período de incubación de aprox. 36 h

Período de incubación de 2-10 días

Similar a una influenza (no neumónica)

Neumonía progresiva, algunas veces fatal

Fiebre de PontiacEnfermedad de los Legionarios

Mayor reservorio de Legionella sp.: AGUA

Medio de transmisión primario:

Inhalación de bioaerosoles (en forma de gotas que d eben ser de una medida entre 1-5 µµµµm)

Fuentes conocidas para la transmisión de Legionella sp. por bioaerosoles.

Condensadores de torres de evaporación y enfriamiento, piscinas de recreación y de hidroterapia, saunas, spasOrnamentales de agua ornamentales, humedificadores

No potable(incluidas las aguas mineromedicinales)

Duchas, grifos, equipos de terapia respiratoria

Potable

Medios de transmisiónTipo de agua

34

Ejemplos de pruebas bioquímicas y serológicas.

Caldo para la fermentación de azúcares(sacarosa, L-arabinosa y D-manosa; manitol e inositol)

Caldo de tolerancia a sales

Prueba serológica con antisueroPrueba de la cuerda

Método de concentración por hisopo de Moore

35

Método de concentración por filtración por membrana

XAgar Chromocult enterococos (Merck)

XAgar Chromocult coliformes ES (Merck)

XAgar Chromocult coliformes (Merck)

XCaldo Fluorocult Lauril Sulfato (Merck)

XCaldo LMX según Manafi y Ossmer(Merck)

XCaldo READYCULT enterococos (Merck)

XCaldo READYCULT coliformes (Merck)

XCaldo Enterolert (IDEXX)

XCaldo Colilert (IDEXX)

Estreptococos fecales/ enterococos

Coliformes totales/ Escherichia coli

Medio de cultivo (Compañía)

Medios de cultivo cromogénicos y fluorogénicos útiles para la evaluación de la calidad microbiológica del agua en situaciones de emergencias y desastres

36

Métodos moleculares para la detección e identificación.

Biología molecular: disciplina bioquímica que estudia las moléculas de ácidos nucleicos: ácido desoxirribonucleico (ADN) y ácido ribonucleico (ARN)

�Hibridación del ADN.

�Endonucleasas de restricción.

�Amplificación de ácidos nucleicos (ADN o ARN).

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR), la más empleada en la detección de bacterias y sus productos (ej. Escherichia coli, Vibrio cholerae, Legionellapneumophila) y protozoos.�Clonación molecular(fragmento de restricción insertado en un vector ej fago)

�Secuenciación nucleotídica del ADN.

�Fluorescencia por hibridización in situ (FISH) para detección de bacterias y protozoos.

Fuente:www.udc.es Fuente:www.tododrogas.net Fuente:www.ciencia-hoy.retina.ar

Células viables y no cultivables de Vibrio cholerae por microscopía de epifluorescencia.

37

Métodos novedosos para la detección e identificación.

�Análisis por láser escáner con sustratos fluorogénicos.

(ej. Detección de coliformes y E. coli por ChemScan®, Chemunex®, Colifast®)

�Biosensores.

(ej. poseen tres componentes primarios: ópticos, técnicas de inmunoensayo y pruebas químicas para la detección de patógenos específicos).

�Microchip de DNA.

(ej. para la detección de indicadores y patógenos con la detección de DNA por GeneChip®).

Fuente:www.acg.no Fuente: sid.gsi.co.jp Fuente:www.consumaseguridad.com Fuente:privatewww.essex.ac.uk

Colifast ChemScan Biosensores Genechip

Microbiológicas (coliformes totales y fecales)InglaterraDELAgua

Microbiológicas (coliformes totales y fecales)Francia,Estados Unidos

Millipore Intertech

Físico - Químicas (Aluminio, Amonio, Calcio, Hierro, Fosfato, Manganeso, Nitrito, Nitrato, pH, conductividad, turbiedad, oxígeno disuelto, etc.)

InglaterraHach Company

Físico - Químicas (Aluminio, Amonio, Calcio, Hierro, Fosfato, Manganeso, Nitrito, Nitrato, pH, conductividad, turbiedad, oxígeno disuelto, etc.)Microbiológicas (coliformes totales y fecales)

InglaterraPotopak Limited

Físico - Químicas (Aluminio, Amonio, Calcio, Hierro, Fosfato, Manganeso, Nitrito, Nitrato, pH, conductividad, turbiedad, oxígeno disuelto, etc.)Microbiológicas (coliformes totales y fecales)

InglaterraELE Internacional LTD

Físico - Químicas (Aluminio, Amonio, Calcio, Hierro, Manganeso, Nitrito, Nitrato, pH, etc.)

InglaterraBDH Lab Supplies

DeterminacionesPaísCompañía

Algunos equipo portátiles para el monitoreo de la calidad del agua muy útiles en situaciones de emergencia y desastres

38

Qué es una norma?�Es un documento establecido por consenso y aprobado por un organismo reconocido que establece, para usos comunes y repetidos, reglas, criterios o características para las actividades o sus resultados, que procura la obtención de un nivel óptimo de ordenamiento en un

contexto determinado.

�Surge como resultado de la actividad de normalización y es un documento que establece las condiciones

mínimas que debe reunir un producto o servicio para que sirva al uso al que está destinado.

Fuente:www.crid.or.cr

Características de la norma:

�Es un documento público, pueden ser referenciadas, consultadas y

utilizadas.

�Su aplicación es voluntaria pero en la mayoría de los casos, las

autoridades pueden dictar leyes o reglamentos obligatorios que

exigen dichas normas.

�Ayudan a mejorar la calidad, la seguridad y la competencia.

�Una norma técnica o estándar es un especificación que reglamenta

los procesos y productos para garantizar la interoperabilidad.

�Una norma de calidad es una regla o directriz para las actividades,

diseñada con el fin de conseguir el grado óptimo de orden en el

contexto de calidad.

�Las normas están en constante revisión y este proceso se comienza

cada vez que existan observaciones sólidas a incorporar.

39

Organismos internacionales que más frecuentemente se emplean sus guías y normativas para la calidad del agua y los métodos de ensayo

Siglas empleadas:

ISO: International Standardization Organization (Suiza)

APHA: American Public Health Association (Estados Unidos)

SCA: Standing Committee of Analyst of Environment Agency (Rei no Unido)

EPA: Environment Protection Agency (USA)

WHO: World Health Organization (Suiza)

CEE: Comisión Económica Europea

Normas de métodos de ensayo asociados a la evaluación de la calidad microbiológica del agua.

ISO 7899-1 (1984) Water quality-Detection and enumeration offaecal streptococci-Part 1: Method by enrichment in liquidmedium.ISO 7899-2 (1984) Water quality-Detection and enumeration offaecal streptococci-Part 2: Method by membrane filtration.

Estreptococos fecales

Estreptococos fecales

ISO 7899-2 (2000) Water quality-Detection and enumeration of intestinal enterococci -Part 2: Membrane filtration method.

Enterococos fecales

ISO 7899-1(1998) Water quality-Detection and enumeration of intestinal enterococci in surface and waste water-Part 1: Miniaturized method (Most Probable Number) by inoculation in liquid medium.

Enterococos fecales

ISO 9308-2 (1990) Water quality-Detection and enumeration of coliforms organisms, thermotolerant coliforms organisms and presumptive Escherichia coli-Part 2: Multiple tube (most probable number) method.

Bacterias coliformes, termotolerantes y Escherichia coli

ISO 9308-1 (2000) Water quality-Detection and enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria-Part 1: Membrane filtration method.

Bacterias coliformes, termotolerantes y Escherichia coli

NormaMicroorganismos

40

Normas de métodos de ensayo asociados a la evaluación de la calidad microbiológica del agua (cont..)

ISO 8360-2 (1998) Water quality-Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa-Part 2: Membrane filtration method.

Pseudomonasaeruginosa

ISO 8360-1 (1998) Water quality-Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa-Part 1: Method by enrichment in liquid medium.

Pseudomonasaeruginosa

ISO 6461-1 (1986) Water quality-Detection and enumeration of the spores of sulfite-reducing anaerobes (clostridia)-Part 1: Method by enrichment in liquid medium.

Bacterias esporuladasreductoras de sulfito (Clostridios)

ISO 6461-2 (1986) Water quality-Detection and enumeration of the spores of sulfite-reducing anaerobes (clostridia)-Part 2: Method by membrane filtration method.

Bacterias esporuladasreductoras de sulfito (Clostridios)



ISO 6340 (1995) Water quality-Detection and enumeration of Salmonella.

Salmonella sp.

ISO 6222 (1999) Water quality-Enumeration of culturablemicroorganisms-Colony count by inoculation in a nutrient agar culture medium.

Microorganismoscultivables

ISO/DIS 11731-2 Water quality-Detection and enumeration of Legionella-Part 2: Direct membrane filtration for waters with low bacterial counts.

Legionella sp.

ISO 11731 (1998) Water quality-Detection and enumeration of Legionella Legionella.

Legionella sp.


41


ISO 10705-4 Water quality-Detection and enumeration of bacteriophages- Part 4: Enumeration of bacteriophages infecting Bacteroides fragilis.

Fagos de Bacteroides fragilis

ISO/DIS 10705-3 Water quality-Detection and enumeration of bacteriophages- Part 3: Validation of methods for concentration of bacteriophages from water.

Concentración de bacteriófagos

ISO 10705-2 (2000) Water quality-Detection and enumeration of bacteriophages-Part 2: Enumeration of somatic coliphages.

Colifagos somáticos

ISO 10705-1 (1995) Water quality-Detection and enumeration of bacteriophages- Part 1: Enumeration of F-specific RNA bacteriophages.

Fagos F-RNA



ISO/CD 17994 Water quality-Criteria for the establishment of equivalence between microbiological methods.

Pruebas de equivalencia de métodos de cultivo microbiológicos

ISO 9998 (1991) Water quality-Practice for evaluating and controlling microbiological colony count media used in water in water quality tests.

Evaluación de conteo de colonias

ISO TR 13843 (2000) Water quality-Guidance on validation of microbiological methods.

Validación de métodos de cultivo microbiológicos

ISO 7704 (1985) Water quality-Evaluation of membrane filters used microbiological analyses.

Evaluación de filtros de membrana

CEN/TC 230 CEN/TC230/WG3/TGç. Enterovirus (Nr.12), Working Document, Draft Method, March 2000.

Enterovirus


42

Medios de cultivo normalizados más utilizados para la determinación de coliformes, coliformes termotolerantes y Escherichia coli (NMP).

XAgar nutriente

XAgar MacConkey

XCaldo manitol lauril triptosa

XMedio de glutamatomodificado con minerales

XXMedio A1

XXXXCaldo lactosa bilis verde brillante

XXXMedio EC

XMedio de lactosa glutamato

XCaldo lactosado lauriltriptosa

XCaldo MacConkey

XXCaldo lactosado

NCEPASCAAPHAISO 9308-2

Medios de cultivo

Medios de cultivo normalizados más utilizados para la determinación de coliformes, coliformes termotolerantes y Escherichia coli (FM).

XAgar nutriente

XCaldo de lauril sulfato para membrana

XXXAgua de triptona

XAgar nutriente con MUG

XAgar MI

XAgar mEndo

XAgar mTEC

XAgar lauril sulfato

XXAgar m-EndoLES

XXMedio mFC con 1% de ácido rosólico

XCaldo Teepol con enriquecimiento de membrana

XAgar lactosa con Tergitol 7 o Teepol

XAgar TTC con Tergitol 7 o Teepol

EPASCAAPHAISO 9308-1Medios de cultivo

43

Medios de cultivo normalizados más utilizados para la determinación de estreptococos fecales (enterococos)(FM).

XXXAgar bilis esculina

XXCaldo de infusión de cerebro-corazón

XXAgar de infusión de cerebro-corazón

XAgar bilis esculina azida

XXAgar hierro esculina

XAgar mEI

XAgar Kanamicina esculina azida

XXAgar m-Enterococcus

XXAgar m-E

XXAgar Slanetz-Bartley con 1% de TTC

XAgar KF con 1% de TTC

EPASCAAPHAISO 7899-2Medios de cultivo

44

Medios de cultivo normalizados más utilizados para la determinación de Pseudomonas aeruginosa (NMP).

XXXXCaldo asparagina

XAgar leche con cetrimida

XXAgar King-F

XXAgar King-P

XCaldo malaquita

XXXCaldo acetamida

XCaldo asparagina con etanol

NCEPASCAAPHAISO 8360-1

Medios de cultivo

Medios de cultivo normalizados más utilizados parala determinación de Pseudomonas aeruginosa (FM).

XAgar leche con cetyltrimetilamoniobromuro

XAgar Pseudomonas

XXXXAgar leche

XXXAgar m-PA

EPASCAAPHAISO 8360-2

Medios de cultivo

Medios de cultivo más recomendados para la determin ación de indicadores bacterianos con sustratos cromogénicos y fluorogénicos.

XAgar mTEC (Difco) (EPA)

XAgar Chromocult (Merck) (Oxoid) (ISO)

XAgar MI (EPA)

XAgar nutriente con MUG (EPA)

XCaldo LMX según Manafi y Ossmer(Merck)

XCaldo READYCULT enterococos (Merck)

XCaldo READYCULT coliformes (Merck)

XCaldo Colilert (P/A) (EPA)

Estreptococos/ enterococos

Coliformes/ Escherichia coli

Medios de cultivo

45

Medios de cultivo más utilizados en la determinació n de algunos patógenos bacterianos aislados en aguas. Salmonella sp y Salmo nella typhi.

XXCaldo tretationato

XXXAgar tres azúcares (TSI)

XXXCaldo urea

XAgar urea

XXXAgar hierro lisina

XAgar Kligler

XXXXAgar bismuto sulfito

XXAgar xilosa lisina desoxicolato(XLD)

XXXXAgar verde brillante con rojo fenol

XXXCaldo selenito cistina

XXCaldo Rappaport Vassiliadis

XXXXAgua de peptona bufferada

EPASCAAPHAISO-6340 Medios de cultivo

Medios de cultivo más utilizados en la determinació n de algunos patógenos bacterianos aislados en aguas. Vibrio cholerae.

XXAgar nutriente

XXCaldo de decarboxilación de aminoácidos según Moeller

XAgar Kligler

XXXAgar triptona soya

XAgar MacConkey

XXXAgar TCBS

XXXAgua de peptona

SCAAPHAOPSMedios de cultivo

46

Medios de cultivo más utilizados en la determinació n de algunos patógenos bacterianos aislados en aguas. Aeromonas sp.

XXAgar nutriente

XAgar MacConkey

XAgar tres azúcares

XMedio de Kaper

XAgar hierro lisina

XMedio de oxidación fermentación según Hugh & Leifson

XXXAgar ampicillin dextrina

XXXAgua de peptona bufferada

EPASCAAPHAMedios de cultivo

¨Dicen que el agua será imprescindiblemucho más necesaria que el petróleo, los imperios de siempre por lo tantonos robarán el agua a borbotones, los regalos de boda serán grifos,agua darán los lauros de poesía,el Nóbel brindará una cataratay en la bolsa cotizarán las lluvias,los jubilados cobrarán goteras,los millonarios dueños del diluviovenderán lagrimas al por mayor,un capital se medirá por litros,cada empresa tendrá su remolino,su laguna prohibida a los foráneos,su museo de lodos prestigiosos,sus postales de nieve y de rocíos,y nosotros los pálidos sedientoscon la lengua reseca brindaremoscon el agua on the rocks”

Neruda

47

Gracias

nada en el mundo de las cosas vivientes es permanentemente

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