microbiología del agua - microred · mar rojo microorganismos bentónicos •algunos forman ......

Cátedra Microbiología

Microbiología del agua

• Virus

• Bacterias

• Algas

• Protozoos

• Hongos

microscópicos

Habitan en:

• Aguas naturales

• Aguas dulces

• Estuarios

• Aguas saladas

• Aguas termales

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Los microorganismos del agua son::

INDÍGENAS TRANSITORIOS

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Característicos de la masa de

agua natural

Entran al agua en forma

intermitente, procedentes de:

•El aire

•El suelo

•Procesos industriales

•Procesos domésticos

PAPEL DE LOS MICROORGANISMOS EN EL AGUA


Reciclaje de nutrientes por microorganismos


Papel de los microrganismos

en el reciclaje nutrientes

• Son la base de las cadenas tróficas

acuáticas

• Reciclan la materia haciéndola disponible

para otros organismos • Mineralización

• Producción de proteína microbiana

• Mayor productividad por metro cuadrado

en el agua que en el suelo.

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Bacterias que causan

cambios organolépticos en

el agua


Bacterias que obstruyen conducciones de agua

Principalmente:

ferrobacterias

y sulfobacterias


Ferrobacterias

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Filamentosas

Oxidan carbonato ferroso Hidróxido férrico

4FeCO3 + O2 + 6H2O 4FeOH + 4CO2 + 40 cal Soluble insoluble

precipita en la

membrana

celular

En medio ácido + ferrocianato de K azul de prusia

Hábitat de las ferrobacterias:

• Grandes depósitos

geológicos de Fe

• Canalizaciones y

conducciones

donde

frecuentemente

produce

obstrucciones

• El FeOH

precipitado forma

costras en el

interior de tuberías

de hierro en aguas

ricas en este

elemento

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Crenothrix, Leptothrix, Gallionella

Obtienen energía

oxidando Fe++ (soluble)

Fe+++ (insoluble)

Coloración pardo bermellón en el agua

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Ferrobacterias:

• Leptothrix

• Crenothrix

• Gallionella

Sphaerotilus:

• No es ferrobacteria

obligada. Oxida

también Mn++Mn+++

• Tampoco es autótrofa

obligada

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Sulfobacterias

• Origen: hidrotermal y volcánico

• Características de aguas poluídas ricas en H2S

• Intervienen en procesos de descomposición orgánica: • Oxidando el H2S

• Liberando E para biosíntesis

Thiothrix, Beggiatoa (anaerobia

facultativa, principal causante de obstrucciones) H2S + 1/2 O2 ________________> S + H2O + 41 cal

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Bacterias que producen color en

el agua

Bacterias que al oxidar Fe++ y Mn++

producen indirectamente alteraciones

de color en el agua


La producción de color en el agua es importante en

abastecimientos provenientes de pozos

El hierro contenido en sus aguas promueve la actividad oxidante de

las bacterias

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Bacterias que producen olor y sabor en el agua

Origen del olor y del sabor:

bacterias y otros microorganismos

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Productos de descomposición de bacterias anaerobias:

• Mercaptanos

• Gas sulfhídrico

• Subproductos aminados

• Ácidos grasos, etc

Olor intenso en el agua

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El sabor Se acentúa con la cloración, especialmente si es producido por compuestos fenólicos

• Desechos

• Microorganismos (bacterias)

Sabor en el agua

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Actinomycetos:

Promueven la descomposición de:

• Plantas acuáticas

• Algas (Anabaena, Oscillatoria, Aphanizomenon, diatomeas)

Utilizan su nitrógeno a expensas del cual aumentan sus poblaciones

Olor y sabor en el agua

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• Streptomyces produce olor a tierra en:

• el agua

• el suelo

• en cultivo

• El cloro libre intensifica este olor

• Producen olor y sabor en el agua:

• Crenothrix (ferrobacteria)

• Beggiatoa (Sulfobacteria)

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Origen de la

microbiota

microbiana en el

agua


Origen de la flora microbiana

• La microbiota del

agua atmosférica es

proporcionada por el

aire y es lavada con

la lluvia en las

partículas

• La microbiota de las

aguas subterráneas

es afectada por

procesos de filtración

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• La microbiota de las

aguas

superficiales

llega al agua

periódicamente

• del aire

• del arrastre

superficial de tierra

• de vertimientos

domésticos e industriales

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Distribución de los microorganismos en el

medio acuático

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• Los

microorganismos

pueden estar a

cualquier

profundidad

• Hasta en las fosas

oceánicas

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• Las capas superiores y los sedimentos

del fondo albergan las mayores

poblaciones de microorganismos,

particularmente en aguas profundas


Microorganismos

planctónicos

• Floración: crecimiento

excesivo, explosivo

• Dan color aparente al

agua: rojo, pardo,

verde, ambar,

amarillo

• Oscillatoria erytrea

Mar Rojo

Microorganismos

bentónicos

• Algunos forman

biopelículas

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Microorganismos planctonicos y bentónicos ( fotosíntéticos y heterótrofos )

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Planton: Fotótrofas y hetrótrofas

Epiliton: heterótrofas bentónicas sobre partículas

Bentos: Fotótrofas y hetrótrofas

Bentos: hetrótrofas, muchas anaeróbicas

ZONA

LITORAL

ZONA PROFUNDA Sedimentación

ZONA LIMNÉTICA

Nivel de compensación Oxidantes del Azufre

Sistema fluvial


Aguas bien

aireadas,

metabolismo

oxidativo. Gran

variedad cualitativa

pero no cuantitativa

de especies

Dominio de las

algas verde-

azuladas,

flagelados y

bacterias

micro

aerófilas.

Producción de CH4,

FeS. Etapas

terminales: ausencia

de eucariotas

excepto protozoos

anaerobios (Bodo

spp.), y

ocasionalmente

metazoos como

Tubifex spp. Muy

pocas especies.

Potencial de

oxidoreducción

Predominio de bacilos

gram-negativos anaerobios

facultativos. Reducción de

N03-. Reducción de Mn y de

Fe(lll) puede liberar P

soluble. Poblaciones de

diatomeas y clorofíceas. Cesa la nitrificación, producción de H2 y

productos de la fermentación. Reducción de

S04 2- Afloramiento de bacterias fototróficas

que crecen con H2S.Producción de FeS a

partir de Fe (lll) reducido.

Predominio completo de anaerobios y

desaparición de microaerófilos y la mayoría

de anaerobios facultativos

Hay una diversidad de pruebas para intentar

supervisar la calidad del agua

No se utiliza la

enumeración de

bacterias de cada

comunidad, porque:

• Es difícil por los métodos

sofisticados que requiere

• La comunidad bacteriana

varían mucho y rápido

ante cambios

ambientales.

• Es más sencillo

identificar y

enumerar

pequeños

invertebrados

bénticos o

algas perifíticas.

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Aguas residuales

La polución tiene lugar cuando compuestos o

microorganismos indeseables penetran en el

ambiente acuático y cambian sus propiedades y

con ellas se pierde el equilibrio produciéndose

una variación en la distribución y composición

de la comunidad.

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• Los microorganismos pueden contribuir a la contaminación de diversas maneras:

• Produciendo enfermedades

• Creando una biomasa estéticamente desagradable

• Generando metabolitos tóxicos. Cáte

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Enfermedades producidas por microorganismos acuáticos


Bacterias:

Coliformes

Estreptococos fecales

Especies de Bacillus,

Proteus, Clostridium,

Thiothrix, Thiobacillus,etc.

• Patógenos

causantes de

infecciones del

tracto intestinal

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En áreas de polución

doméstica predominan:

• Los microorganismos en el

agua pueden afectar la

salud de personas,

animales, plantas y otros

organismos


Organismos patógenos transportados por el agua

Bacterias Virus Protozoos

Escherichia Enterovirus EntamoebaSalmonella Hepatitis A AcanthamoebaShigella Adenovirus GiardiaVibrio Coxsackie A y B SchistosomaLeptospira ReovirusMycobacterium Parvovirus


Si hay fecales en el agua de consumo,

hay posibilidad de:

Fiebre tifoidea:

• Salmonella tiphi,

otras salmonelas

• Transmisión por

alimento y

eventualmente por

el agua

Cólera

• Vibrio cholerae

• Endémica en Asia:

niños

• Epidémica en

América: adultos y

niños

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Disentería amebiana:

• Entamoeba hystolitica

• agua y alimentos

Disentería bacilar o shiguelosis:

• Shiguella spp

• Mayor susceptibilidad en niños

de 1 - 4 años

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Hepatitis A o hepatitis viral infecciosa

• Persona a persona

• Alimentos

• Agua

• Moluscos contaminados

Parasitosis:

• Tenias

• Áscaris

• Tricocéfalos

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Otras enfermedades:

• Poliomielitis

• Gastroenteritis viral y por

Escherichia coli

• Dermatomicosis

En aguas recreacionales con más de

2500 coliformes/100ml, pueden aparecer

infecciones de ojos, nariz, oídos y garganta Cátedra Microbiología

Propagación de virus humanos en el agua

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Excretas humanas

HOMBRE

Impregnación de

suelos

Abono con lodos de

depuradoras

Aguas

residuales

Mares Ríos y lagos Agua de riego Agua

subterránea

Mariscos Recreación Agua potable Verduras Aerosoles

Contaminación por microorganismos patógenos

• Los microorganismos patógenos se encuentran en todas las aguas residuales

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La utilización indiscriminada de los mismos cursos fluviales para:

• baños

• agua de bebida

• y eliminación de residuos

Pone la población en peligro

A no ser que los cauces de agua se examinen y traten minuciosamente.

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Para evitar las enfermedades existen:

• Procedimientos para examinar el agua y determinar su calidad microbiológica.

• Métodos de purificación del agua para proporcionar agua potable y segura

• Métodos de tratamiento de aguas residuales antes de su eliminación o reutilización C

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Procedimientos para examinar el agua y

determinar su calidad microbiológica.

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El aislamiento de un microorganismo patógeno constituiría la prueba irrefutable de peligro

potencial

Pero pueden estar en número tan exiguo que su aislamiento sea difícil y no adecuado como

sistema de "alarma".

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Los procedimientos actuales de análisis del agua se basan en que:

• la mayoría de los microorganismos patógenos alcanzan cauces como resultado de la contaminación fecal

Detectarla a bajos niveles es la mejor garantía para preservar la potabilidad

de las reservas de agua.

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• La contaminación fecal puede ser demostrada mediante la detección en el agua de bacterias que están presentes en números muy elevados en el contenido intestinal del hombre y de otros animales.

• "Prueba de la Determinación de Coliformes”:

• Única prueba microbiológica estatutaria vigente en muchos países del mundo C

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• Un examen bacteriológico estricto no garantiza completamente que la muestra de agua se encuentre necesariamente libre de otro tipo de patógenos que tengan características de supervivencia distintas.

• Un incremento general en la incidencia de un patógeno exigiría rápidamente el uso de otros análisis más complicados.

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Para qué se hacen los análisis de agua:

• Evaluar la calidad de las aguas de

abastecimiento doméstico a nivel urbano y

rural

• Evaluar la calidad de las aguas costeras y

aguas dulces destinadas a recreación

• Detectar la influencia de los pozos sépticos,

ubicados en la cercanía de la línea de costa

y de ríos y quebradas

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• Analizar los aportes de

los pluviales a la carga

bacteriana del cuerpo

receptor

• Cuantificar la influencia

de descargas puntuales

importantes, como

plantas de tratamiento

de líquidos cloacales e

industriales.

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Microorganismos indicadores de la calidad del agua

En el análisis rutinario de aguas no se aislan patógenos porque:

• Podrían no aparecer en muestras de laboratorio pues:

• Tienen acceso en forma esporádica

• No sobreviven en el agua por mucho tiempo

• Necesitan mucho tiempo para detectarse

• Si están en número muy pequeño no se pueden detectar por métodos de laboratorio

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Se usan microorganismos indicadores:

• Su presencia en el agua prueba que está polucionada con material fecal de personas o animales de sangre caliente

• Se encuentran sólo en aguas polucionadas

• Y cuando están presentes en el agua indican que hay patógenos C

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Método de determinación del número de gérmenes

Número de gérmenes:

Número de unidades formadoras de colonias totales o de una especie determinada en un gr o en 1 ml de material investigado bajo condiciones

de cultivo definidas

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• Métodos de determinación del número de gérmenes:

YMétodos del número más probable (NMP).

YMétodo de filtro de membrana

• Método de la placa vertida

• Método de título

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Método del número más probable • Paralelamente varias

series decimales de dilución (mínimo tres) en medio de cultivo líquido.

• Número de tubos con crecimiento NMP, tablas de McRady, 100 ml de muestra

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Colimetría

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Prueba Presuntiva

Inoculación en caldo lactosado

Prueba Confirmativa

Resiembra a partir de los tubos positivos caldo lactosado

Producción de gas + No producción de gas - Fin de la prueba

Siembra de muestras + en EMB Colonias pequeñas, con centro oscuro y brillo metálico +

O Siembra en tubos con CLVBB Producción de gas +

Terminación de la prueba

Colonias más típicas de siembra por estría EMB

Coloración de Gram: Bacilos Gram - no

esporulados

Método de filtro de membrana

• Filtro estéril sobre unidad de filtración de 0.45

• Se filtra cierto volumen de agua: bacterias quedan retenidas

• El filtro se coloca sobre soporte absorbente saturado con el medio adecuado. Incubar en cajas de petri especiales que permiten acomodar el soporte y el medio adecuado

• Desarrollo de colonias sobre el filtro

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Ventajas:

• Examinar grandes volúmenes de agua

• Más rápidas que técnicas de tubo

• Estyimación cuantitativa de tipos de bacterias (coliformes, etc.)

Limitación

• Aguas con muchos sólidos disueltos o suspendidos

NMP = #coliformes x 100/ vol filtrado

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Contaminación debida a materia orgánica demandante de oxígeno:

• La materia orgánica biodegradable de origen doméstico, agrícola o industrial puede marcar cambios en un cuerpo de agua

Principalmente como consecuencia de la

alteración en el equilibrio de O2 de

agua.

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• El O2 tiene una solubilidad en el agua relativamente baja (9,8 ppm (mg/l) a 20°C), y la actividad microbiana puede consumir con rapidez el O2 disuelto.

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DBO: Cantidad de oxígeno requerido por las

bacterias, para descomponer la materia

orgánica bajo condiciones aeróbicas.

Condiciones aeróbicas + 200C +

número suficiente de bacterias

La materia orgánica es descompuesta en CO2

y agua.

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Tiempo que tarda la

materia orgánica en

descomponerse: 10

días

• En la práctica cinco

días, período en el

cual se descompone

entre el 70 - 80% de

la materia orgánica.

• En este caso a la

prueba se le nombra

DBO5

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La prueba de DBO permite :

Conocer la contaminación de un cuerpo de agua

con aguas residuales domésticas o industriales,

en términos del oxígeno que requieran para oxidar la

materia orgánica que llevan en solución,

bajo condiciones aeróbicas.

Estas pruebas son de rutina en:

• Las plantas de purificación de agua

• En el cobro de las tasas retributivas.

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Para hacer este bioensayo se requiere :

• Proteger las muestras para

evitar la aireación

• Según los métodos APHA-

AWA, diluir con agua

destilada las muestras con

mucha materia orgánica,

para garantizar la

oxigenación, debido a la

poca solubilidad del O2 (9

mg/l a 200C ).

• Aguas naturales muy

limpias no necesitan

dilución.

• No deben existir tóxicos

en el agua

• Las condiciones

ambientales y el nivel de

nutrientes para las

bacterias deben ser

apropiados

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Standard Methods for Examination of Water and Wasted Water

Método de medición del DBO

• Si hay necesidad, se

diluye la muestra

• Ajustar la temperatura

a 200C

• Airear la muestra, por

agitación, hasta

alcanzar nivel de

saturación

• Llenar con la muestra

dos o más botellas

Winkler

• A una de las botellas se le

mide oxígeno, las demás se

dejan en incubación por 5 días

a 200C.

• Al final de este tiempo, se mide

el oxígeno presente

• Se resta el valor obtenido en la

muestra analizada el primer día

• La diferencia en la en la

cantidad de oxígeno equivale

al valor de DBO presente en la

muestra. Standard Methods for Examination of Water and Wasted

Water


Métodos de purificación del agua para proporcionar agua

potable y segura


Tratamiento de coagulación - sedimentación

• Se espera que con este tratamiento se remuevan entre el

• 40 - 50% de de la DQO

• 80 - 90 % de sólidos suspendidos, incluyendo los microorganismos


Costos de la coagulación - sedimentación :

• Aunque el área de

establecimiento es más

pequeña que la de los

tratamientos biológicos, los

equipos son costosos.

• Los costos de operación tales

como coagulantes, control

permanente de pH y energía

son relativamente altos.

Adaptable a:

• Tratamiento de aguas

de abastecimiento

• Tratamiento de aguas

residuales de la

mayoría de las

industrias desde la

metal - mecánica a las de pulpa y papel.


Tratamiento convencional


Agua cruda

Cribado Sedimentación

Cámara de

mezcla del

floculante

Cámara de

floculación

Canales de

sedimentación Clarificador

Cloración Almacenamiento Distribución

ANÁLISIS

MICROBIOLÓGICO DE AGUA

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ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA

Se puede definir el análisis microbiológico como el conjunto de operaciones encaminadas a determinar los microorganismos presentes en una muestra problema de AGUA.

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FACTORES QUE INCIDEN EN LA MICROBIOTA BACTERIANA

• DISMINUCION DEL CONTENIDO MICROBIANO • La acidez • oxígeno disuelto • Las sales • La filtración • Los protozoos fagocitan bacterias • La turbidez ya que los rayos UV. no manifiestan su acción y así disminuyen el número de estas. • INCREMENTO • La materia orgánica • Si existe poca cantidad de sales se estimula el desarrollo

bacteriano. • La temperatura puede aumentar o disminuir el contenido

bacteriano.

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ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL

AGUA

• El interés se centra en los microorganismos patógenos, que son los diferentes tipos de bacterias, virus, protozoos y otros organismos, que transmiten enfermedades

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ENFERMEDAD AGENTE

ORIGEN BACATERIANO

Fiebres tifoideas y paratifoideas

Salmonella typhi, Salmonella Paratyphi A y B

Disentería bacilar

Shigella

cólera Vibrio cholerae

Gastroenteritis agudas y diarreas

Escherichia coli. Campylobacter Yersiniae nterocolitica Salmonella sp Shigellas

En los países en vías de desarrollo las enfermedades producidas por estos patógenos son uno de los motivos más importantes de muerte prematura, sobre todo de niños. Normalmente estos microbios llegan al agua en las heces y otros restos orgánicos que producen las personas infectadas

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• Métodos de análisis: 1. Bacterias coliformes y Escherichia coli 2. Enterococos: 3. Clostridium perfringens(incluidas las esporas) 4. Enumeración de microorganismos cultivables-Recuento de

colonias a 22 °C Otros tests complementarios: •Salmonelas •Estafilococos patógenos •Bacteriófagos fecales •Enterovirus •Protozoos •Animálculos (gusanos-larvas), Invertebrados béntico

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TOMA DE MUESTRAS PARA ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO

• Las muestras que se tomarán para el análisis deben ser representativas para poder determinar así su calidad microbiológica.

• Su análisis debe comenzar antes de que hayan transcurrido 6 horas desde el momento de la toma de muestras.

• En circunstancias excepcionales, las muestras pueden

conservarse a una temperatura de 4ºC durante un periodo máximo de 24 h antes de su análisis.

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• Para su recogida debe utilizarse frascos estériles y debe recolectarse cantidades comprendidas entre 500 y 1000 ml.

• Cuando se estime probable que el agua a analizar contenga trazas de cloro, cloramina u ozono, será necesario neutralizar su efecto bactericida en el momento del muestreo.

• Se añadirá una cantidad suficiente de tiosulfato sódico.

- Para un volumen de 250 ml son suficientes 0,2 ml de una solución acuosa al 3% de tiosulfato sódico

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ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: BACTERIAS COLIFORMES

1.FUNDAMENTO: Los coliformes reagrupan ciertas especies bacterianas

pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, de morfología bacilar, Gram negativas, aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativa, no esporuladas y que fermentan la lactosa con producción de ácido a 37ºCen 24-48 horas

• Del grupo coliformes forman parte varios géneros:

• Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter.

• -Escherichia coli produce dolor abdominal, diarrea, nauseas, vómitos y fiebre.

• -Klebsiella produce enfermedades respiratorias.

• -Citrobacter produce alteraciones a nivel del colon y a nivel intestinal

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ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: BACTERIAS COLIFORMES • 2. MÉTODO: El método consiste en desarrollar solo una

prueba presuntiva en el que una reacción negativa excluye la presencia del grupo coliforme.

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• 3. PROCEDIMIENTO. Inocular caldo de peptona con diluciones decimales de la muestra de agua, expresados en 10-1, 10-2, 10-3. Inocular 3 tubos de lactosa bilis verde brillante (a los que se les añade un tubo de Durham invertido) con 1 ml de cada dilución. Incubar a 37ºC (+/-1ºC) durante 24 ó48h.

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• 4.LECTURA E INTERPRETACIÓN. Si se observa crecimiento bacteriano con producción de gas las 24h o antes, la presencia de bacterias coliformes fecales se considerará confirmada, prosiguiendo con el método del filtro de membrana para conteo

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ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: COLIFORMES FECALES

• Método de filtración de membrana.

• FUNDAMENTO: Las bacterias coliformes de origen fecal son aquellas comprendidas en el grupo anterior (coliformes totales), que además son capaces de fermentar la lactosa, con producción de ácido y de gas a 44ºC, en un tiempo máximo de 24h.2.

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• MÉTODO: El método consiste en la determinación del nº de coliformes mediante filtración de volúmenes determinados del agua a analizar por filtros de membrana e incubación sobre medio de lactosa enriquecido(agar de lactosa TTC con heptadecilsulfato de sodio) y una temperatura de 44,5ºC(+/-0,2ºC).3.

• TOMA DE MUESTRA Y ALMACENAMIENTO: Se utiliza la muestra de agua tomada para el análisis de coliformes totales que se encontraba guardada en frigorífico a 4ºC

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• 4. PROCEDIMIENTO: 1. Colocar un filtro de membrana estéril

sobre el soporte de filtración. 2. Adaptar el embudo y conectar el matraz a una bomba eléctrica de vacío.

2. Filtrar 100 ml de muestra si se trata de agua potable, y 0,1 y 1 ml si se trata de aguas no potables, previamente homogeneizadas. Lavar con unos 30 ml de agua destilada.

1. Retirar el embudo. Mediante las pinzas

esterilizadas, transferir la membrana filtrante sobre el medio de cultivo contenido en una placa de Petri, de modo que la superficie de filtración quede hacia arriba. Cerrar e invertir la placa e incubar a 44ºC(+/-1ºC) durante 24h ( +/-2h ).

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• 5. LECTURA E INTERPRETACION: • La lectura de los resultados requiere el examen de las colonias

aparecidas sobre la membrana y el examen de los halos en la capa de agar subyacente a la membrana.

• La fermentación de la lactosa provoca la formación de un

halo amarillo.

• Se considera coliformes aquellas colonias que presentan halo amarillo, halo amarillo con centro naranja(Escherichia y Citrobacter).

• halo amarillo con centro rojo ladrillo(Klebsiella y

Enterobacter). • La densidad se estima como el total de coliformes totales por

100ml, utilizando aquellos filtros de membrana que tengan 20-80 colonias de coliformes y no más de 200.

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ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: ENTEROCOCOS FECALES (NORMA UNE-EN ISO 7899-2: 2001)

• 1.FUNDAMENTO: Los enterococos pueden considerarse como

indicadores de contaminación fecal. • Algunos enterococos presentes en las aguas pueden proceder

de otros hábitats. • Se pueden detectar y cuantificar las especies: Enterococcus

faecalis, E. faecium, E. duransy E. hirae.

• Como enterococos intestinales se consideran aquellos microorganismos capaces de reducir el cloruro de trifeniltetrazolio(TTC) y de hidrolizar la esculina.

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ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: ENTEROCOCOS FECALES (NORMA UNE-EN ISO 7899-2: 2001)

• 2. MÉTODO: Se utiliza para la determinación del número de enterococos intestinales mediante filtración de un volumen determinado del agua a analizar a través de filtros de membrana e incubación de los mismos sobre medios de cultivo a temperaturas adecuadas.

• 3. PROCEDIMIENTO: Se filtran 100 ml del agua a analizar

previamente homogeneizada. Se coloca el filtro de membrana sobre el medio de Slanetzy Bartleyy se incuban las placas a 37ºCdurante 48 h.

• 4. LECTURA E INTERPRETACIÓN: Tras la incubación, se

consideran como colonias típicas de enterococos todas las que muestren un color rojo, marrón o rosado, en el centro o en toda la colonia, consecuencia de la reducción del TTC (incoloro) a trifenilformazán(rojo).

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Análisis microbiológico: Clostridium perfringens (incluidas esporas)

• 1.FUNDAMENTO: Los bacterias incluidas en el género Clostridium tienen morfología bacilar, son Gram positivas, anaerobias estrictas y capaces de formar esporas.

• La especie C. perfringens están normalmente presente

en heces. Sus esporas son resistentes al calor, a los procesos de desinfección y a los tratamientos de depuración habituales de las aguas (cloración), por lo que su supervivencia en agua es mayor.

• La diferenciación de C. perfringens de otras especies de

Clostridium, se basa en su capacidad de fermentar la sacarosa con producción de ácido, en su incapacidad de fermentar la celobiosa (debido a la ausencia de β-D-glucosidasa) y en la producción de fosfatasa ácida.

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Análisis microbiológico: Clostridium perfringens (incluidas esporas)

• 2. MÉTODO: Se utiliza de método de filtración para la

determinación del número de C. perfringens mediante filtración de un volumen determinado del agua a analizar a través de filtros de membrana e incubación de los mismos sobre medios de cultivo a temperaturas adecuadas

AGAR m-cp

• 3. PROCEDIMIENTO: Siguiendo el método de filtración, se filtran 100 ml del agua a analizar, previamente homogeneizado. Se coloca el filtro de membrana sobre el medio de m-CP y se incuban las placas a 44ºC durante 24 h en condiciones de anaerobiosis.

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• 4. LECTURA E INTERPRETACIÓN: Tras la incubación, se consideran como colonias típicas de C. perfringens todas las que muestren un color amarillo opaco, consecuencia de la acidificación del medio tras la fermentación de la sacarosa, y que cambien a color rosa o rojo al cabo de 20 a 30 segundos de exposición a vapores de hidróxido amónico.

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Análisis microbiológico: Bacterias aerobias UNE EN ISO 6222:1999

• 1.FUNDAMENTO: Las bacterias aerobias son todas las bacterias heterótrofas, aerobias o anaerobias facultativas, mesófilas y psicotróficas capaces de crecer en un medio de agar nutritivo.

• UTILIDAD

A. evaluar el estado de los recursos de agua en su origen

B. eficacia del proceso de tratamiento de las aguas destinadas al consumo humano

C. indica la limpieza y el estado de los sistemas de distribución

D. Permite detectar cambios anómalos en el número de microorganismos en la red de distribución.

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Análisis microbiológico: Bacterias aerobias UNE EN ISO 6222:1999

• 2. MÉTODO: Este método se basa en contar el nº de colonias desarrolladas en una placa de medio de cultivo sólido, en el que se ha sembrado un volumen conocido de agua muestra, transcurrido un tiempo y una temperatura de incubación determinados.

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• 3. PROCEDIMIENTO: - Preparar 3 tubos con 9 ml de agua peptonada cada uno. - Realizar diluciones decimales - Depositar 1 ml en cada placa de Petri de cada diluciòn. - Verter 15 ml de medio de cultivo de agar (PCA) en cada

placa y dejar solidificar (5-10min), - invertir las placas y meterlas en la estufa a 37ºC(+/-1ºC), - incubar durante 48h. - Si se emplea agar extracto de levadura la incubación se

lleva a cabo a 22ºCdurante 72 horas.

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• 3. PROCEDIMIENTO:

• 4. LECTURA Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS: Transcurridos 48h (+/-3h) contar todas las colonias desarrolladas en cada placa. El resultado se expresará, como nº de bacterias totales en 1 ml. Se estima utilizando aquellos filtros de membrana que tengan 20-80 colonias de coliformes y no más de 200

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•Gracias

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microbiología del agua - microred · mar rojo microorganismos bentónicos •algunos forman ......

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