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Microbiología de las Infecciones del Sistema Nervioso
Dr. Carlos Zala Catedra II de Microbiologia
Facultad de Medicina Universidad de Buenos Aires
Version 1.2 Octubre 2014
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Sistema Nervioso Central
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Los espacios de las meninges
Espacio sub-aracnoideo
Cuero cabelludo
Cráneo
Cortex Cerebral
Espacio extra-dural
Espacio sub-dural Dura-madre
Aracnóide
Pia-madre
LCR
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Barreras anatómicas
• Duramadre - Aracnoides
• Plexos coroideos
• Capilares cerebrales
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Barrera hematoencefálica
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Como ingresan los patógenos al SNC ?
• Sangre (via hematogena)
• Extension local (oido, senos paranasales, orbita)
• Nerviosa (axonal retrograda)
• Directa (traumatismos, cirugia)
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Mecanismos de lesión en infecciones del SNC
• Injuria directa de neuronas o glia por un agente microbiano
• Injuria indirecta
– Toxinas
– Respuesta inflamatoria
– Autoinmune (desmielinizacion)
• Isquemia
– aumento de la presion intracraneana
– vasculitis
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Cuales son los patógenos que afectan el SNC ? (más comunes)
• Bacterias – Streptococcus pneumoniae (neumococo) – Neisseria meningitidis (meningococo) – Tuberculosis y otros
• Virus – Enterovirus – Herpes virus – Otros
• Hongos – Criptococcus spp – Otros
• Parasitos – Plasmodium – T cruzi – Otros
La frecuencia de los distintos patogenos puede variar por region geografica y en personas
inmunodeficientes
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Sindromes del SNC y periferico
• Meningitis
• Encefalitis
• Meningoencefalitis
• Mielitis
• Encefalomielitis
• Polirradiculoneuritis
• Abscesos
– Epidural
– Subdural
– Encefalico
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Meningitis
• Reaccion inflamatoria en las membranas meningeas y el liquido cefalorraquideo.
• Eventual compromiso encefalico (meningoencefalitis)
• Forma de comienzo (*) – hiperaguda (horas),
– aguda (dias),
– subaguda o cronica (semanas)
• Emergencia medica
• Retraso en el diagnostico y tratamiento adecuado aumenta la morbimortalidad y secuelas.
(*) orienta sobre la etiologia
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Signos & Síntomas
• Fiebre
• Cefalea
• Fotofobia
• Nauseas y vomitos
• Rigidez de nuca
• Kernig y Brudzinski
• Convulsiones
• Rash, petequias
• Obnubilacion, estupor, coma
• Shock
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Meningitis Bacteriana Aguda: Etiología según edad y factores predisponentes
Edades y factores predisponentes Etiologia
<1 mes Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Klebsiella spp
1 mes – 23 meses S. agalactiae, E.coli,H. Influenzae, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis
2 – 50 años S.pneumoniae, N.meningitidis
> 50 años S.pneumoniae, N.meningitidis, Listeria monocytogenes, BGN
Inmunosuprimidos S.pneumoniae, N.meningitidis, L. monocytogenes, BGN, Pseudomonas aeruginosa
Fractura de base de craneo S pneumoniae, H influenzae, estreptococos β hemoliticos grupo A
Traumatismo de cráneo, neuroquirurgico Staphylococcus aureus, staphylococcus coagulasa negativa, BGN, P aeruginosa.
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Neisseria Meningitidis (meningococo)
• Serogrupos según polisacárido capsular (n=13)
– Mas comunes: A, B, C, X, Y, W135
• Serotipos según PME (OMP)
– Opa, OpcA (∆ fase: expresion, baja, intermedia y alta)
– Une CEACAM 1 (Opa) o heparan sulfato (OpcA)
– 2 y 15 asociados a epidemias
• Adhesión a la mucosa por pilis (tipo IV-CD46)
– Colonización (5-30 % población)
• Bacteriemia
– Bajo grado: transitoria
– Alto grado: invasión del SNC
• Mayor susceptibilidad en defectos del complemento (C5-C8) y esplenectomizados
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Meningococo: curso clinico
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La infección por meningococo puede activar una respuesta inflamatoria sistémica, shock y muerte
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Forma Clinica Frecuencia Mortalidad
Meningitis sin shock 37-49 % 0-1 %
Meningitis con shock 13-20 % 7-12 %
Shock sin meningitis 10 – 18 % 16-52 %
Bacteriemia sin shock ni meningitis 18-33 % 0-5 %
Enfermedad Meningococcica
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Meningococo: epidemiologia
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Enfermedad por Meningococo
• Endémica
– Area geografica con 1-2 casos/100.000 habitantes distribuidos en tiempo y espacio
• Brote Epidémico
– 3 ó mas casos confirmados o probables del mismo serogrupo en una misma comunidad en un periodo < 3 meses, no relacionados y que aumentan la prevalencia a > 10 casos/100.000
• Esporádica
CURSO A DISTANCIA “ACTUALIZACION EN INMUNIZACIONES 2010”HOSPITAL DE NIÑOS DR. RICARDO GUTIERREZ
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Haemophilus influenzae tipo b
• Principal causa de meningitis bacteriana de la infancia en paises donde no se implemento la vacunación universal
• Coco bacilo Gram negativo aerobio
• Seis tipos de H influenzae según polisacarido capsular (a-f)
• Tipo b = Poliribitol fosfato (PRP)
• H influenzae de la flora normal son no-capsulados
• Portacion de Hib en via area superior: 2-4 %
• Anticuerpos anti-PRP promueven lisis mediada por complemento y fagocitosis
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Streptococcus pneumoniae (neumococo)
• Solo 20 % de los 91 serotipos se asocian a meningitis
• Enfermedad invasiva: 15/100.000 personas/año
• Colonizacion nasofaringea
– 10-20% adultos
– 20-40 % de niños
• Meningitis secundaria a foco contiguo (otitis, mastoiditis) o distante (neumonia)
• Entrada al SNC mediada por Factor Activador Plaquetario
• Factores predisponentes
– Alcoholismo, diabetes, esplenectomia, fistula de LCR, etc
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Listeria monocytogenes
• Bacilo Gram +, anaerobio facultativo
• Movil, hemolitico en agar sangre
• Serotipo 4b asociado a brotes por alimentos
• Resistente a bajas temp, pH y sales
• Entrada digestiva por celulas epiteliales
• Localización intracelular
• Mayor riesgo con defectos de la Inmunidad mediada por células
Listeria, Gram de LCR
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Patogenia
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Patogenia I
Evento patogenico Factores bacterianos Factores del huesped
1.- Colonización mucosa Fimbrias, polisacarido capsular, IgA proteasa,
bacteriocinas
Epitelio mucoso, actividad ciliar, IgA secretoria,
Ab anticapsulares
2.- Supervivencia intravascular Polisacarido capsular Complemento (C3) , Ab especificos
3.- Invasión meningea Fimbrias, asoc con monocitos, ibe10, OmpA, rFAT, proteina A
ligadora de colina, acido lipoteicoico, listeriolisina O
Barrera hemato-encefalica
4.- Supervivencia en el espacio subaracnoideo
Polisacarido capsular Actividad opsonica pobre
Acute Meningitis. A Tunkel, In Principles and Practice of Infectious Diseases 7th Ed, 2009.
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Inflamacion del espacio subaracnoideo
• Inductores – Peptidoglicano
– Lipopolisacarido
• Mediadores – TNFα, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-16
– rTNF, IL-10
• Reguladores – TLR-2, TLR-4, IL-12
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• Inoculacion intracisternal de lipooligosacaridos
– 30’ : TNF + IL-1 en CSF
– 4 hs: aumento en la permeabilidad de la BEH
• Inoculacion intracisternal de IL-1
– 3 hs: aumento en la permeabilidad de la BEH
• MMP-9 (metaloproteinasas de la matrix extracelular)
– Activadas por vias de especies de oxigeno reactivo
– Degrada componentes de la matrix extracelular
Alteracion de la barrera hemato-encefalica (I)
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Alteracion de la barrera hemato-encefalica (II)
• Anatomico y funcional
• Membrana aracnoidea, plexos coroides, endotelio de microcirculacion cerebral
• Ausencia de membrana basal
• Uniones intercelulares estrechas (UIE)
• Aumento de la permeabilidad – Paso de albumina serica (separacion de UIE)
• Venulas de la pia-aracnoides
– Vesiculas pinocitoticas
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Patogenia II
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Encefalitis
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Meningoencefalitis virales
Agente Viral Puerta de Entrada
Enterovirus
1. Echo 2. Cosackie 3. Enterovirus 70, 71 4. Parechovirus 5. Polio
Respiratoria y digestiva
Parotiditis Respiratoria
Herpes
1. HSV 1-2 2. HVZ 3. CMV
Oral y sexual, transplacentaria Complicacion de Varicela o Reactivacion Congenita o Reactivacion
HIV Sexual
WNV, St Louis Vector
Rabia Mordeduras, contacto con mucosas
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Géneros de la Familia Picornaviridae
• Enterovirus
– Polio Tipos 1, 2, 3
– Cosackie A (Tipos 1-24) y B (Tipos 1-6)
– Echo (Tipos 1-33)
– Enterovirus (Tipos 68-78)
• Rhinovirus (> 100)
• Hepatovirus
• Parechovirus (Tipos 1-3)
• Aphthovirus
• Cardiovirus
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Enterovirus
Sindromes Neurologicos mas frecuentes por especie y tipo de Enterovirus y Parecho
Cosackie
Especie Polio Grupo A Grupo B Echo Entero Parecho
Tipos 1-3 1-24 1-6 1-33 68-71 1-3
Meningitis 1-3 varios 1-6 varios 71 1
Paralisis 1-3 7,9 2-5 2,4,6,9,11,30
70,71 3
Encefalitis 2,5,6,7,9 1-5 2,6,9,19 70,71
Adapatado de Jawetz et al., 2010
28-33 nm, desnudos, estables a pH 3, sRNA lineal (+)
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Poliovirus: formas clínicas
• Enfermedad leve
• Meningitis
• Parálisis (1% de todas las infecciones !!!)
• Atrofia muscular progresiva post-polio
• VDPV (virus polio derivado de vacuna)
Argentina se encuentra libre de Poliomielitis desde 1984
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“Arthropod-borne Viruses”: Arbovirus
• Virus que pueden ser transmitidos por artropodos hematófagos.
• Se mantienen en la naturaleza por un ciclo que incluye huéspedes vertebrados o por vía transovarica y posiblemente venérea entre artrópodos
• Familias incluidas en el grupo de Arbovirus – Togavirus: Ej., EEE, EEO, EEV
– Bunyavirus:
– Flavivirus: Fiebre amarilla, Dengue, Encefalitis Japonesa
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Histopatología de las encefalitis virales
• Infiltrado linfocitario perivascular
• Focos de necrosis en sustancia gris y blanca
• Neuronofagia
• Nodulos de microglia
• Vasculitis necrotizante con hemorragias focales
• Cuerpos de inclusion
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Encefalitis herpetica
• Mas comun de las encefalitis esporadicas
• Distribucion bifasica – 5 a 30 años y > 50 años
• Infección exógena – Infección primaria (vía bulbo olfatorio)
– Reinfección
• Reactivación de infección latente – Desde raíces de nervios autonómicos o trigeminales
– Parénquima cerebral
• Lesión (necrosis) localizada de forma característica en la porción inferior y medial de los lóbulos temporales y giro orbital del lóbulo frontal
• Cuerpos de inclusión intranuclear (Cowdry tipo A) en neuronas y glia
• Frecuentes secuelas neurológicas
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Luis Pasteur (1822-1895)
VACUNA ANTIRRABICA
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1. Ingreso del
virus por
mordedura
2. Replicación viral en
músculo en el sitio de
entrada
3. Virus accede a
terminales nerviosas del
sistema nervioso
periférico. Se disemina
por vía axonal retrógrada.
Ingreso del virus por
mordedura
4. Virus replica en
raíces dorsales y se
disemina hacia
cerebro por médula
espinal
6. Virus se disemina
en modo centrífugo
desde cerebro hacia
otros tejidos tales
como ojos, riñón,
glándulas salivales
5. Virus en cerebro
Patogénesis orgánica
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Neurovirus en inmunodeprimidos
Agente Afeccion del SNC predisponente
WNV Encefalitis necrotizante Ancianos, iCCR5
VZV Arteritis granulomatosa Ancianos, sida
CMV Encefalitis, mielitis Neonatos, sida, transplante
JC LMP sida, Tx con MoAb
HIV Congnitivo-motor sida
EBV Linfoma sida
Sarampion PESA Niños (?)
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Meningoencefalitis por hongos
• En general en inmunodeficientes o con un factor predisponente
• Evolucion subaguda-cronica
• Criptococosis
– Meningitis mas comun en personas con sida
• Hongos filamentosos y levaduras
– Neutropenicos, diabeticos, neuroquirurgicos
• Micosis endemicas con neurotropismo
– Coccidioidomicosis
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Meningoencefalitis Parasitarias
• Protozoarios
– T cruzi
– Toxoplasma gondii
– Plasmodium falciparum
– Naeglearia, Acanthamoeba
• Metazoarios (larvas)
– Cisticercosis
– Hidatidosis
– A. cantonensis
– G. spinigerum
– S. stercoralis
– Trichinella spiralis
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Diagnóstico
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44
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Punción Lumbar
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LCR claro vs. LCR turbio
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Orientacion etiológica según aspecto del LCR
LCR Claro
• Virales – Enterovirus
– HSV 1-2
• Micoticas (Criptococo)
• Parasitarias (T cruzi)
• Bacterianas – Tuberculosis
– Sifilis
– Leptospira
– Listeria
LCR Turbio
• Bacterianas – Neumococo
– Meningococo
– Haemophilus
• Micotica – Candida spp
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Características Fisico-Quimica en el LCR de pacientes con Meningitis
En meningitis parasitaria pueden observarse eosinofilos en el LCR
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Diagnóstico “rápido” de la meningitis bacteriana aguda
• Tincion de Gram
– Neumococo: 90 %
– Haemophilus: 86 %
– Meningococo : 75 %
– Listeria monocitogenes: 50 %
• Aglutinacion (antigenorraquia, antigenuria)
– Sensibilidad: 50-100 %
• Deteccion de endotoxinas de BGN
• Lactato > 4.2 mmol/L (favorece meningitis bacteriana)
• Proteina C reactiva (favorece meningitis bacteriana)
• Procalcitonina > 0.2 ng/ml (favorece meningitis bacteriana)
• PCR
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Meningococo Hemocultivos Gram de muestras de LCR Gram del raspado de lesiones cutaneas Gram de extendidos de sangre periferica Cultivo de LCR Antigenuria (deteccion de polisacaridos capsulares)
Thayer Martin
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Reacciones bioquimicas para identificar Neisserias y Moraxella
Forma Gas a partir de
TMM, ML, NYC Glu Mal Lac Suc/Fru DNAsa
Neisseria gonorrhoeae + + - - - -
Neisseria meningitidis + + + - - -
Neisseria lactamica + + + + - -
Neisseria sicca - + + - + -
Neisseria subflava - + + - ± -
Neisseria mucosa - + + - + -
Neisseria flavescens - - - - - -
Neisseria cinerea ± - - - - -
Neisseria polysacharea ± + + - - -
Neisseria elongata - - - - - -
Moraxella catharralis - - - - - +
Medio de Tayer Martin Modificado, Martin-Lewis o New York City
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Neumococo
Hemocultivos Gram de muestras de LCR Gram de extendidos de sangre periferica Cultivo de LCR Antigenuria (deteccion de polisacaridos capsulares)
Diplococos Gram positivos en LCR de un niño con meningitis
Optoquina R (izq) y S (der): S Pneumoniae
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Haemophilus influenzae
Haemophilus influenzae. Agar sangre con “satelitismo” junto a estria de S. aureus
Crece en medios enriquecidos (Agar chocolate con Isovitalex) Se diferencia por la utilización de factor V (NAD) y factor X (hemina) En agar sangre de carnero, colonias de S aureus liberan hemina al medio facilitando el desarrollo de H influenzae (satelitismo) Muestras: hemocultivos, LCR.
Haemophilus influenzae. Desarrollo con discos de factor V y factor X
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Meningoencefalitis virales
Muestra y Técnicas Diagnostico
• LCR: claro, sin bacterias
• Aislamiento viral en hisopado faringeo/material fecal mas titulo serologico
• Aislamiento viral en LCR y sangre
• Amplificacion de acidos nucleicos en LCR
• Inmunohistoquimica-PCR en muestras de biopsia CNS
West Nile Virus: Inmunohistoquimica en tronco cerebral
Encefalitis Equina del Este, glandula salival de mosquito
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• Exámenes de rutina: leucocitosis con neutrofilia, ligera pleiocitosis
• Es ante-mortem. Se emplean diferentes pruebas sobre muestras de saliva, suero, LCR, y biopsia de piel (5-6 mm) en la línea del pelo del cuello (contener >10 folículos pilosos).
– Saliva: cultivo celular o, pesquisa de RNA viral (RT-PCR).
– Suero – LCR: detección de Ac específicos (tras 15 días de enfermedad).
– Biopsias: pesquisa de antígenos en nervios cutáneos de la base de los folículos pilosos.
Diagnóstico en el
Hombre
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Prevención
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Vacunas antineumococcicas
• Vacuna de polisacáridos – 23 serotipos con el 90% de los asociados a infecciones invasivas
– Poco inmunogenicas en menores de 2 años e inmunodeprimidos
• Vacunas conjugadas
– 1ra generación: • heptavalente + CRM 197 (toxoide diftérico)
– 2da generación • 13 serotipos (Pfizer®)
– Puede administrarse hasta los 5 años-
• 10 serotipos + proteina D H. Influenzae + toxoide tetanico y difterico (Glaxo®) – Puede administrarse hasta los 2 años
• Primera dosis a los 2 meses de vida – 3 dosis en el primer año (2, 4 y 6 meses)
– Refuerzo entre los 12 y 15 meses de edad
– Con la vacuna de 13 serotipos puede indicarse 2 dosis en la serie primaria y un refuerzo entre los 12 y 15 meses (una dosis menos)
Comision de Vacunas, SADI 2010
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Vacuna anti-Haemophilus influenzae tipo b
• Purificado del polisacarido de la capsula (polirribosil-ribitol-fosfato: PRP)
• Conjugado con proteinas
– Toxoide difterico (PRP-D), la menos inmunogenica
– PME Neisseria meningitidis B (PRP-OMP)
– Toxina difterica mutante (PRP-CRM)
– Toxoide tetanico (PRP-T)
• Esquema de vacunacion monovalente:
– 2,4,6 meses y un refuerzo entre los 12 y 15 meses
• Combinaciones con otras vacunas
– Pentavalente: DTP-HB-Hib (2,4,6 meses) + refuerzo con cuadruple bacteriana
– Cuadruple bacteriana: DPT-Hib (2,4,6 meses y refuerzo a los 18 meses)
Comision de Vacunas, SADI 2010
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Distribución anual de casos de meningitis por Haemophilus influenzae tipo b en la Ciudad de Buenos Aires, 1994-2006
Fte., SI.NA.VE. Ministerio de Salud
La tasa de portación nasofaríngea en una población inmunizada de niños de la Ciudad de Buenos Aires fue 0,06 % (Arch Argent. Pediatr. 2007)
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Vacunas antimeningococcicas
• Polisacáridos (A,C,Y,W-135)
– No son inmunogenicas en menores de 2 años
• Polisacáridos + OMV (proteinas de membrana externa)
– Serogrupos B y C
– El componente B no es inmunogenico en menores de 2 años, 47 % en entre 2-4 años, 74% en mayores de 4 años.
• Polisacáridos conjugados con toxoide difterico
– A, C, Y, W-135
– Reducen colonizacion nasofaringea
– Inmunocompetentes: 1ra dosis: 11-12 años
• Un refuerzo a los 16 años
– Personas de alto riesgo: déficit de C´, asplenia, HIV
• Primera serie de dos dosis con 2 meses de intervalo
• Refuerzo cada 5 años
AAP News 2011;32;1
SADI 2010
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Vacunas conjugadas vs polisacáridos
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Vacuna antipoliomielitica
Sabin (oral)
• Poliovirus 1, 2 y 3
• Virus vivos atenuados
• Inmunidad en mucosas y de rebaño
• Enfermedad paralitica (VDPV) – (1/1.4 a 1/5.9 millones)
• Contraindicada
– Embarazo
– Inmunodeprimidos y sus convivientes.
• OpveroMR (Sanofi Pasteur)
Salk (parenteral)
• Poliovirus 1,2 y 3
• Virus inactivados con formalina
• Inmunidad sistemica e individual
• Imovax polio (Sanofi Pasteur) producida en celulas Vero
Esquema de administración: 2, 4,6 y 18 meses. Refuerzo a los 5-6 años
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Vacunas Antirrábicas
Todas son a virus inactivado.
El virus se obtiene desde:
(1) Cerebro de ratón lactante (CRL) inoculado – Tipo
Fuenzalida-Palacios,
(2) Cultivo en células diploides tipo Vero (CV) o,
(3) Cultivo en células de embriones de pollo (EP). Esquema tipo de profilaxis post-exposición
Vacuna CRL, 7 dosis diarias y consecutivas y tres refuerzos a los 10, 20 y 30 ó 60 días.
Vacunas CV y EP dosis 0, 3, 7, 14, 28 días y un refuerzo optativo a los 90 días.
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Infecciones focales del SN
• Abscesos bacterianos
– Por extension de infecciones contiguas (otomastoiditis, sinusitis, odontogena): Flora mixta (aerobios y anaerobios)
– Por via hematogena: endocarditis: Flora monomicrobiana aerobica
• Granulomas
– Tuberculosis, Micosis, Toxoplasmosis
– En general, reactivaciones de infecciones latentes
• Lesiones quisticas
– Cisticercosis, hidatidosis
• Vasculitis
– VZV, sifilis, arbovirus
• Lesiones desmielinizantes de la sustancia blanca
– Virus JC (Leucoencefalopatia Multifocal Progresiva)
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Localización de abscesos en SNC
Absceso epidural
Empiema subdural
Absceso cerebral