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Master de Medicina Cosmética y del Envejecimiento Trabajo de Investigación TÉCNICA DE OBTENCIÓN AMBULATORIA DE CÉLULAS MADRE A PARTIR DEL TEJIDO ADIPOSO Dr. Fernando López Dra. Bettina Tiravanti 2011

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Master de Medicina Cosmética y del Envejecimiento 

   

Trabajo de Investigación      

TÉCNICA DE OBTENCIÓN AMBULATORIA DE CÉLULAS MADRE A PARTIR DEL TEJIDO ADIPOSO 

         

 Dr. Fernando López  

Dra. Bettina Tiravanti     

2011 

2

INDICE  

 RESUMEN 

 I. INTRODUCCIÓN 

II. MARCO TEÓRICO 

2.1 TEJIDO ADIPOSO. 

2.1.1  IMPORTANCIA DEL TEJIDO ADIPOSO 

2.1.2  MORFOLOGÍA DEL TEJIDO ADIPOSO 

2.1.3  DESARROLLO DEL TEJIDO ADIPOSO BLANCO 

2.1.4  MODELOS IN VITRO DE DIFERENCIACIÓN DEL TEJIDO ADIPOSO 

2.1.5  PROCESOS DE LA DIFERENCIACIÓN DEL TEJIDO ADIPOSO 

2.1.5.1  INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO. 

2.1.5.2  EXPANSIÓN CLONAL. 

2.1.5.3  CAMBIOS TEMPRANOS EN LA EXPANSIÓN DE SUERO. 

2.1.5.4  EVENTOS TARDÍOS Y DIFERENCIACIÓN TERMINAL. 

2.1.5.5  FACTORES QUE MODULAN LA DIFERENCIACIÓN DE LOS                         

ADIPOCITOS                   

2.2 CÉLULAS MADRE 

2.2.1  CONCEPTOS Y DEFINICIÓNES 

2.2.2  CELULAS MADRE DE ORIGEN EMBRIONARIO 

2.2.3  CÉLULAS MADRE NO EMBRIONARIAS 

2.2.3.1  DERIVADAS DE LA MÉDULA ÓSEA 

2.2.3.2  DERIVADAS DEL TEJIDO ADIPOSO 

3

2.2.3.3  CÉLULAS MADRE DERIVADAS DE LOS PRECURSORES DE 

LA PIEL 

2.2.3.4  CÉLULAS MADRE DERIVADAS DEL LÍQUIDO AMNIÓTICO 

2.2.3.5  CÉLULAS MADRE DERIVADAS DEL CÓRDON UMBILICAL 

2.2.4  APLICACIONES CLÍNICAS Y EXPERIMENTALES 

2.3 LIPOSUCCIÓN 

III. JUSTIFICACIÓN, OBJETIVOS E HIPOTESIS 

IV.  MATERIAL Y MÉTODOS 

4.1 DESCRIPCIÓN DE LA TÉCNICA 

4.1.1 INSTRUMENTAL 

4.1.2 ELECCION DE LA ZONA DONANTE 

4.1.3 DESINFECCIÓN Y ANESTESIA 

4.1.4 OBTENCIÓN DE LA GRASA 

4.1.5 TRANSPORTE 

4.1.6 PROCESAMIENTO 

4.1.7 CRIOCONSERVACIÓN 

V. RESULTADOS 

VI. CONCLUSIONES 

VII. BIBLIOGRAFÍA  

 

 

 

   

4

RESUMEN   

Objetivos: El trabajo pretende estudiar y a la vez certificar la validez de una técnica que 

permita  obtener  un  número  viable  y  suficiente  de  células madre mesenquimales  a 

partir del  tejido adiposo. Se describe una  técnica ambulatoria sencilla y práctica que 

pueda  ser utilizada en el  ámbito de  la medicina  regenerativa  y otras especialidades 

como la medicina estética y del envejecimiento. 

Metodología:  Se estudiaron a 5 pacientes  (3 mujeres, 2 hombres) entre  los 35 a 63 

años, se les extrajo 60 cc de grasa a nivel de abdomen y flanco izquierdo. Las muestras 

fueron  enviadas  a  un  laboratorio  en  Bélgica  (Crio  Save),  Banco  de  Células Madre; 

donde fueron procesadas y crio preservadas a una temperatura promedio de ‐196 ºC. 

Resultados:  Se  obtuvieron  5  muestras  para  su  validación    con  un  volumen  total 

promedio  de  31 ml  y  un  volumen promedio  de  grasa  de  48%    o  volumen  de  grasa 

procesada, útil (PLA). Se efectuó una comparación de los diversos parámetros del SVF 

(Stromal Vascular Fraction) de las 5 muestras antes y después de su criopreservación. . 

Los  parámetros  que  se  determinaron  fueron: Número  de MSC/g  (células madre  de 

origen mesenquimal) a p0, todas las muestras descongeladas presentaron un número 

de MSC  superiores  a  los  12500/g; Marcadores  de  los  antígenos  específicos  de  las 

células  madre  (CD  73+,  CD  105+,  CD  45/34‐),  en  las  muestras  frescas  y  en  las 

descongeladas fue superior al 94% ; Marcador de vitalidad 7AAD, los resultados en las 

muestras  antes  y  después  de  la  criopreservación  fueron  de  97‐99%  y  98% 

respectivamente. 

Conclusiones: Las células madre mesenquimales se encuentran de  forma viable en el 

tejido  adiposo  obtenido  de manera  ambulatoria,  tanto  antes  como  después  de  su 

procesamiento  y  crioconservación.  Es  una  técnica  válida  y  accesible  para  los 

profesionales que trabajan con frecuencia con el tejido adiposo.  

Palabras claves: Células madre, Tejido adiposo, Liposucción. 

 

 

5

 

 

                            

          

 I. INTRODUCCION 

     

6

Las  células  madre  (stem  cell)  o  células  troncales  son  un  tipo  especial  de  células 

indiferenciadas, que  tienen  la  capacidad de dividirse  indefinidamente  sin perder  sus 

propiedades y llegar a producir células especializadas. 

 

Los  trabajos  con  células  madre  mesenquimales  se  iniciaron  en  1963,  cuando  se 

describieron unas células autoregenerantes en  la médula ósea del ratón. 1 Fue Ernest 

McCulloch y su colega James Hill quienes crearon el primer método para  identificar a 

estas  células.  Se  postularon  como  células  madre  regenerativas,  para  luego  ser 

denominadas Células Madre Hematopoyéticas. 

 

La  importancia  de  estas  células  radica  en  su  gran  capacidad  de  diferenciación    en 

distintos tipos celulares en el cuerpo humano, sobre todo durante la primera etapa de 

vida  y  crecimiento  y  como  un  sistema  de  reparación    de  tejidos  dañados  y/o 

envejecidos. 

 

A  su  vez,  el  empleo  del  tejido  adiposo  como   material  de  relleno,  fue  descrito  por 

primera  vez  por  el médico  alemán Gustav  Alber Neuber  en  1893,  cuya  experiencia 

consistió en inyectar una pequeña cantidad de grasa extraída del brazo, en un defecto 

óseo en la cara. 2  En 1911, Burming describió por primera vez el uso de una jeringuilla 

como instrumento para la implantación de grasa autóloga  a nivel subcutáneo. 

Los  primeros  ensayos  para  rellenar  defectos  corporales  con  grasa  extraída,  datan 

desde 1950. 

Peer  en  1956,  ratificó  mediante  estudios  histológicos  la  posibilidad  de  obtener 

adipocitos  vivos  mediante  liposucción,  y  es  quien  propone  la  teoría  de  la  

“supervivencia”, frente a la del “reemplazo o fibrosis”. 3 

Posteriormente  a  estos  autores,  otros  siguieron  realizando  trasplante  de  grasa  en 

diferentes partes del  cuerpo, pero  sin mucho éxito, motivo por el que  se abandonó 

ésta técnica. 

7

Al comienzo de la década de los 80, con la aparición  y popularización de la liposucción, 

empiezan otra vez los intentos de reinyectar la grasa autóloga obtenida mediante esa 

técnica quirúrgica. El comienzo del trasplante autòlogo de grasa se  inicia con  Illouz, 4  

con la reinyección de grasa obtenida mediante liposucción. 

 

En 1987, los doctores Vila‐Rovira y Serra‐Renon, publican un libro sobre liposucción en 

cirugía  plástica  y  estética,  incluyendo  dos  capítulos  de  la  inyección  de  grasa  como 

injerto, siendo  la primera publicación con evidencias  iconográficas sobre  la aspiración 

de la grasa con jeringa. 5 

 

En  1988  Illouz    publica  una  supervivencia  de  solo  el  20%  de  grasa  y  aconseja  la 

sobrecorrección. 6 

 

En  los  90,  aparece  una  nueva  generación  en  técnicas  para  obtener  la  grasa  y 

trasplantarla con mayor éxito.  Los estudios realizados demuestran que los injertos de 

grasa autóloga son posibles y se establecen  las condiciones óptimas para el éxito del 

tratamiento.    A  partir  de  ésta  época,  la  supervivencia  del  tejido  graso  autólogo 

trasplantado  da  un  gran  giro,  pasando  de  ser  un  procedimiento  poco  fiable  y 

transitorio a un procedimiento permanente y fácilmente reproducible. 7  

 

Coleman 8, Carpaneda 9,  Niechajev 10 y múltiples autores han dejado mucha evidencia 

de los ensayos que han realizado, de la importancia que tiene el modo de obtención de 

la grasa   en el mantenimiento de viabilidad  tisular.   También de  la  importancia que 

tiene una correcta implantación de la grasa, para asegurar la máxima supervivencia del 

tejido. 

 

El siguiente trabajo pretende estudiar y a la vez certificar la validez de una técnica que 

permita  obtener  un  número  viable  y  suficiente  de  células madre mesenquimales  a 

partir  del  tejido  adiposo.  Se  describe  una  técnica  ambulatoria,  que  por  su  carácter 

8

sencillo y práctico, pueda ser utilizada en el ámbito de la medicina regenerativa y otras 

especialidades como la medicina estética y del envejecimiento. 

 

 

 

 

                                     

9

                                            

II. MARCO TEORICO  

10

2.1 TEJIDO ADIPOSO  2.1.1 IMPORTANCIA DEL TEJIDO ADIPOSO  

El  tejido  adiposo  juega  un  papel  fundamental  en  el  mantenimiento  del  balance 

energético en mamíferos.  

Durante  los períodos de alta ingesta energética,  los adipocitos almacenan energía  en 

forma de grasa (triglicéridos).  Esta grasa puede ser posteriormente liberada en forma 

de  ácidos  grasos  libres,  en  periodos  de  restricción  calórica.    Sin  embargo  el  tejido 

adiposo,  no  puede  ser  considerado  solo  como  un  tejido  pasivo  que  solo  almacena 

energía.    Algunos  estudios  recientes  han  puesto  de manifiesto  que  tiene  funciones 

endocrinas  importantes,  secreta  importantes moléculas que  intervienen en procesos 

tales como:  respuesta  inmune  (TNF alfa),  regulación de  la  ingesta y gasto energético 

(Leptina,  Acrp30/AdipoQ),  y  la  función  vascular  (angiotensina  y  el  inhibidor  del 

plasminógeno tisular tipo I).  Determinadas alteraciones en el crecimiento, desarrollo y 

función del  tejido adiposo, pueden estar  implicadas por  lo  tanto, en el desarrollo de 

diferentes  patologías  como  la  obesidad,  resistencia  a  la  insulina  y  diabetes  tipo  II, 

aterosclerosis, hipertensión11. 

 

2.1.2 MORFOLOGÍA DEL TEJIDO ADIPOSO 

El  tejido  adiposo  se  encuentra  distribuido  en  diferentes  regiones  en  el  organismo. 

Estos  depósitos  se  encuentran  principalmente  a  nivel  dérmica,  subcutánea, 

mediastínica, mesentérica, perigonadal, perirrenal y retroperitoneal.  

Además se distinguen dos tipos de tejido adiposo: el tejido adiposo blanco y el tejido 

adiposo  pardo o marrón,  los dos presentan diferencias no solo por la coloración, sino 

por la morfología, distribución, genes y función. 

El  tejido  adiposo  pardo,  presenta  adipositos  multiloculados  con  abundantes 

mitocondrias que expresan altas cantidades de proteína desacoplante I (UCP I), la cual 

es responsable de la actividad termogénica de éste tejido12. 

Por el  contrario, el  tejido adiposo blanco, está  formado por adipositos uniloculados,  

que contienen mitocondrias diferentes a  las encontradas en el  tejido adiposo pardo. 

11

Estas  células  producen  Leptina,  una  hormona  que  informa  al  cerebro  del  estado 

nutricional del individuo, para regular la ingesta y el gasto energético.  Por lo tanto, la 

función de éste  tejido es  la de controlar  la  ingesta energética   y  la distribución de  la 

misma a otros tejidos en los períodos interdigestivos13.  

El balance entre tejido adiposo blanco y pardo puede verse influido por factores como 

el frío, el calor,  la obesidad, etc.   Así, en animales aclimatados al frío, el balance es a 

favor del tejido adiposo pardo, debido principalmente al desarrollo y proliferación de 

sus precursores.  También la morfología de los adipocitos pardos maduros se modifica, 

aumentando el número, el  tamaño,  la densidad    y  la  concentración de UPC  I de  las 

mitocondrias.   Además  también se observa proliferación del  tejido adiposo pardo en 

los depósitos blancos 14. 

Por  el  contrario,  en  animales  aclimatados  al  calor,  las  áreas  pardas  están  menos 

coloreadas y su histología está intensamente modificada.  Los adipocitos marrones son 

uniloculados  y presentan una  concentración menor de mitocondrias,  aunque  siguen 

mostrando inmunorreactividad por UPC I 15. 

En los animales obesos, se produce un enorme  aumento del tejido adiposo blanco por 

hiperplasia e hipertrofia de sus adipocitos. 

 

2.1.3  DESARROLLO DEL TEJIDO ADIPOSO BLANCO 

El  desarrollo  del  tejido  adiposo  blanco  comienza  antes  del  nacimiento,  aunque  la 

cronología  varía  de  unas  especies  a  otras.      La  capa  de  grasa  subcutánea  de    la 

hipodermis se puede identificar  a partir del cuarto mes del feto. 16 

El mayor crecimiento del mismo tiene  lugar unas semanas tras el nacimiento, pero el 

desarrollo es un proceso continuo a lo largo de toda la vida.  Es conocido la capacidad 

del adulto de generar nuevas células grasas a expensas de una dieta alta en glúcidos y 

grasas.  17.   Una  vez  que  el  tejido  adiposo  está  formado,  los  adipocitos  representan 

entre el uno y  los dos tercios del mismo. El resto del tejido está formado por células 

sanguíneas, endoteliales, pericitos y  precursores de los adipocitos con diferente grado 

de diferenciación, especialmente fibroblastos, aunque también aparecen preadipocitos 

12

(células  interticiales o vacías de  lípidos),   células mesenquimales y células grasas muy 

pequeñas. 18  

Aunque  el origen  embrionario de  las  células  grasas no  es del  todo  conocido,  varios 

estudios  han  sugerido  que  la  línea  adipocitaria  deriva  de  un  precursor  embrionario 

multipotente  y  que  posee  capacidad  para  diferenciarse  en  células  unipotentes  y 

comprometidas hacia el desarrollo de varios tipos celulares determinados, tales como 

adipocitos, condrocitos, osteoblastos y miocitos. Los procesos celulares que llevan a la 

conversión  de  las  células  pluripotentes  en  adipoblastos  unipotentes  son  todavía 

altamente desconocidos19. 

 

2.1.4    MODELOS  IN  VITRO  DE  DIFERENCIACIÓN  DE  ADIPOCITOS 

Los  procesos  implicados  en  la  diferenciación  de  los  precursores  adipocitarios  hasta 

adipocitos maduros han sido ampliamente estudiados utilizando modelos celulares  in 

vitro. Éstos han permitido la caracterización de los eventos moleculares y celulares que 

tienen  lugar  durante  la  transición  de  preadipocitos  indiferenciados  tipo  fibroblastos 

hasta  células  grasas  redondeadas maduras.  Las  líneas  celulares utilizadas  se pueden 

dividir en 3 categorías: 1) células embrionarias totipotentes capaces de generar todas 

las  líneas  celulares;  2)  células  multipotentes  que  pueden  dar  lugar  a  miocitos, 

adipocitos y condrocitos; 3) células ya comprometidas hacia  la  línea adiposa, que son 

las denominadas líneas celulares de preadipocitos (Tabla 1).  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

13

Tabla 1 

 

 

Fueron  aisladas por  clonaje desde  células derivadas de  embriones de  ratones  Swiss 

3T38.  La  línea  TA1  se  estableció  por  el  tratamiento  de  células  fibroblásticas 

embrionarias de  ratón CH310T1/2  con el agente demetilante 5‐azacitidina9.  La  línea 

Ob1710 y sus derivadas se generaron desde precursores adipocitarios presentes en la 

grasa  epididimal  de  ratones  adultos  genéticamente  obesos  (ob/ob). 

 

Se ha  logrado también el cultivo de preadipocitos primarios así como  la  inducción de 

su  transformación  en  adipocitos maduros  en  diversas  especies  animales  incluido  el 

hombre. Las células primarias son diploides y reflejan mejor, por tanto, la situación in 

vitro  que  las  líneas  celulares  aneuploides.  Además,  presentan  la  ventaja  de  que 

pueden  ser  obtenidas  desde  varias  especies  a  diferentes  etapas  del  desarrollo 

postnatal y de diferentes depósitos grasos. Esto último es muy  importante, ya que se 

han observado  importantes diferencias moleculares y bioquímicas entre  los distintos 

depósitos  grasos20. 

14

Durante  la  fase de  crecimiento  tanto  las  líneas  celulares de preadipocitos  como  los 

preadipocitos  primarios  son morfológicamente  similares  a  los  fibroblastos.  Una  vez 

que  las  células  han  alcanzado  la  confluencia,  el  tratamiento  con  los  inductores 

adecuados  de  la  diferenciación  conduce  a  un  cambio  drástico  en  la  forma  de  las 

células. Los preadipocitos se convierten en células de  forma esférica que empiezan a 

acumular  lípidos,  y  que  van  adquiriendo  progresivamente  las  características 

morfológicas  y  bioquímicas  propias  de  los  adipocitos  maduros21. 

 

El  tratamiento  capaz  de  inducir  la  diferenciación  varía  en  los  distintos  modelos 

celulares  descritos  (Tabla  1).  Aunque  los  preadipocitos  de  diferentes  fuentes  son 

similares  en  múltiples  aspectos,  su  respuesta  a  los  agentes  inductores  de  la 

diferenciación varía considerablemente. Estas diferencias pueden venir determinadas 

por el diferente estadio de maduración en el que se obtuvieron los preadipocitos22. En 

la mayor  parte  de  los  casos  se  requiere  la  presencia  de  insulina.  En  algunos  casos, 

como por ejemplo en los preadipocitos 3T3‐L1, la diferenciación se ve acelerada tras el 

tratamiento durante 48 horas  con dexametasona, un  corticoide;  isobutilmetilxantina 

(IBMX),  un  estimulante  del  AMPcíclico;  y  altas  concentraciones  de  insulina,  en 

presencia de suero bovino fetal. Tras este periodo inductor de la diferenciación, no se 

requiere  la  presencia  de  algunos  de  estos  inductores  de  la  diferenciación  para  el 

mantenimiento del fenotipo del adipocito maduro23.  

 

2.1.5 PROCESOS DE LA DIFERENCIACIÓN DE ADIPOCITOS 

La diferenciación de los adipocitos es un proceso complejo en el que los preadipocitos 

deben interrumpir su crecimiento y salir del ciclo celular previamente a su conversión 

terminal en adipocitos. Este proceso de diferenciación  supone  cambios  cronológicos 

en  la  expresión  de  numerosos  genes.  Así,  se  van  adquiriendo  aquellos  genes 

característicos de  los adipocitos, al mismo tiempo que se van reprimiendo genes que 

son  inhibitorios  para  la  adipogénesis  o  que  no  son  innecesarios  para  la  función  del 

adipocito maduro.  Todos  estos  cambios  en  la  expresión  y  función  de  estos  genes 

conducen  finalmente  a  la  adquisición  del  fenotipo  característico  del  adipocito24.  

Aunque  los  fenómenos moleculares  implicados en  la diferenciación de  los adipocitos 

15

no son totalmente conocidos, se ha sugerido un modelo que incluye varias etapas (se 

describe  como  ejemplo  el modelo  de  diferenciación  propuesto  para  la  línea  celular 

3T3‐L1). 

 

2.1.5.1 INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO 

Una vez alcanzada la confluencia, los predipocitos 3T3‐L1 sufren inhibición por 

contacto y cesan su crecimiento, y comienzan a exhibir algunos de los marcadores 

tempranos de la diferenciación25.  

 

2.1.5.2 EXPANSIÓN CLONAL  

El tratamiento de estas células en las que ha cesado el crecimiento con medio de 

diferenciación las induce a reentrar en el ciclo celular, y se producen varias rondas de 

replicación de DNA y duplicación celular. Esta expansión mitótica clonal de células 

comprometidas es esencial para completar la diferenciación terminal en adipocitos 

maduros. Las proteínas del retinoblastoma (Rb) modulan la actividad de E2F, un factor 

de transcripción que juega un papel fundamental en la regulación de la progresión del 

ciclo celular. Varios estudios recientes han sugerido que las proteínas Rb juegan un 

papel fundamental en la regulación de la expansión mitótica clonal necesaria para la 

diferenciación de los adipocitos 3T3‐L126‐27.  

 

2.1.5.3 CAMBIOS TEMPRANOS EN LA EXPRESIÓN DE GENES  

Conforme la expansión clonal cesa, se inicia la activación transcripcional coordinada de 

genes específicos del adipocito. La expresión de estos genes se acompaña de cambios 

bioquímicos y morfológicos dramáticos que conducen a la adquisición del fenotipo del 

adipocito. La expresión de lipoprotein lipasa (LPL) ha sido considerada a menudo como 

un signo temprano de la diferenciación adipocitaria. La expresión de LPL ocurre, sin 

embargo, de manera espontánea al alcanzar la confluencia y es independiente de los 

inductores de la diferenciación. Esta circunstancia sugiere que LPL puede reflejar la 

etapa de cese del crecimiento más que ser un marcador temprano del proceso de 

diferenciación28. 

Hasta ahora, se han descrito dos familias de factores de transcripción, las C/EBPs 

16

(CCAAT/Enhancer Binding Proteins) y PPARg (Peroxisome Proliferator‐Activated 

Receptor g), que han sido identificadas como “directores” reguladores de la 

transcripción de genes adipogénicos29.  

 

La familia C/EBP está constituida por varias isoformas30: C/EBPa, C/EBPb y C/EBPd. 

C/EBPa parece ser un factor nuclear indispensable y crítico en el proceso de 

diferenciación de los adipocitos31.32. Varios estudios han puesto de manifiesto que este 

factor de transcripción es no sólo requerido, sino también suficiente para poner en 

marcha el proceso de diferenciación de los adipocitos incluso en ausencia de agentes 

inductores de la diferenciación33.34. En apoyo de esta hipótesis, se ha observado que la 

supresión de la expresión de C/EBPa por un tratamiento con antisentidos provoca una 

inhibición en la diferenciación terminal de los adipocitos, lo cual parece indicar que 

este proceso requiere el mantenimiento de la expresión sostenida de C/EBPa 35. Esta 

expresión de C/EBPa durante la etapa de diferenciación terminal se ha atribuido a un 

fenómeno de autoactivación de su propio gen, el cual contiene un lugar de unión para 

C/EBP en la región proximal de su promotor. Además, la importancia de C/EBPa para la 

activación de otros genes específicos del adipocito maduro se pone también de 

manifiesto por la identificación de lugares de unión para C/EBPa en los promotores de 

varios de estos genes, tales como aP236. 

 

Sin embargo, el hecho de que C/EBPa se active relativamente tarde en la secuencia de 

eventos del proceso de diferenciación (días 3‐4) ha hecho surgir algunas cuestiones 

referentes a su papel de maestro director en este proceso. En este sentido, se ha 

observado que la activación de las isoformas b y d de la familia de las C/EBPs es 

cronológicamente anterior a la de C/EBPa, lo que sugiere que ambas (b y d) juegan un 

papel preparatorio muy temprano en la cascada de fenómenos que conducen a la 

diferenciación37. Los niveles de C/EBPb y C/EBPd se ven incrementados en respuesta a 

la isobutilmetilxantina (IBMX) y la dexametasona respectivamente20, y su principal 

función es iniciar la activación de C/EBPa, el cual es finalmente responsable de la 

activación de la serie de genes específicos de los adipocitos.  

El PPARg es el único miembro de una familia de receptores nucleares/factores de 

transcripción (PPAR), que se encuentra expresado en altos niveles específicamente en 

17

tejido adiposo y que se ha demostrado es un importante mediador del proceso 

adipogénico. La expresión de PPARg antecede la inducción de C/EBPa en la cascada de 

eventos que conducen a la diferenciación de los adipocitos38. Al igual que lo observado 

con C/EBPa, la expresión retroviral de PPARg es suficiente para inducir la conversión de 

varias líneas celulares de fibroblastos en adipocitos39. En este sentido, se ha observado 

que la coexpresión de PPARg y C/EBPa en fibroblastos tiene un efecto sinérgico sobre 

la inducción del proceso de conversión en adipocitos. 

 

Las tiazolidinedionas, fármacos con acción antidiabética, actúan como ligandos 

directos de PPARg, y se ha observado que son, por tanto, potentes y efectivos 

estimulantes de la adipogénesis40. Los factores de transcripción C/EBPb y C/EBPd 

parecen jugar también un importante papel en la inducción de PPARg. De hecho, su 

expresión ectópica provoca un incremento en los niveles de PPARg equivalente al de 

las células adiposas normales41. 

Otro factor que también parece estar implicado en el proceso de diferenciación es 

ADD1/SREBP1 (Adipocyte Determination Differentiation Dependent Factor 1/ Sterol 

Regulatory Element Binding Protein 1). La coexpresión de este factor de transcripción 

incrementa la actividad transcripcional de PPARg incluso en ausencia de sus ligandos 

activadores. 

 

Entre los genes que disminuyen su expresión a lo largo de la diferenciación es de 

destacar Pref‐1 (Preadipocyte Factor‐1). Pref‐1 presenta altos niveles de expresión en 

preadipocitos y su expresión disminuye durante la diferenciación, siendo 

completamente indetectable en adipocitos maduros42. 

 

2.1.5.4  EVENTOS  TARDÍOS  Y  DIFERENCIACIÓN  TERMINAL 

Durante  la  fase  final  de  la  diferenciación,  los  adipocitos  en  cultivo  incrementan 

marcadamente  la  lipogénesis de novo, observándose, por tanto, un  incremento en  la 

expresión  y  actividad  de  enzimas  implicados  en  esta  ruta  tales  como  la  sintasa  de 

ácidos grasos, enzima málica, glicerol 3‐fosfato deshidrogenasa… Durante esta etapa 

aumenta  también  considerablemente  la  sensibilidad  a  la  insulina,  debido  a  un  gran 

18

aumento  en  el  número  de  receptores  de  insulina  y  transportadores  de  glucosa 

dependientes  de  insulina  (GLUT4). 

 

La diferenciación de  los  adipocitos  conlleva una pérdida de  receptores  adrenérgicos 

b1, mientras que se produce un incremento de los b2 y b3, resultando un incremento 

total  en  el  número  de  receptores  adrenérgicos43. 

 

Además, se expresan y sintetizan también otros genes y productos específicos de  los 

adipocitos como aP2, una proteína fijadora de ácidos grasos específica de adipocitos y 

perilipina, una proteína asociada a las gotas de lípidos. Además, los adipocitos en esta 

etapa  comienzan  a  secretar  algunas  sustancias  endocrinas  y  paracrinas  tales  como 

leptina,  adipsina,  PAI‐1  y  la  angiotensina44. 

 

2.1.5.5  FACTORES  QUE  MODULAN  LA  DIFERENCIACIÓN  DE    LOS      ADIPOCITOS 

Según lo expuesto hasta ahora puede deducirse que la diferenciación de los adipocitos 

es  un  proceso  altamente  complejo,  que  se  encuentra  sometido  a  regulación  por 

diferentes hormonas y factores de crecimiento. La identificación de estos factores que 

regulan tanto positiva como negativamente el proceso de diferenciación adipocitario, y 

el  conocimiento  de  las  rutas  implicadas,  provee  importante  información  para  una 

mejor  comprensión  de  los  mecanismos  moleculares  implicados  en  el  proceso 

diferenciador (Tabla 2).  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

19

Tabla 2 

 

 

2.2 CELULAS MADRE 

Las  células  madre  fueron  estudiadas  por  primera  vez  por  Becker  et  al.  (1963), 

quienes  inyectaron  células  de  médula  ósea  en  ratones  irradiados  y 

notaron  que  en  el  bazo  de  los  ratones  se  desarrollaron  nódulos  en  proporción  al 

número de células de médula ósea  inyectadas. Llegaron a  la conclusión de que cada 

nódulo surgió de una sola célula de la médula. Más tarde, encontraron la evidencia de 

que estas células eran capaces de auto‐renovación infinita, una característica esencial 

de  las  células madre. Así,  las  células madre, por  definición,  tienen dos  propiedades 

esenciales,  es  decir,  la  capacidad  de  auto‐renovación,  dando  lugar  a  más  células 

madre,  y  la  capacidad  de 

diferenciarse en linajes de células diferentes bajo condiciones adecuadas. En términos 

generales, hay dos tipos principales de células madre, embrionarias y no embrionarias. 

Las células madre embrionarias  (CES)  son  totipotentes y, por consiguiente,     pueden 

diferenciarse  en  las  tres  capas  germinales  embrionarias.  Por  otro  lado,  las  células 

madre  no  embrionarias  (no‐CES), 

también  conocidas  como  células  madre  adultas,  son  sólo  multipotentes,  su 

potencial  de  diferenciarse  en  diferentes  tipos  de  células  parece 

20

ser más limitado 45. La potencialidad de estas células y la facilidad relativa de aislarlas y 

amplificarlas son propiedades de valor incalculable para la medicina regenerativa. 

 

2.2.1.‐  CONCEPTOS Y DEFINICIÓNES 

 

Nicho de células madre 

Varias  ideas se han propuesto para explicar  la determinación del  linaje de  las células 

madre. Una  línea  actual  de  investigación  se  centra  en  el microambiente  de  células 

madre  o  "nicho". Un  nicho  se  consiste  de moléculas  de  señalización,  comunicación 

intercelular y  la  interacción entre  las células madre y  su matriz extracelular. Se cree 

que  este microambiente  tridimensional    influencia/  controla  las  propiedades  y  los 

genes que definen  la "troncalidad" de  las células madre, es decir, auto‐renovación o 

desarrollo  de 

células comprometidas 46. Una  interesante teoría propuesta es que  las células madre 

podrían ser células diferenciadas terminales con el potencial para mostrarse como un 

tipo de célula u otro, dependiendo del lugar de acogida. Las células madre adultas que 

se  implantan  en  un  lugar  totalmente  diferente  (diferente  capa  germinal) 

potencialmente  pueden  diferenciarse  en  tipos  celulares  similares  a  los  que  se 

encuentran  en  el  nuevo  entorno.  Por  ejemplo,  se  ha  visto  que  células  madre 

neuronales  humanas  producen  músculo  cuando  se  implantan  en  el  músculo 

esquelético  47.  Células  de  la  médula  ósea  se  diferenciaron  en  células  neuronales 

cuando  fueron  trasplantadas  en  un  tejido  neural  48.  Además,    se  logró 

"transdiferenciación"  de  células  hepáticas  en  celulas  los  islotes  49.  Estos 

resultados evidencian la posibilidad de la influencia "fuerte" del nicho que conduce a la 

plasticidad de células madre adultas (la capacidad de desdiferenciación en  las células 

de  otros  linajes.  El  entusiasmo  generado 

por  estos  hallazgos  en  la  plasticidad  de  células  madre  ha  sido  contrarrestado 

por un grado de controversia y escepticismo en muchos centros de  investigación que 

sugieren la fusión célula‐célula, en lugar de la plasticidad 50. Sin embargo, se necesitan 

más  estudios  para  comprender  plenamente  el  mecanismo  de  potencial  de 

diferenciación de células madre. 

 

21

2.2.2.‐  CELULAS MADRE DE ORIGEN EMBRIONARIO 

 

Las células embrionarias  (ESCs) pluripotenciales se derivan de  la masa celular  interna 

(ICM)  de  blastocistos  de  5‐6  días  de  vida.  Cuando  un  blastocisto  se  implanta  en  el 

útero,  la masa  celular  interna  (ICM)  con el  tiempo  se  convierte en un  feto humano 

(dentro de 2 meses)  y el  trofoblasto  circundante  se desarrolla en  la placenta.  En  la 

embriogénesis,  ICM  da  lugar  a  dos  capas  de  células  distintas,  la  epiblasto  y  el 

hipoblasto. El hipoblasto forma el saco vitelino, mientras que el epiblasto se diferencia 

en las tres capas clásicas del embrión, es decir, ectodermo, mesodermo y endodermo, 

con la posibilidad de formar diferentes tejidos del cuerpo. Las ESCs se describieron por 

primera vez por Martin (1981) de la Universidad de California en San Francisco. A partir 

de  entonces,    tomó  17  años  antes  de  que  la  primera  línea  de  ESCs  humanas    sea 

establecida  en  1998  51. 

en  la Universidad  de Wisconsin‐Madison,  EE.UU. Hasta  la  fecha,  por  lo menos  225 

líneas  de  ESCs  humanos  han  sido  creadas.  Una  línea  de  ESCs  se  define  por  la 

"inmortalidad" de las células en cultivo. 

 

El Blastocisto y la clonación terapéutica 

El pluralismo ético y legal en Europa implica que depende de cada uno de los Estados 

miembros  legislar sobre  la situación de el embrión humano y sobre el uso de células 

madre. Así, la legislación en materia de ESCs es diversa en toda la Unión Europea (UE). 

Por ejemplo, no existe una  legislación  sobre  la  investigación de embriones en  Italia, 

Luxemburgo y Portugal. Por otro  lado,   en Finlandia, Bélgica, Países Bajos, Suecia y el 

Reino Unido la ley lo permite bajo ciertas condiciones, la formación de líneas de ESCs a 

partir  de  embriones  supernumerarios. Alemania  prohíbe  la  producción  de  ESCs  y  la 

investigación con ESCs sólo se permite si se usan  líneas creadas antes de 1 de enero 

2002 en el país de origen, de conformidad con las la legislación nacional. Por otro lado, 

Austria,  Dinamarca,  Polonia,  Eslovaquia,  Lituania,  Malta,  Francia,  Irlanda  y  España 

prohiben por ley la formación y el uso de líneas de ESCs 52. 

El  punto  de  continuo  debate  ético  sobre  los  ESCs 

es la fuente de donde proviene el blastocisto. Estos son en la actualidad derivados del 

exceso  de  óvulos  fertilizados  obtenidos  in  vitro  en  clínicas  de  fertilización.  Sin 

22

embargo,  esta  fuente  es  limitada  y  otras  opciones  son  posibles,  por  ejemplo,  la 

clonación  nuclear.    La  clonación  nuclear  (también  conocida  como  transferencia 

nuclear)  implica  la  introducción  de  un  núcleo  de  una  célula  donante  en  un  ovocito 

enucleado para  generar un embrión  con un  “maquillaje  genético” que es del 99,5% 

idéntico  al  del  donante.  Hay  dos  tipos  de  clonación  nuclear:  (a)  la  clonación 

reproductiva, que conduce a la generación de un embrión para la continuación de vida, 

y  (b)  la  clonación  terapéutica,  generando  embriones  en  etapas  tempranas  para  la 

adquisición  de  los  ESCs,  que  se  utiliza  en  la  investigación  y  terapias  celulares.  El 

primero es científicamente y éticamente condenado. Sin embargo, este último  tiene 

importantes  implicaciones  para  el  futuro  de  las  terapias  con  ESCs.  Esto  permite    la 

producción  de  líneas  EScs  específicos  para  cada  paciente,  lo  que  evita  reacciones 

alogénicas. Además, estos podrían constituirse en bancos y con el tiempo ser utilizados 

para  el  tratamiento  de  futuras  condiciones  médicas. 

 

2.2.3. CÉLULAS MADRE NO EMBRIONARIAS 

 

Células madre  (Non‐ESCs) no  embrionarias  son de  jerarquía más baja dentro de  las 

variedades de celulas madre. Se cree que han perdido  la capacidad pluripotente que 

las  ESCs  tienen.  Sin  embargo,  durante  toda  la  vida  de  un  organismo,  Non‐ESCs 

mantienen el potencial de diferenciación multipotente. Non‐ESCs se pueden derivar de 

varias  fuentes  incluyendo  líquido  amniótico  53,  el  cordón  umbilical  (gelatina  de 

Wharton), el tejido adiposo, sistema nervioso central, médula ósea, la retina y la piel. 

 

 

2.2.3.1. CÉLULAS MADRE DERIVADAS DE MÉDULA ÓSEA 

 

En  biología    la  palabra  "Estroma"    se  refiere  a  los  tejidos, 

o  "parénquima",  que  da  soporte  a  las  células  activas  con  funciones  específicas.  Los 

hematólogos  fueron  los  primeros  en  describir  el  estroma  de  la médula    como  una 

población heterogénea de  células del  tejido  conectivo. Estas  células    son el  soporte 

estructural  de  la  hematopoyesis  de  la médula  54.  Así,  esta  compleja  estructura  de 

células  heterogéneas  constituye  el  “nicho”  de  las  células  madre  hematopoyéticas, 

23

estas últimas, posiblemente,  también apoyan a células de  la médula ósea,  formando 

un  doble  “nicho”  en  ambos  sentidos.  A  partir  de  entonces,  el  término  “células 

estromales de la medula osea” (BMSCs) se aplicó a células aisladas de la médula ósea 

con  potencial  para  formar  los  tejidos  conectivos.  Entre  estas  BMSCs  existe  una 

subpoblación  de  células  indiferenciadas  pluripotentes  capaces  de  generar 

mesénquima, la masa de tejido que se desarrolla a partir del mesodermo del embrión. 

Esta población celular que se conoce que esta presente en todos  los tejidos después 

del  parto  y  se  define  como  células  madre  mesenquimales  55.  Las  células  madre 

derivadas  de  la  médula  ósea,  se  aislaron  y  describieron  por  primera  vez  por 

Friedenstein y Owen en la Universidad de Oxford, Reino Unido, en  la década de 1960 56. Tomaron la médula ósea y la incubaron en plastos plásticos de cultivo, después de 4 

h  retiraron  las  células  no  adherentes.  Una  población  de  células  heterogeneas    fue 

recuperada,  con  algunas  células  adherentes  que  muestran  una  forma  de  huso; 

también, se multiplicaron rápidamente  in vitro,  formando distintas colonias  llamadas 

unidad formadora de colonias de fibroblastos (CFU‐Fs) 57. Con el tiempo, estas células 

se  aislaron  con  éxito  en  varios mamíferos,  incluyendo  seres  humanos.  Además,  se 

encontró  que  las  CFU‐Fs  tienen  potencial multipotente,  lo  que  implica  que  tienen 

propiedades de  células madre  58. Estas  células  se diferenciaron  in vitro en múltiples 

linajes de células mesenquimales,  incluyendo el hueso  59,  ligamento  60, adiposo  61, el 

cartílago 62 y el músculo 63. Asimismo, tras el trasplante de CFU‐Fs en vivo, se formaron 

pequeños  depósitos  de  hueso,  cartílago  o  grasa.  Esto  sustentó  más  el  potencial 

multipotente  de  las  CFU‐Fs.  Células  similares  se  han  aislado  de  diferentes  tejidos 

mesenquimales,  incluyendo  sinovia,  los  tendones,  los músculos esqueléticos y  tejido 

adiposo incluyendo la almohadilla de grasa de la articulación de la rodilla 64. 

BMSCs o MSCs son por lo general aisladas de la capa mononuclear de la médula ósea 

después de la separación por el gradiente  de densidad  en centrifugación. Estas células 

mononucleares  se  cultivan en medios de  cultivo que  contienen un 10‐15% de  suero 

fetal bovino o suero autólogo. Las BMSCs se adhieren al plástico de cultivo de tejidos, 

dejando pequeñas células  adheridas similares a fibroblastos. A partir de entonces, las 

células se dividen y proliferan rápidamente.  In vitro, se ha observado que  las BMSCs  

necesitan  de  ácido  ascórbico,  β‐glicerofosfato  y  glucocorticoides,  como  la 

dexametasona  durante  2‐3  semanas  para  inducir  la  diferenciación  osteogénica  65. 

24

Varios  otros  métodos  se  utilizan  para  ayudar  a  diferenciar 

BMSCs en condrocitos, adipocitos, miocitos o tenocitos in vitro. 

 

2.2.3.2. CÉLULAS MADRE DERIVADAS DE TEJIDO ADIPOSO 

 

En  el  2002,  Zuk  y  et  al,  demostraron  que  el  tejido  adiposo  humano  "grasa  "  

puede  ser  una  buena  fuente  alternativa  de  células madre multipotentes.65,  66.  Estas 

células madre (ADSCs) derivadas de tejido adiposo, tienen una capacidad osteogénica 

in vitro 67 e in vivo. Del mismo modo, ADSCs pueden ser inducidas para diferenciarse in 

vitro  en  diferentes  líneas  celulares,  incluyendo  condrogénicas  68,  adipogénicas, 

hepáticas 69 y linajes neurogénicos 70. Mizuno et al. (2002) demostraron que las ADSCs 

cultivadas en condiciones miogénicas  llevó a  la expresión de genes  relacionados con 

los  músculos  71.  Rangappa  et  al.  (2003)  obtuvo 

diferenciación  cardiomicitica,  jugando  con  las  células  de  manera  espontánea  y 

manteniendo  su  fenotipo  por  un  máximo  de  2  meses.  Por  otra  parte,  usando  la 

fracción vascular derivado del estroma de tejido adiposo de ratones, se obtuvo células 

hematopoyéticas.  Los  estudios  se  llevaron  a  cabo  para  caracterizar  ADSCs;  estos 

informes mostraron  que  el  fenotipo  y  el  genotipo  a  nivel  transcripcional  son muy 

similares  a  los  de    BMSCs.  Sin  embargo,  el  potencial  de  diferenciación  puede  ser 

diferente.  Afizah  et  al.  (2007)72  encontraron  que,  en    condiciones  similares  la 

diferenciación  in vitro condrogénica   es mejor en BMSCs que en ADSCs. En particular, 

se  han  empleado  clínicamente  para  controlar  las  reacciones  de  injerto‐huésped  en 

trasplante hematopoyético (Le Blanc et al., 2002). Del mismo modo, se ha encontrado 

que  las ADSCs tienen funciones inmunorreguladoras. Clínicamente, García‐Olmo et al. 

(2005) informó sobre el uso de ADSCs en el tratamiento de las fístulas relacionadas con 

la enfermedad de Crohn en cuatro pacientes. Los autores demostraron que la mayoría 

de  las  fístulas  curaron  con éxito. Además,  Lendeckel et al.  (2004)73  trató a un  joven 

paciente  con ADSCs  autólogas,  el paciente  tenia  varios defectos de  calota  craneana 

ocasionados  por multiples  lesiones  en  la  cabeza.  El  paciente mostró  aumento  de  la 

formación de hueso  y  la  curación  casi  completa.  La evidencia experimental  y  clínica 

muestra  que  ADSCs  son  una  fuente  alternativa  adecuada  para  la  regeneración  en 

medicina.  En  particular,  se  sabe  que  las ADSCs  pueden  ser mantenidas  in  vitro  por 

25

largos períodos de tiempo con duplicaciones de población estable y bajos niveles   de 

senescencia66.  A  pesar  de  que  la  médula  ósea  es  una  confiable 

fuente  de  células madre,  su  cosecha  es  un  procedimiento  invasivo  y  el  número  de 

células  aisladas  puede  ser  bajo  y  dependiente  de  la  edad.  Pittenger  et  al.  (1999) 

mostró que  sólo 0.01‐0.001% de  las células mononucleares aisladas de médula ósea 

conducen a unidades formadoras de colonias. Por otra parte, el tejido adiposo puede 

producir  grandes  cantidades  de  células  madre  y 

se puede obtener en abundancia 74. Las ADSCs  han abierto numerosas perspectivas y 

se ve muy prometedor para terapias regenerativas. 

 

2.2.3.3. CÉLULAS MADRE DERIVADAS DE PRECURSORES DE LA PIEL (SKP)  

 

La piel es considerada como el órgano más grande del cuerpo. Al  igual que el  tejido 

nervioso, se desarrolla a partir de la capa germinal ectodermica del embrión. Toma et 

al.  (2001) describió el aislamiento de células multipotentes de  la dermis de roedores 

jovenes  y  adultos.  Los  autores  afirman  que  estas  células    in  vitro  proliferaron  y 

diferenciaron  en  diferentes  tipos  de  celulas  tanto  neurales  como  del mesodermo, 

incluidas las neuronas, glía, músculo liso y adipocitos. A pesar de las CMM también se 

pueden aislar de la piel, se sugirio que, al ser nestina positivo, precursor derivado de la 

piel, son un tipo diferente de células madre 75. La mayoría de las células de los nervios 

generados  por  SKPS  son  similares  a  las  neuronas  periféricas  y  de  Schwann  células. 

Estas células estarían presentes en  la piel durante  la embriogénesis, que persisten en 

los  números más  bajos  en  la  edad  adulta  76.  SKPS  pueden  ser  aislados  de  tejidos 

humanos,  incluyendo tan sólo 2.1 cm3 de prepucio y pequeños biopsias por punción 

del cuero cabelludo 77. El descubrimiento de SKPS tiene gran importancia terapéutica.  

Dado  que  en  la  piel,  los  SKPS  son  fuente  disponible  y  accesible  de  los  precursores 

neurales que se puede utilizar para  las terapias regenerativas de  la sistema nervioso. 

Hasta  la fecha, se han realizado estudios sobre el uso de  las células de Schwann para 

lesiones  de  la  médula  espinal.  Sin  embargo, 

las  biopsias  de  nervio  son  necesarias,  ya  que  es  una  fuente  frente  a  posibles 

complicaciones.  Además,  las  células  de  Schwann  tienen  un  potencial  de  expansión 

limitada. Debido a la capacidad de SKPS de diferenciarse en células de Schwann, estas 

26

células ofrecen una alternativa de  fuente autóloga. Esto da a  la piel no  sólo un uso 

interesante  para  la  regeneración  del  nervio  periférico 

sino  también una  fuente de  células para  la osteogénesis. Sin embargo,  se  requieren 

más estudios adicionales para establecer claramente su potencial. 

 

2.2.3.4. CÉLULAS MADRE DERIVADAS DE LÍQUIDO AMNIÓTICO 

 

En el Instituto Wake Forest fueron capaces de aislar células madre multipotenciales en 

el  líquido  amniótico  78.  Estas  células  de  alguna  manera  representan  una 

etapa  intermedia  entre  los  dos  tipos  de  células madre,  CES  y  no  los  CES.  Líquido 

amniótico  derivado  de  células  madre  se  encontraron  para  expandir  ampliamente. 

Estas  células  tienen  la  capacidad  de  diferenciarse  en  células  funcionales 

correspondientes  a  cada  una  de  los  tres  capas  principales  germinales  embrionarias 

(ectodermo,  endodermo  y  el  mesodermo);  así  ser  capaces  de  dar  lugar  a  células 

adipogénicas, osteogénica, miogénica, endoteliales, neuronales y hepáticas.  

 

2.2.3.5. CÉLULAS MADRE DERIVADAS DEL CORDÓN UMBILICAL  

 

El  cordón  umbilical  y  tejido  de  la  placenta  puede  proporcionar  células  madre 

a través de dos compartimentos, de  la sangre del cordón umbilical y de  la matriz del 

cordón umbilical, también conocido como gelatina de Wharton. La sangre del cordón 

umbilical  es  una  fuente  de  células  madre  pluripotenciales79  y  de  células  madre 

hematopoyéticas.  Cuando  se  trasplantan  a  un  alo‐receptor,  estas  células muestran 

baja  inmunogenicidad  y  pueden  tener  incluso 

funciones inmunosupresoras localizadas. Esta fuente de células madre tiene la ventaja 

de estar disponible (normalmente se desecha) y su uso no origina ningún problema de 

morbilidad a  la madre o al  recién nacido.   Esto proporciona un potencial  suministro 

ilimitado  de  células madre,  con  la  posibilidad  de  aislar  un  gran  número  de  células 

madre  con  pocas  o  ninguna  consideración  ética.  Estas  propiedades  hacen  que  las 

células del cordón umbilical sean ideales para la práctica actual de almacenamiento de 

células madre. 

 

27

2.2.4. APLICACIONES CLINICAS Y EXPERIMENTALES 

2.2.4.1. EL TEJIDO ÓSEO, CARTÍLAGO, TENDONES Y LIGAMENTOS, MEDULA ESPINAL, 

MUSCULO CARDIACO, VEJIGA 

 

2.2.4.1.1. El tejido óseo 

 

Los defectos óseos se producen debido a causas congénitas o adquiridas, tales como 

trauma,  cirugía  y  tumores,  que  pueden  dar  lugar  a  una  pérdida  ósea  extensa  y  a 

defectos  que  requieren  trasplante  de  tejido  óseo  o  sustitutos  para  restaurar  la 

integridad  estructural  y  la  funcionalidad.  El  tratamiento  postraumático  de 

complicaciones  esqueléticas,  como  el  retraso  en  las  uniones,    la  falta  de  unión  y 

uniones defectuosas, son desafiantes. El “Estándar de oro”  actual es el uso de injertos 

autólogos  de  hueso  esponjoso.  Sin  embargo,  la  disponibilidad  ósea  adecuada  es 

limitada,  especialmente  en  pacientes  con  osteoporosis,  pacientes  pediátricos  y 

oncológicos  y  su obtención  incrementa  la morbilidad de  la  zona donante,  lo que da 

lugar al dolor, al hematoma o  infección. El  injerto de hueso no es eficaz en todos  los 

casos. Actualmente ya se practican terapias alternativas, incluyendo el uso de factores 

de  crecimiento  como BMPs  80. Un nuevo enfoque es el uso de  terapias  con  células, 

incluyendo BMSCs. La mayoría de los estudios clínicos y experimentales proporcionan 

pruebas  que  apoyan  la  eficacia  de  BMSCs  en  la mejora  de  la  formación  ósea  y  la 

cicatrización de defectos del hueso. Los grandes modelos animales mostraron que el 

tratamiento de grandes defectos óseos  con  la aplicación de BMSCs  con un portador 

osteoconductivo  puede tener éxito 81. Los resultados experimentales en el campo son 

lo suficientemente sugerentes para la aplicación clínica. 

2.2.4.1.2. Cartílago 

 

El  cartílago  articular  tiene  un  escaso  potencial  de  regeneración  después  de    ser 

lesionado, como consecuencia de ello cambios degenerativos y artritis pueden surgir 

después de la lesión. Procedimientos que emplean las células madre como un modo de 

tratamiento  han  evolucionado  con  el  tiempo.  Wakitani  et  al. 

(1994) informó sobre el uso exitoso de MSCs en un Gel de colágeno tipo I para reparar 

defectos  condrales  carpianos.  Esto  se  tradujo  con  éxito  a  la  práctica  clínica.  El 

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trasplante  autólogo  de  BMSCs  se  utilizó  para  tratar  defectos  del  espesor  total  del 

cartílago  articular  en  las  rótulas  de  dos  pacientes  82.  También  informaron  sobre  12 

pacientes que sufrieron de osteoartritis de  la rodilla (OA), que recibieron  inyecciones 

con BMSCs en los defectos del cartílago del cóndilo medial femoral en el momento de 

realizar  osteotomía  tibial  alta.  Experimentos  anteriores  y  actuales  indican  que  las 

BMSCs  representan  una  opción  alternativa  para  ayudar  a  regenerar  los meniscos  y 

prevenir la artrosis. 

 

2.2.4.1.3.  Los tendones y ligamentos 

 

Estos tejidos se curan con tejido cicatrizal de inferior calidad, con el riesgo de ruptura 

posterior  en  el  sitio  de  la  reparación  o  formación  de  adherencias  fibrosas.  Varios 

estudios  se  han  llevado  a  cabo  para  estudiar  la  posibilidad  de  utilizar  terapias  de 

regeneración  basadas  en  el  uso  de  células.  Cao  et  al.  (2002)  obtuvieron  buenos 

resultados  con  tenocitos  implantados  subcutaneamente  en  entramados  de  ácido 

poliglicólico  en  ratones  experimentales.  Sin  embargo,  los  tenocitos  tienen  una  zona 

limitada de obtención y  requieren  largo  tiempo de cultivo  in vitro. Por  lo  tanto, una 

posible  alternativa  es  el  uso  de  BMSCs  para  tales  terapias  regenerativas. 83. BMSCs se sembraron en lesiones experimentales de 1 cm en el tendón de Aquiles de 

conejos, y   se demostró buena formación de fibras transversales de colágeno. BMSCs 

también  pueden  ser  utilizadas  clínicamente  para  incrementar  la  curación  en  la 

interface  hueso‐tendón  después  de  procedimientos  como  la  reconstrucción  del 

ligamento cruzado anterior 84. 

 

2.2.4.1.4.  La médula espinal 

 

El traumatismo de la médula espinal puede llevar a graves daños neurológicos. A pesar 

de que  las células madre endógenas presentes en  la médula espinal tienen capacidad 

de regeneración, la recuperación de la lesión de la médula espinal es difícil.  A partir de 

que  es  posible  la  diferenciación  in  vitro  de  BMSCs  en  células  neuronales  85,  una 

estrategia  para  mejorar  la  regeneración  anxonal  podría  implicar  el  trasplante  de 

BMSCs en  la médula espinal  lesionada. El traslado de modelos animales a ensayos en 

29

humanos es difícil; sin embargo, ensayos clínicos controlados aleatorios son necesarios 

para comprender el uso potencial de células madre para el tratamiento de lesiones de 

la médula espinal. 

 

2.2.4.1.5. Músculo cardíaco 

 

El descubrimiento de un sistema de reparación endógeno cuestiona el viejo paradigma 

que describe al corazón como un órgano post mitotico. Nos lleva a la hipótesis de que 

la regeneración cardiaca puede ser regulada por  las células madre. De hecho, células 

en división con grandes figuras de mitosis se encontraron en el músculo cardíaco. Estas 

pueden ser de origen endógeno, derivadas del epicardio, o incluso ser extracardíacas. 

Esto último es sugerido por estudios de pacientes sometidos a trasplante de corazón,  

los pacientes eran de sexo masculino y recibieron corazones femeninos, mostrando en 

las  biopsias  cardiomiocitos    que  llevan  cromosoma  Y    86.  Además,  una  población 

endógena  de  células madre  cardíacas  capaces  de  diferenciarse  en  cardiomiocitos  y 

linajes vasculares se ha aislado y expandido con éxito a través de biopsias de miocardio 

humano.  Esto  sugiere  que  estas  células  podrían  utilizarse  para  reparar  el  tejido 

cardiaco.  La  inyección  intramiocárdica  de  estas  células  después  de  un  infarto  en 

ratones,  produjo  la  formación  de  cardiomiocitos  y  células  vasculares, mejorando  la 

función sistólica 87. 

Una  fuente  alternativa  de  células  es  el  uso  de  BMSCs.  La  regeneración  de  la 

enfermedad  isquémica  del  corazón  se  puede  lograr mediante  la  distribución  en  las 

arterias  coronarias  de médula  ósea  integra  o  de  BMSCs  cultivadas  y  expandidas,  o 

directamente en el miocardio, para aumentar  la regeneración endógena del conjunto 

de células  88.  Janssens et al.  (2006)  informó  sobre  la  implantación de BMSCs para el 

tratamiento del infarto de miocardio. La terapia con células madre dio como resultado 

una reducción significativa en el tamaño del  infarto de miocardio y mejores tasas de 

recuperación de  la función sistólica regional después de 4 meses de seguimiento. Sin 

embargo, no  se observó ningún beneficio  significativo en  términos de  la  fracción de 

eyección del ventrículo  izquierdo, perfusión del miocardio o el metabolismo cardíaco. 

El mecanismo de reparación tras el  implante de células madre aún no está claro. No 

hay evidencia que confirma la presencia de estructuras contráctiles derivadas de BMSC 

30

después  de  la  implantación  en  el  músculo  cardíaco. 

 

2.2.4.1.1.6. Tejidos Urinarios‐La vejiga 

 

Los urólogos siempre han tenido que hacer frente al problema de la sustitución vesical. 

Tradicionalmente, esto ha sido  llevado a cabo mediante  la construcción de neovejiga 

con  segmentos  de  intestino.  Sin  embargo,  esto  implica  la  complicada  resección 

intestinal y las posibles complicaciones, tales como adherencias, la secreción de moco, 

alteraciones metabólicas e  incluso transformación maligna. Por  lo tanto, es necesario 

encontrar alternativas adecuadas. 

La regeneración célular de  la vejiga hecha mediante bioingeniería se ha reportado en 

varios modelos animales 89. Atala et al. (2006)  informó sobre el primer ensayo clínico 

de  las  vejigas  de  ingeniería  que  se  llevó  a  cabo  en  siete  pacientes  con 

mielomeningocele que  sufrían de  alta presión o  vejigas  con mal  funcionamiento.  La 

aplicación clínica de  la  ingeniería de  tejidos ha permitido dar pasos  importantes,  sin 

embargo, queda mucho por hacer en el futuro para  lograr el objetivo de regenerar y 

trasplantar  un  órgano  completo  en  urología. 

 

2.3 LIPOSUCCION 

El  exceso  de  grasa,  antes  de  que  apareciera  el  concepto  de  liposucción,  se  trataba 

extirpándola  junto  con  la  piel,  por  medio  de  pequeñas  incisiones,  dejando  en 

consecuencia muchas  cicatrices. En  la década de  los 70, Schrudde  fue el pionero en 

este tipo de técnica cerrada,  llamándola  lipoexéresis. Realizaba  la extracción de grasa 

haciendo uso de una legra uterina. Aunque fue utilizada por diversos cirujanos, dejó de 

emplearse porque producía linforreas e irregularidades cutáneas. 

Giorgio Fischer fue el primero en crear un  instrumento especialmente destinado para 

la extracción de  tejido  adiposo, que denominó   planótomos  y un  aspirador de  gran 

potencia  para  transportar  este  tejido  adiposo  hacia  el  exterior.  De  esta  manera, 

lograba la exéresis de la grasa a 13 mm por debajo de la piel, mediante un movimiento 

electromecánico que seccionaba y fragmentaba el tejido adiposo, para poder extraerlo 

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a  través de  la aspiración. El planótomo consistía en una cánula  roma con un orificio 

cercano  a  su  extremidad.  A  pesar  de  ser  romo,  el  orificio  presentaba  una  lámina 

cortante,  que  destruía  todos  los  vasos  sanguíneos,  provocando  grandes 

complicaciones, como hemorragias y linforreas de larga duración. 

En el año 1977,  Illouz empezó a utilizar  la técnica de  lipolisis con una cánula roma, al 

igual que Fisher, para  ir creando túneles. Infiltraba de manera previa a  la cirugía, una 

solución hipotónica para  romper  las células y  facilitar  su aspiración. Esta  técnica  fue 

llamada Blunt Disection (disección con cánula roma). 

Esta técnica fue seguida también por   Pierre Fournier, pero a diferencia de  Illouz, era 

un procedimiento  seco,  llamándola  Lipoplastia,  ya que  realizaba  la  liposucción de  la 

grasa y un remodelamiento periférico. 

Illouz  presentó  su  técnica  a  la  Sociedad  de  Cirujanos  Plásticos  Franceses  en  1979, 

empezando  de  esta  manera  la  verdadera  difusión  de  esta  nueva  técnica  para  el 

tratamiento de las lipodistrofias localizadas. 

A partir de entonces, se han producido modificaciones y adelantos en la técnica. El uso 

de jeringas, ultrasonido y laser son alguno de ellos. 

Actualmente  la  liposucción  se  ha  convertido  en  uno  de  los  procedimientos  más 

realizados dentro de la especialidad de Cirugía Plástica y en la primera indicación para 

mejorar el contorno corporal. 

 

 

 

 

 

 

 

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III. JUSTIFICACIÓN, OBJETIVOS E HIPOTESIS 

 

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JUSTIFICACION 

La  importancia de este estudio  sobre  la obtención de  células madre mesenquimales 

procedentes de  tejido adiposo,  radica precisamente en  la  técnica utilizada. El poder 

demostrar  la  validez  de  un  procedimiento  ambulatorio,    permitiría  una  mayor 

accesibilidad  a  los  médicos  que  trabajan  de  forma  frecuente  con  la  grasa.  Esto 

contribuiría  a  seguir  abriendo  posibilidades  y  oportunidades  para  el  campo  de  la 

investigación científica y   facilitaría  la utilización de  las células madre mesenquimales 

en medicina regenerativa y otras especialidades como la estética. 

 

OBJETIVOS 

. Demostrar la presencia de células madre mesenquimales viables en el tejido adiposo 

obtenido de una técnica ambulatoria, tanto antes como después de su procesamiento 

y crioconservación. 

. Validar la técnica de obtención ambulatoria de células madre mesenquimales viables 

a partir del tejido adiposo. 

 

HIPOTESIS 

.  En  el  tejido  adiposo  obtenido  a  partir  de  una  técnica  ambulatoria  se  obtiene  e 

identifica un número suficiente y viable de células madre mesenquimales, tanto antes 

como después de su procesamiento y crioconservación. 

.  La  técnica de obtención  ambulatoria de  células madre mesenquimales  a partir del 

tejido adiposo es un procedimiento válido. 

 

 

 

 

 

 

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IV. MATERIAL Y MÉTODOS 

 

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El diseño del estudio es de tipo descriptivo, abierto (ya que los investigadores conocen 

las variables que se estudian), experimental y transversal. 

La población de estudio fue de 5 pacientes, 3 de sexo femenino y 2 de sexo masculino. 

La edad estaba comprendida entre los 35 a 63 años. (Tabla 3) 

La  selección  fue  de  tipo  no  aleatoria,  con  el  siguiente  criterio  de  exclusión,  no 

presentar seropositividad frente al VIH ni al VHB. 

A todos se les practicó la extracción de 60 gr grasa, a nivel de abdomen (2) y de flanco 

izquierdo (3). 

Todas las muestras fueron enviadas a un laboratorio en Bélgica (Niel), conocido como 

Crio Save, Banco de Células Madre; donde fueron procesadas y crio preservadas a una 

temperatura promedio de ‐196 ºC. 

 

Tabla 3 

Paciente  Codificación  Sexo  Edad  Zona de extracción 

1  L00028  M  63  Abdomen 

2  L00029  F  41  Abdomen 

3  L00030  M  35  Flanco izquierdo 

4  L00031  F  47  Flanco izquierdo 

5  L00032  F  35  Flanco izquierdo 

 

 

4.1 DESCRIPCIÓN DE LA TÉCNICA 

4.1.1. INSTRUMENTAL 

 

El material que se necesita para    la obtención ambulatoria de  la grasa es el siguiente 

(Foto 1): 

.‐ Jeringuilla de 5 cc (con anticoagulante para la toma de muestra de sangre). 

.‐ Jeringuilla de 5cc luer lock. 

.‐ Jeringuilla de 20cc luer lock (para infiltrar la anestesia local) 

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.‐ Jeringuilla VacLock de 50 cc (con seguro para mantener el vacío al tirar del émbolo 

hacia atrás.) 

.‐ Aguja de 30 G (para hacer el habón anestésico). 

.‐ Aguja Spinocan (Yale) de 19 G. (para la infiltración de la anestesia local). 

.‐ Aguja de 18 G  ( para hacer  la  incisión  en  la piel por donde  va  a entrar  la  cánula 

LuerLock). 

.‐ Aguja de 21 G (para toma de muestra de sangre). 

.‐Solución Salina al 0.9%. 

.‐ Lidocaína al 2%. 

.‐ Adrenalina. 

.‐ Cánula LuerLock (con 4 agujeros, 3 mm x 15 ctm). 

.‐ Bolsa recolectora para la grasa ( freeze‐Pak 60 ml Bio‐Container). 

.‐ Bolsa de plástico con cierre hermético (safety bag with hermetic quick lock). 

.‐ Recipiente para almacenar la solución anestésica. 

.‐ Tallas estériles (campos). 

.‐ Clorhexidina acuosa al 2%. 

.‐ Gasas. 

.‐ Guantes estériles sin polvo. 

.‐ Méfix. 

.‐ 2 Packs de gel. 

.‐ Caja de polietileno (inner small cardboard box inside a neopor box for transport). 

.‐ Caja de cartón con código de barras y con el código del paciente (para transportar la 

grasa). 

.‐  Etiquetas  con  código  de  barras  con  el  número  de  cada  paciente,  para  poder 

indentificar las muestras. 

 

37

 Foto  1.  Parte  del material,  que  incluye  agujas  (30 G,  18 G,  19 G),  cánula  LuerLock,  jeringuillas  de  5  cc,  20  cc, jeringuilla VacLock de 50  cc, bolsa  recolectora para  la grasa  (freeze‐Pak 60 ml Bio‐Container),  recipiente para  la solución anestésica, gasas. 

 

4.1.2.‐ ELECCIÓN DE LA ZONA DONANTE 

 

Las zonas donantes para la extracción ambulatoria de grasa, son las zonas descritas por 

Mendieta, que pueden ser abdomen, flancos, trocánteres y caras internas de muslos y 

rodillas 90. 

Por comodidad para el paciente y para el cirujano y por que es  la zona que con más 

frecuencia hay acumulo de grasa, preferimos la zona del abdomen y de ésta la región 

infraumbilical, pero esto va a depender de cada paciente.  En pacientes con poca grasa, 

se  pueden  utilizar  varias  zonas  para  poder  obtener  la  cantidad  necesaria  de  tejido 

adiposo. 

 

Se realiza el marcaje del área donante con rotulador no permanente. 

 

4.1.3 DESINFECCIÓN Y ANESTÉSIA. 

 

Una  vez definida  la  zona donante  (abdomen,  flancos,  trocánteres,  caras  internas de 

muslos y rodillas), se procede a la desinfección del área con clorhexidina acuosa al 2%( 

para no manchar al paciente con soluciones yodadas).  Se pone el campo estéril. 

 

En un  recipiente preparamos  la anestesia que se va a utilizar,  la misma que consiste 

en: Solución Salina al 0.9% 60 cc + lidocaína al 2% 10 cc. 

38

Se realiza un habón anestésico (con la jeringuilla 5 cc y con aguja de 30 G más lidocaína 

al 2%) en el punto por donde va a entrar la aguja Yale y de la cánula. 

 

Se procede a  infiltrar  la  solución anestésica  con  la  jeringuilla  luer  lock de 30  cc  con 

aguja Yale de 19 G.  Primero en un plano  subcutáneo profundo, de manera muy lenta 

(para que moleste menos), y luego de manera más superficial. 

 

Se espera 10 minutos para que actúe la anestesia. 

 

4.1.4 OBTENCIÓN DE LA GRASA 

 

Una  vez  que  ha  transcurrido  el  tiempo  de  espera  para  que  actúe  la  anestesia  (10 

minutos),  se procede a obtener la grasa. 

 

Se  realiza una pequeña  incisión  con  la  aguja de 18 G,  (en el punto en donde  se ha 

hecho el habón anestésico),  se introduce la cánula (LuerLock con 4 agujeros de 3mm x 

15 ctm), se conecta a la jeringuilla (VackLock syringe de 50 cc), se desplaza el émbolo 

hacia atrás para crea el vacío y se gira el mismo para bloquearlo, de ésta manera se 

mantiene el vacío.   

 

Con movimientos hacia delante y hacia atrás se realiza  la pequeña  liposucción, con  la 

precaución  de  realizar  los  movimientos  en  forma  de  abanico,  para  no  provocar 

depresiones en  la zona donante, y sin salirnos de  la zona de  la  infiltración anestésica, 

para no provocar dolor al paciente.  Una vez que se a llenado la jeringuilla VackLock, se 

pasa el tejido adiposo a la bolsa recolectora, para esto se retira la cánula y se enrosca 

la  jeringuilla al seguro de  la misma. Se apertura el seguro de  la bolsa y se procede a 

transferir  la  grasa,  lentamente;  una  vez  terminado,  se  cierra  el  seguro  de  la  bolsa 

recolectora  y  se  desenrosca  la  jeringa,  así  mantenemos  la  esterilidad  en  todo 

momento del tejido graso. Este proceso se repite hasta alcanzar los 60 cc de grasa. 

 

Finalmente, se procede a la extracción de 5 cc de sangre, con la jeringuilla de 5 cc (con 

anticoagulante) y aguja de 21 G. 

39

La bolsa recolectora con la  grasa y la jeringa con  la muestra de sangre se introducen 

en la bolsa de plástico con cierre hermético (safety bag with hermetic quick lock) (Foto 

2). 

  Foto 2. Se muestra la bolsa recolectora de grasa, la jeringuilla con 

            la muestra de sangre y la bolsa de plástico con cierre hermético 

 

Se ponen  las etiquetas con el código del paciente en  la bolsa recolectora de  la grasa, 

en  la  jeringa  con  la muestra de  sangre, en  la bolsa de plástico  con  cierre hermético 

(safety bag with hermetic quick  lock), en  la caja de polietileno (inner small cardboard 

box inside a neopor box for transport) y en la caja de cartón. 

 

 En  la caja de polietileno  se ponen 2 packs de gel  (ambos a  temperatura ambiente), 

uno en el fondo y el otro por encima de  la bolsa de plástico con cierre hermético. Se 

cierra la caja de polietileno y se introduce en la caja de cartón (Foto 3 a y b). 

    Foto 3 (a y b). Almacenaje de las muestras recogidas (grasa y sangre) en la caja de polietileno entre dos pack de gel. 

40

4.1.5 TRANSPORTE 

El transporte se debe realizar en el menor tiempo posible (máximo 48 hrs.). Este debe 

de ser a temperatura estable, 22 ºC +/‐ 4 ºC (según Estándares Internacionales para el 

transporte  del  Cordón  umbilical).  La  experiencia  de  Crio‐Save,  en más  de  140  000 

muestras en los últimos 10 años, demuestra que el transporte a temperatura ambiente 

mantiene  el  tejido  adiposo  viable,  manteniéndose  la  capacidad  de  proliferación, 

capacidad de diferenciación (osteoblastos, adipositos y condroblastos) y  capacidad de 

adherencia al plástico (Foto 4). 

Dentro de las primeras 48 hrs. luego de la obtención de la muestra, la temperatura no 

debe exceder los 25 ºC, para evitar la contaminación.  

 

 Foto 4. Caja de Cartón con el código de barras y el número de referencia de cada paciente. 

 

 

 

4.1.6 PROCESAMIENTO 

Inmediatamente  luego  de  la  recolección  de  la  grasa,  ésta  debe  ser  sellada  y 

transportada para su procesamiento, dentro de las siguientes 48 hrs como máximo. En 

caso de que se exceda en el tiempo, las posibilidades de viabilidad de las células madre 

se  reducirían. Una  vez  llegado  al  laboratorio,  la muestra  recolectada  es  equilibrada 

durante 30 minutos, hasta formar 3 fases: una capa de aceite, una fracción de tejido 

adiposo  y  una  fracción  de  fluido.  La  fracción  de  tejido  adiposo  es  extraída;  por  lo 

menos 1ml es extraído, pudiendo extraer preferentemente 5 ml, 7.5 ml o 10 ml. Esto 

dependerá del  volumen del  lipoaspirado.  Se  realiza un  control de  calidad del  tejido 

41

adiposo, para controlar su esterilidad. Esto se realiza filtrando el tejido adiposo usando 

un  filtro  de Milipore  (poros  de  tamaño  de  0.45 micrometro)  y  luego  haciendo  un 

cultivo del filtro, durante 2 semanas; si luego de este tiempo no hay contaminación, se 

considera la muestra estéril.  

 

4.1.7 CRIOCONSERVACIÓN 

Para  esta  etapa  es  necesario  de  un  medio  crioprotector,  una  solución  fisiológica 

conteniendo glycerol, sucrosa y/o albúmina sérica. El glicerol puede estar presente en 

una concentración entre 15 wt% a 25 wt%, siendo el ideal a 20 wt%; la sucrosa entre 4 

wt% a 10 wt%,  (lo  ideal a 0.2 M);  la albúmina  sérica 0.1 wt% a 5 wt%,  (lo  ideal a 2 

wt%).  Lo  ideal  es  contar  con  iguales  concentraciones  de  tejido  adiposo  y  medio 

crioprotector, el volumen ratio aconsejado de tejido adiposo y medio crioprotector va 

en proporción de 2:1 y 1:2, lo preferible es 1:1. 

El medio crioprotector es preincubado a 4ºC durante 15 min, siendo el ideal a 60 min, 

antes de agregar el tejido adiposo. 

Existen  dos métodos  de  crioconservación,  el  lento  y  el  rápido.  El método  lento,  se 

requiere  iguales cantidades de tejido adiposo y de medio crioprotector; se recolectan 

en una bolsa de 100 ml (pudiendo ser también de 50 ml o de 25 ml). La bolsa es llevada 

a una temperatura de 4 ºC. Antes de sellar la bolsa se retira el aire de la misma. Luego 

es enfriada gradualmente hasta aproximadamente  ‐45  ºC.  Se enfría a una velocidad 

que  va  de  ‐0.1  ºC  a  ‐5  ºC  por minuto  (se  prefiere  entre  ‐0.5  ºC  y  ‐2  ºC).  Luego  de 

alcanzar esta temperatura, la bolsa es llevada gradualmente a una temperatura de ‐80 

ºC, ‐100 ºC y ‐150 ºC  para después hacer uso del nitrógeno líquido y llevarla a  ‐196 ºC.  

El método  de  crioconservación  rápido  o  vitrificación  se  realiza  en  cualquier  tipo  de 

contenedor. Se debe de  tener presente que el  congelamiento debe  ser por  igual en 

toda el área del contenedor elegido. En esta fase la bolsa es llevada a una temperatura 

de  ‐80  ºc,  ‐100  ºC,  ‐150  ºC  y  a  ‐196  ºC  con  el  nitrógeno  líquido.  La  velocidad  de 

enfriamiento va de ‐20 ºC a ‐80 ºC por minuto (lo ideal ‐40 ºC a ‐60 ºC). 

 

El tejido adiposo en estado criogénico puede permanecer en esa condición por largos 

períodos de tiempo (meses o años). 

42

Cuando se necesite descongelar, se realiza en baño de María, a máximo 40 ºC (entre 

10 y 40 ºC) la velocidad de descongelamiento va entre 10 a 40 ºC por minuto. 

 

Luego  del  descongelado,  el  tejido  adiposo  es  obtenido  removiendo  el  medio 

crioprotector a través de varias centrifugaciones y lavados secuenciales. 

El control de calidad durante este proceso debe de realizarse varias veces; tanto para 

controlar  la  esterilidad,  caracterización  inmuno  fenotípica,  test  de  diferenciación  y 

control de la morfología de las células madre.  

 

El  control de esterilidad  se  realiza  filtrando el  cultivo a  través de un  filtro  (poros de 

0.22 micrómetros) y posteriormente  se cultiva el  filtro en placas de petri con medio 

agar.  Si  no  se  observa  contaminación  luego  de  2  semanas,  el  cultivo  se  considera 

estéril. 

 

La  caracterización  inmuno  fenotípica de  las  células madre,  se  realiza a  través de un 

análisis  de  citometría  de  flujo.  Durante  este  análisis  los  marcadores  de  superficie 

específicos de las células madre son detectados y analizados. 

 

El  test  de  diferenciación  evalúa  la  capacidad  de  las  células  madre  de  poder 

diferenciarse en osteoblastos, adipositos y condrocitos, usando un  test de cultivo de 

tejido in Vitro. 

 

La morfología de las células madre se realiza por una técnica de inspección visual. 

 

El porcentaje de viabilidad de esta  técnica para obtener células madre viables  luego 

del descongelado va de mínimo 70% a 100% (50 a 100 millones de células madre) 91. 

 

 

 

 

 

43

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

V. RESULTADOS 

 

44

Tabla 4 

Fat number

Visual aspect

Total volume Fat volume

Fat volume %

L00028 bloody 41 12 29% L00029 bloody 24 14 58% L00030 bloody 25 11 44% L00031 bloody 18 10 56%

VA

LID

ATI

ON

SA

MPL

ES

L00032 yellow 45 24 53% mean 31 14 48%

SD 12 6 12% min 18 10 29% max 45 24 58%

Para  las 5 muestras estudiadas: Aspecto visual de  la grasa fresca que  llega al banco, 4 con color rojizo 

(debido a la sangre) y 1 con color amarillo (grasa sin sangre).  Volumen total de grasa fresca nativa de 

cada muestra  que  llega  al  banco  y  el  volumen  promedio,  la  desviación  estándar,  el  valor mínimo  y 

máximo. Fat volume o volumen de grasa procesada (útil) o PLA obtenido  a partir de la grasa nativa que 

llega al banco y el volumen promedio, la desviación estándar, el valor mínimo y máximo. Porcentaje de 

volumen de la grasa nativa que se convierte en PLA y porcentajes promedio, desviación estándar, valor 

mínimo y máximo. 

Grafico 1 

 

Para las 5 muestras estudiadas: comparación entre el número de células madre mesenquimales (MSC) 

por gramo de tejido contabilizadas a P0; tanto antes (grasa fresca), como después de congelar las 

muestras (grasa descongelada). P0 es el momento en que tras ser cultivadas aproximadamente de 7 a 

11 días, las  MSC ocupan el 70% de la placa dónde son cultivadas y se procede a su contaje. 

45

Tabla 5 

 

MSCs in P0 (1g) Fresh Thawed

Fat number cell number # culture

days CD73+ CD105+ CD45/34- vitality (7AAD) cell number

# culture days CD73+ CD105+ CD45/34-

vitality (7AAD)

L00028 563000 9 99 100 99 99 19097 7 - - - - L00029 638000 9 98 98 99 97 648000 7 99 100 99 98 L00030 808600 9 99 100 99 99 733000 7 100 100 99 98 L00031 852000 9 99 99 94 98 884000 7 99 100 96 98

VA

LID

ATI

ON

SA

MPL

ES

L00032 536000 11 98 98 97 97 941000 7 97 98 98 98 mean 679520 9 99 99 98 98 645019 7 99 100 98 98

SD 143448 1 1 1 2 1 368865 0 1 1 1 0 min 536000 9 98 98 94 97 19097 7 97 98 96 98 max 852000 11 99 100 99 99 941000 7 100 100 99 98

Para cada una de las 5 muestras estudiadas, tanto frescas (6 primeras columnas) como descongeladas (6 últimas columnas): 

• Número de MSC a P0. 

• Días de cultivo necesarios para alcanzar PO y contabilizar.  

• Porcentaje de las células que reaccionan positivamente ante los marcadores CD73+, CD 105+, CD 45/34‐, la especificidad de dichos marcadores por las MSC, nos permiten afirmar que se trata de MSC. 

• Vitalidad (7AAD): porcentaje de MSC que están viables (vivas) ya que su membrana ha reaccionado positivamente con la sustancia 7AAD. Cuando la MSC está muerta (no viable), no es capaz de reaccionar con esta sustancia. 

Para todos se muestran porcentaje promedio, desviación estándar, valor mínimo y máximo. 

 

46

Grafico 2 

 

Para cada una de las 5 muestras estudiadas en estado fresco (antes de ser congeladas): Porcentaje de 

las células que reaccionan positivamente ante los marcadores CD73+, CD 105+, CD 45/34‐, la 

especificidad de dichos marcadores por las MSC, nos permiten afirmar que se trata de MSC. Vitalidad 

(7AAD) porcentaje de MSC que están viables (vivas) ya que su membrana ha reaccionado positivamente 

con la sustancia 7AAD.  

Grafico 3 

 

Para cada una de las 5 muestras estudiadas una vez descongeladas: Porcentaje de las células que 

reaccionan positivamente ante los marcadores CD73+, CD 105+, CD 45/34‐.  Vitalidad (7AAD) 

porcentaje de MSC que están viables (vivas) ya que su membrana ha reaccionado positivamente con la 

sustancia 7AAD.  

47

Se obtuvieron 5 muestras para su validación, todas de aspecto rojizo, sanguinolento, 

excepto una, de color amarillo; con un volumen total promedio de 31 ml y un volumen 

promedio de grasa de 48%  o volumen de grasa procesada, útil (PLA) (Tabla 4). 

Para  determinar  la  viabilidad  de  las  células madre  obtenidas    ambulatoriamente  a 

partir de  tejido adiposo  se efectuó una  comparación de  los diversos parámetros del 

SVF  (Stromal  Vascular  Fraction)  de  las  5  muestras  antes  y  después  de  su 

criopreservación. Es decir se compararon diversos parámetros de las muestras frescas 

con  las muestras  descongeladas  para  comprobar  si,  tras  la  criopreservación  de  las 

células  medre,  los  valores  son  comparables  a  los  previamente  existentes  en  las 

muestras frescas (Tabla 5). 

Los parámetros que se determinaron fueron: 

• Número de MSC/g (células madre de origen mesenquimal) a p0. 

• Los marcadores de los antígenos específicos de las células madre: 

  CD 73+ 

  CD 105+ 

  CD 45/34‐ 

• El marcador de vitalidad 7AAD 

 

Número de MSC/g (células madre de origen mesenquimal) en p0 (pasaje 0) 

 

El número que se considera viable en el contaje de MSC /g a p0 es de 12.500 células, lo 

que equivaldría a 500 células por cm2 en un cultivo efectuado sobre una base de 25 

cm2. Por debajo de esa  cantidad  se  considera que no  tienen  capacidad para  seguir 

proliferando hacia el siguiente pasaje, probablemente porque el número de contactos 

intercelulares que se establecerían no serían suficientes.   

 

Todas  las muestras descongeladas presentaron un número de MSC  superiores  a  los 

12500/g y en algunos casos  incluso superiores al número contabilizado en  la muestra 

fresca. (Gráfico 1) 

 

De las 5 muestras, 4 mostraron números dentro del intervalo esperado. 

48

La muestra  descongelada  L00028  presentó  un  número  inferior  al  esperado,  si  bien 

superior al mínimo. Por carecer de muestra sobrante no se pudo repetir el cultivo para 

descartar un artefacto de laboratorio. 

 

Ratio de viabilidad celular 

Expresado en función del valor de los marcadores de antígenos específicos localizados 

en la membrana de las células madre: 

CD 73+ 

CD 105+ 

CD 45/34‐ 

Dichos marcadores establecen los criterios mínimos   para definir  la presencia de MSC 

multipotenciales. 

Tanto  en  las  muestras  frescas  como  en  las  descongeladas  la  presencia  de  dichos 

marcadores fue superior al 94% y se situó muy cerca del 100% en 4 de las 5 muestras 

en  ambos  casos,  lo  que  indica  que  la  población  celular  estudiada  pertenece 

específicamente a la estirpe de MSC (Gráfico 2 y 3). 

Las determinaciones se obtuvieron utilizando la citometría de flujo mediante FACSCAN 

(BD Biosciences)  

 

El marcador de vitalidad 7AAD 

Expresado como  [número de células madre vivas/ número  total de células madre] * 

100. 

De nuevo los resultados entre las muestras respecto a la vitalidad antes y después de 

la  criopreservación  fueron  completamente  comparables,  siendo  el  valor  para  las 

muestras  frescas  de  97‐99%;  y  para  las  muestras  tras  su  descongelación  de  98% 

(Gráfico 2 y 3). 

 

 

 

 

49

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

VI. CONCLUSIONES   

 

50

• Las  células  madre  mesenquimales  se  encuentran  de  forma  viable  en  el  tejido 

adiposo  obtenido  de  manera  ambulatoria,  tanto  antes  como  después  de  su 

procesamiento y crioconservación. • La técnica de obtención ambulatoria de tejido graso, es una técnica válida, ya que 

se  obtienen  células  madre  mesenquimales  viables  antes  y  después  de  su 

crioconservación. • Al  ser una  técnica  ambulatoria,  resulta más  accesible para  los profesionales que 

trabajan con frecuencia con el tejido adiposo. • Con  un  único  procedimiento    de  obtención  ambulatoria  de  tejido  adiposo,  se 

puede guardar/crioconservar el mismo para  futuras aplicaciones  tanto de células 

madre y/o  tejido adiposo. • Este  trabajo constituye un primer paso para  futuros estudios  relacionados con  la 

aplicación  de  células  madre  mesenquimales  en  el  campo  de  la  medicina 

regenerativa y en la cirugía y medicina estética.  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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