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Laboratório de Medicina Genômica
Centro de Pesquisa Experimental
Hospital de Clínicas de Porto Alegre
Silvia Liliana Cossio, PhD.
MARCADORES MOLECULARES DE MARCADORES MOLECULARES DE DIAGNDIAGNÓÓSTICO ASOCIADOS A CSTICO ASOCIADOS A CÁÁNCER NCER
HEREDITARIOHEREDITARIO
Cáncer
• Es un problema significativo de salud pública en el mundo
• La incidencia está en aumento
• Se lo define como una enfermedad genómica, que surge como
consecuencia de alteraciones que se acumulan en el material genético
de células normales, las cuales sufren transformaciones hasta
volverse malignas.
• El proceso carcinogénico resulta de múltiples etapas
Displasia Carcinoma in situ
Carcinoma invasivo
Normal Hiperplasia
Tiempo
Secuencia adenoma-carcinoma , Fearon y Vogelstein, 1990
Factores de riesgo
Historia
personal/hábitos Genéticos
Ambiental
Enfermedad multifactorial
Factor de riesgo: EDAD
400
300
200
100
Riesgo de Cáncer y Edad
Número de casosde cáncer(por 100,000 pers.)
Edad en años
Cólon
Mama
0 20 40 60 80
Esporádico
(70-80%)
Familiar (20-30%)
Hereditario (5%-10%)
Tipos de cáncer
Mutaciones germinativasMutaciones somáticas
Mutación en
células de un tejido Mutación
en células
germinales
Todas las
células
afectadas
Progenitor Prole
Ocurre a edad temprana
Alteraciones heredadas en genes de alta
penetrancia
Alto riesgo de desarrollar cáncer
Otros tumores asociados
Varias generaciones afectadas
ESPORÁDICO HEREDITARIO
Ocurre a edad avanzada
Acumulo de alteraciones genéticas a lo
largo de la vida del individuo
Bajo riesgo de desarrollar cáncer
Sin desarrollo de tumores asociados
Casos aislados de individuos afectados
Qué es un Síndrome de Predisposición
Hereditária al Cáncer?
Condición en la que un indivíduo hereda una probabilidad mayor de
desarrollar determinado(s) tipo(s) de tumor
Esta predisposición es causada por mutaciones en:
oncogenes,, genes supresores de tumor o genes de reparo del DNA
El indivíduo afectado hereda una predisposición al cáncer
No todo indivíduo con un gen mutado desarrolla cáncer
Existen factores externos que influencian la penetrancia
Factores que afectan la Penetrancia
Factores
hormonales y
reproductivos
Genes
modificadores Exposición a
carcinógenos
Respuesta al
daño del DNA
Cáncer de Mama y Ovario Hereditario - Hereditary Breast and Ovarian Cancer
Syndrome (HBOC)
Síndrome de Lynch - Lynch Syndrome (HNPCC)
Síndrome de Li-Fraumeni y Li-Fraumeni-like - LFS and LFL
Cáncer de Mama y Colon Hereditario - Hereditary Breast and Colon Cancer
Syndrome (HBCC)
Poliposis Asociada a MUTYH - MUTYH Associated Polyposis (MAP)
Laboratório de Medicina Genômica:
Síndrome HBOC
Síndrome autosómica dominante, causado por mutaciones germinativas en BRCA1 y BRCA2
Mutaciones en estos genes predisponen al desarrollo de ciertos tipos de tumores: mama, ovario,
próstata, páncreas, melanoma.
Screening de mutaciones germinativas:
DHPLC � 5382insC (BRCA1),
PCR-Secuenciamiento � 185delAG y 3450del4 (BRCA1)
5382insC y 6174delT (BRCA2)
MLPA � reordenamientos génicos en BRCA1/2
• MLPA: Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification
Hibridización
Ligación
Amplificación
Electroforesis capilarwww.mrc-holland.com
Síndrome de Lynch
Síndrome autosómico dominante de predisposición a cáncer de colon, endometrio, ovario,
intestino delgado, tracto hepatobiliar, tracto uroepitelial, estómago, cerebro.
Mutaciones germinativas en genes del sistema MMR de reparo (MLH1, MSH2, MSH6 y PMS2)
han sido asociadas con SL.
Screening de mutaciones germinativas del SL:
Análisis por IHQ � expresión de proteínas
Analisis de IMS � Inestabilidad de Microsatélites (TT y TN)
Análisis por MS-MLPA � análisis de metilación
mlh1 -
mlh1 +
pms2 -msh 6 -msh 2 -
pms2 +msh6 +msh2 +
• IHQ
PCR Multiplex SSCP BAT26
TN TTTN
TN
TN
TT
TT
TT
NR24
PentaC
NR21
BAT25
MONO27
BAT26
PentaD
Síndrome de Li-Fraumeni y Li-Fraumeni-like
Síndrome autosómico dominante caracterizado por predisponer a pacientes portadores de
mutación germinativa en TP53 a varios tipos de tumores en edad joven.
Entre los principales tumores asociados: tumores de mama, carcinomas, sarcomas, sistema
nervioso central, adrenocortical.
Otros tumores asociados (LFL): leucemias, melanomas, cancer colorrectal, de pulmon,
gastrico, de celulas germinales, plexo coroideo y tumor de Wilms.
Screening para mutaciones germinativas en TP53:
RT-PCR (Ensayo TaqMan) � mutación R337H (exon 10),
PCR-Secuenciamiento � gen completo
Análisis por MLPA � reordenamientos génicos
Síndrome HBCC
Mutaciones germinativas en el gen CHEK2 predisponen al desarrollo de cáncer de mama y colon
principalmente.
La mutación germinativa 1100delC (exón 10) es la mutación mas comúnmente encontrada en
familias HBCC.
Screening de mutación germinativa:
Long-range PCR + Secuenciamiento � mutación 1100delC
Síndrome MAP
Síndrome autosómico recesivo que causa oligopoliposis colónicas en presencia de mutaciones
germinativas en el gen MUTYH.
Clínicamente, pacientes con MAP tienen características similares a individuos con FAP
atenuada, presentando entre 15 a 100 pólipos con histología idéntica a los casos de FAP.
El fenotipo de MAP puede solapar completamente al fenotipo de poliposis clásica, haciendo
difícil el diagnóstico diferencial.
Screening de mutaciones germinativas en MUTYH:
RT-PCR (ensayo TaqMan) � Y179C (exón 7) y G396D (exón 13)
PCR-Sequenciamiento � gen completo
Por qué es importante identificar
individuos en riesgo para cáncer
hereditário?
• Riesgo de cáncer superior al de la población
• Riesgo para diversos tipos de tumores
• Medidas eficaces de reducción de riesgo
• Tratamientos específicos para formas hereditarias de cáncer
?
Avaliação do Heredograma: HNPCC
Critérios de Amsterdam
Qual gene MMRmutado?
IHQ
Expressão normal
Encerrarinvestigação
Qual gene MMRalterado?
Positivo
Diagnóstico clínico deHNPCC
IMS
Seqüenciamentogene(s) MMRselecionado(s) Metilação
IHQ
Extração e quantificação
DNA TEP
Negativo
Expressão anormal
Critérios de Bethesda
Não metilado Metilação somática
Especialmente se hMLH1
Implementar um screening histo-molecular para casos de sospecha de síndrome de Lynch en el HCPA:
Laboratório de Medicina Genômica, CPE – HCPA
Coordinador: Patricia Ashton-Prolla
Ana Paula Brandalize (biol)
Ingrid Petroni Ewald (biol)
Juliana Giacomazzi (biomed)
Diego Paskulin (biol)
Mariana Fitarelli (biol)
Barbara Alemar (biol)
Gabriel Macedo (biol)
Patricia Izetti (med)
Patricia Silva (enf)
Telma Machado (enf)