manual de procesamientolaboratorio hospital dr. daniel cabello m

Hospital Veterinario Dr. Daniel Cabello MarianiPrograma de Prevencin Injuria/Enfermedad

Gua de Seguridad para el Trabajo de Laboratorio1. Reportar todas las condiciones de inseguridad y accidentes al administrador y/o director del Hospital.

2. Todos los materiales utilizados como agujas, lminas de vidrio, puntas de pipetas, hojillas de bistur, etc. deben ser descartados en los envases especiales para materiales corto punzantes.3. Limpiar inmediatamente cualquier derrame de material fecal, orina, sangre y otros especmenes o qumicos que puedan causar contaminacin de las reas de trabajo (mesas, pisos, equipos, etc.)4. Evitar cualquier comportamiento que pueda tender a tener influencia sobre la seguridad de los empleados.

5. Nadie podr ser autorizado a trabajar bajo influencias adversas sobre su estado de alerta, bajo estado de fatiga, enfermedad o alguna otra causa que pudiese ocasionar injurias al personal o mal manejo de los equipos, reactivos y materiales de trabajo.6. Los equipos de seguridad, protectores de voltaje, etc. no deben ser apagados o extrados del laboratorio.

7. Solo personal autorizado y entrenado podr manejar los equipos del laboratorio.

8. No dude en pedir ayuda (en caso de necesitarla) para la manipulacin y manejo de materiales, equipos y traslado de los mismos dentro del laboratorio.

9. Todos los equipos, materiales y herramientas de trabajo deben ser mantenidos en buen estado y funcionamiento adecuado. Aquellos que se encuentren daados debern ser etiquetados como defectuosos y no ser utilizados hasta su reparacin. Reportar inmediatamente al administrador del Hospital cualquier material que requiera reparacin.

10. Los cables y equipos elctricos deben ser protegidos del agua, animales y trfico pesado.

11. Los guantes deben ser utilizados al manipular materiales infecciosos, manipular especmenes, manipular sustancias txicas, corrosivas, etc.

Procedimiento Estndar Operativo: Examen Directo de Heces.

Hospital Veterinario Dr. Daniel Cabello Mariani

Facultad de Ciencias Veterinarias

Universidad Central de Venezuela Ncleo Maracay

Utilizar solo heces frescas y hmedas, preferiblemente muestras rectales para evitar la contaminacin con fuentes ambientales de organismos motiles, especialmente larvas y trofozoitos de protozoarios.

Aplicar 1 a 2 gotas de Solucin Salina en una lmina porta objetos limpia. Usar un palito aplicador para tomar una muestra pequea de heces del interior de la masa fecal; slo se necesita cubrir apenas por encima el palito para tener suficiente muestra. Rodar el palito aplicador por encima de la lmina impregnada con la gota de Solucin Salina para descargar ligeramente el material sobre la misma. Colocar la lmina cubre objeto y observar bajo el objetivo de 40X del microscopio para buscar organismos motiles, particularmente Giardia spp., Trichomonas, Balantidium coli, y/o Amibas.

Observar al menos 50 campos seleccionados al azar antes de reportar un resultado negativo.Diciembre, 2010

Procedimiento Estndar Operativo: Examen de Flotacin Fecal.




En un beaker o envase plstico mezclar aproximadamente 5gr de heces frescas con 45ml de agua limpia (romper todos los acmulos grandes de material fecal hasta obtener una mezcla homognea).

Colar el material a travs de un papel de filtro o colador y por medio de la ayuda de un embudo, depositar el material en un tubo de centrfuga de 50ml, presionar para que todo el material lquido sea decantado en el tubo. Descartar las partculas slidas en un contenedor de materiales biolgicos.

Dejar el tubo en posicin horizontal y en reposo por 15 minutos. (Esta corresponde a la Primera Fase de la Sedimentacin)

Luego de los 15 minutos, descartar el sobrenadante (toda la mezcla exceptuando el contenido que se encuentra en la porcin cnica en el fondo del tubo). Esto debe ser realizado de manera cuidadosa y delicada para no alterar el sedimento.

Re-suspender el sedimento en 40 a 45 ml de agua limpia y colocar de nuevo en reposo por otros 15 min.

Repetir este proceso, una dos o inclusive tres veces para lograr un sedimento limpio. El objetivo es observar el sedimento sin tener que discriminar entre mltiples capas de estados parasitarios y material vegetal digerido: mientras ms se lave, ms limpio ser el producto final y ser ms fcil de examinar!Despus de la ltima limpieza, el sobrenadante es claro, casi transparente o parecido a esto, se decanta una ltima vez.

Utilizar una pipeta para cargar dos lminas con el sedimento y colocar cubreobjetos 22x50. Utilizar el objetivo de 10x para observar todo lo que existe bajo esos dos cubre objetos.

Buscar especficamente huevos de parsitos, sin embargo, todos los ooquistes, quistes y huevos de parsitos se pueden encontrar en la muestra ya que se hundirn en el agua y formaran parte del sedimento.

La muestra puede ser preservada con la adicin de formalina y/o refrigeracin.

Diciembre, 2010

Procedimiento Estndar Operativo: Flotacin Fecal Centrifugada.




Nota: preferiblemente utilizar 3-5 gm de heces frescas, si solo se dispone de 1-3 gm, realizar el examen, pero indicar como comentario que la cantidad de heces podra ser insuficiente para la obtencin de resultados adecuados. (La excepcin es para animales muy pequeos como roedores, reptiles y aves, donde la cantidad de heces proporcionada no es opcional). Cuando la muestra sea menor a 1 gm de un animal de tamao mediano o grande (perro, gato, caballo, etc) es probablemente buena idea NO REALIZAR EL EXAMEN y dejarle saber al clnico que es necesario una mayor cantidad de muestra fecal. Si no es posible disponer de otra muestra y el clnico aprueba realizar el examen, este debe hacerse como un examen directo de heces, pero dejarle saber al clnico en la hoja de resultados que este fue el nico examen que se pudo realizar. Colocar las heces en una copa de plstico o de papel y aadir 5-8 ml de agua corriente. Romper las heces cuidadosamente con una paleta de madera o palito aplicador. Colar el material a travs de un colador y embudo y dejar caer dentro de un tubo plstico centrifugable. En caso de que hayan quedado restos de heces en la copa, aadir unos pocos mls de agua dentro de la copa y revolver el resto de material que quede en la misma para repetir el procedimiento anterior. Si el volumen no ha alcanzado la parte superior del tubo, completar con agua hasta llegar al tope del mismo dejndola pasar a travs del colador y embudo para retirar y lavar el material fecal remanente. Centrifugar el tubo por 10 min a 500 g. Retirar el sobrenadante. Luego aadir Sulfato de Zinc al 37% (solucin de flotacin) al tubo, aproximadamente hasta la marca de 9 ml del tubo, y revolver cuidadosamente con un palito aplicador, utilizando los lados del palito para romper los acmulos de heces contra las paredes del tubo. Completar el resto del tubo con Sulfato de Zinc hasta llegar al tope del tubo y formar un menisco convexo. Colocar un cubreobjetos plstico de 22 x 22 mm en el tope del tubo. Centrifugar por 10 min. Retirar el tubo de la centrifuga y colocar en reposo sobre una gradilla por otros 5 a 10 min adicionales. Retirar el cubreobjetos horizontalmente sin dejar derramar la emulsin que se encuentra bajo el mismo y colocar sobre una lamina portaobjetos. Observar y escanear la lmina con objetivo de 10x, realizarlo metdicamente para garantizar que todo el rea del cubreobjetos sea observado (si es necesario, utilizar el objetivo de 20x y 40x para identificar estadios parasitarios en la lmina, pero retornar al objetivo de 10x para escanear el resto de la lmina). Emplear la escala de conversin micromtrica para determinar los tamaos de los parsitos observados (en micrones) Si no se observa ningn estadio parasitario utilizando solo el objetivo de 10X, repetir el escaneo con el de 40x y observar 50 campos al azar separados entre si, para observar objetos ms pequeos, buscando ms especficamente por quistes de proozoarios y oocistos, especialmente de Giardia spp/Cryptosporidium spp.

Diciembre, 2010

Procedimiento Estndar Operativo: Examen Hematolgico




Espcimen: sangre completa en EDTA (tubo tapa morada)Recepcin de la muestra en laboratorio. Observar las condiciones de la muestra recibida (la sangre no debe tener cogulos, hemolisis, etc). Verificar que el protocolo de laboratorio tenga la fecha, los datos del paciente, los exmenes a realizar en el laboratorio y el nombre del mdico solicitante.

Identificacin. Tubo de sangre. Colocar el nmero de muestra del da encerrado en un crculo, seguido del nombre del paciente y la fecha.

Ejemplo: 1 Molly 12/01/11 Libro de actas del laboratorio. Al inicio del da colocar en el centro de la lnea el da y la fecha para comenzar con la recepcin y registro de muestras a procesar.

Ejemplo:

Lunes 12/01/11

Colocar el nmero de muestra del da en el lado izquierdo de la pagina, seguido del nmero de historia por ejemplo: C-1000845 (en caso de no tener numero S/N, en caso de ser un paciente referido REF.)En la parte central de la misma lnea se coloca el nombre del paciente y en la esquina derecha de la misma lnea el nombre y apellido del mdico solicitante. En la segunda lnea debajo del nmero de muestra y nmero de historia debe colocarse los exmenes a realizar (hematologa completa o HC)Ejemplo:

1 C-1000845 Molly Ma Elena Villaln

HC

Protocolo de laboratorio del paciente. Colocar en la parte superior derecha del protocolo el nmero de muestra del da y archivarlo en la carpeta de protocolos de laboratorio.

Materiales y Equipos:Procedimiento:

1. Tomar tubo de sangre en EDTA y revisar visualmente que no contenga cogulos, de tener alguno o sospechar su presencia utilizar un palito de madera e introducirlo en el tubo rodeando las paredes del mismo para atrapar el cogulo y extraerlo. OJO: Ninguna muestra coagulada debe ser introducida al Coulter ya que esto tapara la punta recolectora de sangre y daara al equipo! Las muestras coaguladas no deben procesarse ya que los valores hematolgicos se encontrarn alterados debido al requerimiento de clulas y componentes sanguneos para la formacin del cogulo, por lo tanto se sugiere al mdico solicitante del examen repetir el muestreo.2. Colocar durante al menos veinte segundos sobre el agitador mecnico para que la sangre se mezcle bien, de ser una emergencia se puede aplicar agitacin manual invirtiendo el tubo delicadamente al menos tres veces antes de introducirlo al Coulter.

3. La muestra sin cogulos, previamente agitada es introducida en el Coulter (destapar tubo, introducirlo verticalmente hasta la parte superior de la punta de acero, presionar el botn blanco una sola vez y esperar al sonido del equipo que avisa que ya ha tomado la muestra, extraer el tubo de la punta de acero y posteriormente limpiar la punta de acero con una gasa seca hasta retirar todos los restos de sangre.

4. Anotar resultados en el libro de actas una vez que el equipo seale Next Test. Para leer resultados en el Coulter debe presionarse los siguientes botones en forma sucesiva (DIR, ADV, SEL) y posteriormente seguir presionando el botn (SEL) hasta obtener todos los resultados del equipo. 5. Tomar una lmina porta objetos limpia y pulida para realizar el frotis sangre completa. El mismo deber ser realizado con la lmina cubre objetos para obtener un rodamiento delicado de la sangre sobre la lmina porta objetos. Una vez seca la sangre se procede a su identificacin. La cual consiste en colocar los siguientes datos sobre la parte posterior del frotis con un marcador o lpiz: escribir las siglas SC para denotar que es de sangre completa, nmero de muestra de laboratorio encerrado en un crculo, y fecha.

Ejemplo:

6. Fijar y teir la lmina. Introducir la lmina en el metanol (envase 1), para fijarla. Una vez seco el metanol puede teirse con el rojo (envase 2) y una vez teido debe lavarse en agua corriente, luego de escurrir el resto del agua, introducir en el colorante morado (envase 3), una vez fijado el color, lavar en agua corriente y dejar secar sobre un toalln. Dejar secar la lmina porta objetos en posicin vertical y con la bala del frotis hacia arriba para evitar la formacin de artefactos por mal secado.7. Proceder a la lectura y anlisis de las lminas (contaje diferencial, caractersticas de regeneracin celular y morfologa). El personal que se encuentra rotando por el servicio de laboratorio (pasantes, internos, estudiantes de la especializacin) deber ser autorizado por el personal contratado del laboratorio para poder leer y revisar las muestras previamente analizadas. Los estudiantes que estn cursando la especializacin en medicina de pequeos animales y que hayan logrado un nivel ptimo de anlisis de las muestras durante su entrenamiento, podrn colaborar formalmente en su interpretacin. Contaje Diferencial. Utilizando el contador electrnico se contabilizan 100 glbulos blancos en el frotis sangre completa. El contaje es realizado en la bala o porcin final del mismo. Y una vez finalizado se transfieren los resultados al libro de actas. Este contaje ser el equivalente al % de glbulos blancos en sangre (GB). Luego debe realizarse el clculo matemtico del valor absoluto o real el cual consiste en tomar el valor de contaje total de glbulos blancos arrojado por el Coulter (nmero sin la coma) y multiplicarlo por cada uno de los % obtenidos en el contaje manual.

Ejemplo: Caractersticas de Regeneracin Celular. OJO: Solo es necesario describir estas caractersticas para aquellos pacientes que reflejen un ndice hematemtrico anormal o estado de anemia (contaje de glbulos rojos, hematocrito y hemoglobina por debajo del rango normal establecido). Debern describirse las caractersticas de regeneracin de la serie roja observables en el frotis sangre completa para poder determinar si existen o no signos de regeneracin y a su vez en qu grado se estn expresando (Se describirn como ausentes, escasos, moderados o marcados signos de regeneracin de la serie roja y entre parntesis se incluirn cules de estos signos se observaron en el frotis SC). En caso de observarse algunas clulas inmaduras de la serie blanca (mielocitos, metamielocitos, linfoblastos) se reportarn tambin en la descripcin del frotis.

C.C. GB nmero de GB (cifra sin la coma) x 100

100 + % de GR nucleados

Ejemplo: GB 17,5 Metarrubricitos/Rubricitos 18%

C.C. GB 175 x 100 9,72 C.C. GB 17,5 9.72 C.C. GB 7,78

100 + 18

Colocar en el libro de actas y protocolo el % de metarr/rubric observados y al lado el resultado del C.C. GB.

8. Vaciado de datos en el Libro de Actas y protocolos. Todos los datos recopilados del Coulter, lectura de las lminas (contaje diferencial, caractersticas de regeneracin celular y morfologa) debern anotarse cuidadosamente para evitar errores de transcripcin.9. Firma de protocolos. Solo el personal contratado en el laboratorio (Mdicos Veterinarios y Bioanalistas) puede firmar los protocolos de laboratorio realizados durante su turno de trabajo, as como tambin aquellos estudiantes de postgrado que estn cursando la especializacin en medicina de pequeos animales y que hayan logrado un nivel ptimo de lectura e interpretacin de las muestras durante su entrenamiento, de lo contrario las muestras ledas por cualquiera de los estudiantes (pasantes, internos, primer ao de especializacin) debern ser revisadas y los protocolos sern firmados por el personal contratado de turno.

10. Archivar los protocolos dentro del acorden del laboratorio una vez que hayan sido revisados y firmados.

Enero, 2011Procedimiento Estndar Operativo: Despistaje de Hemoparsitos.




Materiales y Equipos:Procedimiento:

1. Tomar el tubo tapa morada y realizar el llenado de 2 micro-capilares.2. Tapar con la plastilina Cha-Seal uno de los extremos de ambos capilares y dejar los micro-capilares sobre la base de plastilina en la posicin que corresponde al nmero de la muestra.3. Colocar dentro de la micro-centrifuga los micro-capilares. Uno en la posicin que corresponde al nmero de muestra y el otro en el espacio de en frente.

4. Centrifugar durante 2 minutos. OJO: No olvidar siempre colocar la tapa enroscable de la centrifuga ya que de olvidarla se partirn los micro-capilares y se esparcir la sangre de los mismos dentro del equipo. De ocurrir esto, se debe retirar todos los restos de vidrio para no causar desperfectos en el centrifugado y limpiar bien los restos de sangre con una gasa empapada en alcohol o agua oxigenada. 5. Extraer los micro-capilares de la centrfuga una vez que deje de girar el plato interno.

6. Realizar la prueba de Woo. Consiste en observar los micro-capilares en el microscopio y descartar la presencia de micro-filarias en sangre. Ubicar la capa flogstica y capa blanca para buscar movimiento u observar las larvas. Colocar el resultado (positivo/negativo) en el libro de actas del laboratorio.7. Realizar el frotis capa blanca. Utilizar una lmina porta objetos limpia y pulida para realizar el frotis. Cortar uno de los micro-capilares a nivel del plasma, dejando una distancia de aproximadamente 5 mm entre el plasma y la capa blanca. Tomar la aguja y revolver la capa blanca dentro del micro-capilar para mezclar suavemente las clulas y despegarlas de los bordes del capilar. Extraer la aguja e introducirla por el extremo de la plastilina hasta dejar caer el plasma, la capa blanca y una pequea cantidad de capa roja sobre la lmina portaobjetos, tomar el cubre objetos y mezclar ligeramente la sangre depositada en la lmina haciendo movimientos circulares. Realizar el frotis en forma de bala.8. Una vez seca la sangre se procede a su identificacin. La cual consiste en colocar los siguientes datos sobre la parte posterior del frotis con un marcador o lpiz: escribir las siglas CB para denotar que es de capa blanca, nmero de muestra de laboratorio encerrado en un crculo, y fecha.

Ejemplo:

9. Fijar y teir la lmina. Introducir la lmina en el metanol (envase 1), para fijarla. Una vez seco el metanol puede teirse con el rojo (envase 2) y una vez teido debe lavarse en agua corriente, luego de escurrir el resto del agua, introducir en el colorante morado (envase 3), una vez fijado el color, lavar en agua corriente y dejar secar sobre un toalln secante. Colocar la porta objetos en forma vertical y con la bala del frotis hacia arriba para evitar la formacin de artefactos por mal secado.10. Proceder a la lectura de la lmina (bsqueda de hemoparsitos e inclusiones virales, bacterianas o micticas). El personal que se encuentra rotando por el servicio de laboratorio (pasantes, internos, estudiantes de la especializacin) deber ser autorizado por el personal contratado del laboratorio para poder leer y revisar las muestras previamente analizadas. Los estudiantes que estn cursando la especializacin en medicina de pequeos animales y que hayan logrado un nivel ptimo de anlisis de las muestras durante su entrenamiento, podrn colaborar formalmente en su interpretacin.En caso de ser hemoparsitos deber colocarse un estimado del grado de parasitemia en base al nmero de cruces:

++++ Extremadamente alta (70 a 100% de las clulas observables se encuentran parasitadas)+++ Alta (50 a 70% de las clulas observables se encuentran parasitadas)++ Moderada (30 a 50% de las clulas observables se encuentran parasitadas)+ Leve (1 a 30% de las clulas observables se encuentran parasitadas)Ejemplo: de las plaquetas totales del paciente fueron observadas solo 3 inclusiones de A. platys, esto equivale a menos del 30% de plaquetas, es decir, + A. platys.

11. Vaciado de datos en el Libro de Actas y protocolos. Todos los datos recopilados de la lectura de las lminas (bsqueda de hemoparsitos e inclusiones virales, bacterianas o micticas). debern anotarse cuidadosamente para evitar errores de transcripcin.12. Firma de protocolos. Solo el personal contratado en el laboratorio (Mdicos Veterinarios y Bioanalistas) puede firmar los protocolos de laboratorio realizados durante su turno de trabajo, as como tambin aquellos estudiantes de postgrado que estn cursando la especializacin en medicina de pequeos animales y que hayan logrado un nivel ptimo de lectura e interpretacin de las muestras durante su entrenamiento, de lo contrario las muestras ledas por cualquiera de los estudiantes (pasantes, internos, primer ao de especializacin) debern ser revisadas y los protocolos sern firmados por el personal contratado de turno.13. Archivar los protocolos dentro del acorden del laboratorio una vez que hayan sido revisados y firmados.Enero, 2011Procedimiento Estndar Operativo: Urianlisis.




Materiales y Equipos: Espcimen: orina en envase recolector estril o tubo tapa roja o sin anticoagulante.

Recepcin de la muestra en laboratorio. Verificar que el protocolo de laboratorio tenga la fecha, los datos del paciente, los exmenes a realizar en el laboratorio, el nombre del mdico solicitante, y la tcnica empleada para recoleccin de la muestra de orina (cistocentesis, catter, miccin espontnea) y hora en que fue recolectada la muestra.Identificacin.

Tubo o envase recolector. Identificar como ORINA para evitar confundir la muestra con otro lquido corporal o sangre. Colocar el nmero de muestra del da encerrado en un crculo, seguido del nombre del paciente y la fecha.

Ejemplo: 1 ORINA Molly

12/01/11

Libro de actas del laboratorio. Al inicio del da colocar en el centro de la lnea el da y la fecha para comenzar con la recepcin y registro de muestras a procesar.

Ejemplo:

Lunes 12/01/11

Colocar el nmero de muestra del da en el lado izquierdo de la pagina, seguido del nmero de historia por ejemplo: C-1000845 (en caso de no tener numero S/N, en caso de ser un paciente referido REF.)En la parte central de la misma lnea se coloca el nombre del paciente y en la esquina derecha de la misma lnea el nombre y apellido del mdico solicitante. En la lnea siguiente, debajo del nmero de paciente se coloca los exmenes a realizar en el laboratorio.Ejemplo:


Urianlisis Protocolo de laboratorio del paciente. Colocar en la parte superior derecha del protocolo el nmero de muestra del da y archivarlo en la carpeta de protocolos de laboratorio.

Inspeccin Visual de la muestra: Colocar estos datos en el protocolo del paciente.1. Color: incoloro, beige, amarillo, mbar, rojo, marrn, verde, negro.

2. Turbidez: limpia, ligeramente, moderadamente o marcadamente turbia, opaca.

Tira Reactiva:

Equipo VetLab UA IDEXX: el equipo VetLLab UA IDEXX debe calibrarse cada siete das o cuando aparezca el mensaje de Repetir Calibracin en la pantalla del equipo. (Las instrucciones para procedimientos de calibracin y lectura de las tiras se encuentran al final del protocolo de Urianlisis). Una vez finalizada el equipo generar un informe de resultados impresos. Retirar el resultado de la calibracin y archivarlo en la gaveta. Una vez calibrado proseguir con el procesamiento de la muestra. Esperar el informe de resultados impresos y transferir datos al protocolo del paciente y libro de actas del laboratorio.

Manual: tomar el tubo tapa roja con orina e introducir la tira hasta llenar todas las almohadillas de la misma, sacarla del tubo y secar la parte de atrs de la cinta retirando el exceso de orina. Ver la parte externa del tubo de tiras reactivas para realizar la comparacin y evaluacin de los valores expresados en la tira. Anotar los valores en el protocolo del paciente y libro de actas del laboratorio.

Centrifugar muestra en un tubo tapa roja (1000 revoluciones x 5 min).Evaluacin con Refractmetro:

Calibracin del Refractmetro: colocar una gota de agua destilada y observar la lnea azul, debe estar justo encima del lmite inferior. Una vez calibrado, se coloca a travs de la micro-pipeta una gota del sobrenadante para evaluar los siguientes aspectos qumicos de la orina: 1. Protenas Totales: se mide tambin en el refractmetro en conjunto con la gravedad especfica (corresponde a la primera columna ubicada a la izquierda, el valor se expresa en gr/dl).

2. Gravedad Especfica: colocar el sobrenadante del tubo ya centrifugado sobre el refractmetro, con ayuda de una micro-pipeta. Medir densidad o gravedad especfica de la orina (columna derecha del refractmetro, el valor se encuentra expresado por encima de 1000).Examen del Sedimento Urinario: 1. Examen Fresco: una vez centrifugada la muestra y tomados los valores de protena urinaria y gravedad especfica de la orina con el refractmetro, se procede a decantar delicadamente en el lavamanos del laboratorio todo el lquido superior, dejando solo en el tubo el material sedimentado que se encuentra en el fondo del mismo.

Se toma la micro-pipeta con una punta de 20 l y se coloca una gota del sedimento sobre una lmina porta objeto limpia y pulida, colocar una laminilla cubre objeto sobre el material citolgico depositado y observar al microscopio con objetivo de 40X. Describir los cilindros, cristales, fibrina, bacterias, gotas lipdicas, espermatozoides, cantidad de glbulos rojos y glbulos blancos, parsitos, levaduras (Expresados en un rango de 0 a abundantes o incontables x campo). Anotar todos los datos descritos tanto en el libro de actas como el protocolo del paciente.2. Sedimento Coloreado: tomar parte del sedimento y realizar de 2 a 4 citologas del mismo. El extendido se har en funcin de las condiciones macroscpicas de la muestra.

De acuerdo a la celularidad presente se evalan las siguientes opciones de preparacin de la muestra: Muestra Acuosa: se realizan concentrados, colocando una gota y esparciendo el sedimento con la punta de la micro-pipeta en forma de estrella o simplemente se colocan varias gotas pequeas sin esparcir.Muestra Semi-Slida: compresin de una lmina sobre otra y luego realizar traccin inversa de una sobre la otra para obtener una mono-capa de clulas.

Muestra Sanguinolenta: extendido en frotis (como si fuese sangre completa)

Identificar cada lmina colocando el nmero de muestra del da encerrado en un crculo, la fecha y las siglas SED (sedimento urinario).

Ejemplo. Sedimento Acuoso:

OJO: No descartar el resto del sedimento hasta asegurarse de que las citologas hayan sido coloreadas y hayan quedado correctamente ya que a veces se pierde parte del material una vez que son lavadas luego de la coloracin final. Independientemente de la(s) tcnica(s) utilizada(s) se deben dejar secar completamente las citologas realizadas y posteriormente fijar con metanol en espray al 10% y colorear con Hemacolor por medio de los goteros de coloracin de citologas dejando las lminas en posicin horizontal sobre la bandeja de coloracin con cada colorante por lo menos un minuto sobre cada lmina. Una vez coloreadas se decanta el colorante restante y se lavan y dejan secar. Una vez secas las lminas, se colocan en la mesa de citologas con su respectivo protocolo debajo de las lminas.Enero, 2011

Procedimiento Estndar Operativo: Preparacin de CitologasHospital Veterinario Dr. Daniel Cabello Mariani



Materiales y Equipos:Espcimen: lmina(s) porta-objeto con material citolgico.

Recepcin de la muestra en laboratorio. Verificar que el protocolo de laboratorio tenga la fecha, los datos del paciente, los exmenes a realizar en el laboratorio, el nombre del mdico solicitante, nmero de lminas tradas para anlisis citolgico, descripcin macroscpica de la(s) masa(s) o tejido(s) en estudio, tcnica(s) empleada(s) para la toma de muestra(s), diagnsticos presuntivos, antecedentes de otras masas.

De ser varios rganos o tejidos muestreados, colocar el nmero de lminas elaboradas de cada uno de los tejidos en el libro de actas e identificar inmediatamente los porta-objetos correspondientes para evitar confundir los especmenes muestreados.

Identificacin.

Identificar cada lmina segn el tejido al cual corresponde, tcnica de muestreo empleada, nmero de muestra del da encerrado en un crculo, seguido del nombre del paciente y la fecha. Ejemplo:

Colocar el nmero de muestra del da en el lado izquierdo de la pagina, seguido del nmero de historia por ejemplo: C-1000845 (en caso de no tener numero S/N, en caso de ser un paciente referido REF.)En la parte central de la misma lnea se coloca el nombre del paciente y en la esquina derecha de la misma lnea el nombre y apellido del mdico solicitante. En la lnea siguiente, debajo del nmero de paciente se coloca los exmenes a realizar en el laboratorio.

Ejemplo:


Citologa de Masa en MAD. AAF. (3 lminas)


Procedimiento: se deben dejar secar completamente las citologas realizadas y posteriormente fijar con metanol en espray al 10% y colorear con Hemacolor empleando los goteros de coloracin de citologas dejando las lminas en posicin horizontal sobre la bandeja de coloracin con cada colorante por lo menos un minuto sobre cada lmina.

Tincin con Hemacolor: cubrir la lmina con el colorante rojo y esperar un minuto o hasta que el color se fije a la muestra, luego decantar el colorante sobre la bandeja de coloracin y cubrir con el colorante morado. Una vez coloreadas se decanta el colorante restante, se lavan y dejan secar en posicin vertical.

Una vez secas las lminas, se colocan en la mesa de citologas con su respectivo protocolo debajo de las lminas.

Enero, 2011

Procedimiento Estndar Operativo: Anlisis de Fluidos Corporales




Materiales y Equipos:

Espcimen: fluido abdominal, pleural, y/o pericrdico en tubo tapa morada o con anticoagulante.

Recepcin de la muestra en laboratorio. Verificar que el protocolo de laboratorio tenga la fecha, los datos del paciente, los exmenes a realizar en el laboratorio, el nombre del mdico solicitante.

Identificacin.

Tubo tapa morada: Identificar como FLUIDO Abd, Pleu, Peri, para evitar confundir la muestra con otro lquido corporal, orina o sangre. Colocar el nmero de muestra del da encerrado en un crculo, seguido del nombre del paciente y la fecha.

Ejemplo: 1 FUIDO Abd. Molly 12/01/11

Libro de actas del laboratorio. Al inicio del da colocar en el centro de la lnea el da y la fecha para comenzar con la recepcin y registro de muestras a procesar.

Ejemplo:

Lunes 12/01/11

Colocar el nmero de muestra del da en el lado izquierdo de la pagina, seguido del nmero de historia por ejemplo: C-1000845 (en caso de no tener numero S/N, en caso de ser un paciente referido REF.)En la parte central de la misma lnea se coloca el nombre del paciente y en la esquina derecha de la misma lnea el nombre y apellido del mdico solicitante. En la lnea siguiente, debajo del nmero de paciente se coloca los exmenes a realizar en el laboratorio.

Ejemplo:


Anlisis de Fluido Abdominal


Procedimiento:

1. Inspeccin Visual de la muestra: Colocar estos datos en el protocolo del paciente.

Color: incoloro, beige, amarillo, naranja, marrn, verde, blanco, rosado o rojo.

Turbidez: limpio (visiblemente no turbio), ligeramente turbio (turbidez visible y capacidad de leer escritura a travs del tubo), moderadamente turbio (capaz de ver pero no de leer escritura a travs del tubo) u opaco (marcadamente turbio e imposible ver a travs del tubo).Revisar que la muestra no contenga cogulos y mezclar el fluido varias veces delicadamente con la mano para procesar con el Coulter 540. Tomar los datos de glbulos rojos, glbulos blancos y hemoglobina. 2. Centrifugar muestra en el tubo tapa morada o separar una porcin en tubo de Ependorff para centrifugar rpidamente (1000 revoluciones x 5 min).3. Evaluacin con Refractmetro:

Calibracin del Refractmetro: colocar una gota de agua destilada y observar la lnea azul, debe estar justo encima del lmite inferior. Una vez calibrado, se coloca a travs de la micro-pipeta una gota del sobrenadante del fluido para evaluar los siguientes aspectos qumicos:

Protenas Totales: se mide tambin en el refractmetro en conjunto con la gravedad especfica (corresponde a la primera columna ubicada a la izquierda, el valor se expresa en gr/dl).

Gravedad Especfica: colocar el sobrenadante del tubo ya centrifugado sobre el refractmetro, con ayuda de una micro-pipeta. Medir densidad o gravedad especfica del fluido (columna derecha del refractmetro, el valor se encuentra expresado por encima de 1000).4. Preparacin de Citologas a partir del Sedimento:

Una vez centrifugada la muestra y tomados los valores de protena y gravedad especfica del fluido con el refractmetro, se procede a decantar delicadamente en el lavamanos del laboratorio todo el lquido superior, dejando solo en el tubo el material sedimentado que se encuentra en el fondo del mismo.

Sedimento Coloreado: tomar parte del sedimento y realizar de 2 a 4 citologas del mismo. El extendido se har en funcin de las condiciones macroscpicas de la muestra.De acuerdo a la celularidad presente se evalan las siguientes opciones de preparacin de la muestra:

Muestra Acuosa: se realizan concentrados, colocando una gota y esparciendo el sedimento con la punta de la micro-pipeta en forma de estrella o simplemente se colocan varias gotas pequeas sin esparcir.

Muestra Semi-Slida: compresin de una lmina sobre otra y luego traccin inversa de una sobre la otra para obtener una mono capa de clulas.

Muestra Sanguinolenta: extendido en frotis (como si fuese sangre completa)

Identificar cada lmina colocando el nmero de muestra del da encerrado en un crculo, la fecha y las siglas AF (Anlisis de Fludo).

Ejemplo. Muestra Acuosa:

OJO: No descartar el resto del sedimento hasta asegurarse de que las citologas hayan sido coloreadas y hayan quedado correctamente ya que a veces se pierde parte del material una vez que son lavadas luego de la coloracin final. Independientemente de la(s) tcnica(s) utilizada(s) se deben dejar secar completamente las citologas realizadas y posteriormente fijar con metanol en espray al 10% y colorear con Hemacolor por medio de los goteros de coloracin de citologas dejando las lminas en posicin horizontal sobre la bandeja de coloracin con cada colorante por lo menos un minuto sobre cada lmina.

Una vez coloreadas se decanta el colorante restante y se lavan y dejan secar.

Una vez secas las lminas, se colocan en la mesa de citologas con su respectivo protocolo debajo de las lminas.

Enero, 2011

Agitador mecnico Tubo de sangre en EDTA Palitos de Madera Coulter Lmina porta objetos Lmina cubre objetos Gasa o papel secante Kit de Hemacolor Microscopio ptico Contador de clulas

SC 1

12/01

Valor % Valor Absoluto

GB 17,5 M 11 1925

L 08 1400

N 68 11900

B 01 175

E 02 350

Clculo: GB 175 x M 11 1925

Signos de Regeneracin Medular de la Serie Roja:

Anisocitosis (escasa, leve, moderada, marcada)

Reticulocitos (tambin llamados policromatfilos)

Cuerpos de Howell-Jolly

Puntillado Basfilo

Sx. Regeneracin Ausentes: ninguno est presente.

Sx. Escasos: escasa a leve anisocitosis, 1 a 2 reticulocitos x campo (100x)

Sx. Moderados: anisocitosis moderada, 2 a 6 reticulocitos x campo, cuerpos de H-J presentes y puntillado basfilo presente o no.

Sx. Marcados: anisocitosis marcada, > 6 reticulocitos x campo, cuerpos de H-J y puntillado basfilo presentes o no.

Signos de Hematopoyesis Extra-Medular:

Rubricitos

Metarrubricitos

Contaje Corregido de Glbulos Blancos: en caso de que el nmero de rubricitos y /o metarrubricitos vistos durante el contaje diferencial de blancos sea superior a 15 clulas, debe realizarse la correccin del contaje realizado por el Coulter ya que stas clulas nucleadas fueron incluidas como glbulos bancos en el contaje. Para corregir este error se emplea la siguiente frmula:

Sospecha de Trastornos del Estroma Medular, Sndrome Mielodisplsico, Leucemia Aguda:

Formas blsticas de GB (Lecucemia aguda >30% clulas observables en el frotis son blsticas)

Citopenias, bicitopenias o pancitopenias

Sospecha de Reaccin Leucemoide o de Leucemia Crnica:

Abundantes formas maduras de GB (de una o varias lneas celulares)

Formas blsticas de GB (5-6% clulas observables son blsticas)

Microcapilares Tubo de sangre en EDTA

Plastilina Cha-Seal Micro-centrfuga

Microscopio ptico Aguja

Gasa o papel secante Corta uas

Lmina porta objetos Lmina cubre objetos

Kit de Hemacolor

CB 1

12/01

Tubo sin anticoagulante o envase colector estril

Guantes Micro-pipeta Puntas amarillas (20l) Gasa o papel secante

Centrfuga Tira Reactiva

Lminas porta objetos Lminas cubre objetos Microscopio ptico Cinta de pH

Refractmetro

Equipo VetLLab UA IDEXX

SED 1

12/01/11

Tubo sin anticoagulante o envase colector estril

Guantes Micro-pipeta Puntas amarillas (20l) Gasa o papel secante Centrfuga Lminas cubre objetos

Lminas porta objetos Microscopio ptico

Refractmetro

AF 1

12/01/11

Metanol Kit de Hemacolor Bandeja de Coloracin Guantes

Gotero para colorante rojo Agua Corriente

Gotero para colorante morado Alcohol al 70 %

Marcador indeleble o lpiz de cera

AAF 1

12/01/11

manual de procesamientolaboratorio hospital dr. daniel cabello m

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