Manual de Practicas de Laboratorio.Prctica No. 1Tipificacin del sistema ABOObjetivo:Al trmino de la prctica el alumno determinara los cuatro grupos sanguneos en sangre del sistema ABO.Generalidades:En la membrana del glbulo rojo existen complejos qumicos que representan los llamados grupos o factores sanguneos Fu Landsteiner quin realiz en 1900 el importante descubrimiento de que los eritrocitos del hombre pertenecen a varios sistemas Antignicos diferentes, este autor descubri el sistema A B O. La clasificacin del grupo sanguneo est, determinada por la presencia o ausencia de los aglutingenos en el eritrocito y las aglutininas en el suero. Para la identificacin del grupo sanguneo ABO se deben hacer dos investigaciones consecutivas: la primera se llama tipado globular y es la determinacin de los aglutingenos eritrocticos con antisueros o aglutininas conocidas, la segunda se llama tipado srico o contratipado y es la identificacin de las aglutininas utilizando glbulos rojos con antisueros conocidos, los sueros patrones deben ser de alto titulo, estos sueros pueden ser preparados en el laboratorio o en su defecto, se consiguen en las casas comerciales de productos biolgicos. La investigacin de los aglutingenos eritrociticos se deben realizarse por el mtodo de tubo de ensayo. Se utilizan tres reactivos llamados: suero anti A (de sangre b), de color azul y que contiene aglutininas alfa, suero anti B (de sangre a), de color amarillo y que contiene aglutininas beta, existe adems otro suero, el anti AB que contiene las dos aglutininas, alfa y beta.Fundamento: Los antgenos de los hemates son estructuras qumicas que proporcionan propiedades especficas a su superficie y que solo pueden detectarse con anticuerpos que corresponden a esos antgenos la mayora de estas reacciones antgeno-anticuerpo implican la aglutinacin o hemlisis de los hemates.Material y equipo: 1 gradilla 16 tubos 10 x 75 4 tubos 13 x 100 4 pipetas Pasteur con bulbo Centrifuga clnica Centrfugas Serofuge Sueros hemoclasificadores Anti-A, Anti B. Anti-AB Albmina bovina al 22% o 33% Solucin fisiolgica en Pizeta Sangre problemaTipificacin en tubo.Tcnica:1. Se prepara una suspensin de glbulos rojos al 5%, previamente lavado en solucin fisiolgica.2. En una gradilla colocar 4 tubos de ensaye de 10 x 75, marcados con las letras A, B, AB y Control.3. En cada tubo poner una gota de suspensin de glbulos rojos al 5%.4. En el tubo marcado con A poner una gota de suero anti A, en el tubo marcado con B, poner una gota de suero anti B, en el tubo AB una gota de suero anti AB5. Se debe hacer un control agregando a 1 tubo con una gota de albmina bovina al 22 %6. Mezclar perfectamente los tubos y dejar reposar por dos minutos.7. Mezclar nuevamente y se procede a centrifugar a 2,500 r p m durante un minuto8. Se sacan los tubos cuidadosamente de la centrifuga evitando que se mezclen los glbulos rojos que quedan depositados en el fondo de los tubos y para efectuar la lectura se sacuden cuidadosamente el botn del fondo, uno por uno buscando si existe aglutinacin macroscpica.9. Si la aglutinacin tuvo lugar, puede comprobarse en el seno del liquido claro los hematies que nadan y se flotan formando pequeos agrupamientos, si el resultado es negativo los glbulos rojos se distribuyen uniformemente por el lquido.10. El resultado se reporta de acuerdo a la intensidad del grupo y al color del liquido sobre nadante, de una o varias cruces, hasta cuatro.11. Si existe duda en la lectura se podr observar al microscopio una gota o tambin se pueden incubar los tubos a 37 C. durante 30 minutos.Contratipado sanguneo o prueba de WienerObjetivo:Al contrario de las: pruebas anteriormente descritas que emplean sueros testigos, esta prueba utiliza glbulos rojos testigos tipo A, B y AB en suspensin al 5% y suero de la persona a clasificar la prueba puede realizarse en tubo, de acuerdo con las tcnicas antes descritasInterpretacin de resultados:Grupo sanguneo aglutinacin en tuboAnti AAnti-BAnti AB

Grupo APositivoNegativoPositivo

Grupo BNegativoPositivoPositivo

Grupo ABPositivoPositivoPos itivo

Grupo ONegativoNegativoNegativo

Es recomendable que la tipificacin al realizarse, los resultados son ms confiables tubo, ya que la aglutinacin se puede expresar en cruces, de una a cuatro, dependiendo del grado de la misma. 4 cruces; la aglutinacin se presentar como un botn slido con fondo claro y grumos gruesos. 3 cruces; la aglutinacin sern varios grumos grandes con el fondo claro o rosado 2 cruces pocos grumos y muy pequeos, una suspensin uniforme 1 cruz pocos grumos, muy pequeos, el fondo muy rosado. Negativo: Una suspensin uniforme de color rojo.Comentarios:Los principales errores que pueden existir en la clasificacin sangunea, son los siguientes: Error en la preparacin de la suspensin de glbulos rojos as si se ha colocado demasiada sangre (mezcla de color rojo intenso) en exceso de glbulos rojos puede absorver la aglutinina del suero y no evidenciar la aglutinacin. Si se ha colocado poca sangre (La mezcla color rosa muy plido) la escases de glbulos dificultar la lectura macroscpicamente.Con respecto a los sueros hemoclasificadores:a) pueden estar envejecidos, mal preparados y su potencia dbil. contaminado control de calidad se observa turbio y de mal olor.b) con respecto a las sangres: sangres viejas o contaminadas con bacterias.c) con respecto a la manipulacin: rotulacin equivocada de los tubos colocacin erronea de los reactivos equivocacin en los reportes.