UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIASDEPARTAMENTO DE PATOLOGÍA VETERINARIACATEDRA DE MICROBIOLOGIA E INMUNOLOGIA INMUNOLOGIA VETERINARIA :Guías de Trabajo Práctico

Una característica de la ciencia y del progreso es, que continuamente abren nuevos campos a nuestra visión.Cuando avanza hacia el descubrimiento de lo desconocido, el científico es como un viajero que alcanza cimas cada vez más altas desde donde observa en la distancia nuevas regiones que explorar”. Louis Pasteur

Elaborada por:Prof. Aurico Sousa FonsecaProf. Luis R. González H.

Maracay, Junio de 2.009INTRODUCCIÓN AL LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA

NORMAS DE SEGURIDAD A SEGUIR DURANTE LAS PRÁCTICAS DE INMUNOLOGÍA.

INFORMACIÓN GENERAL:

El acceso al laboratorio de prácticas sólo se permite a los alumnos que estén realizando las prácticas. No se admiten visitas por razones de seguridad.

Localice los dispositivos de seguridad más próximos. Estos dispositivos son elementos tales como extintores, lavamanos, salidas del laboratorio etc. Infórmese sobre su funcionamiento.

Lea las etiquetas de seguridad. Las botellas de reactivos contienen pictogramas y frases que informan sobre su peligrosidad, uso correcto y las medidas a tomar en caso de ingestión, inhalación, etc. Algunos aparatos pueden contener información del mismo tipo. Lea siempre detenidamente esta información y tenga en cuenta las especificaciones que se señalan en ella.

Infórmese sobre las medidas básicas de seguridad. El trabajo en el laboratorio exige conocer una serie de medidas básicas de seguridad que son las que intenta recoger esta guía.

En caso de duda, pregunte. Cualquier duda que tenga, consúltela con su profesor. Recuerde que no está permitido realizar ninguna experiencia no autorizada por el profesor.

PROTECCIÓN PERSONAL:

Cómo ir vestido en el laboratorio. El uso de batas abrochadas es obligatorio en el laboratorio, ya que por mucho cuidado que se tenga al trabajar, las salpicaduras de productos químicos o biológicos son inevitables. La bata será preferentemente de magas largas, ya que, en caso de accidente, otros tejidos pueden adherirse a la piel, aumentando el daño. Durante el periodo de prácticas, la bata no debe utilizarse fuera del laboratorio. No es aconsejable llevar minifalda o pantalones cortos, ni tampoco medias, ya que las fibras sintéticas en contacto con determinados productos químicos se adhieren a la piel. Se recomienda llevar zapatos cerrados y no sandalias. Los cabellos largos suponen un riesgo que puede evitarse fácilmente recogiéndolos con una cola.

Uso de guantes. Es recomendable usar guantes, sobre todo cuando se manipulan muestras biológicas (sangre, suero, orina, leche, efusiones, tejidos u órganos etc.) También cuando se utilizan sustancias corrosivas o tóxicas. En ocasiones, pueden ser recomendables los guantes de un sólo uso.

“RECUERDE SIEMPRE QUE TODO FLUIDO BIOLOGICO ES POTENCIALMENTE CONTAMINANTE HASTA QUE NO SE DEMUESTRE LO CONTRARIO”.

Cuidado de los ojos. Los ojos son particularmente susceptibles de daño permanente por productos corrosivos así como por salpicaduras de partículas. Es obligatorio usar gafas de seguridad siempre que se esté en un laboratorio donde los ojos puedan ser dañados. Particularmente la manipulación de material biológico puede ocasionar salpicaduras que conducen a infecciones.

“TRABAJAR CON SEGURIDAD EN EL LABORATORIO”

NORMAS HIGIÉNICAS Y DE SEGURIDAD.

No comer ni beber en el laboratorio, ya que es posible que los alimentos o bebidas se hayan contaminado.

Lavarse siempre las manos después de realizar la actividad práctica y siempre antes de salir del laboratorio.

Por razones higiénicas y de seguridad, está prohibido fumar y comer chicle en el laboratorio.

No inhalar, probar u oler productos químicos sin estar debidamente informado. Nunca acerque la nariz para inhalar directamente de un tubo de ensayo o de algún material microbiológico. Evite llevarse a la boca ningún objeto (bolígrafos...) o tocarse los ojos y nariz.

Trabaje con orden y limpieza. Recuerde que el orden es fundamental para evitar accidentes. Mantenga el área de trabajo ordenada, sin libros, abrigos, bolsas, exceso de frascos de

productos químicos y cosas innecesarias o inútiles. En la superficie de trabajo no deben depositarse en ningún momento ropa u objetos personales.

Mantenga los mesones de trabajo siempre limpios. Utilice el desinfectante para limpiar el área de trabajo antes de iniciar la actividad práctica y al finalizar la misma. Se tienen que limpiar inmediatamente todos los productos químicos derramados.

Limpie siempre perfectamente el material y aparatos (Microscopios) después de su uso.

Actúe responsablemente. Trabaje sin prisas, pensando en cada momento lo que está haciendo, y con el material y reactivos ordenados. No se debe gastar bromas, correr, jugar, empujar, arrojar líquidos, etc. en el laboratorio.

Un comportamiento irresponsable puede ser motivo de expulsión inmediata del laboratorio y de sanción académica.

Atención a lo desconocido. Está terminantemente prohibido hacer experimentos no autorizados por el profesor.

No utilice ni limpie ningún frasco de reactivos que haya perdido su etiqueta. Entréguelo inmediatamente a su profesor.

No substituya nunca, sin autorización previa del profesor, un producto químico por otro en un experimento.

No utilice nunca un equipo o aparato sin conocer perfectamente su funcionamiento. En caso de duda, pregunte siempre al profesor.

Se deben usar los mecheros Bunsen con precaución, no dejando material inflamable cerca y evitando el posible contacto con pelo y ropas. Se comprobará que se ha apagado el gas al finalizar el experimento y al abandonar el laboratorio.

Está prohibido pipetear con la boca. Use siempre un dispositivo especial para pipetear líquidos.

Ante un vertido accidental de material microbiológico debe informarse inmediatamente al profesor encargado del grupo. Se deben lavar las manos con jabón antiséptico ante cualquier sospecha de contaminación.

No se debe forzar un tubo de vidrio o la apertura de un frasco sin tener protegidas las manos.

La eliminación de residuos, material desechable y material reciclable se realizará utilizando los contenedores dispuestos a tal efecto.

PRECAUCIONES ESPECÍFICAS PARA ALUMNOS EN CONTACTO CON ANIMALES EN PRÁCTICAS DE INMUNOLOGÍA

Se recomienda la vacunación antihepatitis B, antihepatitis A y el toxoide tetánico. Extrema las medidas higiénicas y de protección detalladas en los apartados anteriores. En concreto:

Use siempre guantes en la extracción de sangre o procedimientos invasivos, en el contacto con líquidos que requieran precauciones universales (líquido amniótico, pericardio, peritoneal, pleural, sinovial, semen, secreciones vaginales y cualquier líquido contaminado con sangre), en el contacto con mucosas, piel no intacta y para manipular objetos o superficies manchados con líquidos corporales. Use también guantes cuando tenga cortes arañazos o lesiones en la piel de las manos.

Lávese las manos después de quitarse la bata y los guantes, antes de abandonar el laboratorio e inmediatamente si se han contaminado de sangre.

Use batas desechables cuando la ropa pueda ser manchada por líquidos corporales, sangre, secreciones o excreciones.

Use gafas, bata y mascarilla protectoras cuando haya riesgo de salpicaduras de líquidos corporales.

Evite heridas accidentales con instrumentos que puedan estar contaminados y tenga cuidado con las heridas abiertas, aunque sean pequeñas.

Las agujas no deben ser reinsertadas en su capuchón original antes de tirarlas, porque esto es causa frecuente de pinchazos. Han de ser depositadas en un envase preparado a tal efecto.

Las gotas de sangre que se derramen deberán limpiarse rápidamente con un desinfectante como el hipoclorito de sodio (lejía) a la dilución 1/10 o en su defecto con glutaraldehido.

Las muestras de sangre y otros materiales biológicos deben ser enviadas en un contenedor doble debidamente señalizado (p. ej. una bolsa doble de plástico) y deben de ser examinados para detectar posibles roturas o fisuras.

OBJETOS PUNZANTES Y CORTANTES

El uso de agujas hipodérmicas y jeringas debe ser limitado. Sólo deben usarse las unidades ya montadas.

Nunca se debe volver a poner la capucha a las agujas y éstas no deben ser torcidas ni separadas de la jeringa.

Las agujas y jeringas usadas, así como los bisturís, deben ser desechados sólo en contenedores especiales diseñados para este propósito.

CUIDADO Y MANEJO DE ANIMALES El alumno debe saber manejar adecuadamente los animales de experimentación y el cuidado que se les debe suministrar con el fin de adquirir uniformidad para producir experimentos que se puedan repetir. Los experimentos son llevados a cabo en animales vivos, y estos deben ser tratados con mucho cuidado para evitar en lo posible su sufrimiento.

El maltrato de los mismos puede ser motivo de expulsión del laboratorio. Las investigaciones en animales es la base del progreso de la medicina la mayoría de contribuciones en beneficio de la salud y bienestar del hombre, proviene de la investigación con animales. Estos estudios han dado lugar al conocimiento de las funciones del organismo, a los requerimientos nutricionales, al uso racional de los medicamentos y al control de las enfermedades. Los animales del laboratorio son absolutamente necesarios para el estudio de la farmacología. Existen procedimientos adecuados para el manejo y cuidado de estos animales.El cuidado que se presta a los animales de laboratorio data de 1945, estos cuidados se les suministran con el fin de conseguir:

Uniformidad para producir experimentos cuantitativos que se puedan repetir.Fines específicos útiles para un experimento en particular.Economía, ya que no se va utilizar un mono o un perro, pudiendo utilizar un ratón o un conejo.

PRACTICA Nº 1

ANIMALES DE LABORATORIO COMO MODELOS BIOLÓGICOS: ETOLOGÍA, TÉCNICAS DE ABORDAJE Y SANGRADO

PREPARACIÓN DE SUEROS HIPERINMUNES MEDIANTE INOCULACIÓN DE ANTÍGENOS PARTICULADOS Y ANTÍGENOS SOLUBLES

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

Al culminar la práctica el estudiante deberá estar en capacidad de:

Proceder a la correcta y adecuada inmovilización de las principales especies animales empleados como modelos en el laboratorio de Inmunología.

Identificar las vías de abordaje frecuentemente empleadas en la obtención de muestras biológicas destinadas a la realización de pruebas inmunológicas.

Inocular los animales de laboratorio con diferentes soluciones antigénicas, empleando todas las vías de abordaje disponibles para cada modelo en particular.

Obtener y procesar correctamente las muestras biológicas empleadas en el laboratorio de Inmunología a partir de cada uno de los modelos animales estudiados.

Realizar la correcta preparación de antígenos solubles a partir de sueros sanguíneos provenientes de diferentes especies animales: humanos, caninos, equinos, bovinos, ovinos, caprinos ó aves.

Preparar suspensiones de células bacterianas totales muertas (bacterinas) que contengan determinantes antigénicos como: Antígeno Somático “O”, Antígeno Flagelar “H”, Antígeno Capsular “K” o Antígeno Fimbrial “P” (Pili), según la cepa bacteriana dada al grupo de práctica.

Inocular estos antígenos (solubles y particulados) en conejos con la finalidad de inducir una respuesta primaria y secundaria de anticuerpos polivalentes los cuales serán utilizados en pruebas serológicas posteriores.

MANEJO E INMOVILIZACIÓN DE ANIMALES

INTRODUCCIÓN

La mayoría de las personas que se dedican a la medicina veterinaria, han tenido experiencias en el control de animales; algunos incluso, son expertos en el manejo y entrenamiento de ciertas especies - por ejemplo, perros o caballos. Existen personas que tienen la falsa creencia que si alguien ha tenido buena afinidad con alguna especie animal en particular, puede aplicar estos conocimientos al manejo de otras especies animales. Es ventajoso saber que las técnicas de manejo que se aplican a una especie animal, pueden tener por lo general, poca utilidad en otras especies animales; en algunos casos son ineficaces, y en otros su uso puede hasta resultar peligroso. Pocas personas utilizarían la misma forma de inmovilización para una vaca que para un perro, rata o conejo; del mismo modo, quien no este familiarizado con los caballos pensaría que pueden ser controlados con las mismas técnicas usadas en bovinos, lo cual es falso debido a que ambas especies tienen rasgos de comportamiento que se interpretan con diferentes significados según el respectivo animal.

El presente trabajo de laboratorio incluye una sección que pretende ser una guía sobre el comportamiento, manejo e inmovilización de animales de laboratorio (conejos, roedores y aves). La intención no es elaborar un texto exhaustivo, sino precisar los conocimientos aplicables en diversas situaciones según la especie animal abordada.

INSTRUCCIONES PARA LA INMOVILIZACIÓN

¿Cuales son las razones para inmovilizar un animal?. La razón más común es dominarlo para efectuar algún procedimiento. Gran parte de los procedimientos terapéuticos y de diagnóstico utilizados en animales, no son de su agrado, por lo que naturalmente se resisten. La inmovilización en sí, implica molestia para el animal. Con el objeto de evitarles un exceso de incomodidad debe procurarse aplicar la mínima inmovilización efectiva. Por ejemplo, no es necesario recostar a un gato común para examinarle el hocico, por lo general, los gatos se muestran dóciles y permisibles cuando la inmovilización es mínima. Por el contrario sería audaz efectuar una punción yugular en un gato mal inmovilizado, a

menos que estuviera agonizando. Es evidente que se necesita un criterio adecuado para decidir oportunamente la manera de inmovilizar un animal.

La segunda razón importante para una eficaz inmovilización consiste en la de evitar que el animal se dañe. Este hecho es claro con la utilización de ciertos instrumentos de inmovilización que tiene por objeto impedir la automutilación o destrucción de vendajes. Sin embargo, existen formas mediante las cuales los animales se pueden dañar al reaccionar frente a un procedimiento molesto (o simplemente al evitar a la gente) si no están correctamente inmovilizados; por lo que deben tomarse en cuenta los factores ambientales. Lo importante es que los médicos veterinarios logren que las áreas de examen y manipulación sean lo más seguras posibles, ya que si algo le ocurre al animal, se considera al veterinario culpable.

Los animales deben estar inmovilizados de tal modo que no se dañen durante el procedimiento. Si un animal se mueve durante una sencilla venipunción puede ocurrir rotura de vasos, hematomas y hemorragias.

Una de las razones más importantes en la adecuada inmovilización de los animales, es la protección del personal. Tanto el médico veterinario como su ayudante dependen de partes funcionales del cuerpo para realizar su trabajo. Heridas leves pueden tener como consecuencia una significativa reducción en la eficacia operativa y las percepciones económicas. Una mano mordida, tumefacta y contusa no podría realizar una intervención quirúrgica, así sea menor.

Por último, es importante recalcar que el médico veterinario es legalmente responsable de las heridas sufridas por el animal durante la práctica veterinaria e igualmente de las personas que colaboren con él en el ejercicio de la práctica veterinaria.

PERCEPCIÓN Y COMPORTAMIENTO ANIMAL

La evolución humana está íntimamente ligada al éxito en el aprovechamiento de los animales. Este logro, requirió de un profundo conocimiento del modo en que los animales reaccionaban a la presencia del hombre. Los hombres siempre han sido ávidos estudiosos del comportamiento animal; a menudo, para utilizar el conocimiento adquirido en el mejor manejo de animales, en su propio beneficio.

El hombre tiene la capacidad innata de manejar a los animales para su propio beneficio. Si por razones laborales o de esparcimiento se usa esta capacidad, realmente es grato, aunque no del todo sorprendente, experimentar la rapidez y el grado de destreza, que se desarrolla. Sin embargo, antes de confiar completamente en el tema y en la capacidad que todo hombre tiene, se debe tener en cuenta que hay muchos aspectos por conocer para evitar lesiones en un mismo y en el animal. Se debe analizar cuidadosamente el manejo e inmovilización, teniendo presente el ambiente en que se encuentra el animal bajo control y su comportamiento normal en un determinado ambiente. Una vez evaluada la situación cuidadosamente, se podrá dominar al animal aplicando los conocimientos en relación a su comportamiento y para cada caso, con el equipo necesario.

LA PERCEPCIÓN EN LOS ANIMALES DE LABORATORIO

Por medio de los sentidos, en particular olfato, vista y oído, los animales conocen el ambiente en que se encuentran y los cambios que en él se producen. Uno o más de estos sentidos pueden estar más desarrollados en el animal que en el hombre. Los animales de laboratorio retienen, en gran parte, las sensaciones agudas que resultan de tanta importancia en su modo de vivir para la interacción social, defensa, reproducción, detección y selección de alimentos, de sus similares en estado salvaje. Una consideración muy importante en el manejo de diversas especies, es conocer el modo como el animal detecta la invasión del hombre en su espacio vital.

OLFACIÓN

Los mamíferos muestran un comportamiento olfatorio. La primera forma de identificar a sus crías dentro del rebaño o la manada, es mediante el olfato. El olfato tiene un papel importante en la identificación de lugares y personas. Algunas veces se expresa que "los animales huelen al miedo", muchos conductistas han indicado que es más factible que el "lenguaje corporal" del hombre indique su falta de seguridad y así, ser mal interpretado como el "olor del miedo".

OÍDO

Los humanos no pueden percibir los sonidos de alta frecuencia, importantes para la detección y comunicación en los animales de laboratorio. Los mamíferos tienen métodos desarrollados para percibir ondas sonoras en el oído externo. Los animales domésticos, incluyendo al conejo, pueden orientar el pabellón por medio de músculos, enfocando así la fuente del sonido. Aparte de la percepción sonora, las orejas son indicadoras del comportamiento.

Los humanos captan sonidos que van desde 20 Hz como mínimo, hasta 20.000 Hz como máximo. El perro capta sonidos hasta de 40.000 Hz y probablemente, arriba de los 60.000 Hz. Por increíble que parezca, los murciélagos atrapan insectos voladores utilizando la ecolocalización de sonidos que emiten estos de 98.000 Hz. La rata de laboratorio capta sonidos entre 60.000 y 80.000 Hz. Se ha demostrado que la intercomunicación de las ratas y sus crías se lleva a cabo dentro del espectro ultrasónico. Investigaciones recientes indican que posiblemente también ocurra este fenómeno entre la perra u sus cachorros.

Debido a que el hombre no percibe la comunicación entre animales por encima de las frecuencias que el oído humano puede captar, debe aclararse que el mundo sensitivo de los animales no debe juzgarse a partir de nuestras condiciones cognoscitivas.

VISIÓN

Los animales domésticos - con excepción del cerdo - tienen un estrato reflector detrás de la parte sensorial del ojo - retina - la cual incrementa la intensidad de la luz percibida en el ojo. Esto les permite una mejor visión con baja intensidad de luz, dándoles una visión nocturna superior a la del hombre.

El campo visual de los herbívoros domésticos es amplio, permitiéndoles detectar rápidamente desde distintos ángulos la presencia de predadores; esto se puede observar particularmente en el caballo y conejo, quienes poseen un campo visual de 360º sin necesidad de mover la cabeza. La ubicación de los ojos en el conejo es tal que, el único lugar que no cubre la visión, es la zona inmediata posterior a la cabeza, y una pequeña zona delante de la nariz. Tiene un campo visual de 215º para cada ojo, sobreponiéndose en la parte delantera y quedando ubicada la zona ciega por detrás del área sobrepuesta; resultando así un campo visual de casi 360.

COMPORTAMIENTOS AGONISTAS

Los comportamientos agonistas son aquéllos provocados por un conflicto. Muchos animales deben estar manejados en una posición en la que sea posible la inmovilización, o como medida de seguridad deben estar inmovilizados desde un principio. El animal percibe los movimientos como una forma de conflicto; pero con el fin de comprender los principios de manejo en cada especie, conviene familiarizarse con los fundamentales mecanismos de comportamiento agonistas de las diferentes especies. Estos comportamientos incluyen distintas respuestas frente al conflicto, desde la pasiva evasión pasando por el predominio, hasta la agresión y el combate. Naturalmente, los ataques que conducen a una lucha con otros animales, de igual o diferente especie, no son frecuentes fuera del comportamiento predador o sexual. La forma común de resolver el conflicto en aspectos como el territorio u otros privilegios lo constituye el dominio y la sumisión respectiva.

HUIDA O LUCHA

Cuando un animal extraño se aproxima, sea un animal doméstico o salvaje, se aplican los mismos principios. En un determinado ambiente cada especie tiene sus propias reacciones, pero los factores o señales que condicionan la reacción son comunes a todos los animales, aunque la intensidad es distinta. Cada animal posee un espacio para huir. Si una persona se aproxima a esa distancia, el animal se alarma. El estado de alerta llamado "adrenalización" se debe a que las señales del cerebro, por vía del sistema nervioso simpático, originan la secreción de adrenalina en la glándula suprarrenal, mostrando el efecto en los fuertes latidos del corazón y la sensación de alerta por el temor o aprensión previos a una competencia. En el caso de huida animal los músculos se preparan para el movimiento, el ritmo cardíaco aumenta y la sangre se dirige a las partes corporales, principalmente al músculo esquelético, cerebro y pulmones.

Si continua la aproximación hacia el animal y si éste, en especial, no está en condiciones de mantener una distancia segura respecto al extraño, se da por hecho la evasión o "huida", o el ataque conocido como "lucha".

COMPORTAMIENTO AGRESIVO

El comportamiento agresivo es la característica del comportamiento que conduce a la lucha. La agresión no es resultado de una sola causa. Las diferentes formas agresivas se clasifican de acuerdo al estímulo o las circunstancias que dan origen a la ferocidad:

AGRESIÓN CAUSADA POR IRRITACIÓN O DOLOR

La agresión causada por irritación o dolor es un problema frecuente en el manejo de animales de laboratorio y en la clínica veterinaria. Las inyecciones y ciertos manejos, que pueden ocasionar lesiones menores, causan cierto grado de dolor e incomodidad. Aún la primera inyección de un anestésico local produce incomodidad por muy diestro que sea el anestesista. El estado mental del animal influye notablemente en la agresividad. Si el animal, en un comienzo, está nervioso y con recelo, la probabilidad es mayor. Es por ello que cuando sea posible, debe calmarse al paciente y familiarizarse con él.

AGRESIÓN MATERNAL

Todas las hembras de las especies animales empleadas en el laboratorio, e igualmente las especies domésticas que están amamantando a sus crías, se encuentran alertas y al cuidado con su progenie, evitando el roce con extraños. Especial mención para este tipo de conducta agresiva reciben las cerdas con prole.

AGRESIÓN PREDADORA

Se denomina agresión predadora al despliegue agresivo de los animales predadores. Por lo general, no hay riesgo para quien trata con estos animales, pero hay que tener cuidado con tirones de estos animales al tratar de perseguir una presa.

AGRESIÓN TERRITORIAL

Todos los mamíferos domésticos son territoriales en el sentido que protegen el área que dominan evitando la invasión de intrusos; pero en ciertos casos pueden mostrar agresión territorial. Por ejemplo, la coneja en cautiverio es dominante en su territorio. Si se introduce al macho en su jaula, lo atacará con suma agresividad, causándole graves heridas. La hembra siempre es llevada a la jaula del macho para el apareamiento.

AGRESIÓN POR TEMOR

Cuando un animal le teme a un ambiente determinado y a las personas que se encuentren en él, reaccionara agresivamente a éstos. El temor es una causa frecuente de agresión en los perros ante tales circunstancias. En el laboratorio y en la práctica veterinaria las mordeduras por temor son el tipo de ataque más común. El ataque no es totalmente dominante, por lo general el animal muestra los clásicos signos de intimidación. Si se invade el espacio territorial de dicho animal con la intención de aplacarlo o tranquilizarlo, puede ocurrir un ataque repentino. Es de esperarse que este ataque sea dirigido generalmente a las manos y los brazos.

AGRESIÓN ENTRE MACHOS

La agresión entre machos puede ser un problema; especialmente donde se encuentran animales reproductores.

AGRESIÓN SEXUAL

Es muy conocida la lucha sexual que se presenta por las hembras en celo.

AGRESIÓN POR DOMINIO

Los animales domésticos que descienden de manadas o jaurías reconocen una jerarquía en la familia y conocen al líder de la jauría. El hombre representa el papel de líder de la jauría (proporciona comida, abrigo, compañía, ejercicio y autoridad), sin embargo, algunos animales establecen su autoridad ante familiares y extraños, de un modo relativamente agresivo. Estos animales son una amenaza en el laboratorio o en la práctica veterinaria, ya que no solo morderán por dolor, sino que atacarán. Con esta clase de animales, la persuasión resulta de poca utilidad. Desde el comienzo, el médico veterinario debe aplicar una total inmovilización de estos animales.

COMPORTAMIENTOS COMUNES DE LOS ANIMALES DE LABORATORIO DURANTE LA AGRESIÓN Y LA EVASIÓN

CONEJOS

Los comportamientos agresivos del conejo están supeditados a rasguñar con las patas traseras cuando se intentan atraparlos introduciendo las manos dentro de la jaula. Aun cuando los conejos no suelen morder y presentan una actitud de huida más que de enfrentamiento agresivo, es conveniente manipularlos empleando guantes de mediano grosor. El conejo luchara hasta que se presionen sus cuartos traseros contra el piso y se inmovilice el resto de su cuerpo.

Es importante recordar que los conejos poseen uñas extremadamente filosas en la patas traseras, que, si el animal forcejea, pueden provocar profundos rasguños en el abdomen o brazos de quien los carga.

A los conejos les desagrada ser colocados sobre superficies lisas y resbaladizas, al perder apoyo forcejean y patean. Es sumamente importante evitar este tipo de situación, ya que podría conllevar a lesiones en el animal, el personal que lo manipula o hasta escape del animal.

RATAS Y RATONES

La ratas y ratones son animales fáciles de manejar en el laboratorio siempre y cuando se observen algunas normas básicas sobre su comportamiento agresivo. Los roedores en general presentan una fuerte predisposición a escapar cuando son manipulados. Igualmente todos los roedores muerden cuando están asustados o cuando son sometidos a manipulaciones que generan dolor o stress, razón por la cual es conveniente utilizar guantes gruesos, salvo que sean especímenes excepcionalmente dóciles. COBAYOS

Los cobayos son criaturas sumamente dóciles que rara vez muerden, no importa cuan asustados estén o el grado de dolor al que sean sometidos. No tienden a saltar, pero son sumamente rápidos cuando logran escapar.

AVES

Los comportamientos agresivos no son muy frecuentes en las aves. La mayor precaución que debe observarse en el manejo de las mismas es la inmovilización de las alas e impedir que picoteen. Particular atención debe observarse en la manipulación de aves por su tendencia a escapar desplegando totalmente sus alas, la inadecuada sujeción de las mismas puede originar lesiones al tratar de recapturarlas.

MANEJO ETIOLÓGICO

La etología es el estudio del comportamiento animal. El manejo etológico no es más que el estudio del comportamiento animal para establecer la mejor manera de manejarlos y dominarlos. Las técnicas de acercamiento y manejo están interrelacionados con el comportamiento de las diferentes especies, y considerando los métodos físicos de inmovilización o sujeción compatibles con su anatomía. La capacidad humana para observar una buena cantidad de aciertos y errores han determinado la importancia actual de esta técnica. Aunque estos conocimientos se adquieren para obtener destreza, nada reemplaza a la aguda percepción, la agudeza mental, la observación y el análisis crítico de cada situación. El único modo efectivo de aprender esta técnica, consiste en la preparación mental y práctica con la seguridad que se ha hecho una cuidadosa evaluación de la situación en particular.

INMOVILIZACIÓN DE CONEJOS

Los conejos tienen peculiaridades respecto a la inmovilización que deben conocerse. En primer lugar tienen una muy elevada relación masa corporal - esqueleto. La relación con sus huesos, livianos y pequeños, es deficiente respecto a su tamaño. Además sus patas traseras son muy poderosas. Las patadas descontroladas de un conejo pueden causar una torsión elevada en la zona lumbosacra, produciendo como consecuencia una "espalda quebrada", término impreciso que significa pérdida de las funciones neurales de los cuartos traseros, por traumatismo en columna vertebral. No sólo quedan paralizadas las patas traseras del conejo, sino que se anulan las funciones de vejiga y ano. El diagnóstico en cuanto a recuperación es malo, y lo más humano es la eutanasia. Esto suele ocurrir cuando se coloca al conejo nuevamente en su jaula; al familiarizarse con la misma, dará un salto prematuro. La parálisis puede ser inmediata o retrasarse hasta que la hemorragia y el edema compriman la médula espinal.

¿Cómo evitar esta desafortunada situación? Existen básicamente dos modos de cargar un conejo adulto. Si bien los pequeños pueden ser levantados sin riesgo por la piel del cuello, a los grandes y pesados es mejor tomarlos por los cuartos traseros y la piel del cuello. De este modo permanecen relativamente inmóviles. Se pueden transportar así sin mayor dificultad por distancias cortas. Para las más largas se colocan sobre una mesa y se le toma con los

antebrazos atrayéndolos hacia el cuerpo. Esta posición sostiene con comodidad los cuartos traseros. Cuando se transportan así, esconden la cabeza debajo del codo de quien los conduce. Es poco probable que muerdan, por lo que dejarles la cabeza libre no constituye un problema; la mejor forma de colocar un conejo en su jaula es sosteniéndolo por la piel debajo y detrás colocándolo bien adentro de la jaula y presionando su cuerpo contra el piso unos momentos antes de soltarlo. Nunca debe levantarse un conejo joven o adulto por las orejas.Ilustración SEQ Ilustración \* ARABIC : Sujeción del conejo para su traslado de un lugar a otro.

Los conejos poseen uñas extremadamente filosas en las patas traseras, que, si el animal forcejea, pueden provocar profundos rasguños en el abdomen o brazos de quien los carga. Si bien, siempre deben utilizarse batas protectoras con mangas largas, la mejor manera de evitar ser rasguñados es no cargarlos con los antebrazos. Las uñas de los conejos pueden cortarse sin dificultad colocándolos sobre una mesa y sujetándolos con el antebrazo y pecho. Las uñas de las patas traseras se cortan tirando las patas hacia atrás, e igual que en los caballos

A los conejos les desagradan las superficies resbaladizas, y al perder apoyo sobre ellas comienzan a forcejear y patear. Lo más aconsejable es colocarlos sobre una superficie que les dé una buena tracción por ejemplo una alfombrilla de caucho.

Los conejos tienen bigotes muy sensibles que echarán inmediatamente hacía atrás si se tocan éstos o el hocico. Por ello, la cabeza debe estar sujeta fuertemente antes de examinar el hocico o introducir algo en su interior. Para lograrlo se presiona el cuello hacia abajo con la palma de la mano, en tanto que el pulgar y los demás dedos se colocan a los lados de la cara para impedir el movimiento lateral. Esta es la posición adecuada para limarle los incisivos.

Para la inmovilización farmacológica de conejos se usan ketamina y acepromacina, esta combinación se emplea también para inducción de anestesia con gas.

En ocasiones, los conejos, y en especial las hembras, pueden ser muy agresivos e intentan rasguñar con las patas traseras cuando se introduce la mano en la jaula. Como ya se ha dicho los conejos no suelen morder, por lo que basta con un par de guantes de mediano grosor para someterlos. Normalmente el conejo deja de luchar cuando se presionan sus cuartos traseros contra el piso, y se inmoviliza el resto de su cuerpo.

Ilustración SEQ Ilustración \* ARABIC : Métodos para la sujeción y transporte de conejos y su colocación y ajuste en la jaula de restricción para tomas de sangre e inyecciones

Dentro de cajas pueden inmovilizarse con un dispositivo para tomar la cabeza a ambos lados y una tabla para sujetar la parte trasera, que debe estar ceñida contra los cuartos traseros para obligar el conejo a introducir la cabeza en el orificio correspondiente. En

ningún caso debe sujetarse sólo por la cabeza, pues intentarán retroceder, lastimándose durante el forcejeo.

Para la venipunción en la oreja, se sujeta al conejo desde atrás, presionando su cuerpo con los antebrazos y conservando su cabeza gacha, con los pulgares detrás de las orejas y los demás dedos a lo largo de la cara.

INMOVILIZACIÓN DE ROEDORES, CRICETOS Y JERBOS Cuando estos animales son ariscos e intentan morder se manejan con guantes. Los jerbos tienen largas colas (terminadas en un mechón de pelos) por donde se pueden atrapar. Con el fin de poder evitar que escapen, se toma la cola por cualquier porción, pero para levantarlos se debe asir por la base, para no rasgar y desprender la piel. La técnica de tomarlos por el cuello es más o menos eficaz tanto en jerbos como en cricetos, aunque estos últimos poseen un exceso de piel por las bolsas en la mejillas, las cuales deben recogerse al lazarlos. La cola de los cricetos es insignificante, por lo que deben atraparse por el cuerpo. Esta técnica también es más apropiada para jerbos, salvo que tiendan a morder. Estos pequeños roedores se inmovilizan en una mesa, colocando una mano sobre ellos, a modo de jaula, permitiendo que asomen la cabeza entre los dedos índice y mayor. Los cricetos también pueden atraparse "arreándolos" hacia el interior de una lata, ya que tienden a buscar orificios en donde meterse.

En todas las especies roedoras puede utilizarse ketamina. También se utiliza un gas anestésico ligero en pequeñas cantidades, aunque muchos jerbos presentan reacciones adversas al mismo y una vez que dejan de respirar mueren inevitablemente por más esfuerzos que se realicen para reanimarlos

INMOVILIZACION DE RATONES:

Los ratones usualmente son sostenidos por la base de la cola, específicamente en el área de la parte media hacia la base. Con este sencillo método de sujeción pueden ser transferidos de una jaula a otra, examinados y sexados. Para la aplicación de un tratamiento o un examen mas profundo, este método no es suficiente. Para un mejor control sobre el ratón, este debe sujetado por la cola, colocado sobre la rejilla de la jaula, la mesa u otra superficie, preferiblemente de donde el pueda sujetarse y entonces con el dedo pulgar e índice, tomar la piel que se encuentra en la parte superior de su cuello y hombros. Durante este proceso el ratón puede voltearse y morder pero una vez sujetado correctamente, está perfectamente controlado. Con la otra mano pueden sujetarse la cola y las patas traseras y realizar un adecuado examen de animal. Existen dispositivos de restricción aplicables a ratones que ayudan a la sujeción y al manejo correcto del animal.

: Métodos de sujeción y manipulación en el ratón para inyecciones intraperit oneales o intramusculares.

INMOVILIZACION DE RATAS:

Las ratas normalmente se sujetan por todo su cuerpo. Ver figura 2. Se cubre con la palma de la mano toda su espalda con los dedos rodeando su cuerpo cerca del cuello, debajo de las axilas de sus patas delanteras. Las ratas pueden ser también sujetadas por la cola de forma temporal. La sujeción de la rata con una mano es lo más común y efectivo para ejercer el control adecuado y debe estar acompañado de la sujeción de las patas y la cola con la otra mano para un control total. En esta posición otra persona puede realizar el examen o el tratamiento en el animal. Ratas jóvenes y más pequeñas pueden ser manejadas de la misma forma que un ratón, cuando su tamaño no permita la sujeción con la mano. Un hueso plano que se encuentra en la espalda de la rata llamado Chassaignac, hace difícil la sujeción de la piel de la rata. Las ratas pueden morder y determinadas cepas y líneas son más agresivas, por ejemplo, la F-344 es más agresiva que la Sprague Dawley, por lo que el cuidado y la experiencia son determinantes para un manejo correcto y sin heridas. Existen dispositivos de restricción aplicables a ratas que ayudan a la sujeción y al manejo correcto del animal.Ilustración SEQ Ilustración \* ARABIC : Métodos de restricción y sujeción de ratas para inyecciones

INMOVILIZACION DE HAMSTER

Los hámsteres muerden rápido y profundo cuando el manejo no es el correcto o se encuentran en una situación de estrés que consideran de peligro. Cuando el manejo es el correcto asimilan muy bien la situación y llegan a interactuar con la persona. Son varios los métodos de sujeción de un hámster. Las palmas de ambas manos pueden sujetar al animal. Puede ser elevado sujetándolo con una mano de manera similar a la rata. La piel alrededor del cuello y sobre los hombros es una herramienta útil que ejerce un buen control para sujetarlo con una mano, no obstante se requiere de práctica para ejercer dicho control. Ver REF _Ref232496676 \h Ilustración 7. En ocasiones es más fácil utilizar un recipiente para trasladar un hámster de un punto a otro si el control efectivo no es necesario para realizar una evaluación o inspección del animal.

Ilustración SEQ Ilustración \* ARABIC : Métodos de restricción y sujeción del hámster.

INMOVILIZACION DE COBAYOS

El cobayo es una criatura dócil que rara vez muerde aunque este muy asustado o se le cause dolor. No saltan, como la mayor parte de los roedores, pero se escabullen y corren a gran velocidad. Dentro de una jaula se atrapan con las manos, contra un rincón o a lo largo de las paredes; para alzarlos se toman con las manos entrecruzando los dedos por debajo y sujetando el lomo con los pulgares. Las hembras preñadas pueden desarrollar grandes vientres pendulares, por lo que deben alzarse tomando el tórax con una mano y colocando la otra debajo de las caderas, sosteniéndolas en posición vertical.

Ilustración

SEQ Ilustración \* ARABIC : Método de sujeción para inyecciones y movimiento del cobayo

Los cobayos se inmovilizan fácilmente empleando el procedimiento anteriormente explicado, de igual manera se pueden emplear ambas manos para sujetarlo por el lomo y los anillos óseos pélvicos. Los dientes pueden ser recortados sosteniendo la cabeza con una o ambas manos, colocando el dedo índice bajo la mandíbula y el pulgar detrás de la cabeza. El cobayo igual que los lechones, tolera ser colocado de lomo, sobre una superficie con forma de V y con las patas amarradas. Puede usarse la ketamina para su inmovilización, aunque por lo general no es necesaria.

INMOVILIZACION DE AVES

Los pájaros enjaulados se capturan con la mano o por medio de una red. Cuando se utiliza la red, se debe tener la precaución de no golpear al pájaro con el marco y no atraparlo con violencia, ya que se fracturan con facilidad los huesos de alas y patas. Es evidente que deben inmovilizarse las alas e impedirse que picotee. Los pájaros de ornato como los periquitos australianos se sostienen con la mano sobre la espalda para inmovilizar las alas, y el pulgar .