Límites microbianos

En 1881 dentro del Congreso MédicoInternacional en Londres, Robert Koch describióun método de cultivo de microorganismosempleando medios después de agregargelatina.

En 1882, fue perfeccionado por suscolaboradores Fanny y Walther Hessesustituyendo la gelatina por agar-agar.

En esos años también Julius Richard Petriinventó las cajas del mismo nombre. Con esto yla técnica de dilución serial desarrollada porJoseph Lister, se conforma la técnica de cultivoy aislamiento con medios sólidos.

Origen de técnicas de cultivo en medios sólidos

En los productos no estériles que carecen de especificación,

aplicar el Apéndice VII Análisis microbiológico de productos

farmacéuticos no estériles, con carácter obligatorio. Nuevo

MGA 0571, Límites microbianos

Los métodos para evaluar la calidad microbiológica de materiasprimas, productos intermedios y terminados son descritos en el MGA0571, Límites microbianos.

Las técnicas de enumeración de microorganismos descritas son:

MGA 0571, Límites microbianos

• Filtración por membrana

• Cuenta en placa - vaciado

• Cuenta en placa – extensión

• Numero más probable

En el mismo método se incluyen técnicas de enriquecimiento selectivopara el aislamiento e identificación de los microorganismos específicosy grupos indicadores:

• Escherichia coli

• Salmonella sp

• Pseudomonas aeruginosa

• Staphylococcus aureus

• Clostridium sporogenes

• Candida albicans

• Bacterias Gram negativas bilis tolerantes

MGA 0571, Límites microbianos

Promoción de crecimiento y características selectivas e inhibitoriasde los medios de cultivo

MGA 0571, Límites microbianos

• Reorganización de la información de promoción en medios de

cultivo líquidos y sólidos. Propiedades selectivas y diferenciales.

• Incubar los medios en el menor tiempo de incubación indicado.

• El medio de cultivo cumple si el número de microorganismos

recuperados es comparable en un factor no mayor de 2 (50 a 200 %)

con un lote control.

Evaluación de la aptitud del método

• Mantener a los microorganismos de referencia mediante el sistemalote semilla véase Apéndice VI, Conservación, mantenimiento ymanejo de cultivos microbianos: sistema lote semilla, de maneraque los microorganismos no tengan más de 5 pases a partir de lacepa original o un sistema de conservación que asegure esto. Nuevo

• Un periodo diferente de conservación de suspensiones demicroorganismos de referencia puede establecerse siempre que sedemuestre la estabilidad de las mismas. Nuevo

MGA 0571, Límites microbianos

Evaluación de la aptitud del método

• Verifica la aptitud del método de filtración por membrana o elmétodo de cuenta en placa, el promedio de la cuenta de losmicroorganismos de referencia en presencia del producto, no debediferir por un factor mayor que 2 de los valores del control.

• La aptitud de las pruebas para recuperar a los microorganismoscontaminantes en presencia del producto debe determinarse yconfirmarse cada vez que se introduzca un cambio en el método oen el producto. Esta evaluación corresponde al control positivo de laprueba. Nuevo

MGA 0571, Límites microbianos

Expresión de resultados

• Las técnicas de enumeración de microorganismos está basado en lacuenta de células viables, usando como unidad de expresiónUnidades Formadoras de Colonias (UFC) o Numero Más Probable(NMP).

MGA 0571, Límites microbianos

• La expresión de resultados para la determinación demicroorganismos específicos es “ausencia o presencia” endeterminado tamaño de muestra.

Los resultados generados por métodos

microbiológicos deben ser interpretados por

microbiólogos calificados; entendiendo la variabilidad

per se de los mismos y los factores que contribuyen al

resultado final .

MGA 0571, Límites microbianos

En éste apéndice se proporcionan lineamientos de carácter general

para auxiliar al fabricante en los aspectos a considerar para el control

microbiológico de productos no estériles así como en el

establecimiento de sus especificaciones microbiológicas. Aquellos

productos que cuenten con una monografía farmacopeica con límites

establecidos para las pruebas de enumeración y(o) investigación de

microorganismos específicos deben cumplir con lo requerido en la

monografía. Nuevo

Apéndice VII, Análisis microbiológico deproductos farmacéuticos no estériles

En las tablas A7.1 y A.7.2, se incluye una lista de grupos indicadores y

microorganismos específicos para los que se establecen criterios de

aceptación. En algunos excipientes y preparados farmacéuticos puede

ser necesario establecer niveles de alerta y(o) acción e investigar otros

microorganismos, dependiendo de la naturaleza de las materias primas

y el proceso de fabricación. Nuevo

Apéndice VII, Análisis microbiológico deproductos farmacéuticos no estériles

Apéndice VII, Análisis microbiológico deproductos farmacéuticos no estériles

ProductoOrganismos mesofílicos

aerobios (OMA) (UFC/g o mL)Hongos filamentosos y levaduras (UFC/ g o mL)

Ausencia por 1g o 1 mL de producto

Oral solido 103 102 Escherichia coli

Oral líquido 102 101 Escherichia coli

Rectal 103 102 -----

Bucal 102 101 Staphylococcus aureusPseudomonas aeruginosa

Tópica(incluye parches transdérmicos)

102 101Staphylococcus aureus (1g, 1 mL o parche)Pseudomonas aeruginosa (1g, 1 mL o parche)

Nasal 102 101 Staphylococcus aureusPseudomonas aeruginosa

Ótico 102 101 Staphylococcus aureusPseudomonas aeruginosa

Vaginal 102 101Staphylococcus aureusPseudomonas aeruginosaCandida albicans

Para inhalación 102 101Staphylococcus aureusPseudomonas aeruginosaBacterias Gram (-) tolerantes a la bilis

Elementos, no limitativos, para un análisis de riesgos y especificaciones:

Disponibilidad de materiales de la calidad deseada.

Proceso de fabricación

Vía de administración

Capacidad para soportar el crecimiento

Presencia de preservativos adecuados

Uso de inmunosupresores, corticosteroides.

Tipo de población al que se le administra el producto, presencia delesiones o daños en los pacientes.

Apéndice VII, Análisis microbiológico deproductos farmacéuticos no estériles

¿Qué diferencia existe entre un resultado de 100

o 101 UFC/g?

¿Cómo procedemos sí aislamos un

microorganismos enlistado en el apéndice VII ?

¿Y si no está en la lista?

Apéndice VII, Análisis microbiológico deproductos farmacéuticos no estériles