Introducción al uso del GPHF Minilab®

Taller de Capacitación: Entrenamiento en Pruebas Básicas para el

Monitoreo de Calidad de Medicamentos

Puerto Maldonado, Madre De Dios, Perú 24-28 Septiembre de 2012

Q. B. Lukas Roth Programa de Promoción de la Calidad de Medicamentos

Farmacopea de los Estados Unidos de América

El Control de Calidad (CC) de los medicamentos

se lleva a cabo con el objetivo de verificar que el

producto cumple con las especificaciones de

calidad establecidos durante el registro

Llevar a cabo el CC de acuerdo a las

especificaciones de registro requiere:

– Recursos humanos y financieros

– Personal de laboratorio capacitado

– Equipo caro, reactivos y normas de referencia

– Procesamiento largo de resultados

Racional para uso de Pruebas Básicas

Una alternativa para facilitar el control de calidad

es utilizar metodologías más sencillas y menos

costosas, que no requieran la infraestructura y el

equipo de un laboratorio establecido ni personal

altamente especializado para llevar a cabo los

pruebas de calidad.

Racional para uso de Pruebas Básicas

Pruebas Básicas Análisis no-compendial

Utiliza equipo portátil y descentralizado – Equipo de bajo costo

– Recursos humanos no especializados

Análisis simples

Procesamiento corto de resultados

Costo bajo de análisis

Pruebas Compendiales (LOCM) Análisis compendial

Requiere laboratorio centralizado – Equipo costoso

– Recursos humanos especializados

Análisis complejos

Procesamiento largo de resultados

Costo alto de análisis

Racional para uso de Pruebas Básicas

Equipo fácil de transportar que incluye instrumental e

insumos básicos, estándares de referencia, reactivos

y manuales con metodologías para análisis

Kit de pruebas cromatográficas Kit para reacciones colorimétricas

Global Pharma Health Fund (GPHF) Minilab®

Fácil transportación

GPHF-Minilab®: Variedad de métodos de prueba

1. Inspección física para

verificar el número de lote

y licencia, la dirección, las

especificaciones de los

productos y elementos de

autenticidad

2. Ensayo cromatográfico

para verificar la identidad,

y contenido del

medicamento con respecto

a lo impreso en la etiqueta.

Puede también detectar

impurezas.

3. Se puede añadir un kit

para reacciones

colorimétricas específicas

como segunda prueba

independiente para la

identificación del

medicamento (Pruebas

básicas de la OMS, etc.)

4. Prueba simplificada de

desintegración para

verificar los riesgos para la

salud asociados con la

liberación inadecuada del

fármaco debido a malas

formulaciones de tabletas

o cápsulas

Inspección visual y

física

Cromatografía en

capa fina

Reacción

colorimétrica

Desintegración

Un alto porcentaje

de medicamentos

falsificados pueden ser

detectados a este nivel

Esto permite detectar medicamentos falsificados presentes

en envases perfectamente copiados e identificar

riesgos de salud asociados con productos de mala calidad

Portátil

Capacidad de Identificar Medicamentos

Sub-estándar y Falsificados

Fácil de:

– Usar

– Interpretar

Capacidad de Analizar:

– 62 Medicamentos de la Lista Modelo de

Medicamentos Esenciales de la OMS

– Varias Muestras Simultáneamente

Resultados Reproducibles

Bajo Costo de Análisis y Mantenimiento

Global Pharma Health Fund (GPHF) Minilab®

Antimicrobials (17) Antimalarials (17) Anti-TBs (10) Antiretrovirals (7)

Amoxicillin

Ampicillin

Azithromycin

Cefalexin

Cefixime

Cefuroxime

Chloramphenicol

Ciprofloxacin

Cloxacillin

Erythromycin

Levofloxacin

Metronidazole

Moxifloxacin

Phenoxymethylpenicillin

Sulfamethoxazole

Tetracycline

Trimethoprim

Amodiaquine

Artemether

Artesunate

Atovaquone

Chloroquine

Dihydroartemisinin

Halofantrine

Lumefantrine

Mefloquine

Piperaquine

Primaquine

Proguanil

Pyrimethamine

Pyronaridine

Quinine

Sulfadoxine

Sulfamethoxypyrazine

Ciprofloxacin

Cycloserine

Ethambutol

Ethionamide

Isoniazid

Levofloxacin

Moxifloxacin

Prothionamide

Pyrazinamide

Rifampicin

Didanosine

Indinavir

Lamivudine

Nevirapine

Oseltamivir

Stavudine

Zidovudine

Non

Antinfectives (7)

Acetylsalicylic acid

Aminophylline

Furosemide

Glibenclamide

Paracetamol

Prednisolone

Salbutamol

Antifungals (1)

Griseofulvin

Anthelmintics (3)

Albendazole

Mebendazole

Praziquantel

Estándares de Referencia del GPHF Minilab®

Manuales de Metodologías en Español del GPHF Minilab®

Reacciones Colorimétricas Cromatografía de Capa Fina Suplementos Anuales

Inspección Visual y Física

Inspección Visual

La inspección visual del empaque puede

identificar productos falsificados

Foto: GSK 2005

Países desarrollados: EE.UU. 2010

Medicamentos para bajar de peso - Estilo de vida

Foto: GSK/FDA

genuino falso

Sibutramina Alli® (Orlistat)

Medicamentos falsificados

genuino falso

0,0 mg

Países en desarrollo: Africa Oriental 2007

Medicamento para tratamiento de malaria – Salva vidas

Medicamentos falsificados

Foto: M. Sunjio, Bases Thérapeutiques des Inflammations et des Infections, Bordeaux University

Todo puede ser adulterado,

diluido y falsificado:

- Ingredientes activos

- Concentración de las dosis

- Información en empaque

- Fechas de caducidad

- Números de lote

- Números de registro

- Etiquetas de autenticación

- Documentos de embarque En la muestra falsificada está impresa

En la muestra genuina esta grabada

Fotos: GSK & US FDA

Medicamentos falsificados

Muestra auténtica

Muestra falsificada

Todo puede ser adulterado,

diluido y falsificado:

- Ingredientes activos

- Concentración de las dosis

- Información en empaque

- Fechas de caducidad

- Números de lote

- Números de registro

- Etiquetas de autenticación

- Documentos de embarque

falso genuino

Fotos: FDA Vietnam

Medicamentos falsificados

Medicamentos falsificados

Copia casi perfecta Copia casi perfecta

Inspección Física

Características físicas de las muestras de tabletas/cápsulas

Para determinar las características físicas de las muestras de

tabletas/cápsulas, el inspector debe de seguir los siguientes

pasos:

1. Use guantes quirúrgicos para proteger sus manos y tome una

muestra de las tabletas/cápsulas para inspección visual.

2. Use una espátula, cuchara o contador de tabletas/cápsulas para

obtener una muestra de las tabletas/cápsulas del envase original.

3. Ponga 5-25 tabletas/cápsulas en un trozo de papel blanco.

4. Examine un lado de la tableta/cápsula bajo luz artificial normal.

5. Con una espátula, volteé la tableta/cápsula para examinar el/los

otro(s) lado(s).

6. Registre las observaciones de este examen en el formulario de

resultados.

Uniformidad de la forma: Las tabletas/cápsulas deben de

tener una forma uniforme.

Uniformidad del tamaño: Las tabletas/cápsulas deben de

tener un tamaño uniforme.

Uniformidad del color: Las tabletas/cápsulas deben de

tener un color uniforme.

El color de las tabletas/cápsulas en su contenedor (en

caso de un envase de vidrio/botella): Las tabletas/cápsulas

deben de tener un color uniforme.

Recubrimiento (solo en tabletas; puede ser recubrimiento

de película, recubrimiento de azúcar o recubrimiento

entérico): El recubrimiento debe de tener una textura

uniforme.

Inspección Física

Señales (marcas, letras, etc.): Las señales deben de ser

uniformes e idénticas.

Roturas: Las tabletas/cápsulas no deben de tener roturas.

Grietas: Las tabletas/cápsulas no deben de tener grietas.

Manchas incrustadas en la superficie o contaminación

en la superficie: Las tabletas/cápsulas no deben de tener

manchas incrustadas en la superficie o estar contaminadas.

Contaminación por sustancias extrañas: Las

tabletas/cápsulas no deben de tener contaminación por

sustancias extrañas

Inspección Física

Fisuras: Las tabletas/cápsulas no deben de tener fisuras.

Agujeros: Las tabletas/cápsulas no deben de tener

agujeros.

Presencia de cápsulas vacías en una muestra de

cápsulas: La muestra examinada no debe contener

cápsulas vacías.

Presencia de cápsulas abiertas o rotas: La muestra

examinada no debe contener cápsulas abiertas o rotas.

Presencia de puntos débiles en el cuerpo de la

cápsula: La muestra examinada no debe contener cápsula

que evidencien puntos débiles en el cuerpo de las mismas.

Inspección Física

Separación de la tapa y cuerpo de la cápsula: Las cápsulas

de la muestra deben estar intactas y no tener separaciones.

Cobertura o burbujas en tabletas o cápsulas: Las

tabletas/cápsulas no deben tener coberturas o burbujas.

Recubrimiento (tabletas recubiertas en azúcar o película): Las

tabletas deben de tener un recubrimiento uniforme y la base de

las tabletas debe estar totalmente cubierta.

Pulido: Las tabletas/cápsulas deben de estar pulidas

uniformemente y libres de polvo.

Pegajosidad: Las tabletas/cápsulas no deben ser pegajosas.

Evidencia de incrustaciones o adherencias de sustancias

extrañas: Las tabletas/cápsulas deben de estar libres

incrustaciones o adherencias de sustancias extrañas.

Inspección Física

Desintegración

Esta prueba determina si la cápsulas o

tabletas se desintegran en agua en treinta

minutos.

Desintegración

Para los propósitos de esta prueba, la

desintegración no implica la disolución completa

de la unidad ni de su ingrediente farmacéutico

activo (API, por sus siglas en inglés).

Se define la desintegración como aquel estado en

el cual cualquier residuo de la unidad, excepto

fragmentos de la cubierta insoluble o cuerpo de la

cápsula, es una masa suave que no tiene un

núcleo firme palpable.

Desintegración

Desintegración

Todas las formulaciones de liberación rápida

deben cumplir con el tiempo de

desintegración completa.

Desintegración

Excepciones

Las tabletas cubiertas de azúcar pueden

cumplir las especificaciones de la prueba de

desintegración, pero ésta no es requerida.

Sólo las tabletas y cápsulas de liberación

modificada o con cubierta entérica pueden

desviarse del tiempo de desintegración

completa.

Desintegración

Cromatografía en Capa Fina

La cromatografía en capa fina (TLC, por sus siglas en inglés) es una herramienta analítica útil para:

– Identificación y cuantificación de sustancias – Detección de impurezas y degradación de los

medicamentos – Seguimiento de las reacciones químicas

Cromatografía en capa fina (TLC)

Algunas de las ventajas de la TLC:

– Equipos sencillos y de bajo costo

– Varias muestras se pueden analizar simultáneamente

– Gran flexibilidad en términos de fases estacionarias y

móviles

– No hay problemas de detección en el caso de no-

elución, inestabilidad térmica, etc. (HPLC, GC)

– Fácil de interpretar

Cromatografía en capa fina (TLC)

¿Qué necesitamos para realizar una TLC?

– Muestra del medicamento

– Sustancia de referencia

– Placa cromatográfica (placas de aluminio recubiertas de

gel de sílice)

– Mezcla de solventes = revelador

– Cámara cromatográfica (tanque) con tapa

– Detector (mezcla de productos químicos o lámpara UV)

– Accesorios: microcapilares, pistilo, papel de aluminio,

botellas de vidrio, pipetas, papel de filtro, etc.

Cromatografía en capa fina (TLC)

Paso 1: Preparación del solvente para la

extracción de principios activos farmacéuticos

(API, por sus siglas en inglés)

– Methanol – sulfadoxina y pirimetamina, artesunato,

etambutol, pirazinamida, rifampicina, isoniazida

– Agua – amodiaquina clorhidrato, fosfato de cloroquina

– Acetona – lumefantrina/arteméter

Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento

Paso 2: Preparación de estándares y muestras

Soluciones

– Todos los sólidos se trituran usando un mortero y una

lámina de aluminio

– Los sólidos son, a continuación, disueltos en un

volumen conocido de solvente de extracción

Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento

Paso 3: Preparación de la solución reveladora

– Mezclar los reactivos como se indica en el

procedimiento

– Transferir la solución reveladora a la cámara, añadir

papel de filtro y dejar que se equilibren durante al

menos 15 minutos

– Mantener la cámara cerrada

Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento

¡Advertencia!

Todos los solventes son tóxicos.

No utilice la boca para pipetear

Paso 4: Aplicación de los puntos (depositar una

solución en la placa cromatográfica)

– Utilizar nuevos capilares o enjuagar el capilar utilizado

tres veces con solvente de extracción antes de aplicar

la siguiente muestra en el lugar

– Secar los puntos antes de iniciar el revelado de la placa

cromatográfica

– Los microcapilares aplican 2 µl

– Comprobar la uniformidad de todos los puntos con UV

de 254 nm

Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento

Paso 5: Revelado de la placa cromatográfica

– Colocar la placa en la cámara de revelado,

sumergiendo el borde inferior de la placa, pero no los

puntos de muestreo

– Sustituir la cubierta y permitir que el solvente ascienda

al punto de 3/4 de la longitud de la placa (generalmente

requiere de 10 a 20 minutos)

– Retirar la placa de la cámara y marcar el frente del

solvente

– Secar la placa (ventile o caliente la placa si es

necesario)

Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento

Paso 6: Detección

– El detector puede ser una mezcla de productos químicos o

simplemente luz UV

• Artesunato: exposición al ácido sulfúrico

• Arteméter (lumefantrina/arteméter): exposición al ácido

sulfúrico

– Si el procedimiento indica el uso de detector químico, a

continuación, mezclar los reactivos como se indica mientras

la placa se encuentra en el revelador

– Luz UV 254 nm: todos los puntos sensibles a esta luz se

tornarán visibles

– Marcar los puntos para evaluación adicional utilizando el

lápiz

Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento

¡Advertencia! No mirar directamente a la fuente de luz UV

Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento

Factor de retención (Rf)

El factor de retención se define como la distancia

recorrida por el compuesto dividido por la

distancia recorrida por el solvente

El valor Rf debe estar entre 0,0 (el punto no se

movió de la línea de inicio) y 1,0 (el punto se

movió con el frente de solvente) y es sin unidades

frente del solvente

nueva posición del

compuesto

origen

RF = 2,1/2,8 = 0,75

2,1 cm

2,8 cm

Verificación de la identidad

del medicamento con

respecto a lo impreso en la

etiqueta

principio activo

adulterado

sin principio activo

Ejemplos de

medicamentos

antipalúdicos falsificados

(caso quinina)

Cromatografía en capa fina (TLC) – Ejemplo de Identidad 1

Verificación del

número de activos en

productos combinados

de dosis fija con

respecto a lo impreso

en la etiqueta

Ejemplos de

medicamentos

antirretrovirales

Cromatografía en capa fina (TLC) – Ejemplo de Identidad 2

6,25 5,0 3,75 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,25 0,12 0 0,12 0,25 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,75 5,0 6,25

μg quinolona/punto

Ejemplo de medicamentos antituberculosos

de segunda línea

UV 254 nm

UV 366 nm

A la luz del día después de la tinción

Verificación del contenido de medicamento con

respecto a lo impreso en la etiqueta

Fuente: B. Singh, D.V. Parwate , S.K. Shukla / RTM University, Nagpur (India)

Cromatografía en capa fina (TLC) – Ejemplo de contenido