IntroducciónEn la naturaleza, los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixta1s con otros tipos de microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se llaman por ello cultivos mixtos. Sin embargo, el conocimiento de los microorganismos se consigue mediante el estudio de cepas aisladas, cultivadas en el laboratorio en cultivos purosSin embargo la identificación bacteriana y micotica2 y a su vez la caracterización completa solo es posible tras el aislamiento de dichos microorganismos y la obtención de cultivos puros. Por ello el primer problema al estudiar de dos muestras de agua determinar sus posibles precensias de bacterias y hongos, que en su aislamiento del resto de los microorganismos presentes3 (enn una muestra patológica, de agua, de suelo, de alimentos, etc.). para lograr el aislamiento de microorganismos bacteriasnos de los micoticos se procede a realizar montaje correspondiente a su medio de favorabilidad elección de cultivo selectivo,Una vez que se ha logrado el aislamiento es posible obtener la bacteria de interés en cultivo puro.Aislamiento4Es la separación de un determinado microorganismo del resto de microorganismos que le acompañan. El método más usual es la siembra por estría sobre un medio de cultivo sólido adecuado dispuesto en una placa de petri.

Para ello se toma una pequeña cantidad de muestra con un asa curva y se reparte sobre la superficie del medio de cultivo. Sobre el medio quedan separadas e inmovilizadas las células bacterianas y micoticas. 5Tras la incubación en condiciones adecuadas, cada célula viable origina una colonia visible resultado de sucesivas divisiones celulares. Cada colonia bacteriana y micotica presente tendra unas características determinadas en cuanto a su forma, borde, elevación, tamaño , consistencia, etc6bacterias

Tamaño forma y agrupaciones bacterianas

Entre las principales características de las bacterias se encuentran su tamaño, forma, estructura y tipo de agrupación. Todas estas características van a constituir la morfología propia de las células bacterianasExisten también algunas especies de bacterias que presentan otras características además de las ya mencionadas y que pueden ser detectadas a través de técnicas específicas de tinción, como es la presencia de diferentes elementos facultativos: flagelos, cápsulas, esporas, corpúsculos metacromáticos, etc.; y que igualmente forman parte de la morfología de las bacterias,7La morfología nos da una información primaria sobre el tipo de bacteria, no de forma concluyente pero sícomo paso previo a cualquier proceso de identificación y clasificación taxonómica.TAMAÑOLas bacterias son de pequeño tamaño, por lo que para su observación es necesario el microscopio. Su tamaño

se mide en micras (1 µm = 10-6 m) y oscila entre 0,2 µm de algunos cocos y las 5-8 µm de largo por 1,5 µmde ancho de los bacilos. El tamaño es una característica para cada tipo bacteriano y se puede medir congran exactitud y fiabilidad.8FORMALa forma de una bacteria como organismo individual viene dada por la rigidez de su pared. Es igualmenteuna característica de cada tipo bacteriano. Las bacterias suelen adoptar fundamentalmente alguna de lasformas siguientes: esférica, cilíndrica, helicoidal, filamentosa o formas intermedias de los casos anteriores9AGRUPACION MACROSCOPICAEstas agrupaciones son visualizadas a simple vista y corresponden al crecimiento en un punto de una única línea celular hasta formar una colonia (todas las células que componen la colonia provienen de una única célula).10 El cultivo se realiza en un medio de cultivo sólido para formar colonias que serán distintas y características para cada tipo bacteriano; el medio sólido impide el posible movimiento de los individuos de la colonia y favorece su agrupamientoLas características del medio de cultivo sólido donde se ha desarrollado la bacteria constituyen un criterio de gran importancia a la hora de hacer una valoración taxonómica de la misma.El tipo de bacteria problema: Las bacterias de mayor movilidad presentan mayor tendencia a dar colonias extendidas y planas frente a las que no presentan esta característicaEs importante considerar que un mismo tipo de bacteria puede dar lugar a distintos tipos de colonias dependiendo del medio de cultivo sólido empleado, e igualmente, distintos tipos bacterianos pueden crecer formando colonias similares.11DESCRIPCION DE AGRUPACION DE COLONIAEn placa, sembrándolo por estrías.El tamaño, forma y aspecto de las colonias obtenidas por esta técnica suele ser bastante constante para cadagénero y especie bacteriana, hecho que se puede utilizar como característica diferencial. Para ello debemosconsiderar los siguientes aspectos de las colonias: tamaño, forma, superficie, consistencia, transparencia ycoloración y presencia o no de halos de transparencia.Tamaño de las colonias.Tamaño pequeño: colonias puntiformes con aproximadamente 0,5 mm de diámetro o inferiores.Tamaño mediano: de 1 a 2 mm de diámetro.Tamaño grande: de 4 a 6 mm de diámetro.Tamaño muy grande: colonias extendidas en forma de velo invadiendo toda la superficie del medio de cultivo.12Forma de la colonia. Atiende a la forma, elevación y borde de la colonia. Según la forma se dividen enpuntiforme, circular, rizoide, filamentosa, irregular y fusiforme.

Según la elevación: plana, convexa (semiconvexa), cóncava (semicóncava), umbiculada, acuminada, planoconvexa,papilada, en meseta, semiesférica, umbeliforme, elevada, etcSegún los bordes: entero, lobulado, rizoide, filamentoso, ondulado, aserrado, espiculado, redondeado, etcSuperficie de la colonia. Corresponde al aspecto de la colonia. Pueden ser lisas, rugosas, planas, cuminadas, umbilicadas, mucosas, secas, etc. Es muy importante la diferenciación entre colonias lisas y rugosas, donde las segundas suelen presentar cápsulas u otros componentes superficiales que proporcionan un aspecto más compacto o rugoso, relacionando este tipo de bacterias con una mayor virulencia, la cual sepierde cuando la bacteria sufre un cambio de rugosa a lisa (no obstante existen bastante excepciones en este hecho).Consistencia de la colonia.13Las colonias pueden ser duras, viscosas, mucosas, secas, muy secas, cremosas, etc. En general, al mayor parte de las bacterias forman colonias de consistencia más o menos cremosa, aunque existen muchas excepciones y también, con poca frecuencia, pueden tener consistencia mucosa como la de la mayor parte de las levaduras.Transparencia y coloración.En general es frecuente algún tipo de color en las colonias; esto puede ser debido a la elaboración de algún tipo de pigmento, a la formación de alguna sustancia por parte de la bacteria o por la utilización de algún sustrato del medio que acidifique o alcalinice a éste de forma que, ante la presencia de indicadores de pH que están en el medio, cambia de color, hecho que nos ayuda a conocer la utilización de ese sustrato por parte de la bacteria (tipificación bioquímica). La transparencia puede ser completa, en cuyo caso, se habla de colonias translúcidas, semitransparentes o completamente opacas, dependiendo del tipo bacteriano o del medio de cultivo utilizado.14COLORACIONCuando se requiere conocer los detalles morfológicos de las bacterias es necesario recurrir a técnicas decoloración. Los colorantes empleados pueden ser naturales o sintéticos. Entre los naturales suele utilizarse elcarmín y la hemotalilina pero son más utilizados los sintéticos, en su mayoría derivados de la anilina. Las coloraciones pueden ser directas (contacto de la suspensión bacteriana con el colorante) o indirecto (utilización de mordiente).La técnica de coloración de Gram brinda un carácter taxonómico que permite distinguir empíricamente entre bacterias grampositivas y gramnegativas. La diferente estructura química de la pared celular es la responsable de esta propiedad. Las bacterias grampositivas forman un compuesto estable con el violeta degenciana mordenteado por lugol y resisten la decoloración con la mezcla alcohol-acetona.La preparación del frotis consiste en suspender una porción de material bacteriano en solución salina isotónica.15Los portaobjetos deben estar libres de grasa, pelusa, pegamento, rotulados anteriores, etc. Para ello debenlimpiarse perfectamente con alcohol y dejar secar.es evidente que la Afinidad tintorial depende de la naturaleza y composición química del tipo de pared. En ambos tipos de bacterias se forma inicialmente un complejo con la coloración primaria (complejo violeta de genciana-lugol).16

Este complejo es retenido por las bacterias grampositivas resistiendo la decoloración. Las gramnegativas, sinembargo, son más permeables al alcohol por su alto contenido lipídico y esto permite que el complejo coloreado sea arrastrado.Así las grampositivas conservan el color inicial del complejo y se observan de color violeta, mientras que las gramnegativas se decoloran y aceptan el colorante de contraste observándose de color rosado.17Morfología de los hongos

Existen dos tipos de hongos: las levaduras y los mohos.Las levaduras son hongos unicelulares, que se reproducen por gemación. Las levaduras son generalmente, células mayores que las bacterias, aunque este parámetro puede variar dependiendo de la bacteria y la levadura. Su tamaño es muy variable, este se encuentra entre 1 y 5 micras de ancho y 5 a 30 de largo. 18Los mohos son hongos pluricelulares. Estos crecen formando un filamento llamado hifa, que puede alcanzar varios cm. de largo. Las hifas pueden ser tabicadas o continuas. Las tabicadas se dividen en una cadena de células mediante la formación de paredes transversas o tabiques. Las continuas carecen de dichos tabiques. Las hifas crecen por elongación de la punta ó ápice. Durante el crecimiento las hifas se entrelazan densamente constituyendo el micelio.19 Existe un micelio tabicado y uno continuo. Los tabiques presentan orificios que permiten el libre movimiento de citoplasma y sus núcleos. El organismo completo (micelio) es una estructura cenocítica, esto significa que es una masa citoplasmática continua multinucleada.Hay dos tipos de micelio, de acuerdo a su función:20

Micelio vegetativo: formado por hifas que penetran en el medio de cultivo o difunden en la superficie absorbiendo nutrientes.

Micelio aéreo: formado por hifas que se proyectan por encima de la superficie del medio hacia el aire y que presenta la estructura reproductora del hongo, que son las esporas, es el micelio de reproducción.

Ciertos hongos, entre ellos varios patógenos para el hombre, presentan dimorfismo, es decir que pueden crecer como levaduras o como mohos, de acuerdo a las condiciones ambientales.21

El análisis microscópico es de gran importancia en micología para la observación de las diferentes especies de hongos d. Se deben utilizar tinciones que logren preservar la integridad de las estructuras fúngicas.1Para la correcta identifi cación de hongos de interés clínico, ya sea con fi nes de diagnóstico o estudios taxonómicos, es necesario observar las estructuras fúngicas con una alta calidad y contraste; para ello se utilizan diversos compuestos químicos que permitan la tinción entre la pared y el citoplasma de las células fúngicas.22 La tinción de azul de lactofenol no es considerada una tinción diferencial, sin embargo, posee características tintoriales que permiten observar cada uno de los componentes fúngicos y apreciar fácilmente las estructuras para una adecuada identifi cación. El fenol inactiva las enzimas líticas de la célula e impide que ésta se rompa; de igual forma, destruye la fl ora acompañante e inactiva a la célula, quitándole el grado de patogenicidad; como mordiente cuando se usa en combinación con colorantes. El ácido

láctico preserva las estructuras fúngicas al provocar un cambio de gradiente osmótico con relación al interior fúngico, lo que genera una película protectora. El azul de lactofenol es un colorante ácido, que tiñe el citoplasma y la quitina presente en las células fúngicas, mientras que el glicerol mantiene húmeda la preparación.23

1. P. R. MURRAY. Microbiología Médica. 2006. Mosby (Elsevier Science).2. http://www.md.huji.ac.il/microbiology/book/ 3. http://www.kcom.edu/faculty/chamberlain/Website/Lects/Content1.htm 4. Taxonomía: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/taxonomyhome.html/5. Micología: http://www.doctorfungus.org/index.htm6. Micología: http://www.medmicro.wisc.edu/Resources/ImageLib/Mycology/

index.html7. B. C. MIMS. Microbiología Médica. 2ª Edición. 2002. Mosby (Elsevier Science).8. T.S. WALKER. Microbiología. 2000. McGraw-Hill Interamericana (513 páginas).9. M. GLADWIN y B. TRARRLER. Clinical Microbiology (made ridiculously simple) 2ª

Edición.1999. MedMaster, Inc. P.O. Box 640028. Miami, FL 33164. USA. (270 páginas).10. LUIZ B. TRABULSI e FLÁVIO ALTERTHUM. Microbiologia. 5 ed. Atheneu, 2009 DUNLAP; 11. MADIGAN; MARTINKO. Microbiologia de Brock . 12ª Ed. Editora: Artmed. 2010 PELCZAR, 12. MICHAEL. Microbiologia - Conceptos e Eplicacioneses - Vol. 2 - 2ª Ed. . Editora: Makron Books,

2005.13. Microbiología. 5ª ed. 2004. Prescott, Harley y Klein. Ed. McGraw-Hill. (**). 14. . Brock Biología de los Microorganismos. 10ª ed. 2003 Madigan, Martinko y Parker. Ed. Prentice-

Hall. Madrid.