inseminacion artificial en porcinos

INSEMINACION ARTIFICIAL

CUALIDADES DE UN BUEN EYACULADO

Ausencia de organismos contagiosos

Alta calidad

Adecuada durabilidad o resistencia al

almacenamiento

Buena fertilidad

Alto valor genético

Motilidad progresiva 60-70%

Células espermáticas anormales < 20%

Número total de espermatozoides en el eyaculado 29-48 x

109

Durabilidad (resistencia al almacenaje) < 60% de motilidad

progresiva después de 48 horas de almacenado

VIRUS ENCONTRADOS EN EL

SEMEN PORCINO

PESTE PORCINA AFRICANA

PSEUDORABIA (AUJESZKY)

PESTE PORCINA CLÁSICA

PARVOVIRUS PORCINO

VIRUS DEL PRRS

CYTOMEGALOVIRUS

ADENOVIRUS

ENTEROVIRUS

AFTOSA

ENCEFALITIS JAPONESA

REOVIRUS

ENFERMEDAD VESICULAR PORCINA

VIRUS DEL PAPILOMA GENITAL

BACTERIAS ENCONTRADAS

EN EL SEMEN

COMUNES INFRECUENTES

STAPHYLOCOCCUS spp CORYNEBACTERIUM spp

PSEUDOMONAS spp STREPTOCOCCUS spp

ESCHERICHIA spp PROTEUS spp

KLEBSIELLA spp SERRATIA spp

CITROBACTER spp BACILLUS spp

MICROCOCCUS spp ENTEROBACTER spp

EUBACTERIUM SUIS AEROBACTER spp

BORDETELLA spp

MYCOPLASMA spp

INSEMINACIONARTIFICIAL

VENTAJAS GENETICAS:

- Mayor difusión genética de los sementales de

calidad en un periodo de tiempo corto

- Lotes homogéneos, más uniformidad en los

cerdos para sacrificio y la producción de canales

con mejores características.

- Aumento en el número de concepciones por

macho. La proporción de verracos/cerdas

reproductoras es de 1/75-100 comparado con la

monta natural 1/17-20.

VENTAJAS GENETICAS

Un reproductor logra producir más

lechones/año y más kilos de carne cerdo

al año.

Facilita la práctica de cruzamientos

interraciales para la producción de

híbridos comerciales.

Aumenta la cantidad de hembras servidas

por un reproductor y es más rápida la

transmisión de características deseadas

VENTAJAS SANITARIAS

Reduce el riesgo de transmitir

enfermedades a través del semen,

siempre y cuando este provenga de

granjas con un buen estado sanitario.

Ayuda a detener los traumatismos y la

propagación de enfermedades de tipo

reproductivo.

Nos permite establecer programas de

bioseguridad en el manejo del semen.

VENTAJAS ECONOMICASMenor costo por mantenimiento del

reproductor.

Se puede tener más control de la calidad

del semen que se está trabajando.

Menor número de machos y mayor

aprovechamiento de los mismos.

Manejo de machos de diferente peso.

Esto nos permite el manejo de las cerdas

sin importar el peso y la edad.

Ayuda a controlar la sobreutilización del

macho.

DESVENTAJAS DE LAINSEMINACION ARTIFICIAL

- Posibilidades de errores humanos

- Exposición del semen a factores

ambientales, sin la debida protección.

- Requiere de una adecuada detección del

celo, para establecer el momento óptimo

de la inseminación.

- Elevados costos para el montaje de

laboratorio en explotaciones pequeñas

ENTRENAMIENTO MACHOS

PERSONAL CAPACITADO

INTALACIONES ADECUADAS

RECONOCIMIENTO DE LAS INSTALACIONES POR EL MACHO

EDAD Y DESARROLLO ADECUADOS

PRIMEROS INGRESOS DE EXPLORACION

EVITAR LOS RUIDOS FUERTES

NO PEGARLE AL MACHO

MUCHA PACIENCIA

SITIO ATEMPERADO MANIQUI CON OLOR

MANEJO REPRODUCTIVO DE MACHOS

Manejo individualPubertadEdadNutriciónEntrenamientoLuminosidadEspacios (corrales)Evaluación del

comportamiento sexual

ENTRENAMIENTO DE MACHOS

Reason Number of boars

Breeding strategy

Genetic value

Hereditary defect

Leg problems

36 (12%)

18

1

17

Sperm production

Quality

Quantity

Libido/ejaculation

189 (61%)

145

27

17

Other

Leg problems

Illness

Death

Aggressiveness

Other

84 (27%)

20

13

20

6

25

REASONS FOR REPLACING BOARS AT AN AI STATION

PROCESO DE RECOLECCION

PREPARACION DEL MATERIAL DE RECOLECCION (TERMOS, FILTROS, VASOS)

PREPARACION DEL MACHO (EVACUACION PREPUCIAL, RETIRO DE RESIDUOS, CONDUCCION A LA SALA)

ASEPSIA DEL OPERARIO DE RECOLECION

SECADO DEL PREPUCIO

MONTA DEL MACHO AL MANIQUI

ERECCION Y RECOLECCION

SEPARACION DE LAS FRACCIONES

OBSERVACION DEL SEMEN (OLOR, COLOR, IMPUREZAS)

TRANSPORTE AL LABORATORIO

PROCESO DE RECOLECCIÓN

FRACCIÓN CANTIDAD (%) ORIGEN

Pre-espermática 25 ml (20%) Próstata

espermática 40 - 1000 ml (30 -50%)

Epidídimo

Post-espermática

70 - 400 ml (50 -60%)

Epidídimo y vesículas seminales

Tapioca 20 -40 ml (8%) Glándulas bulbouretrales

COMPOSICIÓN DEL EYACULADO DEL

VERRACO

FRACCIONES SEMINALES

1.Secreción

Uretral

2.Fracción rica

3.Fracción

pobre

4.Fase

gelatinosa

PROCESO DE RECOLECCIÒN

Técnica de mano enguantada

PROCESAMIENTO DEL SEMEN Evaluación macro (olor, color, impurezas, otros)

CLASIFICACIÓN MICROSCOPICA(motilidad, tipo de movimiento,

anormalidades)

Motilidad

Morfología

EVALUACION MICROSCOPICA

1. MOTILIDAD

Atemperar todo el equipo (cubre y

portaobjetos, platina microscopio)

Colocar gota de evaluación pequeña

Poner en objetivo de 40 ò 100x

Porcentaje de espermatozoides en

movimiento

Registrar en hoja de vida macho

CALIFICACIÓN

MOTILIDADCARACTERÍSTICAS

0 A 20% Muy pocos espermatozoides presentan movimiento progresivo, gran cantidad sin movimiento.

20 A 40% Una pequeña proporción de espermatozoides tiene movimiento progresivo, el movimiento es oscilatorio.

40 A 60% Una buena proporción tiene movimiento pero de tipo circular o fijo.

60 A 80% La mayoría de los espermatozoides tienen movimiento progresivo y vigoroso, pero un poco lento a través del campo.

80 A 100% La mayoría de los espermatozoides muestran movimiento progresivo y vigoroso.

2. TIPO DE MOVIMIENTO

TIPO 0 Espermatozoides sin movimiento.

TIPO 1 Espermatozoides sin movimiento progresivo

girando sobre sí mismos.

TIPO 2 Espermatozoides con movimientos anormales y algunos progresivos.

TIPO 3 Espermatozoides con movimientos progresivos lentos y en zigzag.

TIPO 4 Espermatozoides con movimientos progresivo rápidos.

TIPO 5 Espermatozoides con movimientos progresivo muy rápidos.

Motilitya

(%)In vitro sperm

penetration rateb

(%)

Farrowing ratec (%)

Number born alive

94.7 89.5v (58) 86.9v (460) 10.6v

82.3 81.7v,w (55) 87.1v (330) 10.5v

76.1 84.3v,w (50) 84.5v (300) 10.5v

66.2 74.7w (44) 86.1v (264) 10.1v

52.4 55.5x (40) 72.4w (201) 9.2w

44.2 34.7y (28) 72.3w (168) 9.2w

32.6 21.3z (17) 51.7x (85) 7.8x

SEMD 4.8 5.8 0.3

Relationships among motility, sperm penetration rates, farrowing rates and number of pigs born alive for boar semen

a Motility is expressed as the average number of motility spermatozoa within the following classes:>90; 80-89; 70-79; 60-69; 50-59; 40-49; and 30-39.b In vitro sperm penetration rate is defined as the percentage of eggs that that were fertilized. Numbers in parentheses represent the number of ejaculates within a motility category.c Numbers in parentheses represent the number of sows inseminated with semen within a motility category.d Standard error of the mean.v, w, x, y, z Means within the same column with different superscripts are significantly different (P < 0.05).

3.PRESENCIA DE CUERPOS EXTRAÑOS(AGLUTINACIONES)

POCA Menos de 2 aglutinaciones por campo.

+

MEDIA Entre 3 y 5 aglutinaciones por campo.

++

ABUNDANTE Más de 5 aglutinaciones por campo.

+++

Aglutinación. Acúmulo de células que se valora

junto con la motilidad (0 a 3 cruces).

+ ++ +++

Aglutinación

4. CONTEO DE ESPERMATOZOIDES

Se ubica la cámara de conteo (burker)

Se pone el cubreobjetos

Se adiciona una gota pequeña que

ingresa por capilaridad (previamente

diluido en suero formolado)

Se cuentan los espermatozoides en el

interior de 40 cuadros

Se hace el calculo de dosis así:

CONCENTRACIÓN

ESPECTROFOTOMETRÍA

COLORIMETRÍA

CITOMETRÍA DE FLUJO

CONCENTRACIÓN

CÁMARA DE BÜRKER

(WOELDERS, 1990; HAFEZ, 2000; NOAKES et al., 2001)

A X V

Nº DE DOSIS = ------------

300

DONDE :

A = # De espermatozoides en 40 cuadros

V = volumen de fracción rica.

con una concentración de 3000 Millones de espermatozoides por Dosis de 100 CC.

CALCULO DE DOSIS SEMINALES

VOLUMEN= 250 ml.

CONTEO = 28 Espermat. En 40 cuadros

N = 250 * 28 = 23.33 dosis

300

5. ANORMALIDADES ESPERMATICAS

Gota citoplasmática proximal (máx.. 50%)

Gota citoplasmática distal (máx.. 80%)

Colas en látigo (máx.. 25%)

Cabeza sin cola

Doble cabeza

Colas enrolladas

Perdidas del acrosomas

Aglutinaciones

Anormalidades menores al 20% del total de los espermatozoides contados en 40 cuadros

NormalCola en

látigo

Gota

citoplasmática

proximal

Gota

citoplasmática

distal

Morfología del espermatozoide. Durante el conteo en

cámara de Bürker, por tinción y fijación de la muestra.

Las más comunes son colas en látigo, gotas

citoplasmáticas proximales y distales.

Gota Citoplásmatica

Anormalidades

normal dañado perdiendo perdido

Integridad del acrosoma. El acrosoma es fundamental en la

fecundación, ya que contiene las enzimas necesarias par la

penetración en el óvulo. El análisis queda supeditado a

laboratorios especializados que dispongan de microscopio de

contraste de fases y personal cualificado que realice e

interprete este tipo de análisis. Los diferentes estados del

acrosoma son: normal, dañado, perdiendo y perdido.

¿Son válidos estos espermatozoides…?

Espermatozoides porcinos teñidos mediante combinación de SYBR/PI(Garner)

Spz con membrana funcional (vivos) aparecen verdes, teñidos con SYBR-14

Spz con la membrana dañada (muertos) se muestran rojos.

Spz con marcajes intermedios se consideran moribundos.

Acrosomas teñidos con PSA-FITC con permeabilización de membrana


Espermatozoides viables con el acrosoma y la vaina

mitocondrial intactas. Los núcleos de espermatozoides

viables emiten una intensa fluorescencia azul (A)

Los acrosomas intactos y las vainas mitocondriales

intactas emiten fluorescencia verde débil y moderada

respectivamente (B). 40x.

Bisbenzimida/PI/SBTI Alexa Fluor/ Mitotracker Green


Espermatozoide viable con el acrosoma intacto

(A) y la vaina mitocondrial intacta (MS). 40x.

MS

A

MS

A

Bisbenzimida/PI/SBTI Alexa Fluor/ Mitotracker Green

Espermatozoide viable con el acrosoma reaccionado

(A) y la vaina mitocondrial intacta (MS). 40x.


ENVASADO

ALMACENAMIENTO

Después de haber sido evaluado

Envasar el semen ya diluido y evaluado en las botellas, cuidando de no dejar aire en su interior

Rotular las botellas a almacenar (fecha, macho, hora)

Dejar bajo una toalla las botellas acostadas durante 2 horas.

Almacenar en la nevera entre 15 y 16 º c

No sacar antes de 24 horas en lo posible

Voltear cada 12 horas.

ALMACENAMIENTO

CALENTAMIENTO DE DOSISSacar las dosis y cubrir con una toalla, dejar reposar 15 minutos

Introducir al baño Maria (37º c) durante otros 15 minutos

Transportar en nevera a una temperatura de 37º c

Transportar pocas dosis a la vez evitando cambios bruscos de temperatura

Proteger siempre de la luz

TECNICA DE INSEMINACIÓN

CATETER DE MELLROSE

OTROS CATETERES

DESECHABLES

TECNICA DE INSEMINACION

PASO1

TECNICA DE INSEMINACIÓN

PASO 2


PASO 3


PASO 4

USO DE ARNESES PARA INSEMINAR

TÉCNICA

CONVENCIONAL

Actualmente la

inseminación es

intracervical con

aplicación de 70 –

100 ml con 2.5 – 4 x

109

espermatozoides

Recientemente se redujo la

dosis a 10 millones de

espermatozoides en cada

cuerno, aplicados

quirúrgicamente en la unión

útero tubárica (Krueger y

Rath, 2000)

TÉCNICA POST-CERVICAL

50 ML CON 1.5X109

ESPERMATOZOIDES 30 ML CON

1X109

ESPERMATOZOIDES

CÁNULA POST-CERVICAL SOFT

QUICK® (IMPORVET ,ESPAÑA)

DIÁMETRO EXTERNO DE 3.5 MM Y

LONGITUD DE 72 CM, CON DOS

ORIFICIOS EN SU CABEZA QUE

PERMITEN LA SALIDA DEL SEMEN

POR LA CÁNULA.

I IUP 1

Mediante cateterización

transcervical con cateter

flexible es posible inseminar

con una dosis de 5 ml y una

concentración de 50

millones de esp. (Martinez

et al, 2001)

I IUP 2

I IUP 3

I IUP 4

I IUP 5

I IUP 6

I IUP 7

I IUP 8

I IUP 9

0,86 0,80

0,00

0,10

0,20

0,30

0,40

0,50

0,60

0,70

0,80

0,90

1,00

IAC IIUP

TASA DE PARICION

Nombre

granja

Número

inseminac.

Número

partos

Tasa

partos

IAC IIUP IAC IIUP IAC IIUP

La Fabiola 76 9 65 7 0.86 0.78

Montelindo 6 3 5 3 0.83 1.00

Pontevedra 125 11 113 11 0.90 1.00

Asturias 125 14 107 9 0.86 0.64

El Trébol 104 13 88 9 0.85 0.69

TOTAL 436 50 378 39 0.86 0.80

Nombre

granja

Número

inseminac.

Número

partos

Tamaño

camada


La Fabiola 76 9 65 7 11.22 11.22

Montelindo 6 3 5 3 11.40 8.00

Pontevedra 125 11 113 11 11.82 12.73

Asturias 125 14 107 9 10.98 9.42

El Trébol 104 13 88 9 10.51 8.00

TOTAL 436 50 378 39 11.19 9.24

11,19

9,24

0123456789

101112

IAC IIUP

TAMAÑO DE CAMADA

Nombre

granja

Número

inseminac.

Número

partos

Nacidos

vivos


La Fabiola 76 9 65 7 10.33 7.80

Montelindo 6 3 5 3 10.80 7.73

Pontevedra 125 11 113 11 10.82 11.73

Asturias 125 14 107 9 10.22 9.04

El Trébol 104 13 88 9 10.17 7.50

TOTAL 436 50 378 39 10.47 8.70

10,47

8,70

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

IAC IIUP

NACIDOS VIVOS

Nombre

granja

Número

inseminac.

Número

partos

Nacidos

muertos


La Fabiola 76 9 65 7 0.45 0.12

Montelindo 6 3 5 3 0.40 0.67

Pontevedra 125 11 113 11 0.53 0.55

Asturias 125 14 107 9 0.48 0.21

El Trébol 104 13 88 9 0.25 0.26

TOTAL 436 50 378 39 0.42 0.35

0,42

0,35

0,00

0,05

0,10

0,15

0,20

0,25

0,30

0,35

0,40

0,45

IAC IIUP

NACIDOS MUERTOS

Nombre

granja

Número

inseminac.

Número

partos

Nacidos

momias


La Fabiola 76 9 65 7 0.44 0.06

Montelindo 6 3 5 3 0.20 0.00

Pontevedra 125 11 113 11 0.47 0.45

Asturias 125 14 107 9 0.28 0.17

El Trébol 104 13 88 9 0.08 0.24

TOTAL 436 50 378 39 0.30 0.19

0,30

0,19

0,00

0,05

0,10

0,15

0,20

0,25

0,30

0,35

IAC IIUP

NACIDOS MOMIAS

Nombre

granja

Número

inseminac.

Número

partos

Peso

nacimiento


La Fabiola 76 9 65 7 1.42 1.57

Montelindo 6 3 5 3 1.19 1.48

Pontevedra 125 11 113 11 1.57 1.51

Asturias 125 14 107 9 1.57 1.75

El Trébol 104 13 88 9 1.59 1.73

TOTAL 436 50 378 39 1.47 1.61

1,471,61

0,00

0,20

0,40

0,60

0,80

1,00

1,20

1,40

1,60

IAC IIUP

PESO AL NACIMIENTO

ASENTAMIENTO EN REGISTROS

METAS DE AREA DE SERVICIOS

Entrega de machos y hembras con capacidad de reproducción

Hembras de buen estado sanitario

Machos con buena producción de semen (monta ) y excelente estado sanitario y corporal

Reproductores de buen potencial genético para transmisión a su descendencia

Principales causas de mortalidad embrionaria:

Altas temperaturas ambientales

Mezcla de las cerdas después de la monta

Lesiones en el aparato locomotor/ otras lesiones

Marranas en jaula después de la monta

Problemas nutricionales

Dia 0 4 - 6 6 - 8 8 - 14 14 - 18

Mortalidad Embrionaria

EL PERIODO DE LA GESTACIÓN

CERDA CICLANDO

EL MECANISMO SE ESTABLECE A LOS

12-14 DÍAS DEL CICLO

SE INICIA LA LISIS PROPIAMENTE A

LOS 14-16 DÍAS DEL CICLO

LUTEOLISIS

Ludwig et al. (1998)

CERDA RECIEN PREÑADA

SE BLOQUEA 10-12 DÍAS DE INICIADA

LA GESTACIÓN

El desarrollo de un ambiente uterino que soporte el crecimiento del conceptus es crítico para el establecimiento de la preñez, y requiere primordialmente que la dominancia de la progesterona sobre el útero no sea interrumpida por los mecanismos luteolíticos que normalmente ocurren durante el ciclo estral, o sea, que el cuerpo lúteo permanezca funcional; este fenómeno se conoce con el nombre de reconocimiento materno de la preñez (Cross y Roberts,

1989)

RECONOCIMIENTO

MATERNO DE LA PREÑEZ

Bajo Retorno al Celo

Baja Mort. Embrionaria

Alta Fertilidad

Buena CondiciónCorporal

Buen Peso de los Lechones al Nacimiento

METAS EN LA GESTACIÓN

MORTALIDAD PRENATAL35 – 40% en el cerdo

20 a 30% durante los primeros 30 d de gestación

10 a 20% entre 40 y 100 d de gestación

Muchas pérdidas embrionarias (75%) ocurren

durante la peri-implantación, entre d 12 y

18 de gestación

(Webel and Dziuk, 1974; Pope, 1994; Anderson, 1993; Ford, 1997;)

Mucha Energia

Menos Progesterona

Menos Proteinas UterinasMayor mortalidad embrionaria

Cantidad de Mortalidad Progesterona

ración, kg/dia embrionaria,% en el Plasma,ng/ml

1,50 17,2 16,7

2,25 21,4 13,8

3,00 28,1 11,8

(Dyck et al, 1980)

Primeros 7 dias de Gestación

6

10

14

18

22

Ovu

lación

13 dias

25 dias

114 dias

Nacido

s Totales

Nacido

s Vivo

s

PÉRDIDAS EMBRIONARIAS Y FETALES

DE LA OVULACIÓN HASTA EL PARTO

2018

1412,5 12 11,3

El blastocisto de 5 a 6 mm (d 11 de gestación) empieza a producir 17-estradiol (E2) trofoblástico (Wilson and Ford, 1997).

La producción E2 tiene un pico entre d 12 y d 15 de gestación (Geisert et al., 1994b; Pusateri et al., 1990)

Como respuesta al E2 se producen cambios en el útero (endocrinos, inmunológicos y vasculares),

determinantes para la viabilidad del conceptus (Engelhardt et al., 1997; Frank et al., 1977; Keys and King,

1995; Pope et al., 1982)

La implantación comienza el día 12, si el embrión muere antes la cerda repetirá el celo cíclicamente (18-23 días). El periodo embrionario

termina cuando se inicia la osificación (día 35).

Pasa de un cigote a animal maduro, a través

de procesos de hiperplasia e hipertrofia

celular, acompañados de diferenciación

celular, bajo la influencia de factores genéticos

y ambientales, regulados por procesos

enzimáticos y hormonales.

Cerdo 21 días de Gestación

CAPACIDAD UTERINA

Maximo número de fetos que la cerda puede soportar en su útero en una etapa específica de la gestación

(Christenson et al., 1987)

Pérdidas debidas a insuficiente capacidad uterina ocurren principalmente entre los 30 días de gestación y el parto, con un

pico entre 50 y 70 días

(Fenton et al., 1970; Webel and Dziuk, 1974; Knight et al., 1977)

PLACENTA FUNCIONAL

Finalización de la unión del trofoblasto al endometrio (d 19)

Final de la formación del saco corioalantoideo (d 26)

La mortalidad embrionaria y las características del embrión

porcino durante este período podrían estar relacionados con

cambios morfológicos y bioquímicos en el endometrio, de manera similar a como han sido

asociados durante la peri-implantación

GRACIAS POR SU ATENCIÓN

inseminacion artificial en porcinos

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