guia enfermedades entericas practica 9

5/17/2018 Guia Enfermedades Entericas Practica 9 - slidepdf.com

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“ENFERMEDADES ENTÉRICAS”

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

CATEDRA DE MICROBIOLOGÍA

“ENFERMEDADES

ENTERICAS”

SALMONELLA, SHIGELLA,

ESCHERICHIACOLI.

REALIZADO POR:

M.CAROLINAOCAÑA.T




1. OBJETIVO

Reconocer la morfología de las principales enterobacterias causantes de enfermedadgastrointestinal.

Conocer los procedimientos de diagnóstico microbiológico para Salmonella typhi, Shigella yEscherichia Coli.

Establecer el valor diagnostico de la prueba de Widal.

2. INTRODUCCIÓN:

Los miembros de la familia Enterobacteriaceae son bacilos gram negativos anaerobios facultativos,fermentan la glucosa, reducen los nitratos a nitritos.Son llamadas enterobacterias porque con frecuencia residen en el aparato digestivo de animales yhumanos, pero algunas especies también habitan en la tierra y en le agua. Incluyen los géneros , Shigella, Salmonella, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Yerstnia, Providencia, entre otros.

La mayoría forman parte de la flora normal, o son bacterias ambientales, a excepción de los géneros: Shigella, Salmonella, Yerstnia.

Quienes son causantes de infecciones gastrointestinales,; es por eso que si se encuentra en heces, esporque esta causando daño. (1)

Algunos microorganismos entéricos, como E. coli, forma parte de la flora normal y pueden producirenfermedad cuando se establecen infecciones en un sitio del cuerpo que por lo general es estéril;aunque también es frecuente como agente etiológico nosocomial.

3. MORFOLOGIA, PATOGENIA Y DIAGNOSTICO PARA CADA BACTERIA:

“SALMONELLA”

Son bacterias gramnegativas de la familiaEnterobacteriaceae, fermentadoras de la glucosa, pero casinunca fermentadoras de lactosa o sacarosa, flagelados,móviles, anaerobios facultativos, y productoras de H2S.

Con frecuencia, las salmonellas son patógenas para humanoso animales cuando se adquieren por vía oral. Se transmiten alos humanos a partir de animales y productos de estos, ycausan enteritis, infección sistémica y fiebre entérica.

Cuatro serotipos de salmonella que causan fiebre entérica sepueden identificar en el laboratorio mediante pruebas bioquímicas y serológicas, y son de importanciaclínica: S. paratyphi A, S. paratyphi B, S. choleraesuis y S. typhi.

Una de las principales clasificaciones para este tipo de bacteria se basa en la estructura de susantígenos O, H, Vi.




La dosis infectante promedio capaz de producir infección clínica en humanos es de 10 5 a 108

salmonellas (pero quizá hasta 103 microorganismos de Salmonella typhi ).(2)

COMPOSICIÓN ANTIGENICA DE SALMONELLA:

a) Antígeno somático O: Del alemán ohne hauch, “sin movimiento”, está conformado por una

cadena repetida de polisacáridos, que forma parte del lipopolisacárido (LPS), que se genera y sobresalede la membrana externa y que actúa como una barrera de protección agentes externos.

b) Antígeno flagelar H: Del alemán hauch, “por el halo producido en un medio de cultivo a raíz

del movimiento”

c) Antígeno capsular Vi: Antígeno de virulencia.

Las salmonellas producen tres tipos principales de enfermedad en los humanos, fiebres entéricas,bacteremia con lesiones focales, enterocolitits. (2)

PATOGENIA:

Representación esquemática de la fisiopatología de las toxiinfecciones alimentarias colectivas. A. Proceso tóxico; B. Proceso invasivo; C. Caso particular de las salmonelas. (4).

La fuente inicial de la bacteria se encuentra en el tracto intestinal de las aves y de otros animales. Losseres humanos adquieren la bacteria a partir de alimentos contaminados, como por ejemplo de la carnede vaca, de aves de corral, de los huevos, y sus derivados y del agua.

Una vez las bacterias entran en el cuerpo, el periodo de incubación tan solo es de 8 a 48 horas.laenfermedad se produce como consecuencia de una autentica infección alimentaria, ya que las bacteriasse multiplican e ivanden la mucosa intestinal (ileon), donde producen una enterotoxina y una citotoxinaque destruyen las células epiteliales. Para llegar hasta ahí tiene que vencer el obstáculo gástrico –donde




el pH ácido destruye buen número de bacilos– y después resistir el efecto bactericida de la flora normaldel intestino delgado. Después de atravesar la mucosa intestinal sin ocasionar apenas lesión epitelial nimanifestaciones clínicas (a lo sumo, algunas deposiciones diarreicas como pródromos de la tifoidea),los microorganismos alcanzan los folículos linfáticos, donde se multiplican. Desde allí llegan a lacorriente sanguínea y originan una bacteriemia precoz asintomática.

Luego las salmonellas son fagocitadas por las células del sistema mononuclear fagocítico. Sin embargo,las salmonellas no son destruidas, sino que se multiplican en el seno de estas células y vuelven a pasar ala sangre en ondas sucesivas, ocasionando una segunda fase bacteriémica prolongada, esta vezsintomática, que disemina los gérmenes por todo el organismo. Los síntomas mas llamativos son dolorabdominal, calambres, diarrea, nauseas, vómitos, y fiebre.

Durante la fase aguda de la enfermedad pueden encontrarse hasta 1000 millones de salmonelas porgramo de heces.

El tratamiento consiste en la restitución de líquidos y electrolitos. La prevención depende de unasbuenas practicas de manipulación de lo alimentos y de su correcta refrigeración. (2)(3).

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO:

a)

Cultivosb) Pruebas bioquímicas y serológicas: ensayo de aglutinación de Widal; ELISA

a) CULTIVOS

Los cultivos son ampliamente considerados por su especificidad del 100%. Se puede realizar cultivospara obtener el crecimiento de Salmonellas en: sangre, secreciones intestinales (vómitos o aspiradoduodenal) y heces, con resultados positivos en aproximadamente 85-90%. Sin embargo el coprocultivoposee una sensibilidad inferior al 50% y el urocultivo es mucho menos sensible.1. Hemocultivo.- Positivo durante la primera semana de enfermedad en el 80% de los casos.2. Mielocultivo.- Le atribuyen mayor porcentaje de positividad que al anterior.3. Urocultivo.- Positivos en la siguiente semana

4. Coprocultivo.- Empieza a ser positivo al final de la primera semana con mayor frecuencia ensegunda y tercera.

Medios de cultivo diferencial :

MacConkey detecta,(fermentadores y no

fermentdores de lactosa).

Agar sulfito de bismuto, colonias negras rodeadas de un hagrande de color marrón o negruzco, a verde con brillo metálicSe lo usa previo enriquecimiento en CALDO DE TETRATIONAT




Medios selectivos o específicos:

Ensayo de aglutinación de Widala) Fundamento

La reacción de Widal es un prueba basado en el principio de aglutinación antígeno-anticuerpo, donde sedetermina la presencia de anticuerpos contra el antígeno O y H de la Salmonella typhi para elserodiagnóstico de fiebre tifoidea, sin embargo debido a su falta de especificidad, debe ser interpretadoen el contexto clínico del paciente.

La importancia de la aglutinación de Widal radica en ser un método serológico, rápido, barato, yampliamente conocido para el diagnóstico de la fiebre tifoidea; sin embargo, tiene grandes limitacionespor reacciones antigénicas cruzadas con otras bacterias, parásitos, virus y hongos.

b) Materiales:

CentrífugaMezcladorJeringuillas de 5 ml.Tubo tapa roja de 10 ml de capacidadTubo pequeño de 5 ml de capacidadLáminas de vidrio con celdillas de 18 mm de diámetro

c) Procedimiento :

Extraer sangre total (sin anticoagulante) centrifugar y separar el suero Rotular a un lado de las celdillas los antígenos a utilizarse Utilizando una pipeta, se dispensa una gota de suero del paciente (0,05 ml) en cada

anillo/celdilla de la lámina

Medio "SS" (Salmonella - Shiguella), contienelactosa, por lo tanto las Colonias son grises,húmedas, translúcidas, con punto negro centralpor la producción de H2 S, se diferencia de laShiguella que no tiene punto negro.

Medio Hektoen: contiene sales biliares y colorantes: bromitol y fucsina, retrasa de manera selectiva el crecimila mayoría de enterobacterias no patógenas encontradaintestino y permite el desarrollo de salmonella y shiguecolonias de salmonella son verdes con punto negro centraproducción de H2S

Pipetas automáticas graduablesPuntas amarillasTorundasTorniqueteSeparadores de suero

TimerReactivos con antígenos para la prueba deWidalPalillos




Mezclar y homogenizar los reactivo y agregar una gota de un reactivopor separado junto al suero

Mezclar las dos gotas y extenderlas en toda la superficie del círculo,usando un palillo individual para cada reactivo

Hacer rotar la lámina en forma de 8 horizontal o ponerla sobre el rotordurante 2 minu tos.

d) Resultados:

Proceso Semicuantitativo: Diluciones seriadas del suero con buffer o solución salina

Interpretación: Más de 1/80 = Positivo

81,10 1/160 Enfermedad Activa

H 1/160 Enfermedad Activa

0+H 1/160 Enfermedad Activa

H 1/160 Vacunación reciente o recuerdo anamnésico deinfección pasada

0 1/80 Por más de tres meses: Portador sano

Ay B Mayor a 1/80 Paratifoidea poco intensa

Menor a 1/80 Niños 3 meses a 1 año. Fiebre paratífica

Vi o K 1.5 - 1.20 Fiebre tifoidea. Epidemiología. Investigación deorigen de un brote epidémico

FALSOS NEGATIVOS. Antibioticoterapia temprana.Utilización de corticosteroidesMedición temprana de anticuerpos (primera semana)Inmunodeficiencias adquiridas y congénitas.Portadores crónicos de Salmonella typhi. (7)

FALSOS POSITIVOS.

a) En procesos infecciosos

Salmoneolosis no Typhi

Infecciones por Enterobacterias.NeumoníasTuberculosis pulmonar y miliarBrucelosisEndocarditis bacteriana

b) En procesos no infecciososEnfermedades Autoinmunes ( Artritis Reumatoide, Lupus Eritematoso Sistemico) , Hepatopatíascrónicas

SUERO DILUCIONES

0.8 ml. 1/20

0.4 ml. 1/40

0.2 ml. 1/80

0.1 ml. 1/160

0.05 ml. 1/320

RickettsiosisInfecciones por Staphylococcus aureus

TetanosMalaria

AmeabiasisDengueInfección por VIHHepatitis viral aguda y crónicaCryptocococcis.




c) Conclusiones:

La reacción de Widal NO es el gold standard para el diagnóstico de fiebre tifoidea.

La reacción de Widal sobrediagnostica fiebre tifoidea teniendo en cuenta sus numerosasreacciones cruzadas.

Para la interpretación de la reacción de Widal se debe conocer la prevalencia de la fiebretifoidea en una determinada área

Confirmación de la Cura: Luego de tres coprocultivos negativos seriados. Uno por semana.

“SHIGELLA”

Perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, son bacilosgramnegativos delgados fermetan la glucosa. Con excepciónde la Shigella sonnei, ninguna fermenta latosa, forrman acido apartir de carbohidratos, pero pocas veces producen gas.

Shigella solo se encuentra en los seres humanos. S. sonnei es elppatogeno habitual en los Estados Unidos y Gran Bretaña,pero S.flexneri también es bastante común. (3)

El género Shigella se divide en cuatro especies: S. dysenteriae,S. flexneri, S. boydii, S. sonnei.

Composición antigénica: Contiene antígeno “O” somático y

“K” de tipo capsular, lo cual sirve para su clasificación

serológica. No contiene “H” por no poseer flagelos, es

inmóvil.(2)

PATOGENIA:

Este microrganismo se transmite por la via oral fecal-oral, principalmente desde los alimentos, los

dedos, las heces y las moscas y su prevlencia es mayor en los niños, especialmente de edadescomprometidas entre 1 y 4 años. La dosis infectiva es de aproximadamente 10 a 100 bacterias.

Las shigellas se multiplican en el interior de las células vellosas epiteliales del colon. Las bacteriasinducen su fagocitosis por las célulasde la placa de Peyer. Una vezfagocitadas, las bacteriasdesorganizan la membrana delfagosoma y se liberan en elcitoplasma, donde se reproducen. Acontinuacion, invaden las célulasadyacentes de la mucosa.(3)

Shigella inicia una reaccióninflamatoria en la mucosa lasbacterias no suelen diseminarse masalla del epitelio del colon, las hecesacuosas a menudo contienen sangre,mucus, y pus. En los casos mas

graves, el colon puede ulcerarse.(5)




Las shigellas virulentas producen una exotoxina AB termolábil (Sxt) conocida como toxina shiga(antiguamente conocida como verotoxina).

Las shigellas patógenas también utilizan un sistema de secreción tipo III para liberar factores devirulencia en las células epiteliales diana. Los factores de virulencia típicamente alteran las funcionesnormales de las células del huésped de manera que estas beneficien a las bacterias invasoras, como lacapacidad para adquirir hierro, adherirse a las células del huésped, o invadirlas.

Su periodo de incubación suele oscilar entre 1 a 3 dias.

En el tratamiento de la enfermedad suele bastar la reposición de líquidos y de electrolitos y no esnecesario administrar antibióticos en los casos leves, aunque estos pueden acortar los síntomas y latransmisión a los miembros de la familia.(3)

La prevención se basa en una buena higiene personal y en mantener limpio el suministro de agua.

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO:

El diagnóstico etiológico se basa en el aislamiento del microorganismo por coprocultivo. Las muestras de hecesdeben ser recientes y procesarse en medios diferenciales.

MEDIOS DE CULTIVO

Agar Salmonella-Shigella (s-s) Agar Xilosa-lisina-desoxicolato (xld), colonias incoloras Agar Mac-conkey: crecimiento característico Agar Hektoen: colonias verdes

IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA

Esta identificación se suele realizar en 2 subfases: Identificación bioquímicainicial con unas pruebas determinadas: Generalmente, fermentación de

glucosa y lactosa (TSI), descarboxilación de la lisina (LIA) y utilización de laurea.

Agar triple-azucar-hierro Agar lisina-hierro

Caldo urea.

FACTORES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO

Temperatura: óptima 37°C, rango 10-45°C. Generalmente sensible al calentamiento y resistente al congelado. pH: óptimo 6.5-7.5, mínimo 4.0-9.0 Humedad: mínima aw 0.95




“ESCHERICHIA COLI”

Millones de personas viajan anualmente de un país a otro.Desgraciadamente, un elevado porcentaje de estos viajerosadquieren una enfermedad de rápida aparición y que causadeshidratación denominada diarrea del viajero. Esta diarrea es elresultado del encuentro con determinados virus, bacterias, oprotozoos que generalmente están ausentes en el entorno normaldel viajero. Uno de los principales agentes causantes es E.coli. (3).

La E. coli fue aislada por primera vez en 1885 por el pediatraalemán Theodore Escherich, quien la denominó bacteria Coli

Comunne para indicar su aparición universal en el intestino deindividuos sanos.(7) La E. coli es un bacilo gramnegativo, móvil, facultativo, oxidasanegativo, reductor de nitritos, no espuralados, fermenta la glucosacon producción de ácido y gas.

COMPOSICIÓN ANTIGÉNICA:

Antígeno O: somático (grupo). Antígeno H: flagelar (tipo).

Antígeno K: de superficie, asociado al grupo.(7)

La E. coli productora de diarrea es aquella con características de virulencia que le permite lesionar lascélulas intestinales o alterar la función del intestino.(6)

En la actualidad existen 6 categorías principales de E. coli que ocasionan diarreas:

E. coli enterotoxigénica (ECET). E. coli enteropatogénica (ECEP). E. coli enteroinvasiva (ECEI). E. coli enterohemorrágica (ECEH). E. coli con adherencia difusa (ECAD).

E. coli enteroagregativa (ECEAg).

EPIDEMIOLOGIA:

La incidencia real es desconocida pues pocos laboratorios pueden identificar estos organismos. La E.

coli enterotoxigénica (ETEC) es la causa más común de diarrea en el viajero. La E. coli enteropatogénica(EPEC) y la E. coli enteroinvasiva (ECEI) infectan principalmente a los niños menores de 2 años en lospaíses en vías de desarrollo. La ECEP se ha reportado como causa importante de diarrea en el reciénnacido.

La E. coli enterohemorrágica (ECEH) aparece en la década del 80 en casos esporádicos y en brotesepidémicos fundamentalmente en países desarrollados. El serotipo más observado en EE.UU., Europa yJapón ha sido O157 H7.14. (7.




PATOGENIA:

Debido a que se necesita muchas de estas bacterias para iniciar una infección, los alimentoscontaminados y el agua son el medio principal por el que se transmite la bacteria. Esta es la base de lasadvertencias populares a los viajeros internacionales: “no beba el agua local” y “hiérvalo, pélelo,cocínelo u olvídelo”.

Aunque la inmensa mayoría de cepas de E.coli son miembros no patógenos de la flora intestinalnormal, algunas cepas pueden causar enfermedades diarreicas por diversos mecanismos .(3)

BACTERIA ORGANO QUE COLONIZA TOXINAS PATOGENIA

ECET Intestino delgado.

Enterotoxinatermoestable(ST).Enterotoxinatermolábil(LT).

La toxina TL está relacionada de formafuncional, inmunológica y estructural con latoxina del cólera. Es causa de la diarrea delviajero.

La toxina ST está relacionada con ciertas cepasde E. coli de Yersinia. El daño que produce esesencialmente funcional.

ECEP

Duodeno hasta colon. No produceenterotoxinasni invade lascélulasepiteliales.

Se adhiere al borde velloso de las células delepitelio intestinal y causan una lesión celularespecífica denominada lesiones de borrado.La cual representa la destrucción del borderecubierto de microvillosidades.

ECEI

Colon. Citotoxina quese presentacon mayorintensidad enun medio bajoen hierro.

Causan diarrea al penetrar y multiplicarse enel interior de las células del epitelio intestinal.La capacidad de invadir las células epitelialeses asociada con la presencia de un plásmidogrande.

ECEH Colon.

Idéntica a latoxina Shiga(Verotoxina 1(VT-1). YVerotoxina 2(VT-2).

Estas toxinas se relacionan con el síndromehemolítico urémico. Produce lesiones oborramiento de las microvellosidades, dolorabdominal grave y calambres seguidos de unadiarrea sanguinolenta.

ECEAg

No se handetectadotoxinasextracelulares.

se adhieren a las células epiteliales, formandoagregados de bacterias que recuerdan“ladrillos apilados”, y se observan lesiones en

células epiteliales, lo que sugiere laparticipación de toxinas.

ECAD Colon. Toxinastermolábil ytermoestable.

Se adhiere a las células epiteliales del coloncon fimbrias de adherencia. Se la denominaE.coli enteroaglutinante.

REFERENCIAS : (2-3-7).

DIAGNOSTICO CLINICO Y LABORATORIO:

La presencia de este patógeno puede determinarse por métodos microbiológicos clásicos, siguiendo clsiguiente protocolo:

a.- Coprocultivo en medio MacConkey -sorbitol.b.- Caracterización mediante pruebas bioquímicas; las cepas predominantes son:

• Sorbitol negativo. • Beta glucuronidasa negativo.(8)




El diagnostico del laboratorio se realiza aal aislar el tipo especifico de E.coli de las heces y alidentificarlo mediante sondas de DNA, al determinar los factores de virulencia y mediante la reacciónen cadena de la polimerasa. (3)(7).

Los estudios habituales de laboratorio (cultivo de heces fecales) tienen un valor muy limitado ydependen en la actualidad, en gran medida, de métodos que no son fácilmente accesibles al médico. Loscriterios bioquímicos tienen un valor mínimo.

El cultivo del jugo duodenal puede ser útil en pacientes con diarrea persistente, cuando se sospeche quela causa sea por E. coli enteropatogénica.

En la infección por E. coli enteroinvasiva puede observarse un aumento de leucocitos con las hecesfecales, al igual que como ocurre en la infección por otras bacterias invasivas.

E. coli enteropatogénica se asocia con brotes de diarreas en recién nacidos.

Ante un cuadro de diarrea tipo coleriforme pero más atenuado, que sucede a continuación

de un viaje, debemos pensar en la posibilidad de una E. coli enterotoxigénica (7)

REFERENCIAS:

1. Evangelia Olivas. Manual de practicas de Microbiología I y II. (2009).

2. Jawetz, Melnick y Adelberg. Enterobacterias. Microbiología medica, 19va edición, traducida dela 24va edición en ingles. Capitulo 16.

3. Prescott, Harley y Klein. Microbiologia. 7ma edicion, pag-984:987.

4. LAVIGNE, J. P.; TIENE, B.; JEANDROT, A. y LECHICHE, C.. Toxiinfecciones alimentarias colectivas(TIAC). Acta bioquím. clín. latinoam. [online]. (2008) . Revista chilena SciELO.42: 79:87. ISSN1851-6114

5. "Shigella infection" from Epidemiology of Infectious Diseases. Available at:http://ocw.jhsph.edu. Copyright © Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health. CreativeCommons BY-NC-SA.

6. Winsor DK, Cleary TG. E. coli, aereomonas y plesiomonas. En: Behrman RE, Nelson. Tratado dePediatría. 15 ed. Madrid: Mc Graw Hill-Interinama 1996;995-8.

7. FERNANDEZ FERRAN, Raquel; RODRIGUEZ PEREZ, Carlos; RODRIGUEZ RIBALTA, Isis de los A.y GOMEZ MARTINEZ, Freddy. Escherichia coli como causa de diarrea infantil.(2003). Revista

Cubana Pedriatica, l.75:.3, pp. 0-0. ISSN 0034-7531. Revista Chilena SciELO.

8. Williams López Acuña y José M. Guevara Duncan. INFECCIÓN POR ESCHERICHIA COLIENTEROHEMORRÁGICA. (2008). Revista de la Facultad de Medicina de la Universidad RicardoPalma 2002 ; 3 (1) : 38-41

http://ocw.jhsph.edu/

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