fotometria
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presentacion de la descripcion de la tecnica fotometrica utilizada en los aparatos que se utilizan para la deteccion de metabolitos por medio ya sea de enzimas o cromogenos.TRANSCRIPT
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIAPAS FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CAMPUS IV TAPACHULAMAESRTRÍA EN CIENCIAS EN BIOQUÍMICA
CLÍNICA
TIPOS DE METODOS EN QUIMICA CLINICA:
ESPECTROFOTOMETRIA Y FLUOROMETRIA FOTOMETRIA DE LLAMA
ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA
DOCENTE: DRA CONSUELO CHANG RUEDA
TAPACHULA, CHIAPAS. 21 DE AGOSTO 2015
ESPECTROFOTOMETRIA
La espectrofotometría es la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe o transmite un sistema químico en función de la longitud de onda; es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y bioquímicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.
Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe longitud de ondas que pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la región del infrarrojo.
El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida.
Medición de Transmitancia y Absorbancia La transmitancia y la absorbancia se miden en un instrumento llamado espectrofotómetro, la solución del analito se debe contener en algún recipiente transparente, tubo o celda.
Leyes y principios de la Espectrofotometría
En la espectrofotometría se aprovecha la absorción de radiación electromagnética en la zona del ultravioleta y visible del espectro. La muestra absorbe parte de la radiación incidente en este espectro y promueve la transición del analito hacia un estado excitado, transmitiendo un haz de menor energía radiante.
Ley de Beer
La Ley de Beer afirma que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de la concentración en la solución.
Ley de Lambert
La Ley de Lambert dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto depende de la distancia recorrida por la luz.
FLUOROMETRIA
Es un tipo de espectroscopia electromagnética, la cual analiza la fluorescencia de una muestra.
Su técnica complementaria es el espectro de absorción el cual nos arroja datos de manera cualitativa y cuantitativa . El equipamiento que mide la fluorescencia es llamado fluorómetro o fluorímetro.
La tecnología del fluorómetro permite recoger un amplio espectro de longitudes de onda (absorbancia, transmitancia, o intensidad) en menos de un segundo. Se puede determinar fácilmente la concentración de una solución (la ley de Beer), o controlar los porcentajes de reacción. Con sus dos longitudes de onda de excitación diferente, SpectroVis Además cuantitativamente puede medir los espectros de fluorescencia de muchos compuestos, tales como la clorofila, fluoresceína, y mucho más.
Técnica espectrofotométrica que se basa en la absorción de radiación por parte del analito a medir en una muestra y su posterior emisión. Su fundamento es la fluorescencia que es la emisión de radiación por electrones excitados.
En el fenomeno de fluorescencia , una molecula absorbe radiacion electromagnetica y debido a ello los electrones pasan de un estado basal a otra fase de excitación.
Aspectos importantes de Fluorimetría:
Aplicaciones de la fluorometria en el laboratorio clinico
Medir iones inorgánicos
Determinacion de aminoacidos y sustancias relacionadas con los mismos.
Medicion de nucleotidos
Determinar enzimas
Trigliceridos y vitaminas
Medir esteroides y drogas
Partes opticas de un fluorimetro
ESPECTROMETRÍA DE EMISIÓN DE LLAMA
La espectroscopia de emisión con llama es un método analítico basado en la medida de la energía radiante emitida por átomos (o iones o moléculas) de un elemento que se encuentra en estado de vapor.
A temperatura ambiente, todos los atomos de una muestra se encuentran esencialmente en el estado fundamental. Los atomos son elevados a un estado electronico excitado termicamente, es decir, atraves de colisiones con los gases quemados en la llama.
Hay cuatro etapas principales durante la espectrometría de emisión por llama:
Evaporación Atomizaci
ón
Excitación Emisión de radiación
La fotometría de llama se divide en dos grandes categorías
Fotometría de llama de emisión
Fotometría de llama de absorción atómica
VAPOR ATOMICO
Fotometría de llama de emisión
A* A+ hv
La energía se separa en diferentes longitudes de onda del espectro característica para cada elemento.
Un fotómetro de llama de emisión consiste esencialmente en las siguientes partes:
SISTEMA DE QUEMADORES
SOLUCIÓN
LLAMA
SELECTOR DE LONGITUD DE ONDA
FOTOMETRO
• Reguladores de presión y medidores de flujo para los gases combustibles y comburentes.• La Llama
La llama se emplea para:
- Transformación de la muestra.
-Descomposición del compuesto molecular.
- Excitación de las partículas
Hay principalmente dos tipos de llama:
-La llama blanda.
-La llama dura.
Temperatura de la llama (ºC) con diversasmezclas de combustible
CARACTERÍSTICAS DE LA LLAMA
1-Temperatura de la llama
2-Perfiles de la llama
Sistema de quemadores
Es la parte del fotómetro donde se evapora instantáneamente el disolvente y la muestra se convierte en un gas.
El sistema de quemadores consta de:
Nebulizador
Quemador
Sistema óptico
Consiste en:- Un filtro.- Una lente sencilla.
Detector fotosensible:
Los mas simples: Fotocélula
Los mas complejos : Fototubo Fotomultiplicador
FOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA
La absorción atómica es una técnica capaz de detectar y determinar cuantitativamente la mayoría de los elementos del sistema periódico. Sus campos de aplicación son por lo tanto muy diversos.
En la espectrofotometría de absorción atómica la muestra es vaporizada mediante un proceso a alta temperatura.
A este proceso se le conoce con el nombre de atomización y son principalmente de tres tipos: • De llama• Electrotérmica • Con plasma.
La técnica de atomización más usada es la Absorcion atómica en llama o flamaque nebuliza la muestra y luego la disemina en forma de aersol dentro de una llama de aire de acetileno u oxido nitroso acetileno.
Este método se puede aplicar en la detección de ciertos metales como:
Antimonio Cadmio Calcio
Cesio Cromo
Cobalto
Niquel Plomo Oro
Se hace pasar un rayo de luz monocromático proveniente de una lámpara de cátodo hueco, a través de una llama y se mide la atenuación de los fotones luego de la interacción con los átomos en estado de energía basal que así se transforman en átomos excitados.
Un fotómetro de llama de Absorción Atómica consta esencialmente de las siguientes partes:
• Se utiliza ampliamente para la determinación de metales en diferentes sustancias problemas.
• Es capaz de analizar más de 65 elementos �distintos.
Aplicaciones en el Laboratorio Clínico.
