flores castañeda, ana maría gamboa grados, ana iris

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE MEDICINA

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA

INTEGRANTES:

ALIAGA VERA, Amalia

ALTAMIRANO VALLEJO, Enma

ARGOMEDO LLAPO, Juan Carlos

CANCHACHI ALFARO, Hector

CONTRERAS VELASQUEZ, Meliza

Flores Castañeda, Ana María

GAMBOA GRADOS, Ana Iris

GARCÍA COSTANTINO, David

LEÓN YNTI, Wiecer

LUJAN PARDO, Ricardo

DOCENTE: Dra. ROSA A. SALCEDO DÁVALOS

TRUJILLO- PERÚ

2010

TESIS

Efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial

de Origanum vulgare “orégano” sobre

Streptococcus Pyogenes.

PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:

MÉDICO CIRUJANO

AUTOR: Delgado Nicolás, Héctor Diego

ASESORA:

Dra. Mejía Delgado, Elva Manuela

CO-ASESORA:

Dra. Soto Vásquez, Marilú Roxana

TRUJILLO- PERÚ

2018

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

DEDICATORIA

A Dios, por haberme dado la fuerza necesaria durante

estos 6 años para seguir adelante y superar mis obstáculos

A mis padres, por haber guiado mi camino y ser mí soporte,

por enseñarme a diferenciar entre lo bueno y lo malo e

inculcarme los cimientos necesarios para seguir adelante

A mis hermanas, porque son mi referente y ejemplo a seguir

desde pequeño y porque hoy en día son una de las principales

razones por las que sigo esforzándome

A todos esas grandes personas que he conocido en mi preciada

facultad y con las que he compartido grandes momentos,

gracias por su confianza y comprensión



AGRADECIMIENTOS

A la Dra. Elva Mejía Delgado, mi asesora de tesis, por brindarme su apoyo desinteresado,

orientación y ayuda durante la realización de la presente investigación.

Al personal técnico del Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la UNT,

especialmente a la Sra. Tania Mendoza por su gran apoyo y servicio durante la ejecución de la

investigación.

A la Dra. Marilú Soto Vásquez, por su apoyo en el Laboratorio de Farmacognosia-

Farmacobotánica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UNT



ÍNDICE

I. INTRODUCCIÓN… ............................................................................... 1

1.1. Antecedentes… ...................................................................................... 1

1.2. Justificación ........................................................................................... 5

1.3. Problema… ............................................................................................ 5

1.4. Hipótesis ................................................................................................. 5

1.5. Objetivos… ............................................................................................ 5

II. MATERIAL Y MÉTODOS .....................................................................6

2.1. Material de estudios: ............................................................................. 6

2.2. Métodos y Técnicas ............................................................................... 8

2.3. Instrumento de Recolección de Datos… ............................................. 13

2.4. Operacionalización de variables. ......................................................... 14

2.5. Definición conceptual de variables… .................................................. 14

2.6. Análisis estadístico e interpretación de la información ..................... 15

2.7. Aspectos éticos… ................................................................................... 15

2.8. Diseño Experimental… ......................................................................... 17

III. RESULTADOS ........................................................................................ 18

IV. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN… ................................................................. 26

V. CONCLUSIONES ................................................................................... 29

VI. RECOMENDACIONES ......................................................................... 30

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .................................................. 31

VIII. ANEXOS .................................................................................................. 36



RESUMEN

OBJETIVO: Evaluar el efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de

Origanum vulgare (AEOV) sobre Streptococcus pyogenes. MATERIAL Y

METODOS: Estudio de tipo experimental del efecto antibacteriano de las

concentraciones al 25%, 50%, 75% y 100% del AEOV sobre Streptococcus

pyogenes; se utilizó como control positivo Penicilina G Benzatina y como control

negativo Tween80. Se empleó el método de Kirby Bauer y la concentración mínima

inhibitoria (CIM) para evaluar la actividad antibacteriana. Se utilizó el cálculo de

la desviación de estándar, se evaluó los coeficientes de variación y la prueba de

comparaciones múltiples utilizando subconjuntos homogéneos; todas con un nivel

de significancia del 0,05 (P< 0,05). RESULTADOS: La susceptibilidad de

Streptococcus pyogenes frente al AEOV fue de 15.17mm, 15.33mm, 16.08mm y

18.75mm al 25%, 50%, 75% y 100% respectivamente y la CIM de AEOV fue la de

25% (230.81mg/mL). Asimismo, las cepas de Streptococcus pyogenes mostraron

“sensibilidad media” a los grupos de AEOV de 75% y 100% en un 100% y a los

grupos de AEOV de 25% y 50% en un 83% y 92% respectivamente.

CONCLUSION: Existe efecto antibacteriano del AEOV sobre Streptococcus

pyogenes aislada de hisopado faríngeo.

PALABRAS CLAVE: Efecto antibacteriano, Origanum vulgare, Streptococcus

pyogenes.



ABSTRACT

OBJECTIVE: To evaluate the in vitro antibacterial effect of the essential oil of

Origanum vulgare (EOOV) on Streptococcus pyogenes. MATERIAL AND

METHODS: Experimental study of the antibacterial effect of the concentrations at

25%, 50%, 75% and 100% of the EOOV on Streptococcus pyogenes; Penicillin G

Benzathine is used as a positive control and Tween80 as a negative control. The

Kirby Bauer method and the minimum inhibitory concentration (MIC) were used

to evaluate the antibacterial activity. The calculation of the standard deviation was

used, the coefficients of variation were evaluated and the multiple comparisons test

was used using homogeneous subsets; all with a level of significance of 0.05 (P

<0.05). RESULTS: The susceptibility of Streptococcus pyogenes to EOOV was

15.17mm, 15.33mm, 16.08mm and 18.75mm at 25%, 50%, 75% and 100%

respectively and the MIC of EOOV was 25% (230.81mg / mL). Likewise, strains

of Streptococcus pyogenes showed "average sensitivity" to the AEOV groups of

75% and 100% in 100% and to the EOOV groups of 25% and 50% in 83% and 92%

respectively. CONCLUSION: There is an antibacterial effect of EOOV on

Streptococcus pyogenes isolated from pharyngeal swab.

KEY WORDS: Antibacterial effect, Origanum vulgare, Streptococcus pyogenes



1

I. INTRODUCCIÓN

1.1 ANTECEDENTES

El Estreptococo ß-hemolítico del grupo A (EGA) o Streptococcus pyogenes, es uno

de los patógenos más frecuentes en la edad pediátrica y responsable de producir

enfermedades tales como la faringoamigdalitis aguda (FAA), una infección de la

orofaringe o nasofaringe que constituye una de las principales causas de consulta

médica en la atención ambulatoria, en aproximadamente 1/3 parte de los casos1,2.

La mayor incidencia de esta enfermedad suele ser en las estaciones de invierno y

primavera y el mecanismo de transmisión suele producirse por vía respiratoria a

través de las pequeñas gotas de saliva que se expelen al toser, estornudar o

simplemente hablar desde una persona infectada a un huésped susceptible y tocando

las llagas de las infecciones por EGA en la piel3.

El 25-40% de las amigdalitis infantiles y el 10-25% de las formas adultas son de

origen estreptocócico. Aproximadamente el EGA es responsable del 30-40% de las

FAA que se observan en niños de 3-13 años, del 5-10% en niños entre los 2 y 3

años y solo el 3-7% en menores de 2 años; además, aunque ocurran, las FAA por

EGA son muy raras en niños menores de 2 años, e insólitas en los menores de 18

meses4,5.

Asimismo, la FAA por EGA produce 2 tipos de complicaciones: Supurativas y no

supurativas; las primeras por diseminación de EGA a estructuras adyacentes a la

faringe (flemón y absceso periamigdalino, absceso retrofaríngeo, otitis media

aguda, sinusitis, mastoiditis, adenitis cervical supurativa), y las segundas, como

secuelas de la respuesta inmunológica (fiebre reumática aguda y la

glomerulonefritis postestreptocócica)1,6



2

Se recomienda administrar el tratamiento antibacteriano durante 10 días. Basado en

su estrecho espectro de actividad, la infrecuencia de reacciones adversas, y el costo

modesto, la penicilina (penicilina G benzatina IM en dosis única en personas con

peso mayor a 25 kg 1.200.000 UI, mientras que por debajo de ese peso la dosis es

de 600.000 UI) o la amoxicilina (VO 500 mg/12 h) es el fármaco de elección

preferido para aquellos no alérgicos a estos agentes. Si hay alergia confirmada a la

penicilina se aconseja utilizar una cefalosporina de primera generación (para

aquellos que no son anafilácticamente sensibles) durante 10 días, clindamicina o

claritromicina durante 10 días o azitromicina durante 5 días7,8.

Pese a que los estreptococos causantes de FAA mantienen hasta la fecha

sensibilidad a las penicilinas y a otros antibióticos β-lactámicos (No se ha descrito

ninguna cepa resistente a la penicilina) se sabe que la prevalencia de alergia a

betalactámicos auto-reportada en niños varía entre 1,7 y 5,2% de los cuales la

amoxicilina como etiología representa el 1.4 %, otras penicilinas el 1.2 % y la

cefalosporinas el 0.7 %; esto es debido a que al metabolizarse la penicilina se

liberan determinantes alergénicos como el benzilpeniciloil, que constituye la causa

principal de la mayor parte de reacciones alérgicas tales como las de tipo I o

inmediatas (en menos de 1 h: urticaria y anafilaxia), de tipo II o citotóxicas y tipo

III o por inmunocomplejos (mediadas por anticuerpos: anemia hemolítica y

enfermedad del suero, y de tipo IV (entre las 24 a 48 h, inducidas por linfocitos T:

exantema maculo- papular)3,9.

Por las razones antes mencionadas además de la baja inmunidad en las células

huésped y la capacidad de las bacterias para desarrollar biofilms asociados a la

resistencia a los medicamentos han llevado a los investigadores a explorar nuevas



3

alternativas contra las cepas de EGA. En este sentido, los aceites esenciales de

plantas y sus principales constituyentes químicos son candidatos potenciales como

agentes antibacterianos. Se ha descrito que varios tipos de aceites esenciales

(canela, clavo, pimiento, orégano, romero, etc) y sus principales constituyentes

químicos poseen una amplia gama de potenciales inhibidores bacterianos10.

El Origanum vulgare "Orégano" es una planta muy versátil y aunque se ha conocido

durante mucho tiempo como una hierba culinaria en gastronomía y en la

preservación e inhibición del crecimiento de varias bacterias y hongos patógenas

transmitidas por los alimentos, también ha demostrado su uso en medicina popular

en el tratamiento de trastornos respiratorios, dispepsia, menstruación dolorosa,

artritis reumatoide, escrofulosis y trastornos del tracto urinario. Recientemente se

le ha reconocido por su potencial papel terapéutico como diaforético, carminativo,

antiespasmódico, antiséptico, antioxidante y otras propiedades. 11,12,13

Se ha demostrado que el aceite esencial de orégano se obtiene principalmente de

las hojas y que el nivel de insolación, la naturaleza de los componentes del suelo,

el régimen de lluvias y vientos determinan algunas variantes o quimiotipos en su

composición química: El quimiotipo A que es rico en compuestos terpénicos

(monoterpenos y sesquiterpenos que representan el 45 y 27%, respectivamente); el

quimiotipo B, cuyo principal componente es el carvacrol (40%) seguido de p-

cimeno (13%) y γ-terpineno (11%) y timol (11%); y el quimiotipo C que posee altos

niveles de timol (56%, seguido de p-cimeno (9%) y γ - terpineno(5%)13,14.

El aceite esencial de Origanum vulgare presentan actividad contra bacterias Gram

negativas como Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,

Yersinia enterocolitica y Enterobacter cloacae; y Gram positivas como



4

Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Listeria monocytogenes y

Bacillus subtilis; además también exhiben propiedades antifungicas frente a los

patógenos humanos Malassezia, Trichophyton rubrum y beigelii Trichosporon y

hay evidencia que tienen efecto antirretroviral contra adenovirus y poliovirus10,12.

La actividad antibacterial de Origanum vulgare ha sido comprobada en diversos

estudios: Siroli y col. (2015) encontraron que el aceite esencial de orégano mostró

mayor actividad antimicrobiana contra L. monocytogenes en comparación con E.

coli. De hecho, la concentración inhibitoria mínima de L. monocytogenes osciló

entre 125 y 200 mg/l, mientras que la de E. coli varió entre 250 y 350 mg/l15.

Boskovic M y col (2015) trabajaron con plantas de orégano y tomillo, encontrando

que ambos aceites esenciales exhibieron excelente actividad antibacteriana contra

Escherichia coli, Salmonella spp y S. Enteritidis; además, aunque generalmente

estos aceites son más afectivos frente a las bacterias Gram positivas, en este estudio

ambos mostraron actividad moderadamente fuerte contra S. aureus con un valor de

CIM obtenido de 640 μg/mL y una actividad antibacteriana más fuerte contra el

MRSA16.

Magi G, Marini E y Facinelli B (2015), demostraron que los aceites esenciales de

tomillo y orégano poseen la mayor actividad antimicrobiana contra estreptococos

del grupo A resistentes a la eritromicina con una concentración mínima inhibitoria

que oscila entre 256 y 512 μg/mL. Además encontraron que el monoterpeno

fenólico carvacrol, principal componente de estos aceites podría servir

potencialmente como una nueva herramienta terapéutica17.



5

1.2 JUSTIFICACION

En los últimos años, el número de infecciones causadas por Streptococcus pyogenes

así como sus complicaciones han aumentado en la población en general, afectando

principalmente a niños; además en algunos casos la hipersensibilidad generada por

la penicilina G Benzatina, fármaco de elección, así como la aparición de cepas

resistentes a los antibióticos alternativos comúnmente utilizados, han complicado

el tratamiento y motivan la búsqueda de nuevas alternativas que permitan disminuir

el daño causado por los microorganismos con amplio impacto epidemiológico.

Con la presente investigación, se pretende analizar las propiedades antimicrobianas

in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare sobre las cepas de Streptococcus

pyogenes, asimismo, se intenta encontrar una alternativa terapéutica que amplié las

posibilidades de combatirlo y que sea de fácil acceso a la población, disminuyendo

también los efectos adversos de los medicamentos empleados comúnmente.

1.3 PROBLEMA

¿Tiene efecto antibacteriano “in vitro” el aceite esencial de Origanum vulgare

“orégano” sobre Streptococcus pyogenes?

1.4 HIPOTESIS

El aceite esencial de Origanum vulgare posee efecto antibacteriano “in vitro” sobre

Streptococcus pyogenes

1.5 OBJETIVOS

1.5.1. Objetivo General

Evaluar el efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare

(orégano) sobre Streptococcus pyogenes.

1.5.2. Objetivos específicos:



6

Determinar la concentración mínima inhibitoria in vitro del aceite esencial de

Origanum vulgare “orégano” sobre Streptococcus pyogenes utilizando el

método de macro dilución en caldo.

Comparar el diámetro in vitro del halo inhibitorio generado por el aceite esencial

de Origanum vulgare “orégano” al 25%, 50%, 75% y 100% frente a

Streptococcus pyogenes mediante la técnica de Kirby Bauer

Determinar la susceptibilidad bacteriana del aceite esencial de Origanum

vulgare “orégano” frente Streptococcus pyogenes

II. MATERIAL Y MÉTODOS

2.1. MATERIAL DE ESTUDIO

2.1.1. TIPO DE ESTUDIO

- Investigación de tipo aplicada y régimen libre.

- Según el periodo que capta la información: Prospectivo

- Según la evolución del fenómeno estudiado: Transversal

- Según la interferencia del investigador en el fenómeno que se analiza:

Experimental

2.1.2. POBLACION Y MUESTRA

2.1.2.1. CARACTERÍSTICAS GENERALES

Se trabajó con cepas de Streptococcus pyogenes expuestas a aceite esencial de

Origanum vulgare (oregano) en concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100%.

2.1.2.2.CRITERIOS DE SELECCIÓN DE MUESTRA

CRITERIOS DE INCLUSIÓN

Placas con Agar Sangre con macro dilución de Streptococcus



7

pyogenes y la concentración de aceite esencial de Origanum

vulgare correspondiente

CRITERIOS DE EXCLUSIÓN

Placas con la macrodilución que presente algún tipo de deterioro o

daño en su estructura durante el proceso de incubación.

Placas con la macrodilución cuyo resultado en el proceso de

incubación sea dudoso.

CRITERIOS DE ELIMINACIÓN

Placas Petri con la macrodilución que sufra deterioro o daño

durante la conservación y los procedimientos, que no permitan su

medición posterior.

2.1.3. DISEÑO ESTADÍSTICO DE MUESTREO

Se calculó el número de ensayos con el programa estadístico Minitab 17,

obteniendo como tamaño de muestra 11 repeticiones como mínimo para cada

nivel. La muestra total estará constituida por 44 unidades de muestreo para los

4 grupos experimentales y 22 para los 2 grupos controles:

- GRUPO 1: 11 repeticiones utilizando aceite esencial de Origanum

vulgare (Orégano) a una concentración de 25%









8

- GRUPO 5: 11 repeticiones utilizando discos de Penicilina G Benzatina

1.2M UI

- GRUPO 6: 11 repeticiones utilizando discos con Tween 80.

2.2. METODOS Y TECNICAS

2.2.1. DE LA APROBACION DEL PROYECTO

Para la realización del presente estudio de investigación se obtuvo el permiso

para la ejecución, mediante la aprobación del proyecto por el Comité

Permanente de Investigación Científica de la Facultad de Medicina de la

Universidad Nacional de Trujillo y la correspondiente Resolución de Decanato.

2.2.2. DE LA AUTORIZACIÓN PARA LA EJECUCIÓN

Una vez aprobado el proyecto se solicitó el permiso para poder trabajar en el

Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad

Nacional de Trujillo.

2.2.3. DE LA CERTIFICACIÓN DEL EXAMINADOR

La presente investigación se desarrolló por el investigador principal, bajo la

supervisión de su asesora.

El investigador se certificó por su asesora experta en el tema, para lo cual realizó

la lectura de 11 placas Petri para el conteo de las UFC mediante la inspección

visual de cada placa y también repitió la medición con un vernier los halos de

inhibición en milímetros entre el investigador y asesora.

2.2.4. ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare (ORÉGANO) PARA

EL ESTUDIO



9

2.2.4.1. Recolección de Origanum vulgare (Orégano)

Las especies vegetales de Origanum vulgare (10kg) se recolectaron del

departamento de La Libertad, provincia de Otuzco, ubicada a 3350 msnm, los

cuales fueron observados a temperatura ambiente, sin desecar hasta el momento

de la extracción del aceite esencial.

2.2.4.2. Identificación de Origanum vulgare (Orégano)

Un ejemplar completo fue llevado al Herbarium Truxillensis de la Universidad

Nacional de Trujillo para su identificación y posterior verificación taxonómica

según el sistema filogenético de la especie.

2.2.4.3. Preparación de la muestra vegetal

Obtenida la muestra necesaria de Origanum vulgare, fue transportada al

laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la

Universidad Nacional de Trujillo, donde se realizó la selección y se eliminó las

hojas que no se mostraron aptas para su procesamiento. Luego, se lavó el

material vegetal con agua destilada, seguido de desinfección, utilizando

hipoclorito de sodio al 0.5 %. Posteriormente se realizó un enjuague con agua

destilada estéril, para retirar los residuos de hipoclorito18.

2.2.4.4. Obtención del aceite esencial de Origanum vulgare19

La extracción se efectuó mediante el método por arrastre de vapor de agua

(convencional). Técnica simple y económica para obtener el aceite esencial de

este tipo de planta. Se depositó 500 g de hojas de Origanum vulgare,

previamente desecadas, en un balón de fondo redondo de 1000 mL de

capacidad. Se llenó con agua el balón destilador, previa instalación del

conducto refrigerante; el extremo superior de este balón se conectó a un

condensador que permita la circulación de agua a través del mismo.



10

Posteriormente, se llevó a ebullición el balón destilador por un tiempo de tres

horas, periodo en el que se obtiene un líquido inmiscible conteniendo vapor de

agua condensada y el aceite vegetal. La separación de la mezcla aceite/agua se

realizó tomando en cuenta sus propiedades de inmiscibilidad y diferencia de

densidades utilizando una pera de separación de vidrio; además se deshidrató

las impurezas de agua en el aceite esencial con Na2SO4 anhidro.

Finalmente, el aceite esencial obtenido se recolectó en frascos de color ámbar

y se conservó a temperatura de refrigeración a 4°C.

2.2.5. PREPARACIÓN DE LAS CONCENTRACIONES DE ACEITE

ESENCIAL:

Se prepararon según el siguiente cuadro:

Volumen de

aceite esencial

Volumen de

Tween 80

Volumen

final

Concentración

(%)

1.25 mL 3.75 mL 5 mL 25

2.50 mL 2.50 mL 5 mL 50

3.75 mL 1.25 mL 5 mL 75

3 mL - 3 mL 100

2.2.6. RENDIMIENTO DEL ACEITE DE Origanum vulgare:

El rendimiento del aceite fue de 0.5 ml por cada 100g de hoja seca (0.5%),

obteniéndose una densidad de 0.92324 g/mL.

Las concentraciones al transformarse en mg/mL se obtienen sus respectivas

equivalencias:



11

Densidad del aceite

(mg/mL)

Concentración (%)

230.81 mg/mL. 25 %

461.62 mg/mL. 50 %

692.43 mg/mL. 75 %

923.24 mg/mL. 100 %

2.2.7. CEPAS BACTERIANAS PARA EL ESTUDIO

Se trabajó con cepas de Streptococcus pyogenes, obtenidas por hisopado

faríngeo de pacientes sintomáticos con faringoadmigdalitis, en el laboratorio de

Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de

Trujillo.

2.2.8. CRECIMIENTO DE CEPAS BACTERIANAS

Streptococcus pyogenes: creció a 37°C en Agar sangre con 5% de sangre de

conejo y en condiciones de microanaerobiosis.

2.2.9. ESTANDARIZACIÓN DE Streptococcus Pyogenes

Se confirmará la cepa de Streptococcus Pyogenes mediante la determinación

de β-hemolisis, coloración Gram, cultivo tioglicolato, sensibilidad a la

bacitracina y prueba de la catalasa. Para estandarizar las cepas bacterianas se

utilizó un tubo de ensayo conteniendo el medio agar Soya tripticasa, hasta

obtener una turbidez semejante al tubo N°0.5 del Nefelómetro de Mc Farland

(suspensión experimental) que corresponde a 1,5x108 UFC/mL. Los cultivos

se incubaron a 37°C por el lapso de 24 a 48 horas y fueron girados entre las

manos durante 30 segundos antes de proceder al sembrado para distribuir los

microorganismos uniformemente.



12

2.2.10. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN INHIBITORIA

MÍNIMA (CIM) 20,21,22

1° Se preparó 6 tubos de ensayo; 4 tubos a los cuales se añadió 0.8 mL de cada

concentración de aceite esencial de 25, 50, 75 y 100% en cada uno, un quinto

tubo corresponde al control positivo con 0,8 mL de Penicilina G Benzatina y

un sexto tubo corresponde al control negativo con 0,8 mL de Tween 80; además

a los seis tubos se le añadió 0,2 mL de la cepa.

2° Posteriormente, los tubos se mezclaron suavemente hasta uniformizarlos y

se incubarán a 37° C durante 24 horas. Luego, se determinó las cuentas viables

sembrando 0,1 mL de solución de cada uno de los tubos en 11 placas con Agar

Sangre con 5% de sangre de conejo por cada concentración y grupos controles,

utilizando el asa de drigalsky para dispersar la muestra.

3° Dichas placas se cultivaron en la estufa a 37ºC por el lapso de 24 horas,

luego se observó el crecimiento del microorganismo mediante el conteo de

Unidades Formadoras de Colonias (UFC), considerándose como CIM a la

menor concentración en la cual no se observaron UFC.

4º Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm de la

llama de un mechero bunsen y fueron 11 placas Petri por concentración.

2.2.11. DETERMINACIÓN DE EFECTO ANTIBACTERIANO

(PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD) 20,21,22

Para la prueba de susceptibilidad se utilizó el método de Difusión en discos

Kirby-Bauer.

1° Con un hisopo estéril, el cual fue embebido en el tubo del cultivo preparado

y a una distancia de 10 cm de la llama de un mechero, se sembró en placas Petri



13

con Agar Sangre las cepas de Streptococcus pyogenes, hisopando de forma

uniforme sobre toda la superficie.

2° Se preparó discos de papel filtro estériles y se sumergió 12 discos por cada

concentración de aceite esencial. Posteriormente con la aguja estéril se

colocaron los discos sobre los cultivos de Streptococcus pyogenes en las placas

Petri preparadas previamente. Hubo 2 grupos controles: un grupo control

positivo con 12 discos de penicilina G Benzatina y un control negativo con 12

discos de Tween 80. Se colocaron 4 discos por placa de agar. Posteriormente

las placas se incubaron a 37°C durante 24 horas.

4° Finalmente la lectura de resultados se llevó a las 24 horas. Se medirán los

halos de inhibición, incluyendo el área del disco de papel de filtro con una regla

milimetrada, procediéndose de igual manera con ambos controles. La lectura

de los halos de inhibición producidos se midió en milímetros tomando en

cuenta la escala de Duraffourd.

2.3. INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS

Se llenaron los datos obtenidos en las fichas elaboradas (ANEXO Nº1 Y N°2)

El instrumento contiene:

1. El conteo de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC)

2. Medida de halos de inhibición expresada en milímetros (mm).

2.4. OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES



14

VARIABLE DIMENSIONES TIPO DE

VARIABLE

DEFINICIÓN

OPERACIONAL E

INDICADORES

ESCALA

DE

MEDICION

Aceite esencial

de Origanum

vulgare

(Variable

independiente)

Cantidad de

aceite en ml.

Cualitativa Administración de aceite

esencial de Origanum

vulgare en

concentraciones de 25,

50,75 y 100%; control

NOMINAL

Efecto Concentración

Inhibitoria

Mínima

Cuantitativa Unidades Formadoras de

Colonias (UFC) por ml

DE RAZON

antibacteriano

(Variable

dependiente) Sensibilidad

Bacteriana

Cuantitativa Escala de Duraffourd:

Diámetro en mm

DE RAZON

2.5. DEFINICIÓN CONCEPTUAL DE VARIABLES:

Aceite esencial de Origanum vulgare:

Mezcla compleja de líquidos que presentan alta volatilidad, obtenido a partir de

hojas del orégano; planta perteneciente a la familia lamiaceae y originaria del

mediterráneo14

Efecto antibacteriano “in vitro” frente a Streptococcus pyogenes:

Interacción entre el aceite esencial de Origanum vulgare sobre Streptococcus

pyogenes. Se tomó como concentración efectiva, al tener como resultados 0 UFC.

Y para determinar la sensibilidad bacteriana, se utilizó la Escala de Duraffourd,

escala utilizada para determinar cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según

diámetro de inhibición.

- Nula (-) para un diámetro inferior a 8 mm.

- Sensibilidad límite (sensible = +) para un diámetro comprendido entre 8 a

14 mm.



15

- Medio (muy sensible = ++) para un diámetro entre 14 y 20 mm.

- Sumamente sensible (+++) para un diámetro superior a 20 mm.

Sensibilidad de Streptococcus pyogenes a Penicilina: Se consideró según el

diámetro de inhibición25:

- Sensible para un diámetro superior a 24 mm

- Medio y resistente: Hasta la fecha, no se ha descrito ninguna cepa de S.

pyogenes con resistencia a penicilina

2.6. ANALISIS ESTADÍSTICO E INTERPRETACIÓN DE LA

INFORMACIÓN:

Para el análisis de los halos de inhibición y de las Unidades Formadoras de Colonias

(UFC), se calculó la desviación de estándar y se evaluó los coeficientes de variación

para contrastar el supuesto de la normalidad. Se aplicó la prueba de ANOVA con

un nivel de significancia de p < 0,05 para determinar si existe diferencia

significativa entre las medias de los diámetros de halos de los tratamientos y grupos

controles. Al hallarse significancia, se realizó la prueba de comparaciones múltiples

de Duncan; en la cual se determinará qué tratamiento es el óptimo.

Una vez obtenidos los datos, estos serán introducidos en los programas IBM SPSS

Statistics 22 para aplicar las pruebas estadísticas.

2.7. ASPECTOS ETICOS:

- Constancia de Asesoría. (ANEXO N°3)

- Constancia de Co-Asesoría. (ANEXO N°4)



16

- Constancia de aprobación para ejecución del proyecto por el Comité Permanente

de Investigación de la Escuela Académico Profesional de Medicina de la

Universidad Nacional de Trujillo. (ANEXO N°5)

- Constancia de preparación del aceite esencial de Origanum vulgare “Orégano” en

el laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la

Universidad Nacional de Trujillo. (ANEXO N°6)

- Acta de consentimiento informado para las pruebas de hisopado faríngeo.

(ANEXO N°7)

- Para la ejecución de esta investigación, el personal investigador tomó todas las

medidas estándares de bioseguridad establecida por el Ministerio Nacional de Salud

(MINSA) antes, durante y después de cada procedimiento microbiológico.

- Asimismo se tomó en cuenta el principio de precaución en conformidad con el

Principio 15 de la Declaración de Río sobre el Medio Ambiente y el Desarrollo26 y

el Protocolo de Cartagena sobre Seguridad de la Biotecnología del Convenio sobre

la Diversidad Biológica27, considerando los riesgos para la salud humana.



17

2.8. DISEÑO EXPERIMENTAL: Aceite esencial de O. vulgare (AEOV)



18

III. RESULTADOS

A) DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN MÍNIMA

INHIBITORIA (CIM)

La TABLA N°01 muestra que la efectividad en los cuatro grupos de

concentración de AEOV así como en el grupo de penicilina fue de 100% debido

a que no se observó crecimiento de UFC en ninguna de las 12 repeticiones de

los 5 grupos mencionados.

B) DETERMINACIÓN DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN

En el GRAFICO N°01 se usó la media aritmética para obtener los promedios

de cada grupo: El mayor promedio de diámetro de inhibición de los grupos de

investigación corresponden al grupo control positivo (Penicilina G) y al grupo

de AEOV del 100% y el menor promedio de diámetro al grupo de Tween80.

En la TABLA N°02 se describe los análisis de desviación estándar de cada

grupo: La desviación estándar en la concentración del AEOV al 25% fue 0.72,

al 50% fue 0.65, al 75% fue 0.67 y al 100% fue 0.75. En el grupo de Penicilina

G la desviación estándar fue 0.79 y en el grupo Tween80 fue 0.

En la TABLA N°03 se utilizó el análisis de varianza (ANOVA), obteniéndose

como resultado que sí existe diferencia significativa entre las medias de los

diámetros de halos de los grupos de investigación dado que el valor de P de la

tabla de ANOVA es menor que 0.05. (p = 0.000).



19

En la TABLA N°04 se usó la prueba de DUNCAN para determinar que grupos

son estadísticamente diferentes entre sí. Se encontraron 5 grupos

estadísticamente significativos y diferentes entre sí; sin embargo no existe

diferencia significativa entre el grupo con concentración de AEOV de 25% y

el grupo con concentración de AEOV de 50%.

En la TABLA N°05 se muestra el efecto inhibitorio in vitro según diámetro de

inhibición por grupos de investigación teniendo en cuenta la escala cualitativa

de Duraffourd: Se clasifico como “sumamente sensible” al grupo de penicilina

en un 100%, “sensibilidad media” a los grupos de AEOV con concentraciones

de 75% y 100% en un 100% y a los grupos de AEOV con concentraciones de

25% y 50% en un 83% y 92% respectivamente, “sensibilidad límite” a los

grupos de AEOV con concentraciones de 25% y 50% en un 17% y 8% y

“sensibilidad nula” al grupo de Tween 80 en un 100%.



20

TABLA Nº01: EFECTO DEL ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare

SOBRE Streptococcus pyogenes (CIM)

GRUPO DE TRATAMIENTO

Placas

con

UFC

% Efectividad

Concentración del Aceite

esencial de Orégano

25% 0 100

50% 0 100

75% 0 100

100% 0 100

Control (+) Penicilina G 0 100

Control (-) Tween80 12 0

FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018



21

GRÁFICO Nº01: COMPARACIÓN DEL PROMEDIO DEL DIAMETRO

DE INHIBICIÓN (DURAFFOURD) EN mm/ml ENTRE LOS GRUPOS DE

INVESTIGACION SOBRE Streptococcus pyogenes


Concentración

Penicilina

G Tween80

24.08 6

100%

18.75

75%

16.08

50%

15.33

0

25%

mm 15.17

5

10

15

20

25

30

Diá

met

ro



22

TABLA N°02: RESUMEN DESCRIPTIVO DEL EFECTO INHIBITORIO

in vitro SEGÚN DIÁMETRO DE INHIBICIÓN POR GRUPOS DE

INVESTIGACIÓN SOBRE Streptococcus pyogenes

GRUPOS DE

TRATAMIENTO

N

PROMEDIO

DESV.

ESTÁNDAR

Aceite esencial de Orégano 25% 12 15.17 0.72




Penicilina G 12 24.08 0.79

Tween80 12 6 0




23

TABLA N°03: ANALISIS DE VARIANZA PARA DETERMINAR

DIFERENCIAS SIGNIFICATIVAS EN LOS DIAMETROS DE LOS

HALOS DE INHIBICIÓN (EN mm) ENTRE LOS 6 GRUPOS DE

INVESTIGACION SOBRE Streptococcus pyogenes

F de V SC GL CM F P

Tratamientos 2087.903 5 417.581 969.8645 0.0000

Error 28.417 66 0.431

Total 2116.319 71




24

TABLA N°04: PRUEBA DE DUNCAN PARA DETERMINAR GRUPOS

SIGNIFICATIVOS EN LOS DIAMETROS DE LOS HALOS DE

INHIBICIÓN (EN mm) ENTRE LOS 6 GRUPOS DE INVESTIGACION

SOBRE Streptococcus pyogenes

GRUPOS DE TRATAMIENTO

Subconjunto para α= 0.05

n 1 2 3 4 5

Tween80 12 6

Aceite esencial de Orégano 25% 12 15.2




Penicilina G 12 24.1




25

TABLA N°05: RESUMEN DESCRIPTIVO DEL EFECTO INHIBITORIO

in vitro SEGÚN DIÁMETROS DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN (EN mm)

POR GRUPOS DE INVESTIGACION SOBRE Streptococcus pyogenes

SENSIBILIDAD

GRUPO DE INVESTIGACION

25% 50% 75% 100% Penicilina Tween80

ni % ni % ni % ni % ni % ni %

Sensibilidad

nula

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

12

100

Sensibilidad

límite

2

17

1

8

0

0

0

0

0

0

0

0

Sensibilidad

media

10

83

11

92

12

100

12

100

0

0

0

0

Sumamente

sensible

0

0

0

0

0

0

0

0

12

100

0

0

TOTAL 12 100 12 100 12 100 12 100 12 100 12 100




26

IV. DISCUSION

En los últimos 15 años, a pesar de su excelente eficacia in vitro, la tasa de falla de

la penicilina ha aumentado dramáticamente desde 7% a casi 40% en algunas

regiones del mundo28. Los estudios han demostrado que las dosis recomendadas de

penicilina V oral o penicilina G Benzatina (IM) no lograron erradicar el EGA en la

faringitis de inicio agudo en el 35% de los pacientes tratados con penicilina V oral

y el 37% de los tratados con penicilina IM, esto puede ser explicado por: 1)

Persistencia intracelular de S. pyogenes por proteínas F1, debido a la escasa

penetración de la penicilina en los tejidos amigdalinos, incluidas las células

epiteliales de las amígdalas; 2) Protección de S. pyogenes por bacterias productoras

de β-lactamasa (S. aureus , Haemophilus spp., M. catarrhalis y anaerobios) que

son comúnmente parte de la microbiota oral y 3) Congregación entre M.

catarrhalis y S. pyogenes, que puede mejorar la colonización de EGA facilitando

su adherencia a las células epiteliales humanas28,29. Es por tal motivo que, con el fin

de determinar nuevas estrategias terapéuticas, ha aumentado el interés en el uso de

aceites esenciales como el AEOV y de sus agentes antimicrobianos naturales tales

como los compuestos fenólicos timol y carvacrol10.

El presente estudio evaluó el efecto antibacteriano in vitro del AEOV sobre

Streptococcus pyogenes. Mediante la prueba de crecimiento de UFC (TABLA

Nº01), se observó que en las 4 concentraciones de AEOV no hubo crecimiento

bacteriano por lo que la concentración mínima inhibitoria (CIM) fue el grupo de

menor concentración al 25% (230.81 mg/mL.). Chaftar et al30 evaluaron la CIM de

AEOV en diferentes cepas bacterianas, obteniendo que la CIM para bacterias Gram

negativas (K. pneumoniae, S. typhimurium, E. coli, P. aeruginosa y L.



27

pneumophila) varía entre un rango de 0.12 a 0.30 mg/mL y que la CIM para

bacterias Gram positivas (B. megaterium, S. epidermidis, S. xylosus, S.

haemolyticus, S. saprophyticus, L. monoytogenes) varía entre un rango de 0.30 a

0.13 mg/mL. Además, en otro estudio realizado por Wijesundara y Rupasinghe31 se

encontró que la CIM de AEOV sobre cepas de Streptococcus pyogenes aisladas

clínicamente fue de 0.5 mg/mL; por lo que ambas investigaciones demostrarían la

gran capacidad antibacteriana del AEOV incluso a concentraciones mucho menores

del 25%. Asimismo; Magi, Marini y Facinelli17 trabajaron con cepas de

Streptococcus pyogenes aisladas clínicamente y demostraron que la CIM de

carvacrol puro (0.064 a 0.256 mg/mL), principal componente del AEOV, era mucho

menor que la CIM del AEOV (0.256 a 0.512 mg/mL), lo que demostraría el poder

antibacteriano de este componente.

En cuanto a la composición fitoquímica del AEOV, Leyva et al32 realizaron una

revisión sistémica de diversos estudios que evalúan el porcentaje de cada principio

activo del AEOV en diferentes partes del mundo (Argentina, Brasil, Chile, China,

Colombia, Grecia, Iran, Italia, España, Serbia, Algeria, entre otros), encontrando

que los componentes que más se repiten en mayor porcentaje fueron carvacrol,

timol, p-cimeno y terpinenos casi en la misma proporción; además reconocen que

los constituyentes y la concentración de los compuestos del AEOV generalmente

varían debido a una gran diversidad de factores tales como subespecie, plagas,

condiciones del suelo, temporada de cosecha, ubicación geográfica, condiciones

climáticas y de crecimiento, método de secado del orégano, técnica de extracción y

la parte anatómica de la planta utilizada para la extracción. En el Perú, Tellez y

Nolazco33 analizaron químicamente el AEOV cultivado en la ciudad de Tacna



28

mediante cromatografía de gases, acoplada a espectrometría de masas, la cual

encontró como principales componentes del aceite al terpinen-4-ol (26,56 %), timol

(18,80 %) y carvacrol (2,24 %).

Por otra parte, la investigación mostró que el AEOV al 75% y 100%, según la escala

de Duraffourd, tuvo una sensibilidad media (con un halo de inhibición de 16.1 mm

y 18.8 mm respectivamente) (GRAFICO N°01 y TABLA Nº05); esto es explicado

por Kumara et al34 quienes afirmaron que el efecto antibacteriano del AEOV se

debe a la acción de sus componentes principales tales como el timol que ocasiona

una perturbación de las fracciones lipídicas de las membranas plasmáticas

bacterianas y el carvacrol que influye en las membranas celulares al alterar la

composición de los ácidos grasos, inducir la fuga y la pérdida de ATP de células

bacterianas además de que también puede inhibir la síntesis de flagelina. Chavez et

al35 afirman que los compuestos fenólicos (carvacrol y timol) y los terpenos

presentes en el AEOV alteran la membrana celular, lo que resulta en la inhibición

de las propiedades funcionales celulares (producción de energía mediante

alteraciones de la cadena respiratoria y transporte de membrana mediante cambios

en su topología) y, finalmente, provocan la fuga del contenido celular interno y la

muerte celular; siendo las bacterias Gram positivas más susceptibles a las

propiedades antibacterianas que las bacterias Gram negativas.

Finalmente, al aplicar la prueba de DUNCAN (TABLA Nº04) se determinó que la

concentración más efectiva contra Streptococcus pyogenes fue la del 100%, con lo

que queda demostrado el efecto antibacteriano del AEOV en todas las

concentraciones utilizadas y su utilización debería ser considerado como una nueva

alternativa terapéutica en el tratamiento de faringoamigdalitis aguda bacteriana.



29

V. CONCLUSIONES

La concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de Origanum vulgare

(orégano) fue 25% (230.81 mg/mL) frente a Streptococcus pyogenes.

El diámetro in vitro del halo inhibitorio generado por el AEOV sobre

Streptococcus pyogenes al 25% fue 15.17 ± 0.72 mm, al 50% fue 15.33 ± 0.66

mm, al 75% fue 16.08 ± 0.67 mm y al 100% fue 18.75 ± 0.75 mm.

Las cepas de Streptococcus pyogenes utilizadas en el presente estudio mostraron

“sensibilidad media” a los grupos de AEOV con concentraciones de 75% y

100% en un 100% y a los grupos de AEOV con concentraciones de 25% y 50%

en un 83% y 92% respectivamente, “sensibilidad límite” a los grupos de AEOV

con concentraciones de 25% y 50% en un 17% y 8%.



30

VI. RECOMENDACIONES

Realizar estudios con AEOV a concentraciones mucho menores al 25%.

Se recomienda aislar los principios activos de Origanum vulgare responsables

de su actividad antimicrobiana.

Incrementar investigaciones experimentales para demostrar el efecto

antibacteriano del AEOV sobre otras bacterias.

Realizar estudios para evaluar el efecto antibacteriano de Origanum vulgare en

modelos animales mediante diferentes vías de administración.



31

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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pyogenes en la edad pediátrica: desde faringoamigdalitis aguda a infecciones

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33

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Antimicrobial activity of Thyme (Tymus vulgaris) and Oregano (Origanum

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Approved Standard M2-A8, Wayne, Pennsylvania.

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orégano (Origanum vulgare spp.) de Tacna. Ingeniería Industrial. 2017; 1(35),

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34. Kumara M, Sayeed M, Rani U. Antimicrobial Properties of Plant Essential Oils

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Review. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2016: 1-21

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Alternative to Combat Antibiotics Resistance. En: Antibiotic Resistance.

Editor(s): Kateryna Kon, Mahendra Rai,. Academic Press. 2016: 227-237.



36

VIII. ANEXOS



37

ANEXO Nº01: Diámetros de halos de inhibición en mm en función a cuatro

concentraciones de aceite esencial de Origanum vulgare sobre Streptococcus

pyogenes. Control: Penicilina (Control positivo) y Tween80 (control negativo).

MEDICIÓN DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN

Origanum vulgare Control

(+)

Control (-)

Numero de

Repeticiones

25%

50%

75%

100% Penicilina

G

Tween80

mm mm mm mm mm mm

1 14 15 16 20 24 6

2 15 14 16 19 23 6

3 16 15 15 19 24 6

4 15 15 16 18 25 6

5 16 16 16 20 23 6

6 15 16 15 18 24 6

7 14 15 16 18 24 6

8 15 16 17 19 25 6

9 16 15 16 18 25 6

10 15 15 16 18 23 6

11 15 16 17 19 24 6

12 16 16 17 19 25 6

PROMEDIO 15.17 15.33 16.08 18.75 24.08 6.00




38

ANEXO N° 02: Número de UFC en cuatro concentraciones del aceite esencial

de Origanum vulgare sobre Streptococcus pyogenes. Control: Penicilina

(Control positivo) y Tween80 (control negativo).

CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA (CIM)

Origanum vulgare Control

(+)

Control

(-)

Numero de

Repeticiones

25%

50%

75%

100% Penicilina

G

Tween80

UFC/ml UFC/ml UFC/ml UFC/ml UFC/ml UFC/ml

1 0 0 0 0 0 10⁶

2 0 0 0 0 0 10⁶

3 0 0 0 0 0 10⁶

4 0 0 0 0 0 10⁶

5 0 0 0 0 0 10⁶

6 0 0 0 0 0 10⁶

7 0 0 0 0 0 10⁶

8 0 0 0 0 0 10⁶

9 0 0 0 0 0 10⁶

10 0 0 0 0 0 10⁶

11 0 0 0 0 0 10⁶

12 0 0 0 0 0 10⁶

PROMEDIO 0 0 0 0 0 10⁶




39

ANEXO N° 03: Constancia de Asesoría



ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA

CONSTANCIA DE ASESORÍA

Yo, Elva Manuela Mejía Delgado, profesora principal a tiempo completo del

Departamento Académico de Ciencias Básicas de la Facultad de Medicina de la

Universidad Nacional de Trujillo.

CERTIFICO

Ser asesora de la tesis titulada: “EFECTO ANTIBACTERIANO in vitro DEL

ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare (orégano) SOBRE Streptococcus

pyogenes”, perteneciente al estudiante de Pregrado: Héctor Diego Delgado

Nicolás, identificado con DNI: 74610655, código de matrícula: 1011800313; de la

facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.

Se expide la presente para los fines correspondientes.

Trujillo, 13 de Julio del 2017

Elva Manuela Mejía Delgado

Código Docente: 3147

ASESORA



40

ANEXO N° 04: Constancia de Co-Asesoría




CONSTANCIA DE CO-ASESORÍA

Yo, Marilú Roxana Soto Vásquez, docente auxiliar a dedicación exclusiva del

Departamento Académico de Farmacotecnia de la Facultad de Farmacia y

Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo.

CERTIFICO

Ser Co-asesora de la tesis titulada: “EFECTO ANTIBACTERIANO in vitro DEL

ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare (orégano) SOBRE Streptococcus

pyogenes”, perteneciente al estudiante de Pregrado: Héctor Diego Delgado

Nicolás, identificado con DNI: 74610655, código de matrícula: 1011800313; de la

facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.

Se expide la presente para los fines correspondientes.

Trujillo, 13 de Julio del 2017

Marilú Roxana Soto Vásquez


CO-ASESORA



41

ANEXO N° 05: Constancia de Aprobación para ejecución del proyecto



42

ANEXO N° 06: Constancia de preparación del aceite esencial



43

ANEXO N° 07: Acta de consentimiento informado

ACTA DE CONSENTIMIENTO INFORMADO

Yo, , identificado con Nº de DNI

, expreso mi voluntad de someterme a la prueba de hisopado faríngeo,

como parte del trabajo de investigación: “Efecto antibacteriano in vitro del aceite

esencial de Origanum vulgare “orégano” sobre Streptococcus Pyogenes”, realizado

por el estudiante Héctor Diego Delgado Nicolás de la Facultad de Medicina de la

Universidad Nacional de Trujillo, identificado con código universitario:

1011800313.

Además, comprendo y acepto que durante el procedimiento pueden aparecer

circunstancias inesperadas, que puedan requerir una extensión del procedimiento

original.

Al firmar este documento reconozco que he sido informado de los objetivos que

tiene la investigación, lo he leído o que me ha sido leído y explicado su contenido.

Se me ha dado amplias oportunidades de formular preguntas y que todas las

preguntas que he formulado han sido respondidas o explicadas en forma

satisfactoria.

Asimismo, tendré la potestad de retirarme del proyecto cuando así lo desee.

Trujillo, de del 2018

Nombre:

DNI:

Firma:



44


HERBARIO TRUXILLENSE (HUT)

FLORA PERUANA

Familia: Lamiaceae

Nombre Científico: Origanum vulgare L.

Leg: Delgado Nicolás, Héctor Diego

(Alumno de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo)

Código: 59398



45

ELABORACIÓN DEL ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare

(orégano) EN EL LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA DE LA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA- UNT

1) Selección de la muestra de Origanum vulgare para la preparación del aceite

2) Obtención de las concentraciones al 25%, 50%, 75% y 100% del aceite

esencial de Origanum vulgare.



46

HISOPADO FARÍNGEO PARA EL CULTIVO DE CEPAS DE

Streptococcus pyogenes EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

DE LA FACULTAD DE MEDICINA-UNT

3) Toma de muestra de pacientes sintomáticos con FAA bacteriana

4) Crecimiento en Agar sangre y observación mediante microscopio

óptico de las cepas de Streptococcus pyogenes



47

MÉTODO PARA OBSERVAR EL EFECTO ANTIBACTERIANO “IN

VITRO” DEL ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare (orégano) SOBRE

Streptococcus pyogenes EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

DE LA FACULTAD DE MEDICINA-UNT

5) Preparación de los discos con aceite esencial de Origanum vulgare

6) Obtención de la concentración inhibitoria mínima del aceite esencial

de Origanum vulgare y Penicilina G



48

7) Colocación de los discos con aceite esencial de Origanum vulgare en las

placas de Agar Sangre con cepas de Streptococcus pyogenes

8) Sembrado del contenido de los tubos en placa con Agar Sangre para

determinar las unidades formadoras de colonias (UFC) por cada

concentración de Origanum vulgare (orégano)



49

9) Halos de inhibición formados por las concentraciones de aceite

esencial de Origanum vulgare al 25%, 50%, 75% y 100%; penicilina G

y Tween80 sobre Streptococcus pyogenes

10) Conteo de UFC en concentraciones de aceite esencial de Origanum

vulgare al 25%, 50%, 75% y 100%; penicilina G y Tween80



50

IX. ANEXOS DE LA EVALUACION DE LA TESIS

CRITERIOS DE EVALUACIÓN DEL INFORME FINAL DE LOS

TRABAJOS DE INVESTIGACIÓN EN LA FACULTAD DE MEDICINA

DE LA UNT

ASPECTOS PUNTAJE

I. TITULO

a. Contiene las variables del problema de investigación. No es mayor a

quince palabras.

1

b. El título refiere de manera general las variables del problema. Tiene más de 15 palabras.

0.5

c. El título no refleja el contenido del trabajo. 0.1

2. RESUMEN

a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave. 0.5

b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave. 0.3

c. Tiene más de 200 palabras o no tiene palabras clave. 0.1

3. ABSTRACT

a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso del

idioma

0.5

b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso del idioma 0.3

c. Tiene más de 200 palabras en idioma inglés o no tiene palabras clave o uso incorrecto del idioma inglés.

0.1

4. INTRODUCCIÓN

a. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, presenta el

problema con sustento, la hipótesis es coherente con el problema y

objetivos.

3.5

b. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, el problema no está

bien sustentado o la hipótesis no es coherente con el problema y/o

objetivos.

2

c. Se basa en antecedentes de conocimientos previos. No presenta

problema

1

5. MATERIAL Y MÉTODO

a. La muestra recolectada es representativa, adecuada y plantea un

diseño experimental apropiado a la solución del problema.

3

b. La muestra recolectada es representativa, adecuada y no plantea un diseño experimental apropiado a la solución del problema.

2

c. La muestra recolectada no es representativa, ni adecuada. 1

6. RESULTADOS

a. Presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables

del problema e incluye pruebas estadísticas, figuras y tablas de acuerdo a

las normas internacionales.

4



51

b. Presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables

del problema. No incluye pruebas estadísticas, figuras y tablas de acuerdo

a las normas internacionales.

2

c. No presenta los resultados en forma sistemática en función de las

variables del problema.

1

7. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN

a. Discute cada uno de los resultados para probar su validez y contrasta

con las pruebas estadísticas mencionadas en los resultados. Busca

generalizaciones y establecer las posibles implicancias de los nuevos

conocimientos.

4

b. Discute algunos resultados para probar su validez y no contrasta con

las pruebas estadísticas mencionadas en los resultados. Busca

generalizaciones y establecer las posibles implicancias de los nuevos conocimientos.

2

c. Discute algunos resultados para probar su validez y no contrasta con las

pruebas estadísticas mencionadas en los resultados. No busca

generalizaciones.

1

8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

a. Replantea sumariamente el problema y las características de la muestra.

Formula conclusiones lógicas y emite recomendaciones viables. 2

b. Replantea sumariamente el problema y las características de la muestra.

No formula conclusiones lógicas o no emite recomendaciones viables. 1

c. No replantea sumariamente el problema, ni las características de la

muestra. 0.5

9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

a. Presentan citas justificables y asentadas de acuerdo a un solo sistema de

referencia bibliográfica reconocido internacionalmente. 1

b. No presenta citas justificables que están asentadas de acuerdo a un solo

sistema de referencia bibliográfica reconocido internacionalmente 0.5

c. Presenta citas que no se justifican o usa más de un sistema de referencia

bibliográfica reconocido internacionalmente 0.2

10. APÉNDICE Y ANEXOS.

a. Presentar valores ordenados sistemáticamente de acuerdo a las normas

internacionales 0.5

b. Presentar valores desordenados, pero de acuerdo a las normas

internacionales. 0.3

c. Presentar valores desordenados que no están de acuerdo a las

normas internacionales 0.1

CALIFICACIÓN DEL INFORME FINAL



52

CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA DEFENSA DE LA

TESIS EN LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNT

ASPECTOS Puntaje

1. EXPOSICIÓN

a. Formalidad lógica, lingüística y metodológica y uso adecuado de los medios audiovisuales

5

b. Exposición con formalidad lógica lingüística y metodológica pero no hace

uso adecuado de los medios audiovisuales

3

c. Incongruencia en la formalidad lógica, lingüística y metodológica y uso

inadecuado de medios audiovisuales.

1

2. CONOCIMIENTO DEL TEMA

a. Fluidez, dominio del tema y suficiente en responder preguntas 5

b. Fluidez, dominio del tema, pero lentitud e inseguridad en las respuestas 3

c. No dominio del Tema, respuestas contradictorias o no responde 1

3. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN

a. Relevancia completa de las conclusiones en la salud. 4

b. Relevancia parcial. 2

c. Ninguna relevancia 1

4. ORIGINALIDAD

a. Original. 4

b. Repetitivo en nuevo ámbito 2

c. Repetitivo 1

5. FORMALIDAD

a. Presentación personal formal acorde con el acto académico. 2

b. Presentación formal pero no acorde con el acto académico. 1

c. Presentación informal 0.5

CALIFICACIÓN DE LA DEFENSA DE LA TESIS

CALIFICACIÓN DEL INFORME FINAL (A): X 3 =

CALIFICACIÓN DE LA DEFENSA DE LA TESIS (B):

SUB TOTAL (A + B)/4 = NOTA NOTA:

Jurado:

X 1=



53

IDENTIFICACIÓN DE LA TESIS

Nombre: “Efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare

(orégano) sobre Streptococcus pyogenes”

Autor: DELGADO NICOLÁS, HÉCTOR DIEGO

CALIFICACIÓN FINAL

(Promedio de las 03 notas del Jurado)

JURADO: Nombre Código Docente Firma

Presidente: Dr

Grado Académico:

Secretario: Dr

Grado Académico:

Miembro: Dr

Grado Académico:



54

OBSERVACIONES DE LA TESIS

El Jurado deberá consignar las observaciones y objeciones pertinentes, si los hay,

relacionados a los siguientes ítems:

TESIS:……………………………………………………………………………...

………………………………………………………………….…………………..

TÍTULO:……………………………………………………………...……………

….………………………………………………………………………………...…

.……….………………………………………………………………………..……

RESUMEN:………………………………………………………………..………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

ABSTRACT:……………………………………………………………….………

………………………………………………………………………………………

….………………………………………………………………………………...…

………………………………………………………………………………………

INTRODUCCIÓN:……………………………………………………………..…

………………………………………………………………………………………

………………………………………………..………………………………….…

………………………………………………………………………………………

MATERIAL Y MÉTODO: ………………………………………………………

……..…………………………………………………………………….…………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

RESULTADOS:………………………………………………..……….…………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

ANÁLISIS Y DISCUSIÓN:……………………………………………………….

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………



55

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:…………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:…………………………………………..

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

APÉNDICE Y ANEXOS:………………………………………………………….

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………..

NOMBRE:

FIRMA:



56

RESPUESTAS DE TESISTAS A OBSERVACIONES DEL JURADO

El Tesista deberá responder en forma concreta de las observaciones del jurado a

manuscrito en el espacio correspondiente:

a) Fundamentando su discrepancia.

b) Si está de acuerdo con la observación también registrarla.

c) Firmar.

TESIS: “Efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare

(orégano) sobre Streptococcus pyogenes”

FUNDAMENTACIÓN:

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………..

NOMBRE:

FIRMA:



57




CONSTANCIA DE REVISION DE INFORME FINAL DE TESIS

Por la presente yo, MEJÍA DELGADO ELVA MANUELA, docente del

Departamento Académico de Ciencias Básicas – Sección de Microbiología medica

de la Facultad de Medicina en la Universidad Nacional de Trujillo, ASESORA de

la tesis: “EFECTO ANTIBACTERIANO in vitro DEL ACEITE ESENCIAL

DE Origanum vulgare (orégano) SOBRE Streptococcus pyogenes”, de quien es

autor Héctor Diego Delgado Nicolás, identificado con DNI: 74610655, estudiante

del 6º año de la facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo, dejo

constancia que he revisado esta tesis y el informe final se encuentra terminado, por

lo cual el autor se halla en condiciones de iniciar el proceso para sustentación.

Se expide la presente, a solicitud del interesado para los fines correspondientes

Trujillo, 03 de Septiembre del 2018

Elva Manuela Mejía Delgado


ASESORA



58




CONSTANCIA DE REVISION DE INFORME FINAL DE TESIS

Por la presente yo, MARILÚ ROXANA SOTO VÁSQUEZ, docente auxiliar a

dedicación exclusiva del Departamento Académico de Farmacotecnia de la

Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, CO-

ASESORA de la tesis: “EFECTO ANTIBACTERIANO in vitro DEL ACEITE

ESENCIAL DE Origanum vulgare (orégano) SOBRE Streptococcus pyogenes”,

de quien es autor Héctor Diego Delgado Nicolás, identificado con DNI: 74610655,

estudiante del 6º año de la facultad de Medicina de la Universidad Nacional de

Trujillo, dejo constancia que he revisado esta tesis y el informe final se encuentra

terminado, por lo cual el autor se halla en condiciones de iniciar el proceso para

sustentación.

Se expide la presente, a solicitud del interesado para los fines correspondientes

Trujillo, 03 de Septiembre del 2018

Marilú Roxana Soto Vásquez


CO-ASESORA



59



60



flores castañeda, ana maría gamboa grados, ana iris

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