Bioq. Horacio LuceroJefe del Laboratorio

de Biología MolecularIMR-UNNE

CITOGENETICA MOLECULAR1977 INICIO DE LA ERA DE LA CITOGENETICA MOLECULARCON ESTE TIPO DE ESTUDIOS SE PUEDE LOGRAR IDENTIFICAR DEFECTOSSUBMICROSCOPICOS DEL ADN .LA TECNOLOGIA DE “HIBRIDACION IN SITU FLUORESCENTE COMBINA LASTECNICAS DE CITOGENETICA CONVENCIONALES CON TECNICAS MOLECULARES YESTA BASADA EN LA DETECCION DE SECUENCIAS ESPECIFICAS DE ACIDOSNUCLEICOS TANTO EN CROMOSOMAS COMO EN NUCLEOS INTERFASICOS

FISH:I-METODO DIRECTO:UTILIZANDO NUCLEOTIDOS MARCADOS CON SUBTANCIASFLUORESCENTES PUEDE OBSERVARSE LA SEÑAL INMEDIATAMENTE DESPUES DELFISH AL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIAII-METODOS INDIRECTOS:SE UTILIZAN SONDAS UNIDAS A MOLECULAS COMOLA BIOTINA O DIGOXIGENINA MARCADAS CON SONDAS FLUORESCENTES QUEPERMITEN SU OBSERVACION AL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIAHAY UNA AMPLIA VARIEDAD DE SONDAS COMERCIALES Y TAMBIEN PUEDENFABRICARSE CON LA TECNICA “NICK TRANSLATION”

TIPOS DE SONDAS DE FISH• SECUENCIAS EN EL GENOMA :

• I-SONDAS DE SECUENCIA UNICA:para la deteccion deregiones especificas Pj regiones subtelomericas microdelecciones

• II-SONDAS CENTROMERICAS:son sondas alfa satelite quepermiten la deteccion de secuencias altamente repetitivas de lasregiones pericentromericas

• III-SONDAS PARA REGIONES ESPECIFICAS:detectasecuencias altamente repetitivas localizadas en determinadasregiones de los cromosomas P j. Yq12

• IV SONDAS PARA EL PINTADO DE CROMOSOMASCOMPLETOS (WCP):detectan secuencias de eucromatina endeterminados brazos o cromosomas completos

ESTUDIOS FISH

• SOSPECHA DE SINDROME DE MICRODELECION• RETRASO MENTAL• PAREJAS CON ABORTOS DE REPETICION• CROMOSOMAS MARCADORES• CARACTERIZACION DE REESTRUCTURACIONESCROMOSOMICAS• DIAGNOSTICO PRENATAL DE LAS ANEUPLOIDIAS MAS FRECUENTES• DIAGNOSTICO DE DIFERENTES ANEUPOLIDIAS ENABORTOS ESPONTANEOS

t(9;22)(q34;q11)

LSI BCR/ABL ES Dual Color Translocation Probe hybridized to a nucleus showing one green (native BCR), one large orange (native ABL), one smaller orange (ES) and one fused orange/green (20IGIF) signal pattern.

Tecnología de citogenética molecular que permite el estudio y visualización de los 23 pares de cromosomas en forma simultánea. Sondas marcadas fluorescentemente son hechas para cada cromosoma al marcar DNA específico de cada cromosoma con diferentes fluoróforos. Debido a que hay un limitado número de fluoróforos espectralmente distintos, un método de etiquetado combinatorio es usado para generar muchos colores diferentes. La diferencias espectrales generadas por el etiquetado combinatorio son capturadas y analizadas usando un interferómetro agregado a un microscopio de fluorescencia. El programa de procesamiento de imágenes entonces asigna un pseudocolor a cada combinación espectralmente diferente, permitiendo la visualización de cromosomas coloreados.Se usa cuando el bandeo con Giemsa u otras técnicas no son lo suficientemente precisas. no son suficientemente seguras

CUANDO SE PRODUCE UNA DELECION

SUBMICROSCOPICA Y SOLO PUDEDETECTARSE CON TECNICAS DECITOGENETICA MOLECULAR( FISH)

Y/O CON TECNICAS DE GENETICA MOLECULAR

CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS DELSÍNDROME DE MICRODELECIÓN 22q11 • Cardiopatía congénita 75% • anomalías del paladar 69%• Dismorfia facial (>80%): hendiduras palpebralesestrechas, nariz alargada con raíz ancha y puntabulbosa, hipoplasia de alas nasales, filtrum largo,boca pequeña, orejas displásicas y de implantaciónbaja• Déficit inmunológico 77%• Hipocalcemia neonatal 50%

DIAGNÓSTICO GENÉTICOPREIMPLANTACIONAL (DGP)Hibridación de sondas específicas para los cromosomas 13, 15, 16, 17, 18, 21,22, X e Y. Este embrión corresponde a un varón normal.