fijadores simples y mezclas

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Mecanismo de Acción FIJADORES SIMPLES Características Datos Técnicos Ventajas Desventajas Deshidrataci ón celular Alcohol Etílico (CH3-CH2 OH) No Aditivo Coagulante Preserva GLUCOGENO y la actividad de ciertas enzimas (fosfatasa, alcalina y acidas) Fija pigmentos Uso en extensiones citológicas (PAP, líquidos como la sangre y secreciones). Buen fijador para IHQ (Altera escasamente las estructura antigénica). Liquido Inflamable, muy volátil y olor agradable. Preparación : tomar 70-90 ml de OH y llevar hasta 100 ml de agua destilada. Tamaño corte : 5 mm Tiempo fijación : 2-4 hrs Renovación : 3 veces Fija y deshidrata al mismo tiempo. Gran velocidad de penetración Precipita muy rápido las proteínas y el glucógeno (fijación rápida). Agente bactericida (buen conservante). Fuerte reductor, incompatible con fijadores oxidantes como el dicromato de K y tetróxido de osmio. No fija adecuadamente la cromatina. Disuelve ac. nucleico y extrae parcialmente los lípidos. Endurece y contrae excesivamente los tejidos. Pierde su actividad al ir interactuando con el agua. Carece de efecto mordiente (químicamente es un reductor, prepara mal la tinción). Origina fenómeno de desplazamiento de sustancias. Acetona (CH3-C O- CH3) Agente no aditivo y muy oxidante (su átomo de oxígeno puede compartir un Liquido Inflamable, muy volátil y olor dulzon. Conserva bien estructuras antigénicas y la actividad Provocan una gran contracción tisular y por tanto grandes

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Page 1: Fijadores Simples y Mezclas

Mecanismo de Acción

FIJADORES SIMPLES

Características Datos Técnicos Ventajas Desventajas

Deshidratación celular

Alcohol Etílico(CH3-CH2OH)

No AditivoCoagulante

Preserva GLUCOGENO y la actividad de ciertas enzimas (fosfatasa, alcalina y acidas)

Fija pigmentos Uso en extensiones

citológicas(PAP, líquidos como la sangre y secreciones).

Buen fijador para IHQ (Altera escasamente las estructura antigénica).

Liquido Inflamable, muy volátil y olor agradable.

Preparación : tomar 70-90 ml de OH y llevar hasta 100 ml de agua destilada.

Tamaño corte : 5 mm Tiempo fijación : 2-4 hrs Renovación : 3 veces

Fija y deshidrata al mismo tiempo.

Gran velocidad de penetración

Precipita muy rápido las proteínas y el glucógeno (fijación rápida).

Agente bactericida (buen conservante).

Fuerte reductor, incompatible con fijadores oxidantes como el dicromato de K y tetróxido de osmio.

No fija adecuadamente la cromatina. Disuelve ac. nucleico y extrae parcialmente los lípidos.

Endurece y contrae excesivamente los tejidos.

Pierde su actividad al ir interactuando con el agua.

Carece de efecto mordiente (químicamente es un reductor, prepara mal la tinción).

Origina fenómeno de desplazamiento de sustancias.

Acetona(CH3-CO-CH3)

No AditivoCoagulante

Agente no aditivo y muy oxidante (su átomo de oxígeno puede compartir un par de electrones).

Uso limitado: IQ y IHQ Preserva muy exactamente la estructura antigénica y la actividad enzimática de estos.

Deshidrata violentamente. Miscible en agua e

incompatible con fijadores metálicos bivalentes. Generalmente se la emplea sola.

Liquido Inflamable, muy volátil y olor dulzon.

Preparación: Se usa sin diluir a 4ºC

Tiempo fijación : 2hrs. Máximo.

*Piezas delgadas se recomienda 20 min.

Conserva bien estructuras antigénicas y la actividad enzimática.

Rrecomendada para ácidos nucleicos y en IFD (detección de complejos autoinmunes: biopsia renal, hepática, piel o mucosa).

Uso en determinados estudios con MET.

Disuelve los lípidos y los carbohidratos se conservan (correcta precipitación de las proteínas).

Provocan una gran contracción tisular y por tanto grandes artefactos.

Fija muy rápido y endurece demasiado a los tejidos.

La rápida extracción del agua desde el tejido provoca una contracción nuclear, que deja un halo perinuclear epitelios).

Tiempo fijación muy controlado.

Page 2: Fijadores Simples y Mezclas

Mecanismo de Acción

FIJADORES SIMPLES

Características Datos Técnicos Ventajas Desventajas

Cambiosdel

estado coloidalde las

proteínas

Acido Acético(CH3-COOH)

No Aditivo Coagulante

Fijador ideal para NÚCLEO, PROTEÍNAS Y ACIDO NUCLEICOS.

Actúa rompiendo los puentes entre proteínas, exponiendo los grupos hidrofílicos, atrayendo el agua, siendo absorbido y produciendo expansión.

Forma parte de mezclas fijadoras y descalcificante.

Liquido transparente, de fuerte olor avinagrado.

Uso en concentraciones diluidas en 1-5%.

En estado puro: Ac. Acético glacial

Por debajo de los 10°C tiende a solidificarse (agujas cristalizadas muy cáusticas).

Fijador ideal de nucleoproteínas y ac. Nucleicos. Penetra rápidamente y deja el tejido muy blando Precipita proteínas sin sustraer el agua de los tejidos (no es giroscópico) y produce cierto edema intersticial, que compensa la excesiva retracción causado por otros agentes fijadores. Produce un aumento de volumen mayor que el resto de los reactivos fijadores.

Es mal fijador de citoplasma y membranas celular

No fija carbohidratos ni lípidos Destruye mitocondrias. No se utilizan en frotis

sanguíneos porque lisan los eritrocitos.

Acido Crómico(H2CrO4)

AditivoCoagulante

Forma parte de mezclas fijadoras.

Se utiliza en microscopia electrónica.

Se usa también como post-fijación con glutaraldehído.

Preparación: Uso en disolución de cristales de anhídrido crómico en agua. Disoluciones al 2% formando parte de mezclas fijadoras.

Es incompatible con fijadores habituales como el formol y alcohol (Ac. Crómico es oxidante).

Excelente fijador estructural

Por ser un fuerte oxidante actúa como un mordiente en tinciones que emplean colorantes básicos.

Es incompatible con fijadores reductores: formol y Alcoholes.

Escasa velocidad de penetración en trozos pequeños.

Impregna de coloración verdosa los tejidos por lo que hay que lavarlos abundantemente agua destilada

Por el uso de ese acido, los tejidos quedan excesivamente blandos.

Mecanismo FIJADORES Características Datos Técnicos Ventajas Desventajas

Page 3: Fijadores Simples y Mezclas

de Acción SIMPLES

Formación de

sales con el tejido

Cloruro de Mercurio

(HgCl2)

Aditivo Coagulante

Uso: patologías hematopoyéticas y renales (finos detalles nucleares y citoplasmáticos). Efecto fijador se produce por la combinación de los iones de mercurio (Hg+++) con grupos ácidos de las proteínas:

- COOH carboxilo- OH hidroxilo- *SH sulfhídrico- Residuos fosfóricos de las

nucleoproteínas. El efecto fijador se produce por la combinación de los iones de Mercurio con grupos ácidos de las proteínas.

Polvo cristalino muy toxico.

Uso bajo campana (venenoso).

Preparación: solución acuosa saturada.

Se usa en soluciones al 5-6%. Corte : 5mm de

espesor

Tiempo fijación: 4 hrs max.

Excelente fijador Morfológico celular

Excelente mordiente (ya que los puentes de H+ intramoleculares de las proteínas quedan preservados tras la fijación y pueden reaccionar con los colorantes).

Produce intensa y brillante coloración nuclear y citoplas mática, permitiendo finos detalles.

Reactivo muy corrosivo. Penetra poco (5mm espesor). Si se prolonga el tiempo de

fijación, el tejido se contrae y endurece (dificulta el corte).

Da origen a precipitados metálicos de color pardo.

Se eliminan (precipitados) mediante un tratamiento previo a la coloración con soluciones alcohólicas yodadas semejantes al lugol (deszenkerizacion).

Por la intensa eosinofilia citoplasmática que provoca, puede dificultar el reconocimiento de las zonas de necrosis tisular.

No es un buen bactericida.

Dicromato de Potasio

(K2Cr2O7)

AditivoNo Coagulante

Reacciona con las proteínas para formar cromatos.

Excelente fijador para LIPIDOS COMPLEJOS (mielina, golgi y mitocondrias).

Forma parte de mezclas fijadoras, el ion cromo tiende a formar complejos

Polvo rojo amarillento. Preparación: Se utiliza en

disolución acuosa al 1-2%.

pH optimo: 4.4 A un pH mayor están disociados la mayor parte de los grupos carboxilos)

Previo a la fijación lavar en una solución salina o tamponada para evitar el

Fuerte efecto mordiente al oxidar los grupos alcohólicos de las grasas y polisacáridos a aldehídos y por incrementar la basofilia de las proteínas cuando se emplea a un pH fuertemente acido.

Su uso es indispensable para demostrar la reacción

Por ser un fuerte oxidante es Incompatible con el alcohol y formol.

Baja velocidad de penetración. Endurece escasamente los

tejidos. Provoca artefactos tisulares

(aparición de vacuolas citoplasmáticas, retracción y cambios de morfología nuclear).

En soluciones no acidificadas el Dicromato disuelve la cromatina. Por ello es necesario asociarlo

Page 4: Fijadores Simples y Mezclas

Formación de

sales con el tejido

con el agua. Estos grupos constituyen quelatos con las proteínas, al reaccionar con los grupos aminos y carboxilos de estas.

depósitos de pigmentos verde.

cromafin y realizar técnicas de golgi, para técnicas de impregnación argéntica de las células nerviosas.

Las mitocondrias quedan perfectamente fijadas y da aspecto homogéneo al núcleo.

con el ac. Acético o triclocloacetico dentro de mezclas fijadoras.

Después de su fijación, los tejidos han de ser lavados con abundantemente en solución salina o tamponada para evitar depósitos de pigmentos verdes tras reducirse el trióxido crómico (CrO3) a oxido crómico (Cr2O3) en el curso de la inclusión o coloración.

Acido Pícrico

AditivoCoagulante

Actúa coagulando proteínas a través de la formación de picratos que confieren gran apetencia por colorantes ácidos. Es un excelente fijador

estructural, conserva la composición proteica de los tejidos. Fijador de glicógeno,

lípidos y medula ósea. .

Forma de agujas cristalizadas de color amarillo.

Uso: solución saturada al 2%.

Tiempo Fijación: 4-18 horas, dependiendo del tamaño de la pieza aparecen inconvenientes por una excesiva retracción tisular

Excelente fijador estructural, conserva adecuadamente la composición proteica de los tejidos.

Control adecuado del tiempo de fijación, produce una óptima contracción de los tejidos.

Penetración algo lenta, posee buena velocidad de fijación

No disuelve el glicógeno ni los lípidos es el fijador de elección para estas sustancias.

Posee una leve acción decalcificante.

Muy toxico y explosivo. No dejar evaporar sus

disoluciones par evitar la formación de precipitados.

Si se prolonga el tiempo optimo, provoca excesiva retracción tisular y de la disolución que provoca sobre los precipitados calcacicos y hemosiderina.

No puede ser utilizado para ciertos tejidos porque los hace frágiles u quebradizos.

Tiñe los tejidos de color amarillo y si no se elimina antes de la inclusión en parafina provoca un continuo deterioro. Luego de la fijación debe realizarse lavados sucesivos en OH de 70°-80° o la solución saturada de carbonato de litio en OH de 70 °.

Incompatible con la celoidina.

Page 5: Fijadores Simples y Mezclas

Reticulaciónde

Proteínas

Formaldehído o Formol(CHOH)

AditivoNo Coagulante

Excelente fijador para

todo.

MECANISMO DE ACCION:

-Reacciona con las proteínas.

-Rompe enlaces covalentes

entre polipéptidos.

-Ataca grupos que tienen un

H activo (grupo hidroximetil).

-Poder coagulante y alta

capacidad de penetración.

- La producción de acido

fórmico daña los tejidos.

-Produce hinchamiento del

tejido y vacualiza las células.

-Disminuye el contraste entre

el núcleo y el citoplasma.

Es gaseoso en estado puro, se vuelve liquido a 21ºC

Se disuelve fácilmente en agua.

En concentraciones de 37% y estabilizado con metanol se denomina formalina o formol.

Por acción del frío la formalina pura tiende a precipitar al polimerizarse hacia paraformaldehido (es reversible al añadir gotas de hidróxido sódico y calentar la mezcla).

Preparación: Solución diluida 1:10 con agua o buffer.

Es el fijador mas barato, de elección para los trabajos de rutina.

Buen fijador, único que determina una moderada conservación de la estructura tisular.

Alta capacidad de penetración.

Fácil de preparar y estable.

Por ser buen desinfectante y no endurece excesivamente los tejidos.

Medio óptimo para conversar y almacenar biopsias.

Provoca escasa retracción tisular.

Posee una velocidad de penetración intermedia (1mm/hora)

Es tóxico.

Produce vapores de carácter irritante sobre la conjuntiva y mucosa nasal.

Por acción de la luz y del oxígeno atmosférico se transforma progresivamente en ácido fórmico y ésta sustancia disuelve rápidamente la cromatina nuclear, con el paso del tiempo los núcleos adoptan un aspecto de fantasma (por eso el formol debe guardarse en frascos opacos o emplear la solución neutra o tamponado).

Debido a que su incorporación es progresiva en el tejido en forma de puentes metílicos, el formaldehído se consume durante la fijación, por lo cual debe encontrarse siempre en exceso.

Su uso no amortiguado disminuye la basofilia.

Por su acción polimerizarte disminuye la reacción de PAS.

Page 6: Fijadores Simples y Mezclas

MEZCLAS FIJADORAS

PREPARACION USO ACCION

BouinSOLUCIÓN ACUOSA DE ÁC. PÍCRICO(ÁC. PÍCRICO AL 1-2% EN AGUA DESTILADA)… 750.0 ml FORMALINA CONCENTRADA……………… 250.0 ml. ÁC. ACÉTICO GLACIAL……………...…………...50.0 ml. PH. FINAL……………………………..…….………… 2.2 TIEMPO DE FIJACIÓN……………….……. 2 a 24 horas

Piel

Órganos endocrinos

Testículo

Tejido embrionario

Hígado

ganglio

*Sin embargo no es recomendado para la fijación de biopsias renales sobre los cuales provoca una severa distorsión

Es uno de los mejores fijadores para el estudio del glucógeno; penetra rápidamente a los tejidos.

Es un buen fijador general, salvo para el riñón (provoca distorsión).

La expansión de volumen provocada por el ácido acético es contrastado por la retracción del ácido pícrico.

La tinción amarilla producida por el ácido pícrico se retira con la aplicación de Alcohol 70%, sino causa deterioro en la coloración.

Es muy adecuado para las coloraciones de Masson y Mallory.

Produce poco encogimiento. El líquido completo es una solución estable. Este fijador produce lisis de los glóbulos rojos y disminuye

la cantidad de hierro férrico demostrable. - Los tejidos no deben permanecer por más de 12 a 24 h. pues sino se vuelven duros y quebradizos.

Una vez terminada la fijación se debe pasar directamente a la deshidratación con alcohol 80°.

Page 7: Fijadores Simples y Mezclas

Bouin – Hollander

ACETATO NEUTRO DE COBRE…………..……2.5 gr. ÁC. PÍCRICO……………………………….…….…...4.0 gr. FORMALINA CONCENTRADA………..…....10.0 ml. ÁC. ACÉTICO GLACIAL……………………....….1.5 ml. AGUA DESTILADA……………………………..100.0 ml.

Para preparar la solución se disuelve primero la sal de cobre en el agua destilada luego se añade el ácido pícrico y tras filtrarlos el formol y el ácido acético glacial.Esta solución se conserva indefinidamente a temperatura ambiente el tiempo de fijación oscila entre 48-72 horas.

Medula ósea

Es una variante del liquido de Bouin, indicado para la fijación de los cilindros de biopsia de médula ósea cuando no es posible controlar el tiempo de fijación de la muestra en éste líquido, la conservación, puede incluso conservar las 48 horas sin que se produzca excesivo endurecimiento.

Bouin alcohólico

ALCOHOL ETILICO 80%........................75.0 ml. ÁC. PÍCRICO………………………………..………0.5 gr. FORMALINA CONCENTRADA……….…...30.0 ml. ÁC. ACÉTICO GLACIAL……………………..….7.5 ml.

Mezclar antes de usar el tiempo medio de fijación para fragmentos con un espesor en torno a 5 milímetros es de 2 a 3 horas.

Glucogeno Hígado Ganglios Piel

Es una alternativa de líquido de Bouin, se usa para fijaciones relativamente voluminosa porque posee una velocidad de penetración mucho mas elevada.

Page 8: Fijadores Simples y Mezclas

ZENKERSolución stock de Zenker: CLORURO MERCÚRICO………………………5gr. DICROMATO POTÁSICO……………….…..2.5 gr. SULFATO SÓDICO ……………………………1 gr. AGUA DESTILADA C.S.P. …………..…..100.0 ml.

El ácido acético reacciona con el dicromato y hace que la solución se oscurezca progresivamente, por lo que debe recomponerse antes de su uso.

Bazo Medula ósea Trata de combinar los efectos favorables del sublimado y

del dicromato potásico. En la práctica habitual ha sido sustituido por B5.

Su empleo ha quedado prácticamente restringido al proceso de refinación-descalcificación a que son sometidas las biopsias de médula ósea cuando se realiza una fijación inicial con B5.

El tiempo de fijación puede ser mas prolongada que con la solución de b5 porque el ácido acético que contiene, produce un excesivo endurecimiento. Pero no se deben sobreasar las 48 horas.

Tras la fijación el material debe ser tratado con sulfato sódico al 5% durante 1-2 horas.

El bicloruro de mercurio es una sustancia que corroe el instrumental metálico. Es un fijador adecuado para las muestras a las que se les aplique IHQ.

Antes de emplear las tinciones es necesario eliminar de los tejidos, los pigmentos precipitados del bicloruro de mercurio

Page 9: Fijadores Simples y Mezclas

B5 CLORURO MERCÚRICO…………… 12.0 gr. ACETATO SÓDICO....………………….2.5 gr. AGUA DESTILADA……..………..…….200 ml.

Solución es inestable ya que formaldehído reduce el sublimado. Aparición de precipitados mercúricos sobre los tejidos antes de ser coloreados. Se someten a un tratamiento específico mediante soluciones que eliminan estos depósitos.

RiñónEspesor máximo de las muestras no mas 4 mm (escaso poder de penetración de la mezcla).

El tiempo de fijación no debe superar las 4 horas.

Tras la fijación los tejidos se pueden conservar indefinidamente en alcohol etílico al 70-80.

La mayor utilidad de estos fijadores es que mejoran considerablemente la tinción nuclear, de hecho la fijación en una mezcla que contenga sublimado es hoy día prácticamente imprescindible para el diagnóstico morfológico en las patologías del sistema linfoide y hematopoyético. Es debido a la gran importancia que se da a la observación de finos detalles nucleares como es la presencia o no de hendiduras o repliegues nucleares y del nucleolo para catalogar un tumor maligno de ganglios linfáticos, o de médula ósea (leucemias) como de alto o bajo grado de malignidad y por tanto recomendar la terapéutica más oportuna.

Además estas soluciones B5, zenker formol son los fijadores de elección para el riñón, hígado, fibras de tejido conectivo y para fibrina. Se prefiere la solución de B5 porque al no contener dicromato, esto permite una mejor conservación de la cromatina nuclear y de la estructura antigénica tisular

Page 10: Fijadores Simples y Mezclas

CARNOY

ETANOL ABOSLUTO……………....60.0 ml. CLOROFORMO…………………….30.0 ml. ÁC. ACÉTICO GLACIAL…………..10.0 ml.

El tiempo de fijación puede ser acortado hasta 3 horas. Las muestras deben cambiarse directamente a alcohol etílico absoluto. El mayor endurecimiento se produce al prolongar demasiado la deshidratación en alcohol, para prevenirlo se puede sustituir el etanol por metanol en la composición de líquido fijador y para conservar la pieza se deposita en alcohol etílico absoluto.

Glucogeno Hidratos de carbono Proteínas fibrilares Miofibrillas Hígado

Su acción fijadora es extremadamente rápida deshidratando el tejido al mismo tiempo, sin embargo produce una excesiva retracción mística y una hemólisis masiva de eritrocitos así como una pobre conservación estructural del ADN.

Este fijador es muy adecuado para pequeños fragmentos tisulares, por Ej. obtenidos por raspado, que se fijan bien en 30 min. a 2 h.

También inicia la deshidratación, es un buen fijador para el glucógeno, los núcleos se tiñen bien.

Como inconvenientes podemos citar que produce lisis y encogimiento importante.

Disuelve los lípidos y la mielina.

Es un fijador que posee un excelente poder de penetración y de difusión.

Las muestras delgadas de tejidos y órganos se fijan en dos o tres horas.

Produce lisis de los eritrocitos. Es el fijador adecuado cuando se desea demostrar glucógeno y la tinción de núcleos y especialmente cromosomas.