MANUAL DE INSEMINACION ARTIFICIAL PORCINAEvaluacin Seminal e Inseminacin ArtificialMara Elizabet Buritic H.Zootecnista. Reg. MP. 00485 Universidad Nacional de Colombia. Asistencia Tcnica Medelln, Colombia

Celular: 310 830 78 62elizabetburitica@gmail.com

INTRODUCCINLa necesidad de mejorar genticamente la piara implica la obtencin de reproductores que mejoren caractersticas de importancia econmica, debido al costo de estos reproductores se busca su mxima utilizacin, y solo se consigue por medio de inseminacin artificial (I.A), con la que se puede lograr que un macho cubra hasta 10 hembras con doble inseminacin por semana, obteniendo aproximadamente 5000 lechones al ao, de esta manera se consigue mayor intensidad en el uso de los machos. El logro del xito de una explotacin porcina depender tanto de factores tcnicos como econmicos, exigiendo una adecuada administracin y planeacin de actividades en el proceso productivo. Uno de los factores ms importantes a tener e cuenta en la evaluacin e implementacin del programa es el factor humano, de tal forma que el xito de la I.A requiere de precisin, paciencia, confianza, curiosidad y ser buenos tcnicos de I.A. A medida que el tcnico encargado comienza a aprender y practicar las tcnicas necesarias para lograr una I.A. exitosa, la persona se dar cuenta de que algunas tcnicas son mas fciles de aprender que otras. Muchas personas creen que las partes fciles de I.A sern las difciles tcnicamente y viceversa. Las tcnicas requeridas para el manejo del semen y del equipo de inseminacin son relativamente fciles de aprender, an cuando mucha gente cree que son difciles de llevar a cabo. En contraste con estas creencias, la deteccin de estro y la coordinacin de la I.A con el tiempo adecuado para la inseminacin, son tareas que mucha gente cree fciles y que en realidad son bastante difciles.

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BENEFICIOS Y VENTAJAS DE LA INSEMINACIN ARTIFICIAL. Mejora gentica: Se reduce notablemente El nmero de machos, Debido a una mayor proporcin de hembras a servir con cada macho, es conveniente aumentar la calidad de los mismos. Cada macho tendr una influencia mayor sobre la siguiente generacin, logrando as una ms rpida transmisin de las caractersticas deseadas. Mayor difusin gentica de los sementales de mayor calidad, en un perodo de corto tiempo. Sanidad: Con El uso de I.A se controlan muchos problemas infecciosos que se transmiten con la monta directa. Entre ellos los problemas de infeccin causantes de descargas vaginales que tan fcilmente se pueden propagar en granjas que usan monta natural. Se reduce el riesgo de transmitir enfermedades infectocontagiosas por va sexual. Se reduce la entrada de animales portadores de enfermedades del exterior Control de calidad seminal. Fertilidad: Los resultados de fertilidad y prolificidad pueden llegar a superar a los de monta natural Mejorar la programacin: Se evita la sobre utilizacin de los machos. Permite utilizar animales de diferentes pesos en el cruce. Costos: Ahorro en instalaciones, alimentacin del macho y mano de obra. El costo de servicio por dosis se reduce ostensiblemente. Es necesario tener cuidado de no caer en un ambiente de excesiva confianza que lleve a hacer las cosas rpidamente, descuidando los detalles que requiere El proceso. 3

Los servicios por inseminacin en fresco se realizaran todos los das a las 8:00 am y a las 5:00 pm nicamente, estos horarios sern de estricto cumplimiento siempre buscando las horas ms frescas del da. Las I.A las realizaran dos operarios como mnimo. Se utilizaran reproductores como donadores de semen los cuales tendrn como mnimo 4-7 das de descanso antes de la prxima toma de semen. Se deben llevar registros del nmero de servicios, nmero de cerda, nmero de reproductor, fecha, de cada servicio y eyaculado. Los materiales usados para la inseminacin deben ser desechables, se recomienda el uso de lubricante para introducir el catter en la hembra.

FALLAS EN INSEMINACIN ARTIFICIAL. No cumplir con las condiciones higinicas del material en contacto con el semen, si no se hace la adecuada seleccin del reproductor puede transmitir problemas con mucha ms rapidez que con monta natural. No realizar una buena evaluacin del semen. Variaciones de temperatura en el semen. Exceso de confianza. Si no se ejecuta el programa correctamente los resultados econmicos y tcnicos pueden ser funestos.

REQUISITOS Para obtener resultados en la inseminacin en la I.A de la cerda, se hace necesario una adecuada y oportuna deteccin de celo para conocer el momento ptimo de la I.A. Disponer de un tcnico para el manejo del laboratorio y del semen. Utilizacin de material desechable (envases y catter) con el fin de evitar problemas sanitarios. 4

PREPARACION DEL LABORATORIO PARA PROCESAR SEMEN: BIOSEGURIDAD La BIOSEGURIDAD se define como el conjunto de medidas preventivas destinadas a mantener el control de factores de riesgo laborales provenientes de agentes biolgicos, fsicos o qumicos, logrando la prevencin de impactos nocivos, asegurando que el desarrollo o producto final de dichos procedimientos no atenten contra la salud y seguridad de trabajadores de la granja. LAVADO DE MANOS El lavado de manos con jabn corriente o detergente (barra, grnulos o lquidos), es la forma ms eficaz de prevenir la infeccin cruzada entre animales, personal y visitantes. Se realiza con el fin de reducir la flora normal, remover la flora transitoria y disminuir la diseminacin de microorganismos infecciosos, al dejar los microorganismos en suspensin, permitiendo as removerlos. Se debe realizar en los siguientes casos. Antes de iniciar labores en el laboratorio Antes de la toma de semen Despus de la toma de semen y antes del procesamiento Al finalizar labores

Recomendaciones: Los guantes deben ser de VINILO y no de LATEX y deben cambiarse entre toma de semen de diferentes reproductores, puesto que despus de ser utilizados se convierten en una fuente de contaminacin externa y ambiental. Es importante al uso de los guantes con la talla adecuada, dado que el uso de guantes estrechos o laxos la ruptura y accidentes laborales.

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MANEJO CUIDADOSO DE ELEMENTOS CORTOPUNZANTES Durante la manipulacin, limpieza y desecho de elementos corto-punzantes (agujas, bisturs, tijeras etc.), el personal de la granja deber tomar rigurosas precauciones, para prevenir accidentes laborales. La mayora de las punciones accidentales ocurren al re-enfundar las agujas despus de usarlas o como resultado de desecharlas inadecuadamente (por ejemplo: en bolsas de basura). El desecho de elementos corto-punzantes se debe realizar en recipientes de metal o plstico los cuales una vez llenos se inactivan con solucin de hipoclorito de sodio , se llenan y se rotulan como Peligro Material Contaminado. Este procedimiento se hace con el fin de prevenir cortes y pinchazos accidentales con objetos contaminados con sangre y otros fluidos potencialmente infectados durante el proceso de desecho y recoleccin de basura. Una vez lleno el recolector (guardin), se le agrega una solucin de hipoclorito de sodio al 0.5% (5000 ppm) durante 30 minutos para su inactivacin, posteriormente se le vierte la solucin de hipoclorito al desage, se sella el guardin, se coloca en una bolsa roja para su recoleccin y posterior incineracin. Recomendaciones: Desechar las agujas e instrumentos cortantes una vez utilizados en recipientes de paredes duras e imperforables (guardin), los cuales deben estar situados lo ms cerca posible del rea de trabajo para su desecho. No desechar elementos corto-punzantes en bolsas de basura, cajas o contenedores que no sean resistentes a punciones. Evitar tapar, doblar o quebrar agujas, lminas de bistur u otros elementos corto-punzantes, una vez utilizados.

DESCONTAMINACIN, DESINFECCIN Y ESTERILIZACIN DE EQUIPOS E INSTRUMENTAL Limpieza de equipos e instrumentos: La limpieza o descontaminacin de los equipos e instrumentos, se realiza para remover organismos y suciedad, garantizando la efectividad de los procesos de esterilizacin y desinfeccin.

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El personal que labora en las reas donde se estn descontaminando y reprocesando los instrumentos y equipos, deben usar ropa adecuada y limpia que los proteja de microorganismos y residuos potencialmente patgenos presentes en los objetos sucios e igualmente minimizar la transferencia de microorganismos a los instrumentos y equipos. Recomendaciones: Se deben utilizar guantes de caucho para realizar los procesos de limpieza

DESINFECCIN La desinfeccin es un proceso fsico o qumico que destruye la mayora de los microorganismos patgenos y no patgenos, pero rara vez elimina las esporas. Se pueden clasificar tres niveles de desinfeccin que se deben realizar en un laboratorio de procesamiento de semen. Desinfeccin de alto nivel Destruye todos los microorganismos (bacterias, hongos y virus) con la excepcin de las esporas. Es aplicable para instrumentos que tienen ntimo contacto con el semen procesado o con las mucosas de los animales. Existen varios mtodos de desinfeccin pero por motivos prcticos se describen los que mas se utilizarn el laboratorio de procesamiento de semen. Fsicos Pasteurizacin: ebullicin de agua de 80C - 100C sumergiendo los materiales durante 30 minutos a partir de la ebullicin. No es muy eficiente, ya que no es esporicida ni destruye algunos virus e incluso algunas bacterias termo-resistentes.

Qumicos Hipoclorito de sodio: El cloro es un desinfectante universal, activo contra todos los microorganismos. En general se utiliza en forma de hipoclorito de sdico, excelente desinfectante, bactericida y virucida. Es inestable y disminuye su eficiencia en presencia de luz, calor y largo tiempo de preparacin. 7

Es ideal para remojar el material usado antes de ser lavado e inactivar secreciones como heces y orina en el laboratorio. Es altamente corrosivo por lo tanto no debe usarse por mas de treinta minutos ni repetidamente en material de acero inoxidable. Es un qumico econmico que se consigue comercialmente de forma liquida a una concentracin entre 4% al 15%. Requisitos Preparar la dilucin diariamente antes de su empleo Utilizar recipientes que no sea metlicos Mantener el producto en un lugar fresco y protegido de la luz Utilizar la concentracin recomendada segn la necesidad

La cantidad de cloro requerido para un alto nivel de desinfeccin depende de la cantidad de material orgnico presente. Se ha definido las siguientes concentraciones de acuerdo al nivel de desinfeccin que se necesite. Desinfeccin de material limpio: es aquel que no esta contaminado con fluidos corporales. Se requiere diluciones de hipoclorito entre el 0.05% y 0.1%. Desinfeccin de material contaminado: es aquel que esta contaminado con semen, sangre, heces etc. Se requiere diluciones de hipoclorito de 0.5%. a esta concentracin el producto es muy corrosivo por ello debe vigilarse el tiempo de inmersin de los objetos y evitar usarlo frecuentemente en superficies de acero inoxidable. Desinfeccin de superficies reas crticas: Se requiere diluciones de hipoclorito 0.5% reas no crticas: Se requiere diluciones de hipoclorito de 0.25% Bata de laboratorio contaminada: Se requiere diluciones de hipoclorito de 0.1%.

Desinfeccin de nivel intermedio Inactiva la mayora de bacterias patgenas, virus y hongos pero no destruye necesariamente las esporas. Es aplicable para los instrumentos que entran en contacto con piel intacta pero no con mucosas y para instrumentos que hallan sido visiblemente contaminados con semen o fluidos corporales. 8

Agentes desinfectantes Alcohol etlico o isoproplico al 70% Hipoclorito en concentracin baja 0.02% Desinfeccin de nivel bajo Se utiliza para la limpieza de pisos y reas que no estn comprometidas directamente con el procesamiento de semen. Para este proceso se utilizan detergentes comerciales e implementos de aseo nicos para el laboratorio

ENTRENAMIENTO DEL MACHO El verraco es un animal muy peligroso y por esto se debe tener cuidado en su manejo. Algunos verracos montan el potro sin estmulos especiales, sin embargo otros verracos necesitan que se les estimule, y ste estimulo puede ser de diferentes formas. El tiempo de entrenamiento del macho es variable y depende mucho de la libido del verraco, cada animal se toma su tiempo para montar el maniqu. En las primeras sesiones de entrenamiento, conviene que sea el mismo operario el que maneje a los verracos hasta terminar el entrenamiento de ste, luego se recomienda que el macho se acostumbre a otra persona para la toma de semen, esto es con el fin de que si el encargado de hacer las tomas no se encuentra en el momento el macho no lo extrae. Para estimularlos, se debe colocar en diagonal respecto al macho con el potro en medio de ambos (esta norma debe de cumplirse con mayor razn cuando se est trabajando con un macho adulto), y despacio se le echar semen de otro macho que se haya recogido, sobre el potro o se puede utilizar la tapioca u orines de cerdas en calor. Estas sesiones deben ser diarias, dos veces al da (maana y tarde), ojal a la misma hora, con una duracin de entrenamiento de 15 a 20 minutos, siempre y cuando el macho no se estrese con facilidad. El entrenamiento de los machos es de las etapas ms importantes en un programa de inseminacin artificial, ya que de un buen entrenamiento depende del xito del programa.

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FRECUENCIA DE UTILIZACIN DE LOS REPRODUCTORES Una vez se ha logrado que el macho monte el potro y se haga la toma de semen, se procede a organizarles un ritmo de recogida de semen as: EDAD DEL MACHO De 9 a 12 meses De 12 o ms meses TOMA DE SEMEN Un eyaculado por semana 2 veces por semana, teniendo en cuenta de dejarlo descansar entre toma mnimo 4 das.

Es importante que los machos que por cualquier motivo su semen no pueda ser utilizado, se le deben seguir haciendo la toma de semen semanalmente como se haya programado, con el fin de evitar que se almacene en la cola del epiddimo semen envejecido. Se debe llevar un formato de frecuencia de recogida de semen, as: MES____________ MACHO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 ... 31

ENTRENAMIENTO DEL PERSONAL PARA LA RECOLECCIN DE SEMEN Se les har nfasis en la higiene del operario, del macho y del equipo de recoleccin. Los pasos a seguir son: Preparacin del equipo para recoger el semen: Todo el material que vaya a estar en contacto con el semen debe estar limpio, estril, y temperado a 37C. 10

- El termo se debe preparar con anticipacin. La bolsa de recoleccin Se coloca dentro del termo, luego se fija el filtro en la boca del termo con la bolsa ya instalada que se ajustar con las bandas de caucho. Preparacin del sitio de recoleccin: El saln debe estar libre de objetos que puedan distraer al macho. - El potro debe estar seco, pero conservando el olor a orines de cerda en celo, semen de otro macho, o de tapioca. - El saln de recoleccin no debe tener materiales que provoquen la acumulacin de polvo (pasto, aserrn, viruta). -

Manejo del verraco en la toma de semen: Cuando el macho se encuentre en la sala de recoleccin, debe llegar limpio y con la bolsa prepucial vaca. En la sala se debe terminar de vaciar la bolsa prepucial, lavar y secar la parte ventral del macho. Para esto se utilizar un guante desechable transparente de plstico.

Indicacin del personal en la extraccin del semen: El objetivo que tenemos que tener en todos los casos es el de producir semen de calidad bacteriolgica aceptable a los efectos de evitar las contaminaciones bacterianas y/o virales que perturben la conservacin del semen o sean responsables de la transmisin de enfermedades a las cerdas. A tales efectos es altamente recomendable trabajar con maniqu limpio, duchar o desinfectar el prepucio, utilizar la tcnica de la mano con dos guantes, uno de plstico y otro de vinilo NO DE LATEX (el primero destinado a limpiar la zona prepucial y vaciar el divertculo del mismo, y el segundo, limpio, destinado a atrapar el pene). Cuando el macho asome la punta del pene, este se sujeta colocando la mano enguantada, de tal forma que los dedos queden al borde del espiral del pene, luego se debe ejercer una presin suave y se va aumentando hasta que el macho tiene la ereccin, en donde no debe moverse la mano cambiando la presin. En este momento empieza a eyacular y el pene se desva hacia el termo de recoleccin. Se recoge solo la fraccin rica del eyaculado o fraccin espermtica, la primera fraccin y la ltima se deben desechar. El eyaculado recogido es llevado de inmediato al laboratorio, en caso de que el saln de recoleccin est distanciado del laboratorio el termo debe estar tapado y ojal dentro de una caja de icopor para prevenir cambios bruscos de temperatura. 11

ENTRENAMIENTO DEL PERSONAL EN EL LABORATORIO Por medio de este se entrenar al personal para que adquiera habilidades en la preparacin del equipo de laboratorio: Preparacin del laboratorio: El operario debe entrar limpio al laboratorio Lavarse las manos antes de empezar a preparar los equipos. Limpiar con alcohol el mesn, las paredes y sacudir los equipos, trapear con una desinfectante. La vidriera debe estar esterilizada con anterioridad. Prender el bao mara para que vaya estabilizando la temperatura, se coloca al tiempo las bolsas de agua que necesite para preparar el diluyente. Prender la platina trmica, programada entre 37C y 39C, colocar sobre sta los cubres y porta necesarios para la evaluacin seminal, igualmente las pipetas Pasteur para las tomas de las muestras de semen. Luego de tener estabilizada la temperatura de los equipos, se procede a preparar el diluyente, este se debe dejar estabilizar a 35C como mximo. El termo de recoleccin se prepara colocando agua caliente por 5 minutos tapado, se desecha el agua, se seca y se procede a colocar la bolsa de recoleccin con su respectivo filtro.

Al recibir el eyaculado se analizar y estudiarn los siguientes parmetros: 1. Evaluacin Macroscpica que consta de: Se coloca una parte de semen (3 ml) en un tubo de ensayo para ser evaluado o bien se puede hacer la siguiente evaluacin cuando se usa bolsa de recoleccin, as: Color: el color del eyaculado debe de ser cremoso, blanco o marfil. Las tonalidades amarillas verdes, rosadas o castaas indican suciedad o contaminacin de origen patolgico (pus, bacterias, orina). Este tipo de eyaculado debe descartarse. 12

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Olor: un eyaculado limpio tiene poco olor, debe ser de olor proteico neutro. La existencia de olores fuertes o especficos del verraco indican que el eyaculado est contaminado de orina y secrecin prepucial. Sustancias extraas: No deben estar presentes. La presencia de aserrn, viruta, trazas de pasto, polvo, tierra, moco o pus son causales de descarte de la muestra seminal. pH: el pH del esperma debe estar entre 6.8 y 7.1. Un eyaculado con pH disminuido nos indica un aumento de cido lctico, lo que a la vez reduce la movilidad de los espermatozoides. Las variaciones extremas del pH se presentan cuando se afectan las glndulas accesorias, con lo que fcilmente puede alterarse la calidad del eyaculado. Para esta evaluacin se utiliza la cinta de pH, se toma una pequea muestra de semen con una pipeta pasteur y se coloca distribuyndolo sobre la cinta de pH, la lectura se hace inmediatamente. Volumen del eyaculado: puede fluctuar entre 150 a 250 ml de acuerdo con la edad del animal, con la tcnica de obtencin del semen y con las caractersticas individuales. Para la medicin se debe pesar el envase de recoleccin sin el filtro, luego se volver a pesar con el eyaculado y se saca la diferencia de los pesos, dndonos el volumen del eyaculado, un gramo de semen es igual a un ml de semen.

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2. Evaluacin Microscpica que consta de: Se coloca una gota de semen encima de un portaobjetos atemperado a 37 C en una mesa trmica (con temperatura programable), utilizando para esto una pipeta Pasteur de plstico, luego de colocar la gota se cubre con un cubreobjetos. Movilidad Individual: esta es una prueba subjetiva que requiere entrenamiento y prctica. La cantidad de movimiento se valorar entre 0 a 100%. La movilidad es la medida de la viabilidad del semen. Un examen de movilidad consiste en evaluar que proporcin de esperma muestra un movimiento progresivo Calidad de movimiento: una vez se ha determinado e porcentaje de espermatozoides que se mueven se realiza una valoracin de calidad del movimiento, la cual se valorar de 0 a 5 as: 13

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Movimiento Tipo 0: No hay movimiento Movimiento Tipo 1: Las clulas vibran Movimiento Tipo 2: Las clulas vibran y a veces consiguen desplazarse Movimiento Tipo 3: Las clulas se desplazan constantemente pero la mayora de sus desplazamientos son en crculos Movimiento Tipo 4: Las clulas se desplazan constantemente y la mayora de los desplazamientos son progresivos Movimiento Tipo 5: Todos los desplazamientos son progresivos y muy rpidos Concentracin: Determina en nmero de espermatozoides por ml o por eyaculado; su medicin se efecta mediante foto colorimetra, densitometra o por recuento en cmara de Neubauer (Hemocitmetro) o de Brker. La cantidad de espermatozoides encontrados en el eyaculado, determina cuantas hembras pueden inseminarse, cada una con el ptimo de clulas espermticas. La concentracin del eyaculado oscila entre 250 y 650 millones por ml a partir de 650 millones/ml se califica como muy buena concentracin. La concentracin mnima que justifica el empleo del eyaculado en la inseminacin artificial no debe ser inferior a 150 millones de espermatozoides por ml. Morfologa: la evaluacin de la morfologa del esperma es otra manera de determinar la viabilidad del semen. La proporcin de espermatozoides anormalmente conformados y de espermatozoides con gota citoplasmtica sirve como criterio para evaluar la capacidad del verraco para la reproduccin. PREPARACIN DEL DILUYENTE Y DILUCIN DEL SEMEN El semen se diluye con objeto de aprovechar al mximo los espermatozoides contenidos en un eyaculado. Para una fecundacin se consideran suficientes 3.000 millones de espermatozoides con movimiento de propulsin. Tambin se pretende con el diluyente proporcionar a los espermatozoides un medio que conserve su vida y su capacidad fecundante el mayor tiempo posible. Requisitos que debe reunir el medio de dilucin: Constituir un lquido isotnico y afn al semen (presin osmtica) Permitir realizar un grado mximo de dilucin Desarrollar accin conservadora, es decir, que el esperma debe conservar con el diluyente su vitalidad y capacidad fecundante durante varios das. 14

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Ser de fcil preparacin

El diluyente se debe preparar el mismo da que se va a utilizar. Se precalienta el agua destilada a 35C para diluir el polvo del diluyente; el agua se echar en un frasco reactivo de 1 litro y luego se procede a adicionar el polvo (se mide un litro de agua exacto - por un sobre de diluyente), luego se deja reposar el diluyente reconstituido por media hora. Una vez que el diluyente est estabilizado se procede a diluir el semen. Para la preparacin de las dosis se debe tener la concentracin de semen /ml (# de espermatozoides/ml) y conociendo el volumen, se puede hallar el nmero total de espermatozoides que hay en el eyaculado. Ejemplo: Se prepararn dosis de 3x109 espermatozoides (la concentracin de las dosis puede variar entre 2.5 y 6 x 109). Hay que tener en cuenta que entre ms concentrada est la dosis menos tiempo de almacenamiento puede tener. CONCENTRACIN Determina el nmero de espermatozoides por unidad de volumen (o por eyaculado); su medicin se efecta mediante fotometra, o por medio de cmaras de recuento Neubauer (Hemocitmetro) o Brker. La cantidad de espermatozoides encontrados en el eyaculado, determina cuantas hembras pueden inseminarse, con el ptimo de clulas espermticas (3000.000.000). La concentracin del eyaculado oscila entre 250 y 650 millones por ml, a partir de 650 millones/ml se califican como muy buena concentracin. La concentracin mnima que justifica el empleo del eyaculado en la inseminacin artificial no debe ser inferior a 150 millones de espermatozoides por ml. De manera general, las cmaras de recuento se utilizan para determinar el nmero de partculas por unidad de volumen de un lquido. Las partculas como leucocitos, eritrocitos, trombocitos, bacterias, esporas, polen o semen, etc. Las placas base en vidrio ptico especial tiene el tamao de un portaobjetos. En el tercio medio se hallan cuatro ranuras longitudinales, que transcurren en paralelo con respecto a laterales cortos. Las dos superficies laterales ms grandes estn rectificadas planas y pulidas. La superficie del puente central es ms profunda que los dos puentes exteriores por lo cual cuando se coloca la lmina de cuarzo sobre los puentes exteriores, se forma una ranura capilar con una profundidad de 0.1 mm, entre la cara inferior y la lmina 15

de cuarzo (figura 1A). En el campo central (fondo de la cmara) estn grabadas dos cuadrculas de recuento separadas una de otra por una ranura (figura 1B). La limitacin lateral del volumen a contar se forma mediante las superficies imaginadas por la proyeccin vertical sobre las lneas exteriores de la cuadrcula de recuento. A B

Figura 1. Cmara de recuento Neubauer. A. Vista lateral. B. Vista superior. Recuento en Cmara de Neubauer: La cuadricula de recuento (Neubauer) muestra 9 cuadrados grandes, cada uno de 1 mm2. Los 4 cuadrados grandes de las esquinas sealados con una letra L estn divididos en 16 cuadrados con aristas de 0.25 mm. Se utilizan para el recuento de leucocitos (figura 2). El cuadrado grande central est dividido en 25 cuadrados medianos con aristas de 0.2 mm estando cada cuadrado mediano subdividido en 16 cuadrados pequeos con aristas de 0.05 mm y una superficie de 0.0025 mm2. Los 5 cuadrados medianos sealados con una letra E se utilizan para recuento de eritrocitos, trombocitos y espermatozoides. Todos los cuadrados medianos presentes en todos los lados de lneas triples. La lnea central es la frontera y decide si las clulas de esta zona se deben contar o no (figura 2).

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A

B

Figura 2. A. Cuadrcula de recuento cmara de Neubauer. B. Cuadrado grande central Recuento en Cmara de Brker: La cuadrcula de recuento Brker muestra 9 cuadrados grandes de 1 mm 2 cada uno. Cada cuadrado grande esta subdividido por unas lneas dobles que crean un grupo de 16 cuadros de 0.2 mm de lado y mas al interior se generan 9 cuadritos de 0.05 mm de lado (marcados con rojo en la figura 3).

Figura 3. Cuadrcula de conteo en cmara de Brker. Se cuenta en nmero total de espermatozoides presentes en 40 cuadritos de cada cuadrcula (a lado y lado de la cmara) y se promedian para determinar la concentracin por ml. Como hacer la dilucin? El factor de dilucin ms utilizado con cmara de Neubauer es de 1:20 y 1:200 para la cmara de Brker se usa un factor de dilucin de 1:100. Algunas formas de hacer la dilucin se describen a continuacin. El factor de dilucin mas utilizado en granja utilizando la cmara de Brker es de 1:100, se aconseja utilizar un baln volumtrico de 100 ml y llenarlo con solucin salina al 0,9 % formolada hasta antes de llegar a la lnea de referencia, luego se adiciona 1 ml de semen, el cual es medido con una pipeta volumtrica de 1 ml de vidrio esterilizada y seca. Por ltimo, se termina de llenar al baln volumtrico hasta 17

A

B

alcanzar la lnea de referencia. Cabe anotar que las medidas de volumen se deben hacer por debajo del menisco como se muestra en la figura 4.

Figura 4. A. El menisco se observa por debajo de la lnea de precisin (forma incorrecta), B. El menisco se observa por encime de la lnea de precisin (forma correcta). Otras formas de hacer la dilucin: Se utilizar una dilucin de 1:20 (pipetas de glbulos blancos) o una dilucin de 1:200 (pipetas de glbulos rojos). El llenado de las pipeta de glbulos blancos o rojo ser as: Se llena de semen puro hasta 0.5 exacto, y se termina de llenar hasta la lnea superior despus del embolo de la pipeta, con agua limpia; se agita fuertemente para homogenizar la muestra, luego se evacua la pipeta hasta la mitad del embolo, y se procede a llenar la cmara, colocando una gota en cada uno de los cuadros, teniendo cuidado que el lquido no se salga del lmite del cuadro. La dilucin se puede hacer tambin con ayuda de micropipetas que miden volumen de manera exacta. Con la micropipeta de 20l se tomas 5l de semen puro y con la micropipeta de 100l o 200l, se toman 95l de agua destilada o solucin formolada y se llevan a un tubo ependorf, donde se mezclan suavemente para una dilucin final de 1:20. Finalmente se procede a llenar la cmara, teniendo cuidado que el lquido no se salga del lmite del cuadro. La formula de valoracin es la siguiente:espermatoz oides contados 1000 2 sup erficie contadamm profundida de la camara dilucin d

Espermatoz oides por mililitro=

Ejemplo cmara de recuento de Neubauer: 18

El conteo se inicia en la parte superior derecha y sigue en direccin de las flechas anaranjadas como se muestra en la figura 5A, tambin se cuentan aquellos espermatozoides que estn tocando los bordes de la lnea central, por lo cual por cuestiones prcticas y para unificar el criterio de cuales espermatozoides estn dentro y cuales fuera, se ha optado por aceptar que estn dentro todos aquellos que su cabeza toquen la lnea central del lado derecho e inferior y estn fuera todos aquellos que toquen la lnea central izquierda y superior, como se muestra en la figura 5-B, marcados de verde y rojo respectivamente.

A

B

Figura 5. A. direccin de conteo de espermatozoides cmara de Neubauer. B. espermatozoides marcados con rojo se consideran fuera y los marcados con verde se consideran dentro. Una vez contados los espermatozoides de 5 cuadros internos se procede a calcular la concentracin de acuerdo a la formula. 1. 2. 3. 4. Espermatozoides contados 300 Superficie contada 0.2 mm2 Profundidad de la cmara 0.1 mm Dilucin 1:20

300 300 20 = =300.000 espermatozoides/l 0.2 0.1 1 / 20 0.2 0.1 1 19

Ahora bien se multiplica por 1000 para hacer la conversin de l a ml. As tenemos entonces 300000.000 espermatozoides/ml. Ejemplo cmara de Brker: El conteo se inicia en la parte superior derecha y sigue en direccin de las flechas azules como se muestra en la figura 6, tambin se cuentan aquellos espermatozoides que estn tocando la lnea, por lo cual por cuestiones prcticas y para unificar el criterio de cuales espermatozoides estn dentro y cuales fuera, se ha optado por aceptar que estn dentro todos aquellos que su cabeza toquen la lnea del lado derecho e inferior y estn fuera todos aquellos que toquen la lnea central izquierda y superior.

A

Figura 6. A. Direccin de conteo cmara de Brker (flechas azules), B. espermatozoides marcados con rojo se consideran fuera y los marcados con verde se consideran dentro Una vez contados los espermatozoides de 5 cuadros internos se procede a calcular la concentracin de acuerdo a la formula. 1. 2. 3. 4. Espermatozoides contados 30 Superficie contada 0.1 mm2 (0.05 x 0.05 x 40) Profundidad de la cmara 0.1 mm Dilucin 1:100

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30 30 100 = =300.000 espermatozoides/ml 0.1 0.1 1 / 100 0.1 0.1 1 Ahora bien, se multiplica por 1000 para hacer la conversin de l a ml. As, tenemos entonces 300000.000 espermatozoides/ml.

DESCENSO DE TEMPERATURA Y ALMACENAMIENTO DEL SEMEN Una vez que el semen ha sido diluido a 34 C puede ser envasado en las botellas o bolsas dosis de inseminacin, estas deben estar rotuladas (fecha, nombre del verraco). Una vez termin el envasado se debe dejar las dosis sobre la mesa de trabajo o en un lugar fresco hasta alcanzar la temperatura ambiente (120 minutos), siendo ptima 22C y protegidos de la luz para luego ser almacenados a 17 C en la nevera de almacenamiento. El descenso trmico debe ser progresivo.

ENTRENAMIENTO EN LA DETECCIN DEL ESTRO O CALOR Es uno de los factores ms importantes para realizar con xito la inseminacin artificial. De acuerdo al momento de aparicin del celo determinamos el momento adecuado para realizar la inseminacin artificial. Para la deteccin de celo se puede usar diversos mtodos que varan en cuanto a su exactitud: Observacin de signos externos: 1. Edema e hiperemia vulvar 2. Actitud inquieta 3. Gruidos caractersticos Observacin del comportamiento sexual: 1. Bsqueda del verraco 2. Monta de otras hembras Desencadenamiento del reflejo de inmovilizacin: 1. Por el verraco - Pasando el verraco por las jaulas - Pasando el verraco por los corrales 21

2. Por el hombre 3. Por estmulos simuladores del verraco - Aerosoles con feromonas - apoyo sobre los lomos Es conveniente realizar la deteccin de celo dos veces al da para concretar con mayor seguridad el momento de inicio del celo y consecuentemente el momento ms indicado para realizar la inseminacin artificial. Ejemplo: Cerda desteta: Celo entre el 3 da pos destete 1 Da Maana Tarde 1 Da Maana Celo 2 Da 1 IA 2 IA 2 Da 3 Da 3 IA 4 IA* 3 Da 2 IA 4 Da 4 IA* 4 Da

Tarde Celo 1 IA 3 IA * Si an es receptiva para ser la inseminacin Cerda desteta entre 4 y 6 da pos destete 1 Da Maana Tarde Celo 1 IA 1 Da Maana Tarde Celo 2 Da 2 IA 3 IA 2 Da 1 IA 2 IA 22 3 Da 3 IA 3 Da

Cerdas de 7 das pos destete, cerdas repetidoras y cerdas reemplazos:

1 Da Maana Tarde Celo 1 IA 2 IA 1 Da Maana Tarde Celo 1 IA

2 Da 3 IA 4 IA* 2 Da 2 IA 3 IA

3 Da

3 Da 4 IA*

* Si an es receptiva para ser la inseminacin Cerdas destetadas que presenten celos a los 8 das post destete, se aconseja dejarle pasar el celo. Nunca se debe forzar a una hembra a recibir una dosis cuando no es receptiva, o sea cuando se le ha pasado el calor, se debe dejar con las dosis que se le alcanzaron a colocar. No obstante los protocolos de IA mencionados, tenemos que considerar que los mismos deben adecuarse a cada granja ya que existen numerosos factores que pueden acortar o alargar la duracin del celo y por ende la ovulacin.

INSEMINACION ARTIFICIAL DE LA CERDA Deje la cerda tranquila en su medio ambiente normal. El cervix y el tero son rganos muy sensibles que se contraen en respuesta al apareo natural. Son estas contracciones que transportan el esperma al sitio de la fertilizacin. La experiencia 23

durante la inseminacin debe ser lo ms calma y placentera posible, para la hembra obtener la mejor respuesta de contraccin. Si la hembra se pone nerviosa, molesta o se asusta, el transporte del esperma puede ser interrumpido. Asegrese de que sus manos estn limpias y secas antes de comenzar con las tcnicas de inseminacin. El perineo de la cerda debe estar tambin limpio y seco. Se procede a colocar el cinturn de inseminacin en la parte trasera de la hembra, propiamente hacia los flancos, cuando est alrededor de la cerda se apretar lo ms que pueda y se ajustar con el cierre; si la cerda est en celo, con el cinturn se quedar completamente quieta. Maneje los catteres con cuidado. No toque el extremo en espiral o permita que se ensucie antes de usarlo. Lubrique un poco el catter con un ungento que no sea espermicida o con unas gotas de semen. Abra los labios vulvares y aplique una gota de lubricante desinfectante, cuidadosamente pero con firmeza abra nuevamente los labios vulvares e inserte el catter (al cual tambin se le ha aplicado una gota de lubricante en la punta) hacia arriba y delante dentro de la vagina. No dirija el catter hacia abajo porque puede entrar en la vejiga. Si la punta del catter ha sido insertada correctamente, el catter entrar en el cervix. Coloque la punta de la botella o bolsa que contiene el semen dentro del final del catter. Doble la parte media del catter hacia arriba, manteniendo el catter fijo en el cervix y suavemente apriete la botella para verificar que el semen entra con facilidad, luego se ajusta el catter junto con la bolsa o botella al cinturn. No apriete muy fuerte porque el semen puede ser forzado hacia atrs en la vulva y ser una perdida. Normalmente lleva de 5 a 10 minutos para completar la inseminacin, an cuando puede llevar ms tiempo en las primerizas. Luego de la inseminacin deje la cerda quieta en su medio ambiente por 20 a 30 minutos. Se debe utilizar el detector de preez doppler dos veces, a los 35 y a los 55 das desde el ltimo servicio. Es indispensable llevar registros en todos los procesos que se lleven a cabo en el programa de inseminacin artificial.

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Cualquier duda que surja con respecto al manual o a los resultados obtenidos en la evaluacin seminal por favor comunicarse al correo electrnico elizabetburitica@gmail.com , con gusto le resolver sus dudas.

Mara Elizabet Buritic Henao

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