Evaluación de Hongos Entomopatógenos para el Control del Pulgón Café de los Cítricos, Toxoptera citricida (Kirkaldy),

en México

CENTRO DE INVESTIGACIÓN REGIONAL DEL NORESTE

CAMPO EXPERIMENTAL GENERAL TERÁN

Folleto Científico No. 1 Abril de 2007

ismael hernández torres angélica berlanga padilla

j. isabel lópez arroyo jesús loera gallardo efraín acosta díaz

SECRETARÍA DE AGRICULTURA, GANADERÍA, DESARROLLO RURAL, PESCA Y ALIMENTACIÓN

ING. ALBERTO CÁRDENAS JIMÉNEZ

Secretario

ING. FRANCISCO LÓPEZ TOSTADO Subsecretario de Agricultura

ING. ANTONIO RUÍZ GARCÍA

Subsecretario de Desarrollo Rural

LIC. JEFFREY MAX JONES JONES Subsecretario de Fomento a los Agronegocios

C. RAMÓN CORRAL ÁVILA

Comisionado Nacional de Acuacultura y Pesca

INSTITUTO NACIONAL DE INVESTIGACIONES FORESTALES, AGRÍCOLAS Y PECUARIAS

Ph. D. PEDRO BRAJCICH GALLEGOS

Director General

Ph. D. EDGAR RENDÓN POBLETE Coordinador de Investigación, Innovación y Vinculación

Ph. D. SEBASTIÁN ACOSTA NÚÑEZ

Coordinador de Planeación y Desarrollo

LIC. MARCIAL ALFREDO GARCIA MORTEO Coordinador de Administración y Sistemas

CENTRO DE INVESTIGACIÓN REGIONAL DEL NORESTE

Ph. D. FRANCISCO JAVIER PADILLA RAMÍREZ Director Regional

Ph. D. JORGE ELIZONDO BARRÓN

Director de Investigación

C. P. JOSÉ CRUZ GONZÁLEZ FLORES Director de Administración

DR. GUILLERMO J. GARCÍA DESSOMMES

Director de Coordinación y Vinculación en Nuevo León

EVALUACIÓN DE HONGOS

ENTOMOPATÓGENOS PARA EL

CONTROL DEL PULGÓN CAFÉ DE LOS

CÍTRICOS, Toxoptera citricida

(Kirkaldy), EN MÉXICO

Dr. Ismael Hernández Torres

Investigador de la especialidad de Biotecnología

M. C. Angélica Berlanga Padilla Investigadora de la especialidad de Entomopatógenos

Ph. D. J. Isabel López Arroyo

Investigador de la especialidad de Entomología

Ph. D. Jesús Loera Gallardo

Investigador de la especialidad de Entomología

Dr. Efraín Acosta Díaz

Investigador de la especialidad de Fitomejoramiento

Folleto Científico Núm. 1 Centro de Investigación Regional del Noreste

Campo Experimental General Terán General Terán, Nuevo León, México.

Abril de 2007

Evaluación de Hongos Entomopatógenos para el Control del Pulgón Café de los Cítricos, Toxoptera citricida (Kirkaldy),

en México No está permitida la reproducción total o parcial de este folleto, ni la transmisión de ninguna forma o por cualquier medio, ya sea electrónico, mecánico, por fotocopia, por registro u otros métodos, sin el permiso previo y por escrito de los titulares del Copyright. ISBN: 978-970-43-0163-7 Derechos reservados © 2007 Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Serapio Rendón No. 83 Col. San Rafael Del. Cuauhtémoc 06470 México, D. F. Primera edición. Impreso en México. Clave INIFAP/CIRNE/A-390 Esta obra se terminó de imprimir en Abril de 2007, en los talleres de Mundo Gráfico de Monterrey, S. A. de C. V., Av. Rangel Frías 440-A, Col. Burócratas de Estado, Monterrey, N. L. 64380 México. Su tiraje constó de 300 ejemplares

Folleto Científico No. 1, Abril de 2007. Campo Experimental General Terán

Kilómetro 31 Carretera Montemorelos-China Apartado Postal No. 3

General Terán, Nuevo León, 67400 México. Tel.: (826) 267 0260. Fax: (826) 267 0539

hernandez.ismael@inifap.gob.mx La cita correcta de este folleto es: Hernández-Torres, I., A. Berlanga P., J. I. López A., J. Loera G. y E. Acosta D. 2007. Evaluación de Hongos Entomopatógenos para el Control del Pulgón Café de los Cítricos, Toxoptera citricida (Kirkaldy), en México. INIFAP. CIRNE. Campo Experimental General Terán. General Terán, Nuevo León, México. Folleto Científico No. 1. 19 p.

ÍNDICE

Página

RESUMEN.QQQQQQQQQQQQQQQQQQQ....QQQ. 1

ABSTRACTQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQ. 2

INTRODUCCIÓNQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQ 3

MATERIALES Y MÉTODOS...QQQQQQQQQQQ............... 5

RESULTADOS Y DISCUSIÓN.Q.Q............................................. 9

Evaluación de cepasQ.QQQQQQQQQQQ.................... 9

Evaluación de vehículos de aplicación...QQQQQ................ 11

Implicaciones para el control biológico del pulgón café de los cítricosQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQ.

14

CONCLUSIONES.......QQQQQQQQQQQQQQQQQQ... 15

BIBLIOGRAFÍAQ..QQQQQQQQQQQQQQQQQQQQ. 16

EVALUACIÓN DE HONGOS ENTOMOPATÓGENOS PARA EL CONTROL DEL PULGÓN CAFÉ DE LOS CÍTRICOS, Toxoptera

citricida (Kirkaldy), EN MÉXICO Ismael HERNÁNDEZ TORRES1

Angélica BERLANGA PADILLA2 J. Isabel LÓPEZ ARROYO1

Jesús LOERA GALLARDO3

Efraín ACOSTA DÍAZ1

RESUMEN El pulgón café de los cítricos, Toxoptera citricida Kirkaldy (Homoptera: Aphididae), considerado como el vector mas eficiente del virus de la tristeza de los cítricos, invadió el sureste de México durante el año 2000, a través de los estados de Yucatán, y Quintana Roo; actualmente también se encuentra en los estados de Campeche, Oaxaca, Tabasco y Veracruz. Para generar alternativas viables de control de esta plaga, la presente investigación se desarrolló con los objetivos de: 1. Evaluar la mortalidad del pulgón café de los cítricos causada por el uso de cepas de hongos entomopatógenos de las especias Beauveria bassiana, Lecanicillium lecanii y Paecilomyces fumosoroseus, en condiciones de vivero y campo, y 2. Evaluar la eficiencia de diferentes vehículos de aplicación del hongo P. fumosoroseus en condiciones de campo. Los resultados obtenidos mostraron que el porcentaje de mortalidad promedio de T. citricida fue mayor en condiciones de campo que en vivero (90 vs. 48%). El hongo P. fumosoroseus cepa AMBAS1 fue el más eficiente para el control de T. citricida, tanto en condiciones de vivero como de campo (61 y 100% de mortalidad). Este agente al ser aplicado en aceite mineral o el polvo humectable causó mortalidad de T. citricida de 95 y 94%, respectivamente. Los resultados muestran el gran potencial de P. fumosoroseus para ser utilizado en el control del pulgón café de los cítricos en México. Palabras clave: Control biológico, Paecilomyces fumosoroseus, Beauveria bassiana, Lecanicillium lecanii. ____________________ 1Investigadores del Programa de Cítricos del Campo Experimental General Terán, INIFAP. Apdo. Postal. 3, CP 67400 General Terán, N. L. E-mail: hernandez.ismael@inifap.gob.mx 2Investigadora del Centro Nacional de Referencia sobre Control Biológico, SENASICA, Tecomán, Col. 3Investigador del Campo Experimental Río Bravo, INIFAP. Río Bravo, Tamps.

ABSTRACT

The brown citrus aphid, Toxoptera citricida Kirkaldy (Homoptera: Aphididae) is the most efficient vector of the citrus tristeza virus. This pest invaded Mexico through Yucatan and Quintana Roo states during the year 2000; currently, the pest has spread throughout Campeche, Oaxaca, Tabasco and Veracruz states. Three strains of entomopathogenic fungi were evaluated under nursery and field conditions: Beauveria bassiana, Lecanicillium lecanii and Paecilomyces fumosoroseus, sprayed in solution with water; additionally, the effect of water, wettable powder or mineral oil as a carrier agent was evaluated on one strain of P. fumosoroseus to control T. citricida. Entomopathogenic fungi were more efficient to control T. citricida under field than nursery conditions (90 vs. 48% average mortality). The best brown citrus aphid control was obtained with P. fumosoroseus, strain AMBAS1, under nursery (61.03%) and field conditions (100%). Wettable powder or mineral oil was a better carrier when spraying P. fumosoroseus to control T. citricida; they had mortality values of 94 and 95%, respectively. The entomopathogenic fungi P. fumosoroseus, strain AMBAS1, has a great potential as a biocontrol agent for the brown citrus aphid in Mexico. Key words: Biological control, Paecilomyces fumosoroseus, Beauveria bassiana, Lecanicillium lecanii.

INTRODUCCIÓN El virus de la tristeza de los cítricos (VTC) ha provocado la muerte de aproximadamente 98 millones de árboles en las regiones citrícolas del mundo (Marroquín et al., 2004). El VTC se disemina principalmente mediante material vegetativo infectado o a través de insectos vectores, entre los cuales se encuentran los áfidos como el pulgón café de los cítricos, Toxoptera citricida Kirkaldy (Homoptera: Aphididae), considerado como el vector más eficiente (Yokomi et al., 1994). En otras regiones citrícolas importantes como Israel y California, E.U.A., en donde no se ha registrado la presencia de T. citricida, el pulgón del algodón Aphis gossypii Glover (Homoptera: Aphididae) es el principal vector del VTC (Marroquín et al., 2004).

El pulgón café de los cítricos (Figura 1), a partir de su centro de origen en Asia, se ha diseminado a casi todas las áreas citrícolas del mundo, excepto en el Medio Oriente (Yokomi et al., 1994). La presencia de la plaga en el continente Americano es debida a una introducción accidental a Argentina y Brasil, posiblemente durante los años 1920s en material vegetativo proveniente de África (Rocha-Peña et al., 1995; Michaud, 1998). En México, el insecto invadió los estados de Yucatán y Quintana Roo desde el año 2000 (Michaud y Alvarez, 2000); posteriormente se diseminó a Campeche, Tabasco, y Veracruz. Informes recientes indican que actualmente está presente también en el Estado de Oaxaca (H. Sánchez Anguiano, SAGARPA-DGSV, com. pers.). T. citricida además de transmitir razas severas del VTC, causa daños a los árboles al alimentarse de la savia, provoca deformaciones en los brotes tiernos y enrollamiento de las hojas (Denmark, 1978); asimismo, secreta una mielecilla que favorece el desarrollo de especies de hongos causantes de fumagina (Hill y Hoy, 2003). Para el control del pulgón se han utilizado insecticidas químicos (Yokomi et al., 1995; Tsai et al., 1996), los cuales, además del alto costo económico que representan, el producto a la deriva constituye un riesgo para la salud humana, animal y para el medio ambiente, debido al poder residual de los ingredientes activos, además del desarrollo de resistencia de la plaga. El control biológico mediante el uso de hongos entomopatógenos representa una alternativa dentro de las estrategias de manejo y control del pulgón café de los cítricos, ya

que se tienen antecedentes de que éste es atacado por una diversidad de especies de hongos, entre los cuales los más importantes dentro de los hyphomycetes se incluyen a Paecilomyces fumosoroseus (Wize) Brown y Smith, Lecanicillium lecanii (Zimm.) Gams & Zare y Beauveria bassiana (Bals.) Vuill (Bucher, 1964; Feng et al., 1990; Sánchez-Peña, 1993; Yokomi, 1994). Debido a que la información existente sobre el uso de especies y cepas nativas de hongos entomopatógenos para el control del pulgón café de los cítricos es escasa, así como la utilización de vehículos para su aplicación en México, los objetivos de esta investigación fueron: 1. Evaluar la mortalidad del pulgón café de los cítricos causada por cepas de hongos entomopatógenos de las especies B. bassiana, L. lecanii y P. fumosoroseus en condiciones de vivero y campo, y 2. Evaluar la eficiencia de diferentes vehículos de aplicación del hongo P. fumosoroseus en condiciones de campo.

Figura 1. Pulgón café de los cítricos (Toxoptera citricida) infestando brotes tiernos en una planta de naranjo.

MATERIALES Y MÉTODOS Para evaluar la mortalidad del pulgón café de los cítricos causada por cepas de hongos entomopatógenos, se realizaron tres ensayos: uno en condiciones de vivero en el Campo Experimental Chiná del INIFAP (19º 46’ latitud norte, 90º 29’ longitud oeste y 20 msnm), en Chiná, Campeche, y dos ensayos en condiciones de campo, en el Rancho San Pedro, Huimanguillo, Tabasco, (17º 42’ latitud norte, 93º 27’ longitud oeste y 40 msnm). Para evaluar la eficiencia de diferentes vehículos de aplicación se realizó un ensayo en condiciones de campo en el Rancho San Pedro, Huimanguillo, Tabasco. Previo al establecimiento de los ensayos, se procedió a la producción de conidias de las cepas de hongos utilizadas (Cuadro 1). Producción de conidias Se realizó en granos de arroz sin cascarilla, lavado tres veces con agua potable y manteniéndolo en reposo durante 30 min, en agua a 75ºC adicionada con 130 ppm de antibiótico (tetraciclina y furazolidona); posteriormente, el exceso de agua se eliminó estilando el arroz por 20 min, se colocaron 350 g en bolsas de polipapel de alta densidad. Las bolsas se esterilizaron a 120oC durante 20 min (120 kg cm-2). Cada bolsa se inoculó con 10 ml de una suspensión de 106 conidias ml-1, utilizando una jeringa de uso veterinario, el orificio dejado por la aguja se selló con cinta adhesiva; después el arroz se homogenizó con la suspensión del inoculo. La producción de las conidias del inóculo se inició 16 días antes y se incubaron en frascos de cristal con arroz lavado, estilado y esterilizado, bajo las condiciones antes mencionadas. Las bolsas inoculadas se mantuvieron a 28 + 1ºC, durante 16 días, con 14:10 h L:O para obtener el óptimo de esporulación (Berlanga y Carrillo, 2006). Las conidias obtenidas se mantuvieron a 4oC, su viabilidad se evaluó dos días antes de su aplicación, para lo cual se utilizó una suspensión de 107 conidias ml-1 adicionada con Tween 80 al 0.03 % en cajas petri con agar Sabouraud dextrosa, se incubó a 27oC durante 16 h. La germinación se determinó en 400 conidias (datos no mostrados) mediante conteos realizados en microscopio (40X). Previo a su aplicación en los ensayos, cada cepa de hongo se preparó en una suspensión de 1 x 107 conidias ml-1.

Ensayos de evaluación de cepas A). Ensayo en condiciones de vivero: Se estableció durante abril de 2004. Se utilizaron plantas de naranjo var. Valencia de un año de edad, protegidas de la lluvia debajo un cobertizo de madera cubierto con polietileno, la entrada de plagas se evitó con malla antiáfida. Las plantas se sometieron a limpieza física con agua clorada al 0.3% para eliminar huevos o larvas de insectos; y se podaron para estimular la emisión de brotes nuevos. Se evaluaron cuatro tratamientos, las cepas AMBAS1 de P. fumosoroseus, V262 de L. lecanii, BbAPH2 de B. bassiana, y agua como testigo. Las cepas se obtuvieron en distintos sitios de México (Cuadro 2), fueron evaluadas y seleccionadas por su virulencia sobre T. citricida (Berlanga-Padilla y Núñez-Camargo, 2006). Las cepas se aplicaron por inmersión de los pulgones en la suspensión de conidias, en cajas petri con el fondo de tela organdí, durante cinco segundos; después se les quitó el exceso de la suspensión con toallitas de papel absorbente, y con un pincel se depositaron sobre los brotes tiernos de las plantas cuidando no dañar el estilete de éstos. En el tratamiento testigo los pulgones se sumergieron solo en agua. El número de pulgones adultos varió de 14 a 40 por repetición (Berlanga-Padilla y Núñez-Camargo, 2006). b). Ensayos en condiciones de campo: Se establecieron dos ensayos, con duración de siete (E-7) y tres (E-3) días, se realizaron en mayo y noviembre de 2006, respectivamente. Se seleccionaron árboles de naranjo var. Valencia de 15 años, cuyos brotes se encontraban infestados por T. citricida; en todas las colonias se eliminaron las hormigas y/o depredadores de éste, como las larvas de Ceraeochrysa spp., y Chrysoperla spp. (Neuroptera: Chrysopidae) y de especies de sírfidos (Diptera: Syrphidae). Los tratamientos se constituyeron por las tres cepas utilizadas en el ensayo realizado en condiciones de vivero y se incluyó la cepa PfAPH de P. fumosoroseus (Cuadro 3). El tratamiento testigo recibió aspersión solamente de agua. La suspensión de conidias se aplicó rociando una vez las hojas del brote con una aspersora manual marca RL-FLOMASTER de 1.18 L de capacidad, a una distancia constante de 25 cm; la aspersora se calibró para aplicar 2650 conidias mm-2 en promedio.

Ensayo de evaluación de vehículos de aplicación Se realizó en condiciones de campo, en mayo de 2006. Solo se utilizó la cepa AMBAS1 de P. fumosoroseus, la cual resultó sobresaliente en bioensayos de efectividad de cepas de entomopatógenos contra T. citricida, realizados bajo condiciones controladas (López-Arroyo et al., 2004). Se evaluaron cuatro tratamientos: a) AMBAS1 + Agua; b). AMBAS1 + Agua + Polvo humectable; c). AMBAS1 + Agua + Aceite mineral (citrolina al 30%), y d). Agua (testigo). Para permitir la emulsificación de la citrolina, se agregó 1 ml de Ader® (Nonil Fenol Polioxietilenico) como coadyuvante líquido miscible por litro de suspensión. Estos tratamientos se aplicaron igual que en los ensayos de evaluación de cepas en condiciones de campo. Cuadro 1. Especies y origen de los hongos entomopatógenos utilizados en los ensayos de control del pulgón café de los cítricos.

Especie de

patógeno

Clave

CNRCB*

Plaga

Huésped

Cultivo

hospedero

Municipio

de origen

B. bassiana BbAPH2 ND Naranjo Colima, Col.

L. lecanii V262 T. aurantii Cítricos Cofradía de Suchitlán, Col.

P. fumosoroseus AMBAS1 Bemisia sp Sandía Armería, Col.

P. fumosoroseus PfAPH T. aurantii Naranjo Colima, Col.

* Centro Nacional de Referencia en Control Biológico, SENASICA. Los tratamientos de los tres ensayos realizados en condiciones de campo se aplicaron en brotes tiernos infestados por áfidos, de árboles independientes. Después de la aplicación, cada brote fue cubierto con bolsas de tela de organdí (Figura 2) para evitar la presencia de hormigas y de otros enemigos naturales del pulgón, como parasitoides y varias especies de depredadores. En los cuatro ensayos realizados en el presente estudio, los datos de mortalidad se registraron después de siete días, excepto en el ensayo de campo E-3, que fue después de tres días de la aplicación de los tratamientos. El conteo de pulgones muertos se

realizó bajo un estereoscopio y solo los pulgones del ensayo de campo E-7 se colocaron en una cámara húmeda para favorecer el desarrollo y esporulación del hongo para corroborar su presencia (datos no mostrados). Las condiciones de temperatura y humedad relativa registradas durante cada ensayo, en Chiná, Camp. y Huimanguillo, Tab., se muestran en las Figuras 3 y 4. En los cuatro ensayos los tratamientos se establecieron en un diseño experimental completamente al azar, con cuatro y seis repeticiones, en Chiná, Camp. y Huimanguillo, Tab., respectivamente. La parcela experimental estuvo constituida por cada árbol de naranjo. Los datos de mortalidad se transformaron a arco-seno, previo al análisis de varianza (Reyes, 1978). En los cuadros de resultados se presentan datos sin transformar; los promedios de los tratamientos se compararon con la prueba de Tukey a un nivel de significancia del 5% (Minitab, 1996).

Figura 2. Brote tierno de naranjo cubierto con tela organdí para proteger al pulgón café de los cítricos de hormigas y enemigos naturales.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN Evaluación de cepas En vivero, la mortalidad causada por las cepas de los hongos entomopatógenos evaluados sobre T. citricida, varió en un rango de 43 a 61%, siendo la cepa AMBAS1 de P. fumosoroseus la que causó el mayor porcentaje de mortalidad; mientras que en el testigo dicho valor fue de 39% (Cuadro 2). Durante el desarrollo del ensayo prevaleció una temperatura promedio de 26°C y humedad relativa promedio de 64% (Figuras 3 y 4). Las diferencias en mortalidad causada por los diferentes tratamientos no fueron estadísticamente significativas. La mortalidad registrada bajo condiciones de vivero, para B. bassiana y P. fumosoroseus (49 y 61%, respectivamente) fue inferior a la reportada por Poprawski et al., (1999) bajo condiciones de laboratorio para diferentes cepas de las mismas especies (68-86 y 64-89%, respectivamente). Cuadro 2. Mortalidad de T. citricida causada por diferentes cepas de hongos entomopatógenos en condiciones de vivero. Chiná, Campeche, México. 2004.

Especie Aislamiento Mortalidad (%) ± DE

P. fumosoroseus AMBAS1 61.03 ± 18.74

B. bassiana BbAPH2 49.23 ± 8.74

L. lecanii V262 43.49 ± 16.47

Testigo Agua 39.44 ± 4.43

DE=Desviación estándar. En condiciones de campo, en el ensayo E-7, las cuatro cepas evaluadas causaron mortalidad sobre T. citricida entre 96 y 100%, después de siete días de la aspersión de los hongos entomopatógenos (Cuadro 3); en donde P. fumosoroseus aislamiento AMBAS1 causó mortalidad total en todas las repeticiones del estudio, en tanto que el nivel de mortalidad en el testigo fue de 57%. Durante el desarrollo de este ensayo las

condiciones que prevalecieron fueron: temperatura promedio de 29°C y humedad relativa promedio de 96% (Figuras 3 y 4). Las diferencias en mortalidad entre los tratamientos evaluados fueron altamente significativas (p≤0.0001). En el ensayo E-3, a diferencia del ensayo E-7, solamente la cepa AMBAS1 de P. fumosoroseus causó mortalidad altamente significativa (p≤0.0001), mientras que en el resto de los tratamientos la mortalidad fue de 4 a 12%; estos porcentajes fueron registrados tres días después de la aspersión de los hongos. En este ensayo la temperatura promedio fue de 25º C y la humedad relativa (95%) fue muy similar a la del ensayo E-7 (Figuras 3 y 4). Las diferencias en mortalidad entre los ensayos E-7 y E-3, se atribuye principalmente a que en el ensayo E-7, el tiempo de exposición del insecto fue mayor, resultando en un incremento en el porcentaje de mortalidad.

Cuadro 3. Mortalidad de T. citricida causada por diferentes aislamientos de hongos entomopatógenos en condiciones de campo. Huimanguillo, Tabasco, México. 2006.

Especie Cepa Mortalidad (%) ± DE

E-7 E-3

P. fumosoroseus AMBAS1 100.00 ± 0.00a 96.10 ± 6.25a

P. fumosoroseus PfAPH 99.90 ± 0.08a 11.73 ± 15.01b

B. bassiana BbAPH2 96.49 ± 7.14a 3.73 ± 2.50 b

L. lecanii V262 98.41 ± 3.18a

Testigo1 Agua 57.77 ± 36.86b 9.00 ± 6.47 b

Testigo 2 10.38 ± 5.76 b

DE = Desviación estándar. Promedios seguidos por letras iguales dentro de una misma columna, son estadísticamente iguales (Tukey, α=0.05).

Es importante señalar, que el 96% de mortalidad de T. citricida causado por la cepa AMBAS1, se registró tan solo tres días después de la aspersión de dicho agente de control biológico, mientras que la baja mortalidad causada por las cepas PfaPH y BbAPH2, indica que necesitan de un mayor tiempo para alcanzar porcentajes de mortalidad similares a los de la cepa AMBAS1, tal

como ocurrió en el ensayo E-7. Estos resultados indican que esta cepa de hongo entomopatógeno tiene un alto potencial para el control de T. citricida.

En el ensayo de campo E-3, la mortalidad causada por la cepa AMBAS1 de P. fumosoroseus fue mayor a la obtenida por Poprawski et al. (1999) bajo condiciones de laboratorio (96 vs 64-89%) e incluso la mortalidad en el testigo fue menor (9-10 vs 17-44%). Evaluación de vehículos de aplicación Todos los tratamientos de vehículos de aplicación causaron porcentajes superiores de mortalidad respecto al tratamiento testigo (Cuadro 4). Las diferencias en la mortalidad fueron altamente significativas. Los mejores tratamientos fueron los que incluyeron el aceite mineral (citrolina) y el polvo humectable, ya que causaron 95 y 94% de mortalidad, respectivamente, sobre el pulgón café de los cítricos. Durante el desarrollo de este ensayo la condiciones de temperatura promedio fue de 29°C y humedad relativa promedio fue de 96% (Figuras 3 y 4). Cuadro 4. Mortalidad de T. citricida con diferentes vehículos de aplicación de la cepa AMBAS1 de P. fumosoroseus en condiciones campo. Huimanguillo, Tabasco, México. 2006.

Tratamiento Mortalidad (%) ± DE

Aceite mineral + AMBAS1 + agua 95.31 a ± 5.4

Polvo humectable + AMBAS1 + agua 94.46 a ± 3.3

AMBAS1 + agua 80.73 b ± 2.7

Agua (testigo) 64.57 c ± 2.2

DE = Desviación estándar. Promedios seguidos por letras iguales dentro de una misma columna, no son estadísticamente diferentes (Tukey, α=0.05).

Figura 3. Temperatura media en Chiná, Camp. (línea azul), y en Huimanguillo, Tab. (línea roja: ensayo E-7; línea verde: ensayo E-3). Área sombreada representa el periodo de evaluación. Figura 4. Humedad relativa media en Chiná, Camp. (línea azul), y en Huimanguillo, Tab. (línea roja: ensayo E-7; línea verde: ensayo E-3). Área sombreada representa el periodo de evaluación.

Tem

pera

tura

(oC

)

Día

15

17

19

21

23

25

27

29

31

33

35

37

39

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30

Hum

edad

Re

lativ

a (

%)

Día

45

55

65

75

85

95

105

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30

En general se observó una mayor mortalidad promedio de T. citricida bajo condiciones de campo respecto al promedio de mortalidad bajo condiciones de vivero (90 vs. 48%). Se asume que los factores ambientales registrados contribuyeron a la alta mortalidad observada en campo; sin embargo, la diferencia entre las cepas de hongos con respecto al testigo, es atribuible al efecto per se sobre T. citricida.

En los estudios realizados, los resultados indican que el porcentaje de mortalidad de T. citricida estuvo influenciada por las condiciones ambientales prevalecientes. La temperatura y la humedad relativa afectan la supervivencia y capacidad de infectar del entomopatógeno (Vidal et al., 1997), cuando la humedad relativa es inferior a 95%, el proceso de infección no se realiza completamente (Luz y Fargues, 1999); sin embargo, se considera que en los ensayos de campo, a diferencia del ensayo de vivero, la elevada humedad relativa prevaleciente (Figura 4) fue factor determinante de la mayor incidencia de mortalidad causada por las cepas de hongos evaluadas (Cuadros 2 y 3). Por otro lado, la mayor tasa de desarrollo, supervivencia, fecundidad y reproducción de T. citricida se ha observado en un rango de 20 a 27oC; mientras que a 32oC la supervivencia se reduce hasta en 29% en los estadios inmaduros (Komazaki 1982; Tsai et al., 1996; Tsai y Wang, 1999; Wang y Tsai 2001; Xia et al., 2004). Durante el período en que se desarrolló el ensayo de campo E-7, la temperatura media diaria fue de 29oC (Figura 3), con máxima promedio de 36oC, valores fuera del rango favorable para el desarrollo y supervivencia del T. citricida.

Las condiciones de confinamiento proporcionadas durante

siete días, pudieron influir indirectamente para incrementar la mortalidad del insecto. T. citricida coloniza y se alimenta principalmente de brotes tiernos (Lee et al., 1992; Tsai et al., 1996), los cuales al madurar impiden lo anterior, por lo que las ninfas, adultos ápteros y alados, tienen que desplazarse en búsqueda de brotes nuevos (Michaud, 1998); en los ensayos de campo, el embolsado de los brotes para prevenir el ataque de enemigos de T. citricida, interfirió en su desplazamiento; aunado a esto, al término del período del ensayo, los brotes aparentemente mostraron las características de estar en desarrollo.

Por otra parte, la posible limitación en la disponibilidad de alimento en combinación con el efecto de la temperatura,

provocaron un estado de debilitamiento y estrés en los áfidos, condiciones que favorecieron el incremento en la mortalidad de T. citricida (Donegan y Lighthart, 1989), ocasionando un incremento en su susceptibilidad al ataque de las cepas de hongos evaluadas; además, la humedad relativa alta favoreció el desarrollo de estos entomopatógenos y consecuentemente, una mayor virulencia contra T. citricida. Respecto al ensayo de vehículos de aplicación, los aceites tienen un efecto sinergético cuando se combinan con microorganismos patógenos, incrementando su eficacia contra el insecto plaga en comparación con aplicaciones en agua (Womack et al., 1996; Prior et al., 1988). Esto se confirma en el presente estudio, ya que cuando la cepa AMBAS1 de P. fumosoroseus se aplicó con aceite mineral como vehículo, la mortalidad sobre el T. citricida fue de 95%, mientras que cuando esta misma cepa se aplicó solo con agua, como vehículo, la mortalidad fue de 80% (Cuadro 4). Poprawski et al. (1999) al evaluar en campo la cepa GHA de B. bassiana (Mycotrol) preparada en una suspensión (5 x 103 conidias/ml) de aceite emulsificable, obtuvo 89% de mortalidad sobre T. citricida a los cinco días de la aplicación, mientras que cuando se aplicó con polvo humectable bajo condiciones de laboratorio, la mortalidad que registró a los 10 días fue de 70%.

Implicaciones para el control biológico del

pulgón café de los cítricos

El potencial del uso de hongos entomopatógenos para el control de T. citricida ha sido considerado previamente por Peña et al. (2000) y Poprawski et al. (1999). P. fumosoroseus es un hongo asociado frecuentemente a infecciones de áfidos (Bucher, 1964; Humber, 1991), cuya evaluación en campo en el presente estudio ha demostrado potencial para ser utilizado en el control del pulgón café de los cítricos en México; además, la cepa AMBAS1 de P. fumosoroseus es nativa (Berlanga-Padilla y Núñez-Camargo, 2006), y en estudios previos realizados en laboratorio, no causó efectos negativos sobre especies de depredadores de la plaga (Berlanga-Padilla y López-Arroyo, 2006), lo que favorece aún más un posible uso extensivo de esta cepa como agente de control biológico.

Las formulaciones con aceites emulsificables protegen a las conidias de la radiación UV y contra la desecación en condiciones de baja humedad relativa (Alatorre, 2006), durante y después de la aplicación en campo, lo cual es elemental para el éxito de los hongos entomopatógenos en el control de plagas (Daoust et al., 1983; Bateman et al., 1993; Geden et al., 1995; Inglis et al., 1995; Carballo, 1998; Ibrahim et al., 1999; Lacey et al., 2001; Kassa, 2003), sobre todo en las condiciones imperantes de las regiones secas de México (Milner, 1997; Carballo, 1998; Lacey et al., 2001; Shah y Pell, 2003). Además, el aceite asperjado fluye y se extiende sobre la cutícula del insecto, a diferencia de la aspersión en agua donde el hongo permanece en forma de gotas (Ibrahim et al., 1999), permitiendo que las conidias del hongo sean depositadas en sitios donde se favorece su germinación e infección, lo que posteriormente se reflejará en una mayor mortalidad del insecto (Geden et al., 1995; Inglis et al., 1995; Ibrahim et al., 1999; Kassa, 2003). En el presente estudio, aunque se careció de observaciones sobre la supervivencia o el depósito de las conidias sobre la cutícula del insecto, se considera que el aceite mineral influyó en el incremento de mortalidad. Por otro lado, el aceite mineral “citrolina” provee un medio económico para la aspersión de hongos entomopatógenos. Finalmente, la comercialización de P. fumosoroseus y B. bassiana es común en los diferentes laboratorios de producción masiva en México (Rodríguez y Arredondo, 1999), por lo que es probable que éstos mismos podrían asegurar la producción y abastecimiento de las especies y/o cepas con potencial para ser utilizadas en el control del pulgón café de los cítricos.

CONCLUSIONES La cepa AMBAS1 de P. fumosoroseus fue las más eficiente para el control de T. citricida. El aceite mineral y el polvo humectable fueron los mejores vehículos de aplicación de P. fumosoroseus cepa AMBAS1 para el control de T. citricida.

BIBLIOGRAFÍA Alatorre R., R. 2006. Insecticidas microbianos en el manejo de

insectos plaga. In: Memorias del Taller de Hongos entomopatógenos [Ascomycetes anamórficos (Deuteromycota: Entomophthorales)]: Control de calidad. SMCB. Manzanillo, Colima, México. pp. 1-9.

Bateman, R. P., M. Carey, D. Moore, and C. Prior. 1993. The enhanced infectivity of Metarhizium flavoviride in oil formulations to desert locusts at low humidities. Annals of Applied Biology 122: 145-152.

Berlanga P., A. M. y M. Carrillo. 2006. Producción masiva de hongos entomopatógenos. Centro Nacional de Referencia de Control Biológico, DGSV-SAGAR. pp 6. Sin publicar.

Berlanga-Padilla, A. y J. I. López-Arroyo. 2006. Efecto de hongos entomopatógenos en depredadores del pulgón café de los cítricos (Homoptera: Aphididae). XXIX Congreso Nacional de Control Biológico. Manzanillo, Colima, México. pp. 384-388.

Berlanga-Padilla, A. M. y M. C. Núñez-Camargo. 2006. Susceptibilidad de Toxoptera citricida (Homoptera: Aphididae) a hongos entomopatógenos. XXIX Congreso Nacional de Control Biológico. Manzanillo, Colima, México. pp 349-352.

Bucher, G. E. 1964. The regulation and control of insects by fungi. Ann. Soc. Entomol. Quebec. 9: 30-42.

Carballo, M. 1998. Formulación de hongos entomopatógenos. Rev. Manejo Integrado de Plagas 47: 1-4

Daoust, R. A., M. G. Ward, and D. W. Roberts. 1983. Effect of formulation on the viability of Metarhizium anisopliae conidia. J. Invertebrate Pathology 41: 151-160.

Denmark, H. A. 1978. The brown citrus aphid Toxoptera citricida (Kirkaldy). Entomology Circular No. 194. Florida Departmet of Agriculture & Consummer Services. Division of Plant Industry. Gainesville, Fl.

Donegan, K. and B. Lighthart. 1989. Effect of several stress factors on the susceptibility of the predatory insect Chrysoperla carnea (Neuroptera: Chrysopidae), to the fungal pathogen Beauveria bassiana. J. Invertebr. Pathol. 54(1): 79-84.

Feng, M. G, J. B. Johonson & L. P. Kish. 1990. Survey of entomopathogenic fungi naturally infecting cereal aphis (Homoptera: Aphididae) of irigated grain crops in southwestern Idaho. Environ. Entomol. 19(5): 1534-1542.

Geden C. J., D. A. Rutz, and D. C. Steinkraus. 1995. Virulence of different isolates and formulations of Beauveria bassiana for

house flies and the parasitoid Muscidifurax raptor. Biological Control 5: 615-621.

Hill, S. L. and M. A. Hoy. 2003. Interactions between the red imported fire ant Solenopsis invicta and the parasitoid Lipolexis scutellaris potentially affect classical biological control of the aphid Toxoptera citricida. Biological Control 27: 11-19.

Humber, R. A. 1991. Fungal pathogen of aphids. In: Peters, D. C., J.A. Webster and S.C. Chlouber (eds), Proceedings Aphid-Plant to Molecules. USDA/Agricultural Research Service. Oklahoma State University. pp. 45-56.

Ibrahim, L., T. M. Butt, A. Beckett, and S. J. Clark. 1999. The germination of oil-formulated conidia of the insect pathogen Metarhizium anisopliae. Mycological Research 103: 901-907.

Inglis G. D., M. S. Goettel, and D. L. Johnson. 1995. Influence of ultraviolet light protectants on persistence of the entomopathogenic fungus, Beauveria bassiana. Biological Control 5: 581-590.

Kassa, A. 2003. Development and testing of mycoinsecticides based on submerged spores and aerial conidia of entomopathogenic fungi Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana (Deuteromycotina: Hyphomycetes) for control of locusts, grasshoppers and stored product insect pests. Ph.D. dissertation. Georg-August-University. Göttingen. 171 pp.

Komasaki, S. 1982. Effects of constant temperatures on population growth of three aphid species, Toxoptera citricidus (Kirkaldy), Aphis cítricola van der Goot and Aphis gossypii Glover (Homoptera: Aphididae) on citrus. Appl. Entomol. Zool. 17: 75-81.

Lacey, L. A., R. Frutos, H. K. Kaya, and P. Vail. 2001. Insect Pathogens as Biological Control Agents: Do They Have a Future? Biological Control 21: 230–248.

Lee, R. F, C. N. Roistacher, C. L. Niblett, R. Lastra, M. Rocha-Peña, S. M. Garnsey, R. K. Yokomi, D. J. Gumpf, and J. A. Dodds. 1992. Presence of Toxoptera citricidus in Central America: A threat to citrus in Florida and the United States. Citrus Industry 73.

López-Arroyo, J. I., A. Berlanga, R. Canales, M. A. Miranda, y J. Loera-Gallardo. 2004. Avances en la Investigación para el Control Biológico del Pulgón Café de los Cítricos en México. In: Memorias del Simposio Internacional de Citricultura. Mayo de 2004. Cd. Victoria, Tamps.

Luz, C. and J. Fargues. 1999. Dependence of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana a high humidity for infection of Rhodnius prolixus. Micopathology 146: 33-41.

Marroquín, C., A. Olmos, M. T. Gorris, E. Bertolini, M. C. Martínez, E. A. Carbonell, A. Hermoso de Mendoza, y M. Cambra M. 2004. Estimation of the number of aphids carrying citrus tristeza virus that visit adult citrus trees. Virus Research 100: 101-108.

Michaud, J. P. 1998. A review of the literature on Toxoptera citricida (Kirkaldy) (Homoptera: Aphididae). Fla. Entomol. 81: 37-61.

Michaud, J. P. and R. Alvarez. 2000. First collection of brown citrus aphid (Homoptera: Aphididae) in Quintana Roo, Mexico. Fla. Entomol. 83: 357-358.

Milner, R. J. 1997. Prospects for biopesticides for aphid control. Entomophaga 42: 227-239.

Minitab Inc. 1996. MINITAB reference manual, release 11 for Windows, State College, PA.

Peña, E., L. Villazón, S. Jiménez, L. Vázquez, y L. Licor. 2000. Alternativas para el control biológico del pulgón pardo de los cítricos (Toxoptera citricidus Kirkaldy) (Homoptera: Aphididae). Fitosanidad 4: 75-78.

Poprawski, T. J., P. E. Parker and J. H. Tsai. 1999. Laboratory and field evaluation of hyphomycete insect pathogenic fungi for control of brown citrus aphid (Homoptera: Aphididae). Environ. Entomol. 28: 315-321.

Prior, C., P. Jollands and G. le Patourel. 1988. Infectivity of oil and water formulations of Beauveria bassiana (Deuteromycotina: Hyphomycetes) to the cocoa weevil pest (Pantorhytes plutus). J. Invertebrate Pathol. 52: 66-72.

Reyes, C., P. 1978. Diseños Experimentales Agrícolas. Primera Edición. Ed. Trillas S. A. México, D. F. pp. 302-309.

Rocha-Peña, M. A., R. F. Lee, R. Lastra, C. L. Niblett, F. M. Ochoa-Corona, S. M. Garnsey and R. K. Yokomi. 1995. Citrus tristeza virus and its aphid vector, Toxoptera citricida. Threats to citrus production in the Caribbean and Central and North America. Plant Disease 79: 437-445.

Rodríguez, L. A., y H. C. Arredondo. 1999. Quién es quién en control biológico en México. INIFAP-CIRNE. Campo Experimental Río Bravo. Tamaulipas, Méx. Folleto técnico no. 23. 147 pp.

Sanchez-Peña, S. R. 1993. Entomogenus fungi associated whit the cotton aphid in the Texas high plains. Southwestern Entomologist 18(1): 69-70.

Shah, P. A., and J. K. Pell. 2003. Entomopathogenic fungi as biological control agents. Appl. Microbiol. Biotech. 61: 413-423.

Tsai, J. H., R. F. Lee, Y. H. Liu y C. L. Niblett. 1996. Biología y control del áfido negro de los cítricos (Toxoptera citricida Kirkaldy) y la tristeza de los cítricos. In: E.B. Radcliffe y W.D. Hutchison (eds.), Texto mundial de MIP Radcliffe’s. http://ipmworld.umn.edu, Univ. de Minesota. St. Paul, MN.

Tsai, J. H. and K. H. Wang. 1999. Life table study of brown citrus aphid (Homoptera: Aphididae) at different temperatures. Environ. Entomol. 28(3): 412-419.

Vidal, C., J. Fargues and L. A. Lacey. 1997. Intraespecific variability of Paecilomyces fumosoroseus: Effect of temperature on vegetative growth. J. Invertebrate Pathology 70: 18-26.

Wang, K. H. and J. H. Tsai. 2001. Development, survival and reproduction of black citrus aphid, Toxoptera aurantii (Hemiptera: Aphididae) as a function of temperature. Bull. Entomological Research 91(6): 477-489.

Womack, J. G., G. M. Eccleston and M. N. Burge. 1996. A vegetable oil-based invert emulsion for mycoherbicide delivery. Biol. Control 6: 23-28.

Xia, J. Y., W. van der Werf and R. Rabbigne. 2004. Influence of temperature on bionomics of cotton aphid, Aphis gossypii, on cotton. Entomologia Experimentalis et Applicata 90(1): 25-35.

Yokomi, R. K., R. Lastra, M. B. Stoetzel, V. C. Damsteegt, R. F. Lee, S. M. Garnsey, T. R. Gottwald, M. A. Rocha-Peña and C. L. Niblett. 1994. Establishment of the brown citrus aphid (Homoptera: Aphididae) in Central America and Caribbean Basin and transmission of citrus tristeza virus. Journal of Economic Entomology 87(4): 1078-1085.

Yokomi, R. K. 1994. Potential for biological control of Toxoptera citricida (Kirkaldy). USDA, ARS. Horticultural Research Laboratory. Orlando, FL. pp. 1-11.

Yokomi, R. K., P. A. Stansly, E. A. Rodríguez, and T. R. Gottwald.1995. Chemical mitigation of brown citrus aphid populations in Puerto Rico. p. 75-76. In: Proceedings of the Third International Workshop on Citrus Tristeza Virus and Brown Citrus Aphid in the Caribbean Basin: Management strategies. Lake Alfred, FL. University of Florida, Institute of Food and Agricultural Sciences.

AGRADECIMIENTOS

Los autores desean expresar su agradecimiento al Fondo Sectorial CONACYT-SAGARPA, por el apoyo económico para la conducción y finalización de la presente investigación, mediante el proyecto 2002-C01-1249. Así como al M.C. Roberto Canales Cruz (C.E.-Chiná), M.C. Pedro Francisco Velásquez Ehuan (CSV-Campeche), Ing. Ivis Quintana Domínguez e Ing. Javier Escobar Rendón (CSV-Tabasco), Dr. Víctor W. González Lauck, M.C. P. Alejandro López Andrade, M.C. Pablo Ruiz Beltrán, Ing. Sabel Barrón Freyre (CE-Huimanguillo), Dr. Mario A. Miranda Salcedo (CE-Valle de Apatzingán), Dr. Lorenzo Aceves Navarro y Dr. Rodolfo Mendoza Hernández (CP-Campus Tabasco) y Sr. Martín Romero, por el apoyo brindado para el desarrollo de los estudios desarrollados en condiciones de vivero y campo.

Revisión Técnica

Dr. Jorge Elizondo Barrón Dr. Fernando Bahena Juárez

M. C. Marco Antonio Reyes Rosas Dr. José Alfredo Sánchez Salas Dr. Mario Alfonso Urias López

Edición

Dr. Guillermo J. García Dessommes

Comité Editorial del CEGET

Dr. Guillermo J. García Dessommes Dr. Ismael Hernández Torres

M.C. Jorge Manuel Martínez de León

Fotografías

Portada: Dr. Ismael Hernández Torres y M. C. Angélica Berlanga Padilla

Figura 1 y 2: Dr. Isabel López Arroyo