estudios in vitro

8/16/2019 Estudios in Vitro

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Estudios Invitro e In vivo



Existen dos clases de ensayostoxicológicos, los ensayos in vitro (queson realizados sobre tejidos, células uórganos) y los ensayos in vivo (enorganismos vivos).



En la medida de lo posible los ensayosin vivo recurrirn al menor número deindividuos posible e in!igirn elmínimo sufrimiento necesario.



"os ensayos in vivo son imprescindibles,pues aunque los modelos biológicos empleados tienen signi#cativasdi$erencias con el modelo &umano, sonun aporte crítico de información.



"as pruebas in vivo requieren de unaevaluación exitosa para poderconsiderarse idóneas y poder serllevadas a cabo.



"os estudios in vitro se realizangeneralmente en las células o tejidosanimales o &umanos $uera del cuerpo.

'ienen la ventaja de que no con$rontaproblemas de tipo ético y adems

permite un estudio ms preciso delmecanismo de acción en s mismo.



"a expresión in vitro (en vidrio) se re#ere a losprocedimientos que se realizan sobre matarialvivo o componentes de material vivo en placaspetri o en tubos de ensayo en condicionesde#nidas.



estos ensayos no permiten un estudio de lasposibles inter$erencias debidas al metabolismodel resto del organismo ni tampoco tienen encuenta la capacidad de absorción del tóxico, yese el motivo por el cual, a pesar de los

problemas éticos, los ensayos in vivo no puedenser sustituidos.



uando se trata de un ensayo in vivo y quieredemostrarse la toxicidad de un compuesto se &ade corroborar en dos especies (roedor y noroedor), pero con precaución, por qué no todaslas especies estn igual de admitidas a la &ora de

aceptarse para ensayo toxicológico.



*urante el desarrollo del experimentose tendr en cuenta el principio de lamnima dosis



'ambién se tiene en cuenta la gradualidad, se

realizan pruebas de detección sistemtica o unn+mero limitado de estudios de toxicidadcomunes, que pueden bastar para determinar elriesgo o sealar la necesidad de realizar otras

investigaciones.



El estudio realizado en los ensayos toxicológicosestar muy condicionado a la #nalidad misma delensayo, no todos los ensayos buscan determinarla toxicidad general de una sustancia, algunosensayos buscan in$ormación sobre un aspecto enparticular



-e realizarn dos modos de observación a largoplazo, durante una parte mayoritaria del ciclo devida del organismo con el que se realiza elexperimento, y a corto plazo.



-e realizarn ambos para determinar la toxicidadgeneral de un compuesto, estos estudiospermiten identi#car los órganos diana del tóxico ypueden indicar la necesidad de realizar otrostipos pruebas o pruebas ms espec#cas



El modo de exposición debe asemejarse en loposible a la exposición que se dar en los seres&umanos, no es lo mismo que un tóxico se nosadministre va intravenosa que por va oral oin&alada, puesto que se llevan a cabo una serie

de modi#caciones y se traspasan una serie debarreras dependiendo que se trate de una va uotra.



'ambién es importante medir los e$ectos sobre la

capacidad reproductora y los e$ectosteratogénicos.

-e deben medir los e$ectos agudos, semi/crónicosy crónicos, seg+n la cantidad de dosis en elperiodo de tiempo en el que se administran, quepuede ser una sola vez, a lo largo de semanas o alo largo de una parte importante de la vida



-e comienza la investigación con un punto de

inicio donde no se observen e$ectos adversos,012E".

El diseo del experimento debe permitir irconociendo los e$ectos de la sustancia acrecientes concentraciones del mismo.

'ambién es muy importante la con#rmación delas dosis administradas reales



El peso de los resultados obtenidos se determinaa partir de todos los datos disponibles deexperimentos, los datos de todos los estudiosdisponibles en los que se &ayan estudiadolquidos, células, tejidos u órganos iguales o

$uncionalmente relacionados.

"os resultados similares en di$erentes estudios yla demostración de relaciones dosis/respuesta ledan un valor agregado a la caracterización delpeligro.



3no o ms resultados positivos en laspruebas in vitro generalmente exigen unseguimiento mediante pruebas in vivo. "osresultados positivos en los bioensayos exigen

una interpretación cuidadosa respecto delmecanismo de acción, las posiblesdi$erencias entre especies en relación con laincidencia de base y con la respuesta, ytambién de la extrapolación de los datos

obtenidos con altas dosis a las dosis bajas.



Ensayos de citotoxicidad

in vitro 3n ensayo &abitual es el rojo neutro, se

realiza en células en cultivo, y en la mayorade las aplicaciones las células puedenmantenerse en placas de cultivo quecontiene 45 pocillos, cada uno de 5.6 mm dedimetro.

'ras el tratamiento con di$erentes

concentraciones, se lavan y se tien con rojoneutro, un colorante que puede absorber yretener +nicamente las células vivas.



7rueba 8''.

El 8'' (bromuro de 9(6,:/di/metiltiazol/;/il)/;,:/die$eniltetrazolio) es un colorante de

tetrazolio que se reduce a color azul por laacción de enzimas mitocondriales.



'oxicidad en órganos diana

-uelen utilizarse también en los ensayos invitro para evaluar la toxicidad en órganosdiana espec#cos.

8uc&as veces, cuando las células seextraen de animales y se ponen en cultivo,tienden a degenerarse rpidamente odesdi$erenciarse, es decir a perder susespecializaciones $uncionales (como si$uera un órgano).

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