Bol. San. Veg. Plagas, 19: 649-661, 1993

Estudio de la posible relación entre la caída de yemas en peral y la capacidad bacteriana para formar núcleos de hielos u originar podredumbre blanda

Se ha estudiado la población bacteriana existente en el exterior de las yemas y en el interior de los brotes de peral (Pyrus communis, L.), en cuatro fincas de las Vegas Bajas del Guadiana (Badajoz), donde se ha observado, además de un quemado de inflo­rescencias, una abundante caída de yemas a final de invierno y principios de primavera.

En las variedades de peral analizadas (Ercolini, Mantecosa y Blanquilla) se identifi­can Pseudomonas syringae y otras bacterias, algunas de las cuales son causantes de po­dredumbres blandas o presentan actividad INA +. Sin embargo ninguno de los organis­mos mencionados aparece asociado consistentemente con la caída de las yemas.

C. NOVAL, M. T. SEISDEDOS. Subdirección General de Sanidad Vegetal. Juan Bravo 3-B. 28006 MADRID. J. I. DE LA CRUZ. Servicio de Protección de los Vegetales. Consejería de Agricultura y Comercio. Junta de Extremadura. Plaza de la Soledad, 5 06001 BADAJOZ.

Palabras clave: Pseudomas syringae, podredumbre blanda, INA, caída de yemas, peral

C. NOVAL, M. T. SEISDEDOS y J. I. DE LA CRUZ

INTRODUCCIÓN

El Marchitamiento o Tizón bacteriano del peral (Pyrus communis L.) está producido (BARKER y GROVE, 1914) por Pseudomonas syringae pv. syringae van Hall, bacteria fi-topatógena que se encuentra viviendo como epífita sobre la superficie de numerosas plantas, tanto herbáceas como leñosas (LiN-DOW et al, 1978).

La enfermedad puede producir importan­tes pérdidas económicas cuando las condi­ciones climáticas (lluvias y fríos) especial­mente en el período de floración, favorecen la multiplicación de la bacteria (PANAGO-POULOS y CROSSE, 1964; WAISSBLUTH y LATORRE, 1978; MANSUELT y HATTINGH, 1986). En España hemos observado que al­gunos años motiva perjuicios de cierta con­sideración en zonas frutícolas tradicionales

como, por ejemplo, en el Valle del Ebro (Aragón y Cataluña), zona de El Bierzo (León) o en Extremadura. Sus síntomas pue­den ser confundidos con los del Fuego bac­teriano (Erwinia amylovora Burrill), espe­cialmente cuando la infección de las inflo­rescencias, que conlleva su atizonamiento, comienza a progresar en sentido descenden­te hacia los pedúnculos (BILLING et al., 1960). Otras manifestaciones de la enferme­dad son manchas o necrosis en hojas y fru­tos o chancros, a veces papiráceos, en los brotes.

La zona de Vegas Bajas del Guadiana, en la provincia de Badajoz, está siendo mues-treada sistemáticamente desde 1980, época en la que comenzó la campaña para la De­tección y el Diagnóstico Precoz del Fuego Bacteriano. Desde entonces los análisis de laboratorio confirman la presencia de la

Fig. 1 .-Arboles sanos y atacados (S. P. V. Badajoz).

l.-Yema a punto de caerse (S. P. V. Badajoz).

bacteria P.s. pv. syringae en las plantacio-nes de peral.

Una de las alteraciones que con mayorfrecuencia se observan en esta importanteárea frutícola es la caída prematura de lasyemas que afecta de forma especial a deter-minadas variedades, como ocurre con la va-riedad Ercolini.

Las figuras 1 a 5 muestran diversos dañosen la zona.

Durante varios años se han efectuado aná-lisis de yemas en los meses de Diciembre,Enero o Febrero y el diagnóstico más fre-cuente ha sido la identificación sólo esporá-dica de P.s. pv. syringae, Erwinia herbicolao Pseudomonas sp.

Se sabe que algunas bacterias asociadascon las plantas pueden contribuir a incre-mentar los daños del frío debido a su capa-cidad de inducir la formación de cristales dehielo a temperaturas cercanas a los 0o C(ARNY et al, 1976; LiNDOW et al, 1982;MAKI et al, 1974). Esta capacidad reside enel genoma bateriano y se conoce como acti-

Fig. 3.-Brotes afectados por ataque de bacteriosis. Obsérvese desprendimiento de la epidermis y caída de yemas(J. I. de la Cruz).

vidad INA+ (Ice Nucleation Activity). Secree que algunas cepas INA+, al causardaños de heladas, facilitan su propia pene-tración y la de otras bacterias dentro de lostejidos de la planta.

Entre las bacterias que con mayor fre-cuencia presentan actividad INA figuran:Pseudomonas syringae van Hall, P. fluores-cens Migula, P. viridiflava (Burkholder)Dowson, Erwinia herbicola (Lonis) Dye yXanthomonas campestris pv. translucens(Jones, Johnsond and Reddy) Dye.

En lo que se refiere a plantas leñosas, bac-terias INA+ han sido involucradas en dañosde diversos frutales como albaricoquero(Prunas armeniacae L.), cerezo (Prunusavium L.), ciruelo (Prunus domestica L.)melocotonero (Prunus pérsica L. Batsch),peral (Pyrus communis L.) (PROEBSTING

et al, 1982), almendro (Prunus amygdaíusL.) (LlNDOW y CONNELL, 1984), cítricos(YANKOFSKY et al, 1981), o, incluso en vid(LUISETTI et al, 1991). Pero en otros traba-

Fig. 4.-Desecamiento de inflorescencias(Miguel A. Martínez).

Fig. 5.-Caída de yemas y brotación a partirde las latentes (J. I. de la Cruz).

jos se sugiere una implicación de agentes nobacterianos como causa primordial de laaparición de núcleos de hielo (ANDREWSetal, 1983; ANDERSON etai, 1987).

En este trabajo se ha intentado averiguarsi P. syringae u otras bacterias con capaci-dad para formar núcleos de hielo u originarpodredumbres blandas, estaban relacionadascon la caída de las yemas de perales en lazona de las Vegas Bajas del Guadiana.

MATERIAL Y MÉTODOS

Toma de muestras

Se eligieron cuatro fincas situadas en lasVegas Bajas del Guadiana, cuyas plantacio-nes de perales habían presentado problemasdurante los últimos años por la abundantecaída de yemas en el período de finales deinvierno y principios de primavera.

Dentro de cada finca se escogieron lasparcelas según la edad de los árboles y elmuestreo se centró sobre la variedad Ercoli-ni, al ser la más afectada. En algunos casos,para ver diferencias poblacionales, el análi-sis se realizó también sobre las variedadesMantecosa Precoz Morettini y Blanquilla,que actuaban como polinizantes y, en gene-ral, no acusaban caída de yemas.

Cada muestra estaba constituida por 10-15 brotes procedentes de 2-3 árboles. Ade-más de muestras tomadas al azar -muestreogeneral-, en circunstancias concretas, losbrotes fueron seleccionados de acuerdo consu altitud sobre el suelo y/o su orientaciónen el árbol. El muestreo se realizó durante laprimera quincena de marzo de 1991, antesde iniciarse la brotación de los perales, esdecir en el estado fenológico C.

Las particularidades de las 18 muestras,aparecen reflejadas en los cuadros 1, 2, 3 y 4.

Las muestras, cuidadosamente empaque-tadas, fueron enviadas al laboratorio, dondese procesaron en las primeras 24 horas.

Extracción bacteriana

Cada muestra fue sometida a dos protoco-los de análisis para determinar la poblaciónbacteriana colonizadora de las yemas y laexistente en el interior de los brotes.

Población colonizadora de yemas(análisis externo)

En matraces de 100 mi. de capacidad con-teniendo 25 mi. de agua estéril, fueron intro-ducidas 50 yemas de cada muestra, con un

Cuadro 1 .-Toma de muestras en plantaciones de peral. Finca Las Veguitas(Término Municipal de Barbaño)

Cuadro 2.-Toma de muestras en plantaciones de peral. Finca La Vera(Término Municipal de Valdelacalzada)

Cuadro 3.-Toma de muestras en plantaciones de peral. Finca La Herradura(Término Municipal de La Garrovilla)

Cuadro 4.-Toma de muestras en plantaciones de peral. Finca El Hinojal(Término Municipal de Torremayor)

peso que oscilaba entre los 3,62 g y los4,50 g. Los matraces fueron colocados sobreun agitador en vaivén durante 30 minutos.De cada matraz se tomaron 5 mi de la sus-pensión y se prepararon cuatro series de di-luciones decimales en agua destilada estéril.En placas Petri, conteniendo medio B deKing (KING et al., 1954), se sembrarongotas de 9 ul de la suspensión madre y decada dilución, utilizando placas individualespara cada dilución y muestra. Se efectuarondos repeticiones de cada muestra. Las placasse dejaron en incubación a 25° C durante 3-4 días.

Población interna de brotes

Para determinar qué bacterias se encontra-ban en el interior de los brotes, fueron selec-cionados como lugares de análisis los pun-tos de inserción de las yemas con los brotesy, en los casos existentes, pequeños chan-cros papiráceos o áreas con ligera necrosis.Las zonas de análisis fueron desinfectadasmediante el paso de un algodón embebidoen alcohol, seguido de un ligero flameado,previo a la separación de la capa externa.Pequeños fragmentos del tejido subcorticalfueron colocados en placas de Petri, dilace-rados en unas gotas de agua estéril, y some-tidos a un ligero movimiento de vaivén du-rante 15 minutos. Unas gotas de la suspen-sión resultante fueron sembradas en placasconteniendo medio B de King (KB) y colo-cadas en las mismas condiciones de incuba-ción que en el caso de las yemas.

Cultivos bacterianos

Fueron seleccionadas colonias que se con-sideraron representativas de la poblaciónbacteriana en base al tiempo de visualiza-ción sobre la placa de cultivo, tamaño,forma, color u otros caracteres ópticos. Sedesecharon algunos tipos debido a que subajo número parecia indicar una existenciaocasional.

Las colonias fueron transferidas a tubos deensayo conteniendo KB y los cultivos obte-nidos, después de comprobar su pureza, fue-ron mantenidos mediante resiembra periódi-ca en KB y conservados bajo aceite mineral.

Además de los aislados procedentes delmaterial vegetal estudiado, se utilizaroncomo referencia cultivos de las siguientesbacterias: Pseudomonas syringae pv. syrin-gae (PD 1704; 20-89-1 ) Erwinia herbicola(PD 295), Pseudomonas viridiflava (PD1705), Xanthomonas campestris pv. translu-cens (71-5), P. cichorii (PD 1701), P. fluo-rescens (PD 1702). y P. corrugata (PD1707), pertenecientes a la colección del Ser-vicio de Protección de las Plantas de Wage-ningen, Holanda (PD), o a nuestra colección.

Caracterización de los aislados

Todos los aislados fueron testados paraobservar la fluorescencia bajo luz ultraviole-ta (350 nm) después de ser subcultivados enKB durante 48 horas a 25 C. Aquellos quedieron fluorescencia positiva fueron caracte-rizados según su reacción Lopat (LELLIOT etal, 1966):

- Para la producción de Levano se sem-braron en agar nutritivo sacarosa (5 % p/v)y se consideró resultado positivo la apari-ción de colonias abombadas después de 72horas de incubación.

- La existencia de citocromo c Oxidasase puso de manifiesto con el reactivo de Ko-vacs (KOVACS, 1956) y, en algún caso, conel oxalato de NN'dimetil parafenilendiami-no, anotándose resultado positivo si enmenos de 30 segundos aparecía un colorpúrpura o rosa, según el reactivo utilizado.

- La podredumbre de los tejidos de Patatase observó a las 48-72 horas de haber efec-tuado la inoculación en rodajas de patata.

- Para estudiar la degradación de la Argi-nina se siguió el método de Thornley(THORNLEY, 1960). Evaluando como positi-vo el viraje en anaerobiosis a un color rosamás fuerte que el testigo en un período com-prendido entre 2-10 días.

- La reacción de hipersensibilidad sobreTabaco (KLEMENT et al, 1964) se considerópositiva si aparecía un colapso celular de lazona infiltrada a las 24-48 horas.

Los aislados cuya fluorescencia sobre KBera negativa, fueron caracterizados según sureacción Gram (RYU, 1939) y su metabolis-mo respiratorio en el medio H-L (HUGH yLEIFSON, 1953), además de ser sometidos alas pruebas especificadas en el Lopat que seconsideraron precisas. En general todos losensayos fueron realizados siguiendo las in-dicaciones de Noval (NOVAL, 1991).

De cada aislado y de las cepas utilizadascomo referencia, se determinó su capacidadde inducir la formación de núcleos de hielo,según el método aconsejado por Hirano (Hl-RANO, 1988), siendo los tubos con tampónfosfato PBS 0,01 M, pH 7,0 chequeadospreviamente, por la posibilidad de existirnúcleos de hielo heterogéneos. Los tubos secolocaron en nevera a -15° C durante 30 mi-nutos antes de comenzar la experiencia. Alo largo de la misma se mantuvieron dentrode un baño de hielo y alcohol a temperatu-ras que oscilaban entre -10° C y - 3 o C. Lasuspensiones bacterianas (c = 108 cel/ml)preparadas para los ensayos, se mantuvieronen refrigerador a 4o C con objeto de minimi-zar la posible pérdida de actvidad INA debi-da a la temperatura ambiente.

RESULTADOS

Los resultados de los análisis aparecen re-cogidos en los Cuadros 5, 6, 7 y 8. En la co-lumna relativa a clasificación, no se mencio-na la de los microorganismos consideradossin importancia para este trabajo. En el casode las bacterias que mostraron fluorescenciapositiva en KB, Pseudomonas fluorescentes,especificamos el grupo en el que se clasifi-can según la propuesta de Lelliot (LELLIOT.et al, 1966) mencionando la especie o pato-var representativo.

La actividad formadora de núcleos dehielo en cepas usadas como referencia diopositiva en P.s. pv syringae, Xanthomonas

campestris pv, translucens y P. cichorii; ne-gativa en Erwinia herbicola y P.fluorescensy variable, en función de la temperatura, enP. corrúgala.

Finca Las Veguitas

Los resultados se exponen en el cuadronúmero 5. En líneas generales, la situaciónque presentan los árboles de la variedad Er-colini enclavados en la parcela 1-1 (mues-tras n.° 1-1-a, 1-1-b, 1-1-c y 1-1-d) puedeconsiderarse similar: ausencia o al menos,no detección de P. syringae y colonización,tanto interior como exterior de bacterias do-tadas de un elevado poder de descomposi-ción de los tejidos, puesto de manifiestosobre rodajas de patata, que han sido clasifi-cadas como Erwinia spp o Pseudomonas delos grupos IVa, IVb o Va de LELLIOT. Enrelación con el grupo Va, precisamos que laespecie representativa del mismo es P. tola-assii, patógeno del champiñón, pero en nin-gún momento queremos decir que se hayaencontrado P. tolaassü. Los análisis corres-pondientes a la variedad polinizadora Man-tecosa (1-1-e) revelan la presencia de unPseudomonas del grupo la, probablementeP. syringae pv. syringae.

En la parcela 1-2 no aparecen bacterias enel interior de los brotes y no se localiza nadade interés en las yemas.

Una situación diferente se plantea en laparcela 1-3, donde además de P. syringaeaparecen agentes de podredumbres comoErwinia spp y Pseudomonas del grupo IVb.

La actividad INA ha resultado positivapara los aislados de P. syringae, negativapara Erwinia spp, e incierta en el caso de al-gunos Pseudomonas de los grupos IVb y Va.

Finca La Vera

Los resultados se exponen en el Cuadronúmero 6. En la parcela 2-1, sobre la varie-dad Ercolini (muestra n.° 2-1-a) hemos en-contrado una bacteria que, por su levano

Cuadro 5.-Población bacteriana. Finca Las Veguitas

negativo, se ha clasificado en el grupo Ib;sin embargo, es probable que se trate deun aislado de P.s. pv syringae, con ese ca-rácter anómalo; también se detectan agen-tes de podredumbre blanda. En los análisisde la variedad polinizadora Mantecosa(muestra n.° 2-1-b) se aislan bacterias sininterés.

En la segunda parcela se ha encontradoP.s. pv syringae en el interior y en el exte-rior de ambas variedades, y agentes de po-dredumbre blanda en las yemas de la varie-dad Ercolini (muestra 2-2-a).

La actividad INA sólo ha resultado positi-va para algunos aislados de los Pseudomo-nas enclavados en el grupo 1.

Cuadro 6.-Población bacteriana. Finca La Vera

Finca La Herradura

Los resultados se recogen en el Cuadro 7.Se pone de manifiesto la existencia de P.s.pv syringae en todas las muestras analiza-das, encontrándose además Erwinia spp,causante de podredumbre blanda, en lamuestra n.° 3-1-a. Al igual que en el casoanterior aparece una bacteria pertenecienteal grupo Ib.

La actividad INA ha resultado positivatanto en los aislados del grupo 1, como enErwinia spp.

Finca El Hinojal

Los resultados se muestran en el Cuadro 8.En dos de las tres muestras analizadas apare-ce P. syringae dotada, de capacidad INA+.

DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES

La capacidad de algunas bacterias para pro-ducir enfermedades en las plantas, inducir laformación de núcleos de hielo, o descomponercon rapidez los tejidos vegetales podría habermotivado o influido en la caída de yemas quese presenta de forma muy acusada sobre algu-na variedad de las estudiadas de peral, en lazona de las Vegas Bajas del Guadiana.

Estudios realizados en una importantezona frutícola de Cataluña (MONTESINOS yVlLLARDELL, 1991) correlacionan el que-mado de las yemas durmientes en peral conla existencia de P. syringae y su capacidadde formar núcleos de hielo. Precisan los au-tores que, incluso en ausencia de frío, P. sy-ringae puede producir el quemado de lasyemas siempre que exista en una cantidadsuficientemente elevada.

Cuadro 7.-Población bacteriana. Finca La Herradura

Aunque más adelante se discutirán los re-sultados en cada una de las fincas, de formageneral se ha encontrado P. syringae -pro-bablemente pv. syringae-, en todas las fin-cas. Esta bacteria es un organismo que sepuede localizar en la superficie de muchasplantas sin producirles daño alguno, convi-viendo en perfecta armonía con los restantescomponentes de la flora epífita; circunstan-cias aún desconocidas inducen su rápidaproliferación y comienza a comportarsecomo agente nocivo para las plantas. Es porello que su localización en el interior o en elexterior de la planta no tiene la misma im-portancia ya que la presencia interior nor-malmente indica un comportamiento pató-geno, mientras que su existencia en superfi-cie puede, y es función del número de bacte-rias existentes, carecer de importancia o in-dicar la proximidad de un ataque como

agente patógeno. Esta situación no es exclu-siva de P. syringae, sino que afecta a pató-genos que presentan fases epífitas, como esel caso de Erwinia amylovora. El conocerlos momentos en que comienza a producirseel incremento poblacional o los lugares de laplanta donde se alberga la bacteria, revistegran importancia desde un punto de vistapráctico, puesto que la lucha contra losagentes nocivos será más efectiva y econó-mica, al saber dónde y cuándo hay que apli-car las medidas oportunas de control.

La situación que hemos encontrado en lascuatro fincas estudiadas es la siguiente:

Finca Las Veguitas

En las muestras de la parcela 1-1, relati-vas a la variedad Ercolini y, tomadas al azar

de los árboles (1-1-a y 1-1-b) parece ser quela presencia y uniformidad de bacterias tipoP. marginalis, desencadena una caída deyema más intensa que cuando este organis-mo está ausente y existe una competencia deotras bacterias con menor capacidad des-tructiva de los tejidos vegetales.

En cuanto a la distribución relacionadacon la altitud a la que se tomó la muestrasobre el árbol (1-1-c y 1-1-d), se ha encon-trado una población de Pseudomonas delgrupo IVb (P. fluorescens/putida) en lazona baja del árbol mientras que en la zonaalta aparecen organismos no representati-vos.

Los análisis correspondientes a la varie-dad polinizadora Mantecosa (1-1-e) revelanla presencia de P. syringae. Su localizaciónen el exterior de la planta y la ausencia debacterias con poder pectinolítico, explicaríala no caída de yemas en estos árboles.

Podría concluirse que el problema decaída de yemas en esta parcela no está ini-cialmente motivado por una acción bacteria-na y que las bacterias asociadas a la caída de

yemas son, en este caso, agentes oportunis-tas que aceleran, por medio de su poder dedescomposición de los tejidos, el desprendi-miento de las mismas.

Un interrogante se presenta sobre el sig-nificado de la detección de P. syringaesobre la variedad polinizadora. Por unaparte podría haber ocurrido una dispersióninicial a partir del foco localizado en la va-riedad Mantecosa y originado lesiones porsu capacidad de incrementar los daños delfrío; su no localización en los análisis ex-ternos de las muestras con caída de yemassería quizás, debido a su enmascaramientoen las placas de cultivo por el desarrollomás rápido de los oportunistas. Por otraparte podría considerarse que es precisa-mente sobre la variedad polinizadora dondese encuentra el mayor foco de P. syringae,que va a producir posteriormente, el que-mado de las inflorescencias en los peralesen esta parcela.

Los análisis de la parcela 1-2, plantaciónde árboles de bastante edad, no revelan bac-terias en el interior, y en el exterior se en-

cuentra una población pectinolítica. La dudaes si la caída de yemas podría deberse al en-vejecimiento de la planta.

En la tercera parcela analizada (1-3). queno presenta prácticamente caída de yemas,aparece P. syringae en el interior de los bro-tes, y agentes de podredumbre blanda en elinterior y en el exterior. Concurren en ellatodas las circunstancias para que se hubieseproducido un desprendimiento masivo deyemas, con la única circunstancia en contrade que se trata de árboles más viejos que losanalizados en la parcela 1 -1.

Finca La Vera

Se han estudiado mediante un muestreo ge-neral tanto de la variedad Ercolini como de lapolinizadora Mantecosa, dos parcelas bastan-te similares y en todos los casos en que haycaída de yemas, se ha encontrado P. syringaeacompañada, en los análisis de la variedadErcolini, de agentes de podredumbre blanda.

En esta finca parece estar asociada la caídade yemas con la existencia de P. syringae.

Finca La Herradura

Esta finca presentaba una importante caídade yemas en la variedad Ercolini, aparente-mente más acusada en la zona baja de los árbo-les, mientras que sobre la variedad polinizado-ra Blanquilla no se apreciaba desprendimiento.

Aunque se encuentra P. syringae tanto enla zona baja del árbol (3-1-b), como en lazona alta (3-1-c), la localización interna, enel primero de los casos presupone, un mayorriesgo de daños a la plantación.

Tampoco en esta finca parece estar asociada lacaída de yemas con la existencia de P. syringae.

Finca El Hinojal

Esta finca presentaba un problema generalde caida de yemas, siendo aparentementemás acentuado en las zonas más bajas delárbol y con orientación norte.

Los resultados de los análisis indican lapresencia de P. syringae en el interior de laplanta en la muestra 4-1-a, y en el exterioren la muestra 4-1 -b.

El hecho de no haber encontrado agentescausantes de podredumbres blandas en nin-guna de las tres muestras analizadas, parececonfirmar que la actuación de estos organis-mos se produce tras la caida de las yemas,debida inicialmente a otras causas.

No se ha estimado oportuno debatir enesta discusión el papel que tiene la actividadformadora de núcleos de hielo de algunosaislados, al cuestionar que la caída de yemassea debida a la actuación bacteriana o a otrascausas. De hecho en este trabajo se pone demanifiesto la incierta incidencia de las bacte-rias en la caída prematura de yemas.

Se observa una presencia, a veces muyabundante de P. syringae sobre las variedadespolinizadoras, Mantecosa y Blanquilla, a pesarde no presentar caída de yemas. En general, lapresencia de P. syringae y de la poblaciónbacteriana causante de descomposición de teji-dos es mucho más frecuente en las zonas bajasdel árbol, debido tal vez, a una mayor concen-tración de la humedad. En las zonas altas delárbol, su presencia es escasa y, en muchoscasos, sólo de localización externa.

ABSTRACT

NOVAL, C ; SEISDEDOS, M. T. y DE LA CRUZ, J. I. (1993). Estudio de la posible rela-ción entre la caída de yemas en peral y la capacidad bacteriana para formar núcleos dehielos u originar podredumbre blanda. Bol. San. Veg. Plagas, 19(4): 649-661.

The Bacterial population has been studied on buds and in shoots of pear (Pyruscommunis, L), grown in four zones of the Guadianas Vegas Bajas (Badajoz), which, in

addition to burnt inflorescences, threre exists a significant falling of buds at the end ofwinter time and at the beggining of spring.

Pseudomonas syringae and other bacteria, some of which are causal agents of softdecay, and/or have INA+ activity were identified in the analyzed varieties: Ercolini,Mantecosa and Blanquilla. None of the named organisms appear consistentley associa-ted with the falling of buds.

Key words: Pseudomonas syringae, soft decay, INA, fallen buds, pear tree.

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(Aceptado para su publicación: 23 abril 1993),