EL METODO DE FLOTACION PARA LA IDENTIFICACION DE HUEVECILLOS DENEMATODOS EN CANIDEOS Y FELINOS.1. INTRODUCCION:La parasitologa estudia los seres que viven momentnea y/o permanentemente, sobre o dentro de otros organismos vivientes, obteniendo de los mismos su subsistencia. Las enfermedades parasitarias son la interrelacin entre el agente etiolgico (parsito), el hospedero y el medioambiente, en donde al romperse la relacin de equilibrio se produce sintomatologa y se origina la enfermedad. Existen algunos parmetros que nos sirven para destacar la importancia que guardan en Medicina Veterinaria, por ejemplo: la incidencia en animales domsticos, la mortalidad por parasitosis, las erogaciones econmicas producidas a los productores, as como la repercusin social y econmica. Todo ello nos lleva a considerar la importancia de conocer no solo alas enfermedades parasitarias, sus agentes etiolgicos, patologa, sintomatologa, y la forma de combatirla, sin lograr su control mediante el diagnstico e identificacin que permita el control de las infestaciones subsecuentes.2. PRINCIPIO Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACINLa presente prctica consiste en la determinacin de parsitos mediante tcnicas de frotis directo y flotacin. Consiste en dispersar una suspensin de material fecal en solucin de mayor densidad que los huevecillos de parsitos, la diferencia en la gravedad especfica hace que los huevos se eleven a la superficie. Cuando los huevos permanecen demasiado tiempo en la solucin de concentracin, pueden deformarse. Esta tcnica es recomendada para la identificacin de quistes de protozoarios y huevos de helmintos, ya que son capaces de flotar en pesos especficos de 1,000 a 1,200. Los huevecillos de tremtodos son mucho ms pesados, por tanto solo flotarn en lquidos con pesos especficos superiores a los 1,300.3. LISTA DE REQUERIMIENTOS3.1 Reactivos (soluciones de enriquecimiento)NUM.CLAVENOMBRE DEL REACTIVOCONC.CANTIDADSolucin saturada de sal1.190 a 20C5LSolucin saturada de azcar1. 120 a 15C5 LSolucin cloruro de zinc1.890 a 20C5 L3.2 Equipo de Laboratorio1.Microscopio2.Centrfuga (opcional)3.3 Materiales de laboratorio 5Vasos de precipitado 100 ml10Tubos de ensaye10Portaobjetos10Cubreobjetos5Gradillas5Pinzas5Coladeras de malla fina de plstico 6 a 7 cmdimetro10Abatelenguas o varillas de vidrio10Gasas10Guantes desechables5Lazos de alambre5Esptulas3.4 Material Biolgico 1.heces de perro 2. heces de gato3.heces de aves4.heces de cerdo5.heces de bovino u ovino4. TECNICA O PROCEDIMIENTO4.1 FROTIS DIRECTOSe emulsifica una pequea cantidad de heces en agua y se aplica una pequea capa sobre el portaobjetos. Se coloca el cubreobjetos y se examina el frotis en el objetivo de menor aumento, investigando la presencia de huevos, quistes y larvas. Este mtodo es valioso cuando se sospecha dela presencia de larvas de nemtodos o protozoarios mviles.

4.2 MTODO DE FLOTACIONEn un vaso de precipitado de 100 ml se mezclan 2 g de heces con algo de solucin de enriquecimiento utilizando para ello una esptula. Luego se agregan 90 ml de solucin de enriquecimiento agitando vigorosamente para obtener una mezcla bien homognea. Si las heces contienen muchas partculas grandes se cuela la mezcla en colador fino. Se debe recordar que algunos huevos quedan en el residuo detenido por la malla del colador. Lugeo se deja reposar la mezcla por unos minutos hasta que las burbujas de aire hayan salido y dejar flotar cuidadosamente un cubreobjetos sobre la superficie del lquido. Los huevos de parsitos flotarn hacia la superficie y se adherirn al cubreobjetos. Despus de media hora el cubre objeto es cuidadosamente tomado con una pinza y colocado sobre el portaobjetos. La preparacin es observada al microscopio. La flotacin de los huevos en la solucin de enriquecimiento se puede acelerar por medio de la centrifugacin. El tubo para centrfuga debe ser lo suficientemente ancho que permita colocar el cubreobjetos sobre la superficie del lquido. La suspensin se centrifuga con el cubre objeto sobre la superficie del lquido. Si ello no es posible, la capa superficial del lquido puede ser sacada con un lazo de alambre y luego colocada sobre el portaobjetos.

ELECCION DEL METODO:Para este caso se realiza el mtodo de flotacin para la identificacin de huevecillos de nematodos en caninos y felinos, utilizando como muestra las heces de gatos y perros, el anlisis es cualitativa, ya que se quiere conocer la existencia o no de estas larvas en la muestra, para ello se utiliza la diferencia de densidades. PREPARACION DE LA MUESTRA:Se hace de forma instrumental no estequiometria.SEPARACION DE INTERFERENCIAS, se cuela la disolucin (heces con agua).El anlisis es no destructivo.Se hace la disolucin de la muestra con agua.Se trata de un MACROMETODO por la cantidad significativa de la muestra.MEDIDA DE LA PROPIEDAD: gravimtrica, se convierte el constituyente (muestra) de forma que por diferencia de densidad se pueda obtener las larvas (por su menor densidad flotara).CALCULOS Y RESULTADOS:Con el cubre objeto puede obtenerse los huevecillos o larvas que estarn flotando en la disolucin, y ser observados en el microscopio.

DETERMINACION DE HUMEDAD O SUSTANCIAS VOLATILESOBJETIVOS Determinar el contenido de humedad de una muestra alimenticia de origen animal o vegetal,aplicando la tcnica de deshidratacin completa con aire caliente. Escoger un alimento cuyos resultados se puedan comparar con datos tericos encontrados en labibliografa.

INTRODUCCIONEl agua es el nico ingrediente de los alimentos que est prcticamente presente en todos ellos y su cantidad, estado fsico y dispersin en los alimentos afectan su aspecto, olor, sabor y textura.Las reacciones qumicas y las interacciones fsicas del agua y de sus posibles impurezas con otros componentes de los alimentos determinan frecuentemente alteraciones importantes durante su elaboracin. Los alimentos en general pueden considerarse integrados por dos fracciones

primarias: su materia seca y cierta cantidad de agua o humedad; esta agua no est solamente adherida a la superficie de los alimentos sino que tambin se encuentra ntimamente asociada como tal a ellos y por tanto incorporada a su naturaleza y composicin qumica. Es obvio que el hidrgeno y el oxgeno constitutivos de esta agua deben ser considerados como parte de la composicin elemental de la masa y materia de los alimentos, en consecuencia, si se lograse extraer esta agua presente en los productos alimenticios, se puede as demostrar y precisar la contribucin real de estos dos elementos y del agua que ellos forman a la composicin elemental ya la composicin molecular de un alimento dado. El contenido de agua en los alimentos guarda estrecha relacin con el contenido de humedad en el aire que los rodea. Esta relacin reviste gran importancia en la conservacin de los materiales alimenticios y por tanto en la proteccin de su calidad.

Material de vidrio y elementos de laboratorio Cantidad

Capsula de porcelana 2Esptula 1Pinza para crisol 1La determinacin de humedad o sustancias voltiles a 105 C se basa en la perdida de peso que sufre el alimento al calentarlo a 105 C. Este valor incluye adems del agua propiamente dicha, las sustancias voltiles que acompaan al alimento. (Realizar prueba por duplicado)- Se pesan con exactitud 5g de la muestra preparada en una capsula de porcelana previamentetarada y pesada.- Se lleva a desecacin en una estufa a presin atmosfrica entre 100 C y 105 C, o en una estufaal vaco a 70C, durante dos a tres horas.- Se retira la capsula de la estufa y se coloca inmediatamente en un desecador hasta que alcanzanla temperatura ambiente.- La muestra desecada se pesa.- Si es posible, se deben repetir las operaciones de secado, enfriada y pesada hasta cuando se obtenga un peso constante, esto es cuando toda el agua de la muestra haya sido eliminada; luego se guarda en el desecador la muestra deshidratada.- A partir del peso obtenido se calcula el porcentaje de agua en base hmeda (se expresa en gramos de agua por unidad de peso o por 100 gramos del alimento (g agua/g producto).- Calcular el porcentaje de materia seca.

CALCULO% Humedad = perdida de peso * 100 / peso muestra

ELECCION DEL METODO:.se hizo el anlisis de forma cuantitativa ya que se quiere determinar la prdida de peso al aplicar desecacin a la muestra de carne y obtener de esa forma la humedad y sustancias voltiles que acompaan a la carne PREPARACION DE LA MUESTRA:Se hace de forma instrumental no estequiometria, por desecacin de la misma.El anlisis es no destructivo.Se trata de un MACROMETODO por la cantidad significativa de la muestra.MEDIDA DE LA PROPIEDAD: gravimtrica, se convierte el constituyente (muestra) de forma que por diferencia de peso de la muestra se pueda calcular el % de humedad de la carne.RESULTADOS:Se obtiene el % de humedad de la carne o embutido.

DETERMINACION DE CENIZAS O MATERIA MINERAL EN UNA MUESTRA ALIMENTICIA:OBJETIVOS

Determinar el residuo inorgnico de una muestra alimenticia de origen animal o vegetal, utilizando la tcnica de calcinacin a 550oC. Escoger un alimento cuyos resultados se puedan comparar con datos tericos encontrados

INTRODUCCION

Todos los alimentos contienen elementos minerales formando parte de compuestos orgnicos e inorgnicos. La incineracin para destruir toda la materia orgnica cambia su naturaleza; las sales metlicas de los cidos orgnicos se convierten en xidos o carbonatos o reaccionan durante la incineracin para formar fosfatos, sulfatos o haluros y algunos elementos, como el azufre y los halgenos, pueden no ser completamente retenidos en las cenizas perdindose por volatilizacin.Debido a esto, la naturaleza y calidad de las variadas combinaciones minerales que se encuentranen los alimentos son difciles de determinar, an cuando el resultado de la incineracin del materialpermite una orientacin sobre su cantidad aproximada.

En general, las cenizas se componen de carbonatos originados de la materia orgnica y no propiamente de la muestra; en las cenizas vegetales predominan los derivados del potasio y en las animales los del sodio. El carbonato potsico se volatiliza apreciablemente a 700oC y se pierde casi por completo a 900oC, el carbonato sdico permanece inalterado a 700oC, pero sufre prdidas considerables a 900oC. Los fosfatos y carbonatos reaccionan adems entre s. La determinacin debe hacerse aumentando progresivamente la temperatura del horno, hasta alcanzar el rojo oscuro ( 550oC). No se debe dejar pasar de esta temperatura pues se podran descomponer los carbonatos presentes y se volatilizaran otras sustancias como los compuestos de fsforo produciendo resultados errneos.Otra forma de destruir la materia orgnica es por oxidacin hmeda, con cido ntrico o sulfricoconcentrado. Posteriormente, el residuo de cenizas puede utilizarse para el anlisis del contenidode algunos elementos que, ahora en forma predominantemente mineral, ofrecern caractersticasfsicas y qumicas que harn posible su identificacin y determinacin mediante reacciones opruebas rpidas y completas, con mayor facilidad, exactitud y certeza.

MATERIALES

Material de vidrio y elementos de laboratorio CantidadCrisol de porcelana con su tapa 2Esptula 1Pinza para crisol 1

PROCEDIMIENTORealizar prueba por duplicado- Secar en la estufa a 100oC por 30 minutos un crisol de porcelana limpio con tapa y posteriormente enfriarlo dentro de un desecador y pesarlo exactamente.- Pesar con la mayor precisin posible una muestra de 1.0 g. del alimento preparado en el crisol de porcelana con tapa.- Colocar el crisol con la muestra y su tapa en un horno o mufla y llevarlo progresivamente a una temperatura que no exceda los 425oC, con el fin de lograr la incineracin y liberacin de los compuestos gaseosos sin formacin de llamas.- Aumentar la temperatura gradualmente hasta llegar a un mximo de 550oC y mantenerla a estenivel durante el tiempo necesario (~2h) para obtener unas cenizas blancas o grisceas.

- Dejar enfriar el crisol tapado en la mufla o en el aire hasta cerca de 60oC y luego llevarlo a temperatura ambiente dentro del desecador.- Pesar el crisol con las cenizas y la tapa.- Con los resultados obtenidos, calcular en bases hmeda y seca el porcentaje de cenizas.

ELECCION DEL METODO:Para este caso se realiza el mtodo de calcinacin , la muestra de alimento se somete a una incineracin para identificar la composicin de los residuos y hallar el porcentaje de cenizas., anlisis cualitativo. PREPARACION DE LA MUESTRA:Se hace de forma instrumental no estequiometria.El anlisis es destructivoSe procede a incinerar la muestra la la identificacin de cenizas.Se trata de un MACROMETODO por la cantidad significativa de la muestra.RESULTADOS:

Se obtiene finalmente con esta incineracin el porcentaje de cenizas de la muestra.

NOMBRE DE LA PRCTICA: Protena C reactiva

COMPETENCIA: Determina y cuantifica la protena C reactiva en suero sanguneo humano que cursa con un proceso inflamatorio o necrtico.

REACTIVOS: Un equipo para PCR que contiene los siguientes reactivos: un Ltex anti protena C reactiva (conservar entre 2 y 8 C) un Suero control positivo Un Suero control negativo

MATERIAL: Laminillas con 3 reas marcadas, con fondo negro para realizar la prueba. Aplicadores de madera Jeringa, torundas con alcohol y torniquete Tubo rojo o con gel para la toma de sangre. Rotor Reloj o cronmetro Centrfuga Pipeta pasteur Pipetas graduadas de 5 ml Pipetas pistn de 100 y 500 micro litros Perilla de tres vas

INTRODUCCINLa protena C-reactiva es un tipo especial de protena producida por el hgado que slo est presente durante episodios de inflamacin aguda. El aspecto msimportante de la PCR es su interaccin con el sistema del complemento, el cuales uno de los mecanismos de defensa contra elementos extraos.A pesar de que ste no es un examen especfico, s advierte de forma general sobre la presencia de un proceso inflamatorio agudo. El mdico puede utilizar este examen para evaluar una exacerbacin de artritis reumatoide o de fiebrereumtica. El examen tambin puede ser til para evaluar la respuesta a la terapia. La protena C reactiva no se eleva de forma habitual en enfermedades producidas por virus. La protena C reactiva se eleva ante un problema infeccioso o inflamatorio antes que la VSG y comienza a disminuir ante la recuperacin de la enfermedad. 30Si se trata la enfermedad con aspirina o antiinflamatorios desaparece su elevacin. La protena C reactiva aparece elevada en el infarto de miocardio. Tambin puede ser de ayuda tras una intervencin de ciruga, ya que aparece elevada durante 3 4 das, para luego disminuir, si persiste elevada es que hay alguna infeccin o complicacin post-quirrgica.

PROCEDIMIENTO

PRUEBA CUALITATIVA

1. Extraiga sangre sin anticoagulante, Centrifuga durante 5 minutos a 2000 rpm y separe el suero.

2. Diluya el suero a probar (1:40) con solucin salina amortiguadora: 2 gotas (0.1 ml) del suero en 3.9 ml de solucin salina amortiguadora.

3. Coloque una gota de la solucin anterior en una de las divisiones de la placa de vidrio, en las otras reas coloca una gota de suero control negativo y suero control positivo.

4. Aada una gota de ltex anti protena C reactiva a cada una de lasmuestras.

5. Oscile suavemente la placa durante 2 minutos y observe si se presentaaglutinacin macroscpica.

INTERPRETACIONPositivo: Aglutinacin visible con formacin de grandes agregados y fondo claro comparable al control positivo. Si la prueba de suero sale positiva se deber realizar la prueba cuantitativa.

Negativo: Suspensin uniforme sin aglutinacin visible, comparable al control negativo. En ocasiones se pueden apreciar finas granulaciones que no exceden a las observadas con el control negativo, por lo que este fenmeno no deberinterpretarse como aglutinacin.

PRUEBA CUANTITATIVA:1. Prepare diluciones del suero problema en solucin salina de la siguiente manera: Coloque 5 tubos de ensayo en una gradilla, deposite 0.5 ml de solucin salina en cada uno de los tubos. Aada0.5 ml del suero diluido1:40 (ver prueba cualitativo) al primer tubo. mezcle bien y transfiera 0.5 ml de la dilucin anterior al segundo tubo. Contine efectuando la misma operacin hasta terminar con el tubo No.5. TUBO 1 1/80 2 1/160 31 3 1/320 4 1/640 5 1/12802. Utilizando un capilar o gotero, ponga una gota de cada dilucin en las divisiones de la placa de vidrio previamente marcadas.3. Aada una gota de ltex anti protena C reactiva a cada divisin.4. Mezcle con un aplicador, desde la dilucin ms elevada hasta la ms baja y extienda por toda el rea del ovalo5. Oscile suavemente la placa durante 2 minutos y observe si se presenta aglutinacin macroscpica.

.ELECCION DEL METODO:Para este caso se realiza el proceso en dos fases primero se hace un anlisis cualitativo y dependiendo de este se hace cuantitativo.PREPARACION DE LA MUESTRA:Se hace de forma qumica (estequiometria).Se realiza centrifugacin de la muestra (sangre)El anlisis es no destructivo.Se trata de un MACROMETODO por la cantidad significativa de la muestra.MEDIDA DE LA PROPIEDAD, volumtrica se convierte el constituyente (muestra) de forma que se aaden volmenes y ayuda a mostrar la aglutinacin.RESULTADOS:La dilucin ms elevada del suero que muestre aglutinacin visible, se consideracomo el titulo de protena C reactiva en el suero plasma.