efecto sedante del extracto alcóholico de hojas y flores ... · efecto anti-agitación realizados...
TRANSCRIPT
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
UNIDAD DE POSGRADO
Efecto sedante del extracto alcóholico de hojas y flores de
Melissa officinalis “Toronjil” MAS Matricaria
chamomilla “Manzanilla” sobre la ansiedad inducida en
ratones albinos
TESIS
Para optar al Grado Académico de Magister en Farmacología con mención en Farmacología Experimental
AUTOR
Jesús Pedro Buendía Ochoa
ASESOR
Jorge Luis Arroyo Acevedo
Lima – Perú
2015
DEDICATORIA
A Dios y a Jesucristo su Hijo Nuestro Señor
Todo lo puedo en Cristo que me fortalece
Filpenses 4, 13
A mis queridos Padres: Tereza y Epifanio, y a mi estimada Familia.
Por su paciencia y por siempre estar a mi lado en los momentos difíciles,
iluminando mis dias.
A mi maestro, asesor y amigo, Dr Jorge Luis Arroyo Acevedo
Por sus valiosas enseñanzas y apoyo incondicional, motivador para mi
espíritu investigador.
ÍNDICE
CAPITULO 1: INTRODUCCIÓN 1.1 Situación Problematica 1 1.2 Formulación del Problema 2 1.3 Justificación Teórica 2 1.4 Justificación Práctica 3 1.5 Objetivos 4 1.5.1. Objetivo General 4
1.5.2. Obejetivos Específicos 4 CAPITULO 2: MARCO TEÓRICO 2.1. Marco Filosófico 5 2.2 Antecedentes del Problema 7 2.3 Bases Teóricas 21 2.4 Definición de Términos 36 CAPITULO 3: METODOLOGÍA 3.1 Tipo y Diseño de Investigación 39 3.2 Unidad de Análisis 40 3.3 Población de Estudio 40 3.4 Tamaño de Muestra 40 3.5 Selección de Muestra 40 3.6 Técnicas de Recolección de Datos 41 CAPITULO 4: RESULTADOS Y DISCUSIÓN 4.1 Resultados 50 4.2 Discusión 69 CONCLUSIONES 76 RECOMENDACIONES 77 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 78 ANEXOS
LISTA DE FIGURAS
Figura Nº 1
Porcentaje de animales protegidos frente a la inducción de hiperactividad de
cambios conductuales con NMDA (N-metil-D-aspartato).
Figura Nº 2
Tiempo expresado en minutos de los episodios de hiperactividad y cambios
conductuales, producidos por la administración de NMDA y antagonizadas
por DAP7 y EAMM.
Figura Nº 3
Dosis efectiva media del EAMM sobre la hiperactividad y los cambios
conductuales inducidos con NMDA.
Figura Nº 4
Tiempo de dormir en minutos, comparado con el estándar farmacológico
Diazepam 50 mg/Kg.
Figura Nº 5
Porcentaje de hipnosis (Tiempo de dormir), comparado con el estándar
farmacológico diazepam.
Figura Nº 6
Tejido cerebral, sin alteraciones. Solución Twen 80. (40x).
Figura Nº 7
Tejido cerebral, estructuras celulares conservadas. EAMM. (40X).
Figura Nº 8
Bazo, sin alteraciones. Solución Twen 80. (40X).
Figura Nº 9
Bazo, estructuras celulares conservadas. EAMM. (40X).
Figura Nº 10
Corazón, sin alteraciones. Solución Twen 80. (40X).
Figura Nº 11
Corazón, estructuras celulares conservadas. EAMM. (40X).
Figura Nº 12
Hígado, sin alteraciones. Solución Twen. (40X).
Figura Nº 13
Hígado, estructuras celulares conservadas. EAMM. (40X).
Figura Nº 14
Pulmón, sin alteraciones. Solución Twen 80. (40X).
Figura Nº 15
Pulmón, estructuras celulares conservadas. EAMM. (40X).
Figura Nº 16
Riñón, sin alteraciones. Solución Twen 80. (40X).
Figura Nº 17
Riñón, estructuras celulares conservadas. EAMM. (40X).
Figura Nº 18
Niveles de urea en plasma de ratas normales luego de 60 días de
administración de solución Twen 80, 5mL/Kg. y de EAMM 4 g/Kg.
Figura Nº 19
Niveles de TGP en plasma de ratas normales luego de 60 días de
administración de Solución Twen 80, 5mL/Kg. y de EAMM, 4 g/Kg.
Figura Nº 20
Niveles de colesterol en plasma de ratas normales luego de 60 días de
administración de solución Twen 80, 5mL/Kg. y de EAMM, 4 g/Kg.
Figura Nº 21
Niveles de HDL en plasma de ratas normales luego de 60 días de
administración de solución Twen 80, 5mL/Kg. y de EAMM, 4 g/Kg.
RESUMEN
Introducción: Ansiedad enfermedad del milenio, el cual requiere tratamiento
para evitar trastorno mayores. Objetivo: Determinar efecto sedante de
Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla” sobre
ansiedad inducida en ratones albinos. Diseño: Experimental. Lugar:
Facultad de Medicina y Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad
Nacional Mayor de San Marcos. Material Biológico: ratones, ratas albinos.
Intervenciones: Treintaises ratones fueron inducidos a hiperactividad y/o
cambios conductuales por NMDA, considerándose grupos 1) SSF 10 mL/kg;
2) NMDA 75 mg/kg; 3, 4, 5) NMDA + Extracto 1, 2, 4 g/Kg
correspondientemente, y 6) NMDA + DAP-7 antagónico del NMDA 0.33
nmol/kg; observándose hiperactividad, cambios conductuales, periodo
latencia en minutos y porcentaje de protección. Se comparó el efecto
sedante con diazepam en 30 ratones: 1) SSF 10 mL/kg; 2) diazepam 50
mg/kg; 3, 4, y 5) Extracto 1, 2, 4 g/kg respectivamente, midiéndose tiempo
de dormir (minutos). Se realizó el estudio de estudio de toxicidad crónica a
60 días en 20 ratas divididos en 4 grupos: 1, 2 blanco control 3, 4, (extracto
alcohólico) a dosis de 4 g/Kg. por vía oral, se evaluó los niveles tóxicos
determinando a nivel, Bioquímicos: urea, colesterol, transaminasas,
lipoproteína HDL e histología. Resultados: Los compuestos fenólicos y
terpenoídes estuvieron en mayor cantidad en el extracto alcohólico; el 100%
(p<0.05) de ratones mostró efecto sedante; los hallazgos hematológicos,
bioquímicos se encontraron dentro de los límites aceptados; e
histopatológicamente no hubo evidencia de cambios morfológicos.
Conclusiones: El extracto alcohólico de hojas y flores de Melissa
officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla” es sedante
en ratones, y sin toxicidad en ratas.
Palabras clave: Extracto alcohólico, sedación, plantas medicinales, NMDA,
diazepam, DAP-7
ABSTRACT
Introduction: Anxiety millennium ilness requires treatment to prevent further
disorder. Objective: To determine the sedative effect of Melissa officinalis
"Toronjil" Matricaria chamomilla more "Manzanilla" on anxiety induced in
albino mice. Design: Experimental. Location: Faculty of Medicine and
Faculty of Pharmacy and Biochemistry of the Mayor national university, San
Marcos. Biological Material: Mice, albino rats. Interventions: 36 mice were
induced hyperactivity and / or behavioral changes by NMDA, considering
groups 1) SSF 10 mL / kg; 2) NMDA 75 mg / kg; 3, 4, 5) NMDA + Extract 1,
2, 4 g / Kg correspondingly, and 6) NMDA antagonist + DAP NMDA-7 0.33
nmol / kg; observed hyperactivity, behavioral changes, latency period in
minutes and percentage of protection. Was compared the sedative diazepam
in 30 mice: 1) SSF 10 mL / kg; 2) diazepam 50 mg / kg; 3, 4, and 5) Extract
1, 2, 4 g / kg, respectively, measured sleep time (minutes). Chronic toxicity
study it has been made 60 days in 20 rats divided into 4 groups: 1, 2 white
handle 3, 4, (alcoholic extract) at a dose of 4 g / kg., urea, cholesterol,
transaminases, lipoprotein HDL and the histology: toxic levels by orraly
determining a level Biochemicals evaluated. Results: The phenolic and
terpenoid compounds were more abundant at the alcoholic extract; 100% (p
<0.05) in mice showed sedative effect; hematological findings, biochemical
were within accepted limits; and histopathologically there was evidence of
morphological changes. Conclusions: The alcoholic extract of leaves and
flowers of Melissa officinalis "Toronjil" Matricaria chamomilla more
"Manzanilla" is sedative in mice without toxicity in rats.
Keywords: Alcoholic extract, sedation, medicinal plants, NMDA, diazepam,
DAP-7
1
CAPITULO I: INTRODUCCIÓN
1.1 Situación problemática:
Las enfermedades y los trastornos mentales tales como: ansiedad y
depresión son frecuentes en Estados Unidos, Canadá y México; los
pacientes que lo adolecen presentan: cefalea, dolor muscular, dolor de
espalda y fatiga, que son componentes de ansiedad. (Virues, 2005) La
epidemiología en el Perú confirma los hallazgos de otros países que
hasta el 37 % de la población tiene la probabilidad de ansiedad y
depresión alguna vez en su vida. La prevalencia de ansiedad en Lima
Metropolitana es de 18,2%, en la sierra peruana de 16,2% y en la selva
21,4%. (Rondón, 2006) Las patologías aludidas sin tratamiento y no
atendidas, así como el alto nivel de sentimientos negativos tienen como
resultado que: 1 % de las personas en Lima Metropolitana (IESM HD-
HN; 2002) el 0,7% en la sierra (IESM HD-HN; 2003) y 0,6% en la selva
(IESM HD-HN; 2004) estén predispuestas a intentos suicidas. En la
actualidad la triada ansiedad, depresión y estrés está causando más
muertes que el cáncer y el SIDA juntos. (Manelic, 1995).
Actualmente se dispone de drogas tranquilizantes como: diazepam,
midazolan, etc.; que están indicados para el tratamiento de la
ansiedad, debido a la necesidad de seguir encontrando alternativas
para el tratamiento de la ansiedad, se han buscado a través de datos
etnomédicos, plantas medicinales que puedan tener, actividad sedante
e identificar sus metabolitos implicados en el efecto terapéutico. Dentro
de este grupo de plantas, en la medicina tradicional peruana, se
reconoce a las hojas y flores de Matricaria chamomilla “Manzanilla” y a
Melissa officinalis “Toronjil” como agentes tranquilizantes, sedantes,
digestivos, carminativos y antiespasmódicos, (Kuklinski, 2003). Debido
a la presencia de compuestos polifenólicos y terpenos, ambos con
diferente estructura química.
2
1.2 Formulación del problema:
¿La administración vía oral del extracto alcohólico de Melissa officinalis
“Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla” tiene efecto sedante
sobre la ansiedad inducida en ratones albinos?
1.3 Justificación teórica
Los estudios realizados representan muchos estados posibles que
presenta la actividad cerebral como el sueño, la vigilia, la excitación
extrema, e incluso los diversos estados de ánimo de una persona entre
ellos la euforia, la depresión, la ansiedad y el miedo. Cualquiera de
estos estados obedece a distintas fuerzas activadoras o inhibidoras
generadas normalmente en el propio encéfalo; la estimulación de
diversas zonas específicas del encéfalo puede producir sueño dotado
de unas características próximas a la del sueño natural. (Domínguez,
1998).
Desde tiempos inmemoriales los pueblos atesoran en su cultura médica
el conocimiento de las propiedades curativas de muchas plantas. Tal es
el caso de “Toronjil” y “Manzanilla”, que crece en nuestro territorio y a
los cuales se les atribuye propiedades sedantes. (Bruneton, 2003).
El
toronjil identificado como Melissa officinalis Fam. Lamiaceae. La
manzanilla identificada como Matricaria chamomilla Fam. Asteraceae.
(Kuklinski, 2003).
La administración de Melissa officinalis está indicado como un sedante
central, ya que atenúa los síntomas y desordenes nerviosos, incluyendo
los estados de hiperexitabilidad, en estados de preocupación y estrés.
(Kommissiom E Monograph, 1984; Bisset and Wichtl, 1994). Estudios
específicos, mencionan propiedad sedante, proporcionando calma,
efecto anti-agitación realizados en ratones donde se observó reducción
de los movimientos espontáneos, luego de la administración del aceite
esencial de Melissa officinalis y en el extracto aislado de terpenos.
(Wagner and Sprinkemeyer, 1973).
3
Las propiedades farmacológicas de Matricaria chamomilla, incluida;
antiinflamatorio, antiséptico, carminativo, sedante y espasmolítico.
(Salamon et al, 1992). Donde están identificados más 120 compuestos
químicos, en Matricaria chamomilla en los cuales se encuentran
metabolitos secundarios: son 28 terpenos, 36 flavonoides y 52
compuestos que poseen el efecto de potenciar los efectos
farmacológicos antes aludidos depresor del SNC. (Mann et al, 1992).
Habiéndose encontrado estudios individuales del efecto sedante y
depresor del SNC para cada planta; es por ello que en la presente
investigación ha buscado evaluar, si dicho efecto sedante se potencia si
se asocia ambas plantas en estudio.
1.4 Justificación práctica
El presente estudio aporta información nueva y relevante sobre el
conocimiento de las propiedades beneficiosas que brinda la
administración vía oral del extracto alcohólico de Matricaria chamomilla
“Manzanilla” más Melissa officinalis “Toronjil” que ejerce efecto sedante
sobre la ansiedad inducida en ratones albinos, a fin de contribuir con
una alternativa para mejorar estados de ansiedad en la población.
El presente estudio es el primero en realizarse en nuestro país respecto
a la asociación de Matricaria chamomilla “Manzanilla” más Melissa
officinalis “Toronjil” con propiedades sobre la ansiedad, aun cuando
existen trabajos similares pero individuales de cada planta. Nuestros
resultados pueden permitir demostrar si al asociar estas 2 plantas
sujetas a estudio, tienen mejores respuestas a dosis establecidas con
respecto a ser administradas individualmente.
En la práctica, los resultados encontrados en esta investigación
fundamentarían realizar recomendaciones a nivel local y nacional
respecto a un tratamiento alternativo para la terapia de la ansiedad,
valorando además el costo/beneficio que pueda implicar el uso de
terapias tradicionales.
4
1.5 Objetivos de la investigación
1.5.1. Objetivo general
• Demostrar el efecto sedante del extracto alcohólico de Melissa
officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
sobre la ansiedad inducida en ratones albinos.
1.5.2. Objetivos específicos
• Realizar el estudio fitoquímico preliminar del extracto alcohólico
de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla
“Manzanilla”.
• Evaluar el efecto sedante del extracto alcohólico de Melissa
officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
sobre la ansiedad inducida en ratones albinos, estableciendo la
dosis efectiva 50 ansiolítica.
• Determinar si la administración del extracto alcohólico de Melissa
officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
presenta efecto sedante en comparación con el estándar
farmacológico en la ansiedad inducida en ratones albinos.
• Determinar la seguridad del extracto alcohólico de Melissa
officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla” a
nivel hematológico, bioquímico y anatomopatológico al ser
administrado por vía oral en ratas normales durante 60 días.
5
CAPITULO 2: MARCO TEÓRICO
2.1. Marco filosófico
Se trata de una investigación cuantitativa con fundamento positivista, porque
se trata de un sistema filosófico que admite únicamente el método
experimental y rechaza toda noción a prior; y todo concepto universal y
absoluto. Esta doctrina comprende no solo una teoría de la ciencia sino
también una reforma de la sociedad; y debe ser una regla de vida para el
hombre (Comte, 1973).
El nerviosismo es un estado de excitación del sistema nervioso, que surge
por una causa justificable o no; la ansiedad, por su parte es una emoción
indeseada e injustificada, cuya intensidad no guarda ninguna proporción con
la posible causa que lo provoca. La ansiedad no es igual al miedo, pues este
implica la presencia de un peligro real conocido. No obstante, las reacciones
de ansiedad pueden alcanzar niveles excesivamente altos o pueden ser
poco adaptativas en determinadas situaciones. En este caso la reacción deja
de ser normal y se considera patológica. (Sevillano, 2003).
La mayoría de los tratamientos psicofarmacológicos empleados en la
actualidad por la psiquiatría actúan químicamente sobre los sistemas de
neurotransmisión tratando de regular, la actividad de determinadas áreas
del sistema nervioso implicadas en el trastorno que se desea tratar. En el
tratamiento de la ansiedad, se emplean habitualmente dos tipos de
fármacos: los ansiolíticos, y los antidepresivos, con consecuencias
expresadas en reacciones o eventos adversos. (De Lope, 2007).
La presente investigación está relacionada con el tipo de medicina
tradicional, específicamente la medicina alternativa. Por medicina alternativa
se considera al conjunto de disciplinas terapéuticas y diagnósticas que
existen fuera de las instituciones del sistema de salud convencional. El uso
actual de esta 'clase' de medicina está muy extendido, tanto en el mundo
industrial como el preindustrial. Parte del creciente uso de las terapias
6
alternativas se debe a su reciente validación profesional; muchos textos de
divulgación general claman y justifican su uso, basándose en información
académica no necesariamente de rigor científico. En este ensayo, se
analizará la evidencia científica disponible, así como también se analizará
las bases lógicas y filosóficas de la medicina en cuestión (Peña, et al., 2007).
Aunque existen otras alternativas terapéuticas para el tratamiento de la
ansiedad, no fue tema de investigación, pero se da un comentario. La
homeopatía es una forma de medicina complementaria/alternativa y se
promueve por ser una forma segura y eficaz de tratamiento para niños y
adultos. La homeopatía es un sistema de medicina basada en el principio de
tratar "lo similar con lo similar" con diversas diluciones de sustancias
naturales o producidas por el hombre. La homeopatía se centra en las
características únicas de experiencia y sintomatología de cada paciente y
usa esta información para determinar la prescripción apropiada para cada
paciente. (Thomas 2004).
7
2.2 ANTECEDENTES DEL PROBLEMA
Mrlianová, et al, en, 2002, en Republica Checa, al investigar el contenido
del aceite esencial de Melissa officinalis y su relación entre las
concentraciones de sus componentes químicos, respecto a las formas de
recolección, en “The influence of the harvest cut height on the quality of the
herbal drugs Melissae folium and Melissae herba” realizaron estudios sobre
Melissa officinalis. Teniendo como objetivo identificar los metabolitos
presentes en Melissa officinalis. La variabilidad en el contenido y la calidad
del aceite esencial se observó en la planta entera en función de la altura de
corte de la cosecha de melisa (Melissa officinalis). Tres cortes diferentes se
llevaron a cabo en las plantas respectivas. El contenido de aceite esencial,
era más alta en el tercio superior (0,13%), satisfactorio en la planta que
incluye tanto la parte superior y tercio medio (0,08%) y más bajo en la planta
entera (0,06%). El contenido de aceite en las hojas de las plantas
respectivas estuvo en el rango de 0.14% - 0.39%. Además que las muestras
recolectadas también presentan: flavonoides, ácidos fenólicos, taninos,
triterpenos, y sesquiterpenos. Es de destacar que la planta también posee
en su composición; ácido cafeico, el eugenol, el ácido rosmarínico citronelal
y colina. Concluyendo que el cultivo y métodos de recolección tienen una
gran influencia en la cantidad de aceite volátil presente en las hojas. Se ha
encontrado que el contenido de la concentración del aceite esencial en la
planta es más alto en aquellas muestras cortadas en el tercio superior y
más baja en los dos tercios inferiores.
Soulimani, et al, en 1991, en Francia; al realizar estudios experimentales en
ratones sobre la actividad conductual después de la administración del
extracto hidroalcoholico de Melissa officinalis, en “Neurotropic Action of the
Hydroalcoholic Extract of Melissa officinalis in the Mouse” teniendo como
objetivo, determinar la reducción de la actividad conductual después de la
administración del extracto, evidenciadas por la disminución de los
parámetros de comportamiento, utilizando un método de test de escalera,
una prueba de medio ambiente familiar y una prueba de ambiente no
familiar, además se realizó una prueba de analgesia utilizando el método de
8
dolor inducido por ácido acético, (ensayo de retorcimiento), El extracto
hidroalcohólico de Melissa officinalis L. liofilizado (Lamiaceae) ha sido
evaluado para efectos de comportamiento en ratones. De acuerdo con el uso
tradicional de M. officinalis, posee propiedades sedantes confirmadas en
dosis bajas por la disminución de los parámetros de comportamiento en una
prueba de medio ambiente no familiar (test de escalera) y en una prueba de
ambiente familiar (dos pruebas compartimiento). Con dosis altas, la actividad
analgésica periférica se obtuvo mediante la reducción del dolor inducida por
ácido acético (prueba de retorcimiento); Además, el extracto de la planta
inducia sueño en ratones después del tratamiento con una dosis de
pentobarbital y potencializa el sueño inducido por la dosis hipnótica de
pentobarbital. Concluyendo; que después de la administración del extracto
de Melissa officinalis, posee propiedades inductoras del sueño con una dosis
de pentobarbital, potencializando el sueño inducido por este fármaco,
además de poseer efecto analgésico con dosis altas.
Abuhamdah, et al, en 2008, en Inglaterra, en búsqueda de explicar la
participación de los receptores GABA y NMDA después de la administración
de Melissa Officinalis investigaron, en “Pharmacological profile of an
essential oil derived from Melissa officinalis with anti-agitation properties:
focus on ligand-gated channels” un estudio que tiene como objetivo
demostrar la participación de los receptores GABA, NMDA y nicotínicos,
implicados en la génesis de la ansiedad y la interacción de los compuestos
del aceite esencial de Melissa officinalis, describiendo el método
electrofisiológico unión doble de radioligando , centrándose en una serie de
canales iónicos activados por ligando. Melissa officinalis inhibió la unión de
t-butilbiciclofosforotionato en el encéfalo de rata al canal receptor GABA
ácido gamma-aminobutírico (0.040 +/- 0.001 mg/ml), además tuvo efecto
sobre NMDA (alfa-amino-3-hidroxi-5-metil-4-isoxazolpropionato AMPA) y los
receptores nicotínicos de acetilcolina. Los análisis primarios
electrofisiológicos de las neuronas corticales de rata han demostrado que
Melissa officinalis se une de manera reversible en el ensayo de inducción al
stress, en una concentración dependiente (0.01- 1 mg/ml), mientras que la
inhibición del AMPA o NMDA inducidas también se observó. Curiosamente
9
Melissa officinalis provocó una reducción dependiente de la dosis en
periodos de excitación, con un efecto depresor sobre la neurotransmisión (en
contraste con el antagonista de GABA picrotoxinin que provoca episodios de
hiperactividad muy intensas en estas células). Concluyendo que Melissa
officinalis provocó una reducción significativa dependiente tanto en la
transmisión inhibitoria y excitatoria, con un efecto depresor sobre la
neurotransmisión.
Pereira, et al, en 2005, en Brasil; al realizar estudios acerca dela
composición química de muchas plantas a las cuales se les atribuye
propiedades como coadyudantes de muchas enfermedades investigó en
“Neurobehavioral and genotoxic aspects of rosmarinic acid” acerca del ácido
rosmarínico, que es un compuesto hidroxilado de origen natural. Está
presente en muchas plantas, por ejemplo, se produce en Artemisia capillaris,
Calendulla officinalis, Melissa officinalis, Salvia officinalis y en otras varias
familias de plantas. Entre las propiedades que se le atribuye es una serie de
actividades biológicas interesantes, por ejemplo, antiviral, antibacteriano,
antiinflamatorio y antioxidante a dicho acido. El objetivo de este estudio fue
investigar el efecto de la administración intraperitoneal de ácido rosmarínico
(1, 2, 4 y 8 mg/ kg) en la prueba de, elevada-laberinto, el paso de la evitación
a la tarea de campo abierto en ratas. Además, se evaluó su efecto
genotóxico, en el tejido cerebral utilizando el ensayo de genotoxicidad. El
ácido rosmarínico (2 y 4 mg kg) evidenció, en la correspondiente prueba,
una actividad similar a la ansiolítica, cuando se utiliza en dosis bajas, sin
afectar a la memoria a corto plazo (STM) y la memoria a largo plazo (LTM).
Concluyendo que 8 mg/Kg de este ácido era suficiente para aumentar la
motivación y la locomoción de los animales, pero no 1, 2 o 4 mg/kg, lo que
sugiere que en dosis bajas, este compuesto puede producir un efecto de
tipo ansiolítico sin ejercer alteraciones locomotoras o daño del ADN en el
tejido cerebral.
Aoshima y Hamamoto, en 1999, en Japón, realizaron estudios acerca de la
potenciación de los receptores GABA expuestos a estímulos como la
aromaterapia, en “Potentiation of GABA A receptors expressed in Xenopus
10
oocytes by perfume and phytoncid” cuyo objetivo es demostrar la interacción
de muchos compuestos entre ellos Citral que se encuentra presente en
Melissa officinalis interactúa con el receptor GABA, utilizando métodos de
mediciones electrofisiológicas de cerebros de ratas. Para estudiar los efectos
de perfume sobre los receptores GABA, los receptores ionotrópicos GABA A
presentes en Xenopus. Fueron mediante la inyección de ARNm en cerebro
de rata. El aceite esencial, fragancia y tales phytoncid, el alcohol de hojas,
hinokitiol, pineno, eugenol, citronelol citronelal potencian la respuesta en
presencia de GABA A bajas concentraciones (10 y 30 uM), posiblemente
debido a que se unen a la potenciación de sitio en los receptores GABA A y
poseen aumento de la afinidad a los receptores del GABA. Dado que se
sabe que la potenciación de los receptores GABA A por las
benzodiazepinas, barbitúricos, esteroides y anestésicos induce el efecto
ansiolítico, anticonvulsivante y la actividad sedante o efecto anestésico.
Estos resultados concluyen y sugieren la posibilidad de que la exposición a
perfume o phytoncid través de los pulmones y la piel, modula la transmisión
neuronal en el cerebro a través de receptores ionotrópicos GABA-A y cambia
la estructura de la mente humana, como lo hace el alcohol o el tabaco.
Salah y Jager, en 2005, en Dinamarca, propusieron con sus estudios in vitro,
que se han evidenciado que Melissa officinalis, es un débil inhibidor de la
acetilcolinesterasa y tiene una afinidad moderada al receptor de
benzodiazepina GABA-A en “Screening of traditionally used Lebanese herbs
for neurological activities” mencionado estudio tuvo como objetivo demostrar
la interacción de los componentes de Melissa officinalis sobre los receptores
GABA-A, con un método de estudio in vitro; inhibición de la
acetilcolinesterasa, la afinidad para el sitio de benzodiazepina GABA-A y
para el transportador de serotonina. En las últimas décadas el uso de la
medicina tradicional en el Líbano se ha incrementado. Extractos acuosos,
etanólicos y de acetato de etilo de siete plantas de que se utilizan
tradicionalmente para los trastornos neurológicos a la enfermedad de
Alzheimer, la epilepsia y los trastornos afectivos como la depresión fueron
probados para la inhibición de la acetilcolinesterasa y afinidad al sitio GABA-
benzodiazepina y para el transportador de serotonina. Extractos de acetato
11
de etilo de Salvia triloba, Lavandula officinalis, Origanum y Artemisia herba-
alba syriacum. Se exhibe débil actividad de la acetilcolinesterasa en el
ensayo. Ninguna de las plantas estaba activos en el ensayo de transportador
de serotonina. Un extracto etanólico de Artemisia herba-alba tenía buena
afinidad para el sitio receptor GABAA-benzodiazepina; extractos etanólicos
de Melissa officinalis y Salvia triloba tenían actividad moderada.
Concluyendo que el extracto etanólico de Melissa officinalis posee afinidad
moderada sobre los receptores GABA.
Kennedy, et al, en 2003, en Inglaterra, al proponer que algunos receptores
estarían interactuando después de la exposición a los componentes de
ciertas plantas medicinales, realizaron estudios en “Modulation of Mood and
Cognitive Performance Following Acute Administration of Single Doses of
Melissa Officinalis (Lemon Balm) with Human CNS Nicotinic and Muscarinic
Receptor-Binding Properties, teniendo como objetivo, demostrar la
participación de los receptores nicotínicos y muscarinicos tras la
administración del extracto etanólico de Melissa officinalis en individuos
sanos; utilizando un método de análisis de unión al receptor nicotínico y
muscarinico in vitro, un estudio aleatorizado, controlado con placebo, doble
ciego, estudio cruzado equilibrado, prepararon el extracto etanólico de hojas
secas de Melissa officinalis administrándolo a dosis de 600, 1000 y 1600
mg,. Melissa officinalis, es una planta medicinal al que se le ha atribuido
propiedades tales como que mejoran la memoria, pero que actualmente se
encuentra más ampliamente utilizado como un sedante suave y ayuda a
dormir. En un estudio previo se demostró que un extracto de Melissa
comercial llevado a dosis específicas mejoró los estados de calma, e
inhibición en la ejecución de tareas de memoria cronometrada dependientes
de la dosis. Sin embargo, el extracto utilizado en el estudio no exhibió
propiedades de unión a receptores colinérgicos in vitro. (Mantle, et al, 2000).
Concluyendo que no se detectaron propiedades inhibidoras de la
colinesterasa. Los efectos cognitivos y del estado de ánimo más notables se
han mejorado el rendimiento de memoria y el aumento de “calma” en todos
los puntos de tiempo después de la dosis más alta (1600 mg). Sin embargo,
12
mientras que el perfil de los resultados fue abrumadoramente favorable para
la dosis más alta, disminuciones en la velocidad de ejecución de la tarea de
memoria cronometrada y en el test de rapidez visual, tarea de
procesamiento de información se incrementó con dosis decrecientes. Estos
resultados sugieren que las dosis de Melissa officinalis por encima del
máximo empleado aquí puede mejorar el rendimiento cognitivo y el estado
de ánimo y por lo tanto puede ser un valioso complemento en el tratamiento
de la enfermedad de Alzheimer. Los resultados también sugieren que
diferentes preparaciones derivadas de las mismas especies de plantas
pueden exhibir diferente propiedades dependiendo del proceso utilizado para
la preparación de la muestra.
Kennedy, et al, en 2002, en Inglaterra, al realizar una investigación en
búsqueda de evidenciar la acción de mejoría de los estados cognitivos
después de la administración del extracto de Melissa officinalis, en
“Modulation of mood and cognitive performance following acute
administration of Melissa officinalis (lemon balm)” un estudio clínico, cuyo
objetivo es demostrar la mejora de los estados cognitivos en individuos
después de la administración del extracto en estudio; utilizando un método
doble ciego cruzado aleatorizado que incluyó a 20 voluntarios jóvenes
sanos. En este estudio, el tratamiento con la dosis más baja (300 mg)
aumentó autopercepción de 'calma' en 1 hora, mientras que las dosis de 600
mg y 900 mg, produjo efectos significativos en el desempeño de tareas de
memoria, observables en ambos 2,5 horas y 4 horas después de la
administración. Se encontró que la dosis probada más alta (900 mg) es
capaz de reducir significativamente el estado de alerta dentro de 1 hora, lo
que sugiere un efecto de dosis-respuesta. Concluyendo que la
administración de los extractos en diferentes dosis sujeta a estudio fueron
capaces de modular tanto el estado de ánimo y el rendimiento cognitivo en
una dosis y tiempo dependiente.
Wake, et al, en 2000, en Inglaterra, llevaron a cabo una investigación para
afianzar la participación de los receptores nicotínicos y muscarinicos,
dependiente de los componentes de Melissa officinalis, ya que a dicha planta
13
se le atribuye propiedades colinérgicas, el mencionado estudio es “CNS
acetylcholine receptor activity in European medicinal plants traditionally used
to improve failing memory” describe que ciertas plantas utilizadas en
medicina tradicional como por ejemplo, Lamiaceae y Asteraceae tienen una
larga historia de uso en la restauración de las funciones cognitivas pérdidas
o en declive, por la cual se utiliza mucho en medicina tradicional. Las
investigaciones se llevaron a cabo proponiendo como objetivo evaluar la
actividad SNC, receptores colinérgicos vinculante en extractos de plantas
medicinales entre los que destacan extractos de plantas Lamiaceae y
Asteraceae utilizados en Europa para aumentar o restaurar las funciones
mentales, incluyendo la memoria. Eran extractos etanólicos preparados a
partir de estas plantas y un número de otras especies relacionadas por
género, el desplazamiento sobre los receptores colinérgicos, sometidos a
nicotina y escopolamina sustancias anticolinérgicas por parte del extracto de
Melissa officinalis fueron medidos, para esto utilizaron el método de
homogenizado de las membranas de las células cerebrales corticales en
humanos. Concluyendo, que el desplazamiento por parte del extracto de
Melissa officinalis, fueron considerablemente alentadores ya que las curvas
de desplazamiento fueron comparado con el cloruro de carbamilcolina un
análogo de la acetilcolina y esto se debería a la participación de la colina un
ligando nicotínico que además se encontró en proporciones considerables
en el extracto de Melissa officinalis.
Apak, et al, en 2006, en Turquía, buscando explicar las propiedades
antioxidantes de muchas infusiones acuosas entre ellas las de Melissa
officinalis, realizaron un estudio denominado “The cupric ion reducing
antioxidant capacity and polyphenolic content of some herbal teas”
manifestando el objetivo de, determinar la capacidad antioxidante de las
infusiones sujetas a estudio. La capacidad antioxidante total de los extractos
acuosos de algunas plantas utilizadas en medicina tradicional, preparados
en infusiones en agua caliente. Estas infusiones fueron analizadas con
(neocuproína) cloruro de cobre (II), también conocido como el ion cúprico,
observándose la reducción de la capacidad antioxidante de reactivo
(CUPRAC), que era fácilmente accesible, rápido, estable y sensible a los
14
antioxidantes hidrófílicos y lipófilicos. Las capacidades antioxidantes más
altas de algunas infusiones de hierbas disponibles en el mercado turco se
observaron para Pimpinela escarlata (Anagallis arvensis), albahaca (Ocimum
basilicum), té verde (Camellia sinensis) y bálsamo de limón (Melissa
officinalis), en este orden (1.63, 1:18, 01:07, y 0,99 mmol Trolox equivalente
(TR) / g, respectivamente). Midiendo la absorbancia frente a los datos de
concentración en diferentes diluciones y adiciones estándar de modelo en
compuestos antioxidantes (Trolox y quercetina) a base de infusiones de té
de plantas medicinales, donde se mostró las absorbancias (a 450 nm del
método CUPRAC) debido a los diferentes compuestos antioxidantes en
infusiones de té de hierbas son aditivos; es decir, los antioxidantes probados
no interactúan químicamente para producir aparentes desviaciones de la ley
de Beer. Concluyendo que Melissa officinalis posee propiedades
antioxidantes considerables.
Ballard, et al, en 2002, en Inglaterra, realizaron estudios acerca de las
propiedades del aceite esencial de Melissa officinalis en condiciones
controladas en “Aromatherapy as a Safe and Effective Treatment for the
Management of Agitation in Severe Dementia: The Results of a Double-
Blind, Placebo-Controlled Trial With Melissa” para ello utilizaron el estudio
doble ciego en condiciones controladas con placebo, 72 personas que
residían en el Servicio Nacional de Salud (Reino Unido), que tenían
ansiedad clínicamente significativa en el contexto de la demencia severa
fueron asignados al azar a la aromaterapia con aceite esencial de Melissa (N
= 36) o placebo (aceite de girasol) (N = 36). El tratamiento activo y placebo
de aceite se combinó con una loción de base y se aplica a la cara y los
brazos de los pacientes dos veces al día por personal de cuidado. Los
cambios en la agitación clínicamente significativa, fueron evaluados a través
de CMAI (Cohen-Mansfield Agitación Inventario) y la calidad de los índices
de vida (porcentaje de tiempo dedicado socialmente retirado y el porcentaje
de tiempo dedicado a actividades constructivas, medidos con demencia
(Mapeo Care) se compararon entre los dos grupos en un período de 4
semanas de tratamiento. Concluyendo; que los hallazgos de la
aromaterapia con aceite de bálsamo esencial de Melissa officinalis, es un
15
tratamiento seguro y eficaz para la ansiedad clínicamente significativo en las
personas con demencia severa, con beneficios adicionales para la calidad
de los parámetros clave de la vida, e indican la necesidad de ensayos más
controlados.
Kennedy, et al, en 2006, en Inglaterra; al comparar los efectos de un extracto
asociado de Melissa officinalis mas Valeriana officinalis, en “Anxiolytic effects
of a combination of Melissa officinalis and Valeriana officinalis during
laboratory induced stress”, un trabajo que difiere del nuestro ya que dicho
estudio se realizó de manera clínica y con una asociación diferente. En este
estudio hacen referencia que en investigaciones recientes han sugerido que
después de la administración de Melissa officinalis, puede atenuar el estrés
inducido en pruebas en el laboratorio. Como las dos plantas mencionadas
en este estudio a menudo se venden en combinación o con otros, en este
estudio propusieron un objetivo general de demostrar, que la asociación de
Melissa officinalis más Valeriana officinalis ejerce efecto sedante, ansiolítico
e hipnótico, durante el estrés inducido en el laboratorio. Utilizaron un estudio
doble ciego, controlado con placebo, aleatorizado, en 24 voluntarios sanos
que recibieron tres dosis individuales separadas (600 mg, 1.200 mg, 1.800
mg) de un producto estandarizado que contiene extractos de Melissa
officinalis mas Valeriana officinalis en comparación con un placebo, en días
separados, por un período de 7 días. La modulación del estado de ánimo y
la ansiedad se evaluó durante la pre-dosis 1 h, 3 h y 6 h, y después de la
dosis de una versión de 20 minutos de simulación de estrés (DISS).
También se evaluó el rendimiento cognitivo. Los resultados mostraron que la
dosis de 600 mg de la combinación mejoró los efectos negativos de la DISS
en puntuaciones de ansiedad. Sin embargo, la dosis más alta (1800 mg)
mostró un aumento en la ansiedad que fue menos marcada pero que
alcanzó significancia durante la sesión de pruebas. Además, las tres dosis
llevaron a disminuciones en el rendimiento. Concluyendo, que estos
resultados sugieren que una asociación de Melissa officinalis y Valeriana
officinalis posee propiedades ansiolíticas que merecen mayor investigación.
16
Pirzard, et al, en 2006, en Irán, buscando reconocer la composición química
del aceite esencial de Matricaria chamomilla “Manzanilla” en “Essential Oil
Content and Composition of German Chamomile (Matricaria chamomilla L.)
at Different Irrigation Regimes” un estudio que describe como objetivo
identificar los componentes presentes en el aceite esencial de Matricaria
chamomilla, para lo cual emplearon un método de análisis a través de HPLC,
cromatografía liquida; el aceite esencial se obtuvo mediante destilación de
flor seca y se analizó. Concluyendo que las muestras analizadas contienen
en diversas proporciones de flavonoides (incluyendo flavonoles y flavonas
metoxilados), apigenina (otros flavonoles son parcialmente hidrolizada a
apigenina que conduce a concentraciones de hasta 8%), Apigetrin
(apigenina-7-D-glucósido), apigenina-7-acetylglucoside, Apiin (apigenina-7 -
apiosylglucosido), rutina (quercetina-3-rutinósido), luteolina, quercimeritrina
(quercetina-7-D-glucósido), quercetina y isoramnetina. La cumarina,
umbeliferona (7-hidroxicumarina) y Herniarina (metil éter de umbeliferona).
Proazulenos (lactonas sesquiterpénicas), incluyendo matricin, matricarin y
desacetlilmatricarin un precursor de camazuleno. Camazuleno (1-15%),
farneseno, óxidos de alfa-bisabolol y bisabolol A y B Ácidos vegetales
(mucílago ácido), ácidos grasos, polisacáridos, colina, aminoácidos,
encontrándose una variación con respecto a los diversos regímenes de
irrigación varían, de acuerdo a las diferentes muestras estudiadas.
Shinomiya, et al, en 2005, en Japón, buscando una terapia alternativa que
pueda contribuir con los episodios de ansiedad, realizaron estudios acerca
de las propiedades de Matricaria chamomilla en “Hypnotic activities of
chamomile and passiflora extracts in sleep-disturbed rats” un estudio en el
que se utilizó, una asociación de extracto a administrar, utilizaron especies
de plantas diferentes a las que mostraremos en el presente diseño
experimental. Propusieron como objetivo demostrar la capacidad de
disminuir el periodo de latencia al sueño en ratas que recibieron el extracto
de Matricaria y Passiflora, utilizando un diseño experimental en ratas con su
respectiva medición de encefalograma. Concluyendo que a 300 mg/Kg del
extracto de manzanilla disminuyó significativamente el periodo de latencia
17
del sueño en un modelo de rata de sueño-perturbada, lo que demuestra la
actividad de tipo benzodiazepinas.
Della, et al, en 1981, en Italia realizando estudios sinérgicos de varios
extractos a los cuales se les atribuyen propiedades sedantes entre ellas
Matricaria en “Evaluation of the activity on the mouse CNS of several plant
extracts and a combination of them” un estudio que es totalmente diferente
del nuestro visto que en el no hacen alusión a Melissa officinalis, cuyo
objetivo es demostrar el efecto sedante sobre el SNC en ratones de los
extractos mencionados; utilizando un diseño experimental en ratones donde
midieron las capacidad sedante de los extractos administrados vía oral de
las plantas sujetas a estudio. Concluyendo que el extracto de manzanilla
mostraron actividad sedante sobre el sistema nervioso central del ratón. La
asociación de los siete extractos parecía actuar de una manera sinérgica, la
actividad resultante es ser sedantes a alta dosis y ansiolítico a dosis bajas.
Viola, et al, en 1995, en Argentina; realizaron estudios acerca de las
propiedades de la medicina tradicional dentro de ellos, las propiedades del
extracto de Matricaria en “Apigenin, a Component of Matricaria recutita
Flowers, is a Central Benzodiazepine Receptors-Ligand with Anxiolytic
Effects” un trabajo donde utilizaron como vía de administración la vía
intraperitoneal; teniendo como objetivo demostrar la interacción de Apigenina
sobre los receptores GABA en ratones. Propusieron un diseño experimental
en ratones a los cuales se les administra el extracto de Matricaria en
diversas concentraciones por vía intraperitoneal. Mencionado estudio
concluyo que los extractos de manzanilla, así como la apigenina aislado, han
demostrado que se unen a receptores de benzodiazepina in vitro. Apigenina
mostró actividad antiansiedad y sedante con la inyección intraperitoneal en
ratones. Además de no poseer afectos anticonvulsivo o miorrelajante
Yamada, et al, en 1996, en Japón; en búsqueda de sustentar las
propiedades ansiolíticas después de la administración de un extracto de
Matricaria chamomilla, en “Effect of inhalation of chamomile oil vapour on
plasma ACTH level in ovariectomized-rat under restriction stress”
18
investigación en la que utilizaron ratas hembras, siendo un criterio de
exclusión por parte nuestra. Pospusieron como objetivo, determinar los
valores de ACTH en ratas hembras sometidas a stress, en comparación con
un grupo control. Concluyendo que las ratas hembras sujetas a
ovarioectomia propuesta como stress y que recibieron aceite esencial a
través de inhalación de Matricaria chamomilla, mostraron niveles
disminuidos de stress así como también niveles disminuidos de ACTH, en
comparación con el grupo control, y sugieren que Matricaria chamomilla
posee una actividad similar a agonistas de benzodiazepinas.
Gomaa, et al, en 2003, en Egipto, al realizar estudios sobre la propiedades
de Matricaria chamomilla en “Matricaria chamomilla extract inhibits both
development of morphine dependence and expression of abstinence
syndrome in rats” donde se resalta, el efecto de Matricaria chamomilla en el
desarrollo de la dependencia de la morfina y la expresión de la abstinencia,
se investigó en ratas. Proponiendo como objetivo; evaluar la dependencia de
la morfina después de administrar un extracto de Matricaria chamomilla,
desarrollando un método experimental y de observación que fueron medidos
durante los episodios de exposición. Las frecuencias de las señales de
comportamiento de abstinencia (temblor de la pata, castañeteo de dientes,
temblor muscular, diarrea y micción) y la pérdida de peso inducida por
naloxona, fueron evaluadas; dividieron los animales de experimentación en 3
grupos, el grupo de ratas morfina dependiente que recibieron extracto de
Matricaria chamomilla. Otro grupo al que solo se le administro morfina. Y
otro grupo blanco que solo recibió solución salina. Las manifestaciones de
comportamiento de abstinencia y la pérdida de peso se inhibieron
significativamente por la administración crónica de extracto de Matricaria
chamomilla con morfina. La administración de una dosis única de Matricaria
chamomilla ante el reto naloxona en animales dependientes de morfina
abolió las manifestaciones conductuales de abstinencia. El dramático
aumento de cAMP inducida por plasma de naloxona-precipitado fue
impedido por la administración crónica de extracto de Matricaria chamomilla
con la morfina. Estos resultados concluyen que el extracto de Matricaria
19
chamomilla inhibe el desarrollo de la dependencia de la morfina y la
expresión de síndrome de abstinencia.
Roberts y Williams, en 1992, en EEUU, al realizar estudios sobre la sedación
con respecto a Matricaria chamomilla en “The effect of olfactory stimulation
on fluency, vividness of imagery and associated mood: a preliminary study”
un estudio realizado en seres humanos, que tiene como objetivo evaluar la
conducta de los individuos expuestos a estados de ansiedad luego de recibir
exposición al aceite esencial de Matricaria chamomilla, proponiendo un
método, que es un estudio controlado con placebo de 22 voluntarios que
recibieron la inhalación del aceite esencial de Matricaria chamomilla. Se
pidió a los 22 sujetos a visualizar frases positivas y negativas después de la
exposición del aceite de manzanilla y placebo respectivamente. El aceite de
manzanilla aumentó significativamente el tiempo de latencia para todas las
imágenes, y cambió los estados de ánimo y los juicios de frecuencia en una
dirección más positiva. Concluyendo que los estudios realizados sugieren un
posible efecto de estos aceites con el origen de los estados de ansiedad.
Avallone, et al, en 2000, en Italia, en búsqueda de evidencias que permitan
explicar los efectos sedantes de Matricaria chamomilla realizaron una
investigación en “Pharmacological profile of apigenin, a flavonoid isolated
from Matricaria chamomilla.” Hacen mención que se utilizan en gran medida
flores secas de Matricaria chamomilla L. para proporcionar efectos sedantes
así como los efectos espasmolíticos. En el presente estudio, tienen como
objetivo examinar, la propiedad farmacológica de una fracción aislada de un
extracto metanólico de Matricaria chamomilla, que se identificó por análisis
de HPLC-MS-MSy su metabolito apigenina, proponiendo un método de
estudio de unión de radioreceptores, capacidad de desplazamiento de la
flavona por el radioligando. Los estudios electrofisiológicos realizados sobre
las células granulares del cerebelo mostraron que la apigenina reducida
GABA (ácido gamma-aminobutírico), activado por Cl (-) las corrientes de una
manera dependiente de la dosis. El efecto fue bloqueado por la
administracion de Ro 15-1788, un antagonista específico del receptor de
benzodiazepina. En consecuencia, la apigenina reduce la aparición de
20
convulsiones inducidas por picrotoxina. Por otra parte, la apigenina
inyectada por vía intraperitoneal en ratas reduce la actividad locomotora,
pero no demostraron efectos ansiolítico, miorrelajante o actividades
anticonvulsivas. Concluyendo que los presentes resultados parecen sugerir
que la actividad inhibidora de la apigenina en el comportamiento locomotor
en ratas puede ser atribuida a una interacción con el GABA (A) del receptor
de benzodiazepina, sino que tambien a otros sistemas de neurotransmisión,
ya que no está bloqueado por Ro 15-1788.
Navarro, et al, 2011, en Brasil, realizando estudios experimentales en perros
tratando de explicar los efectos de Matricaria chamomilla sobre la ansiedad
en “Efeito da Matricaria chamomilla CH12 na resposta de estresse em caes”
El objetivo fue evaluar los efectos de la Matricaria chamomilla CH12 en la
respuesta al estrés en perros bajo el aislamiento social y posteriormente se
sometió a ovariohisterectomía (SST). 18, perras saludable distribuidas en
dos grupos; tratamientos: PD (n = 9) se administró el placebo y la TC (n = 9)
Matricaria chamomilla CH12 se administró por vía oral dos veces por 15
días; antes de iniciar el tratamiento, y seguido por 24 horas después de la
cirugía. Se evaluó el comportamiento del animal (durante el período de
aislamiento), y la concentración de cortisol sérico mediante la recopilación de
la sangre venosa de la vena yugular antes de la administración de placebo o
Matricaria chamomilla (M0), 15 días después de su tratamiento (M1)
inmediatamente al final de procedimiento quirúrgico (M2) y las mismas 24
horas (M3). Hubo diferencias significativas en la concentración de cortisol
sérico inmediatamente al final de la intervención quirúrgica, con valores más
altos en los animales tratados con placebo. Llegando a la conclusión de que
el tratamiento con Matricaria chamomilla CH12 impide la respuesta
inmediata de estrés postquirúrgico, el mantenimiento de la concentración de
cortisol sérico estable.
21
2.3 Bases teóricas
2.3.1 Trastorno de ansiedad
La ansiedad es una sensación normal que experimenta la persona
alguna vez en momentos de peligro o preocupación. La ansiedad sirve
para poder reaccionar mejor en momentos difíciles. Sin un mínimo de
activación un estudiante no estudiaría para sus exámenes; o en una
situación peligrosa no reaccionaríamos rápidamente, haciéndolo lo
mejor que sabemos. Sin embargo, cuando una persona se encuentra
ansiosa con cierta frecuencia sin que parezca haber razón para ello, o
cuando esa persona se tensa en exceso, entonces la ansiedad se
convierte en un problema que produce sensaciones desagradables.
Como la ansiedad es una reacción normal, el objetivo no es hacer que
desaparezca, sino aprender a controlarla y reducirla a niveles
manejables y adaptativos. (López, 2004).
Cuando una persona tiene ansiedad se produce una excitación en su
sistema nervioso, originándose una serie de síntomas. Los más
comunes son: tensión en el cuello, hombros y espalda; dificultades de
respiración, visión nublada, sofoco; taquicardia, opresión en el pecho;
sensación de nudo en el estómago, náuseas; sudoración, temblor,
hormigueo en las manos; inestabilidad, entumecimiento en las piernas.
Algunas personas, para tratar de reducir la tensión desagradable que
sienten cuando están ansiosas, suelen comer, fumar o beber en
exceso. De momento, esto les alivia, pero a largo plazo la situación se
puede complicar. (Tyrer, 2006).
De hecho, el café, el abuso del alcohol y del tabaco aumentan la
tendencia a sentir ansiedad. Otras personas, en cambio, tienden a
evitar las situaciones que les producen ansiedad. De momento, esa
estrategia funciona. Pero, a largo plazo, las cosas pueden ir a peor.
Evitar situaciones puede convertirse en un hábito perjudicial. Cuanto
más se evita hacer frente a una situación desagradable, más fuerte se
22
hace ésta y más débil se encuentra ante ella la persona, que va
perdiendo confianza en sí misma. Así, los problemas no sólo no
disminuyen, sino que van en aumento. (Bruce, 1989).
El nerviosismo es un estado de excitación, que surge por una causa
justificable o no; la ansiedad, por su parte es una emoción indeseada e
injustificada, cuya intensidad no guarda ninguna proporción con la
posible causa que lo provoca. La ansiedad no es igual al miedo, pues
este implica la presencia de un peligro real conocido, se manifiesta con
un estado de hiperexcitación nerviosa, se recomienda plantas sedantes
que aportan equilibrio al sistema nervioso. (Sevillano, 2003).
La ansiedad es un mecanismo adaptativo natural que permite activar el
estado de alerta ante sucesos comprometidos. En realidad, un cierto
grado de ansiedad proporciona un componente adecuado de
precaución en situaciones especialmente peligrosas. Una ansiedad
moderada puede ayudarnos a mantenemos concentrados y afrontar los
retos que tenemos por delante. En ocasiones, sin embargo, el sistema
de respuesta a la ansiedad se ve desbordado y funciona
incorrectamente. Más concretamente, la ansiedad es desproporcionada
con la situación e incluso, a veces, se presenta en ausencia de
cualquier peligro ostensible. El sujeto se siente paralizado con un
sentimiento de indefensión y, en general, se produce un deterioro del
funcionamiento psicosocial y fisiológico. Se dice que cuando la
ansiedad se presenta en momentos inadecuados o es tan intensa y
duradera que interfiere con las actividades normales de la persona,
entonces se le considera como un trastorno. (Gross, 2005).
La ansiedad es tal vez la emoción con mayor peso como prueba
científica, al relacionarla con el inicio de la enfermedad y el desarrollo
de la recuperación. Cuando la ansiedad ayuda a la preparación a
enfrentarnos a alguna situación importante, esta es positiva; pero en la
vida moderna es frecuente que la ansiedad sea desproporcionada y se
relacione con niveles altos de estrés. Pruebas evidentes del impacto
23
sobre la salud de la ansiedad han surgido de estudios de enfermedades
infecciosas, como resfríos, gripes y herpes, donde la resistencia
inmunológica de la persona se debilita, permite la entrada del virus y el
inicio de la enfermedad. Por otra parte, se conoce el papel que juega la
depresión, sobre todo en el empeoramiento de una enfermedad, una
vez que esta ha comenzado. Parece tener un riesgo especialmente
grave, para los pacientes supervivientes de ataques cardiacos,
complica la recuperación de intervenciones quirúrgicas y aumenta el
riesgo de muerte en personas con transplantes. (Battaglia, 2005).
La ansiedad por lo general se acompaña de una sensación de tensión
interna y dificultad para relajarse. Es frecuente la hiperactividad del
sistema nervioso autónomo; los pacientes suelen quejarse de cefaleas,
inestabilidad, visión borrosa, disminución de la salivación, sudoración
excesiva, molestias estomacales, taquicardia, mayor frecuencia de las
micciones, hormigueos en los miembros, dolores musculares,
fatigabilidad precoz, insomnio, irritabilidad, sentimiento de zozobra,
impaciencia, preocupación y aprensión. La literatura médica distingue
entre los estados de ansiedad puros y otros trastornos emocionales.
Las fobias, se diferencian del puro estado de ansiedad en que los
síntomas no parecen estar relacionados con un estímulo específico;
(Lobo, 1997) dentro de todo este contexto es importante mencionar a
los componentes de la ansiedad:
a). Fisiológico: La ansiedad conlleva a un incremento arousal fisiológico
del sistema nervioso autónomo, que está asociado a sensaciones,
sentimientos o síntomas, experimentados como amenazadores; sin
embargo, solo son sensaciones y no son necesariamente peligrosas,
puesto que la ansiedad implica reacciones corporales normales.
b). Cognitivo: Se refiere a la influencia de nuestros pensamientos,
creencias y expectativas sobre nuestro estado de ánimo y nuestra
conducta. Habitualmente no respondemos a las situaciones sino a las
interpretaciones o valoraciones que hacemos de las mismas, de este
24
modo etiquetamos nuestras experiencias pero las interpretaciones no
son siempre adecuadas y exactas.
c). Comportamental: Último componente de la ansiedad, hace
referencia a la capacidad de la ansiedad para desorganizar la conducta
de una persona provocando evitación, escape o disminuyendo el grado
de eficacia.
2.3.3 Insomnio y otros trastornos del sueño.
El insomnio es la manifestación de sueño insuficiente o poco reparador.
En el caso de los enfermos deprimidos, la forma más típica, es el
insomnio de la última parte de la noche, también llamado insomnio
terminal o tardío. El paciente se despierta a las 03:00 de la madrugada,
por ejemplo, y no puede volverse a dormir. En esas horas de soledad
nocturna, el paciente inicia con una serie de pensamientos pesimistas y
de impotencia, que le impiden dormir nuevamente un día más; «ni
siquiera esto puedo hacer bien»; «no voy a poder continuar con esto»).
Despertarse una hora más temprano, del horario habitual, que solía
tener el paciente, antes del inicio de su depresión, es considerado
como despertar matutino prematuro o insomnio terminal. (Greden,
1974).
En este sentido, una pregunta clave es: ¿a qué hora solía despertarse
por últimas vez en la mañana, para levantarse, antes de estar
deprimido? Y, ¿a qué hora en promedio se ha estado despertando sin
poder dormir nuevamente, en la última semana? Algunos pacientes con
depresión pueden tener datos de insomnio inicial (incapacidad para
iniciar el sueño por más de 30 minutos, en el horario acostumbrado) o
insomnio terminal (fragmentación del sueño, con despertares de más
de 20 minutos o levantarse de la cama, sin tener la necesidad de ir al
baño). En un laboratorio de sueño, el enfermo con depresión tiene una
serie de alteraciones, de las fases o estadios de sueño, como son:
menor cantidad de fases de sueño III y IV (sueño delta), un inicio rápido
25
al sueño de movimientos oculares rápidos; fragmentación del sueño y
despertar matutino prematuro. Sin embargo, puede haber algunos
enfermos que, en vez de presentar una baja en calidad y cantidad de
sueño, tienen lo opuesto, es decir un exceso de sueño. Estas son
personas que duermen de nueve a diez horas, y que refieren que entre
más duermen, más deprimidos se sienten, con gran estado de
adinamia, debilidad y lentitud psicomotríz. (Brown, 2001).
Agitación psicomotríz y ansiedad psíquica. Estas son dos
manifestaciones que se pueden presentar en depresiones, en donde
hay un componente sintomático ansioso importante. El médico puede
evaluar desde la inspección general al paciente, su estado de agitación
psicomotríz, de estar presente, el paciente mueve las manos o los pies
de manera inquieta, juguetea con los cabellos, se seca las manos, se
levanta y sienta, etc. Además el paciente puede referir que se siente
nervioso, y suele mencionar por ejemplo: Ahora me preocupo mucho
por la hora que llega mi esposo, si no me habla dos o tres veces al día
estoy nerviosa, esto no me sucedía antes. (Riveros, 2007).
La eficacia de las benzodiazepinas en el tratamiento de la ansiedad y la
demostración de que su efecto terapéutico esta mediado por el receptor
GABAª sugiere un papel importante del sistema GABAérgico en la
génesis de la ansiedad. El GABA es el principal neurotransmisor
inhibidor del SNC. Regula la transmisión nerviosa de aproximadamente
un tercio de los impulsos cerebrales, entre ellos, sistemas como el
adrenérgico o el serotonérgico que, están implicados en la base
neurobiológica de los trastornos por ansiedad. De hecho, se ha
propuesto que la acción ansiolítica de las benzodiazepinas podría ser
consecuencia de la inhibición de la liberación de serotonina en
estructuras límbicas. (Goodman, 2003).
El sistema serotonérgico proviene de los núcleos del rafe, tronco del
encéfalo; diversas áreas neocorticales y estructuras límbicas que
reciben fibras procedentes de los núcleos dorsal, mediano y
26
mesencefálico del rafe. Dentro del cerebro límbico es particularmente
rica la inervación serotonergica del complejo septo-hipocampico, por lo
que se considera que puede influir decisivamente sobre los sistemas
relacionados con la inhibición de la conducta. En general, la reducción
de la trasmisión serotonérgica mediante maniobras farmacológicas muy
variadas (bloqueo de receptores, lesiones, toxinas, depleción de 5-HT e
inhibición de la síntesis) origina efectos ansiolíticos en el animal de
experimentación, por el contrario, el aumento de la actividad del
sistema serotonérgico, mediante agonistas 5-HT o estimulación
eléctrica del rafe, origina un efecto ansiogénico (Flores, 1998).
2.3.4 Consideraciones etnobotánicas
El toronjil identificado como Melissa officinalis Fam. Lamiaceae, es
originaria de los países de clima templado. Es una planta herbácea,
muy ramificada y frondosa. Sus hojas son pecioladas, ovaladas,
opuestas, dentadas, muy rugosas y al frotarlas desprenden un olor a
limón. Las flores son blancas y se reúnen en grupos de 3-6 flores.
(Kuklinski, 2003). La manzanilla identificada como Matricaria
chamomilla Fam. Asteraceae. Planta que crece sobre todo en Europa
central (Hungría, Yugoslavia) y en general en toda Europa. Es una
planta anual tiene un disco cónico con abundantes flores amarillas
tubulosas y hermafroditas, y en la periferia una sola línea de flores
blancas liguladas y femeninas. Hay numerosas semillas y se reproduce
en Perú. Las flores no son amargas sino que tienen un aroma
agradable. (Kuklinski, 2003).
Melissa officinalis, a pesar de tener un contenido bajo en aceite
esencial (0,5ml/Kg.) es este el que tiene interés, no obstante se han
aislado de la droga otros constituyentes: triterpenos, ácidos fenólicos
derivados del ácido cafeíco, dímeros como el ácido rosmarínico y
trímeros como los ácidos malitricos A y B; derivado del benzaldehído
con estructura benzodioxólica; flavonoides: quercitrósido, ramnocitrina,
7-glucósidos de epigenina y luteolina; heterósidos de monoterpenos y
27
de alcoholes aromáticos, etc. El aceite esencial se caracteriza por la
presencia de aldehídos monoterpenicos: citral (geranial + neral) en
cantidad muy variable, pero normalmente en una relación constante
(4/3), (R)-(+)-citronelal, acompañados de metilheptenona (producto de
degradación del citral), acetato de geranilo, β-cariofileno, óxido de β-
cariofileno, germacreno D y varias decenas de compuestos
mayoritariamente terpenicos.
Matricaria chamomilla Fam. Asteraceae. Junto con un mucílago
galacturónico, cumarinas (umbeliferona, herniarina), ácidos fenólicos y
lactonas sesquiterpenicas, la droga contiene en-ino-diciclieteres
espirononenicos formados por ciclación de poliínos así como un aceite
esencial (3-15 ml/Kg) y flavonoides. Los flavonoides están
representados por heterósidos de flavonas, principalmente glucosil-7-
apigenina y su derivado acetilado en 6” que se acumulan en las flores
liguladas hasta representar el 8% de su masa seca. Se observa
también la presencia de glucósidos de luteolol así como la de
heterósidos del quercetol y del isorramnetol (flavonoles). En la droga
desecada, los heterósidos se encuentran parcialmente hidrolizados y la
concentración de apigenina puede ser muy elevada. El aceite esencial
debe su color azulado a un contenido generalmente importante (1-15%)
de chamazuleno formado por la descomposición de una lactona
sesquiterpénica, la matricina. Contiene también diversos
sesquiterpenos con esqueleto bisabolano: (-)-α-bisabolol, óxidos A y B
de (-)-α-bisabolol y oxido A de (-)-α-bisabolona. Estos sesquiterpenos
representan hasta el 50% del aceite esencial, pero sus proporciones
varían según el quimiotipo. (Bruneton, 2001).
Huaman, (1996) describe que la planta Melissa officinalis “Toronjil” es
solicitada por la población, sus flores de tonalidad blanquecina-rosada,
sus hojas desprenden un olor semejante al limón. Es una de las plantas
muy utilizadas en medicina tradicional, a las cuales se les atribuye
propiedades anticonvulsivantes, antiespasmódico, cardiotónico, usado
también en casos de asma bronquial, cefalea, resfrío, palpitaciones
28
nerviosas, insomnio, melancolía, histerismo, mareos, calambres,
náuseas, hiperémesis gravídica, gastritis, colelitiasis, meteórismo,
enteritis, colitis, infecciones víricas y bacterianas, estomáquico,
calmante, de uso externo para heridas y llagas, carminativo.
Mestanza, (2000) hace referencia que Matricaria chamomillla
“Manzanilla” posee usos medicinales como carminativo, antiinflamatorio
ocular y bucal, antihemorroidal, sedante y útil en eczemas, insomnio,
dolores reumáticos, calmante, emoliente, posible acción espasmolítica
en el sistema digestivo, en los trastornos de tipo nervioso de mujeres y
niños, en molestias de sus períodos menstruales, estimulante de la
digestión, se le atribuye facultades desensibilizantes o antihistamínicas,
también, para combatir el asma bronquial de los niños, para problemas
de la piel.
Briceño, (1974) realizó un estudio de extracción del aceite esencial de
Melissa officinalis “Toronjil” refiriéndose a la presencia de grupos
químicos que le proporcionan propiedades tranquilizantes. Información
etnobotánica, Vega (2001) refiere ciertas propiedades para calmar las
cefaleas. Los Tikunas (pobladores indígenas) se lavan la cabeza con
agua de estas hojas. Episodios de diarreas son tratadas con una
decocción de las hojas, se toma una taza tres veces al día; para estos
fines también se usa una mezcla con Mentha viridis.
La manzanilla y el toronjil, durante el procesamiento de la droga,
específicamente el desecado del vegetal, Matricaria chamomilla tiene
mayor pérdida debido a la incorporación de hojas, tallos y flores como
material vegetal, las flores poseen epidermis más delgada, lo que les
permite una mayor permeabilidad que facilita el flujo de aire húmedo.
(Instituto de fitoterapia americano, 2000).
29
2.3.5 Estudio fitoquímico
2.3.5 a) Aceites esenciales
Los aceites esenciales son productos volátiles de naturaleza compleja,
elaborados por ciertos vegetales a los que confieren un aroma
agradable. Oficialmente, se denominan aceites esenciales a los
productos que se pueden obtener por arrastre con corriente de vapor
de agua o por expresión del pericarpio de ciertos frutos. Los aceites
esenciales están constituidos por una mezcla de sustancias volátiles,
compuesta por terpenos, ácidos orgánicos, cetonas, etc.; que son de
margen terapéutico estrecho 1g. de aceite esencial representa 100g. de
la planta seca, no recomendable en niños ni en pacientes con
trastornos neurológicos.
Características: Los aceites esenciales son generalmente líquidos a
temperatura ambiente aunque algunos solidifican a baja temperatura
como, por ejemplo, la esencia de anís. La mayoría son prácticamente
transparentes, incoloros o ligeramente coloreados (amarillentos) con
excepciones como la esencia de la manzanilla, que contiene
camazuleno de un intenso color azul, algunos aceites esenciales son
inflamables. Generalmente, son menos densos que el agua aunque
también hay excepciones como las esencias de clavo y de canela, que
son más densas. Los aceites esenciales son lipofílicos y solubles en
disolventes orgánicos apolares (hexano, éter etílico, etc.). La solubilidad
en alcohol es variable y suelen ser solubles en alcoholes de alta
graduación. (Instituto de fitoterapia americano, 2002). Su distribución;
los aceites esenciales se encuentran casi exclusivamente en vegetales
superiores concretamente en ciertas familias de Angiospermae, de las
cuales cabe destacar:
30
Confierae: Pinnus sp.
Apiáceae o Umbelíferae: anís, hinojo
Labiadae o Lamiaceae: menta, toronjil, lavanda
Lauraceae: canela
Asteraceae: manzanilla
Mirtáceae: eucalipto, clavo
Retaceae: cítricos
Los compuestos presentes en los aceites esenciales se pueden
clasificar en terpenoídes y no terpenoídes.
• Terpenoídes: Existen muchas clases de compuestos naturales
entre ellos se encuentran los terpenoídes que se distribuyen en
diversos vegetales, también se les puede obtener mediante otras
vías, como por ejemplo la sintética; los terpenoídes son
sustancias volátiles que les otorgan a las plantas y a las flores
sus fragancias y olores característicos se presentan
ampliamente en las hojas y frutos de las plantas superiores. El
termino terpeno fue dado por primera vez a los compuestos
hallados de la trementina que es un líquido volátil aislado del
pino. (Kuklinski, 2003).
• Sesquiterpenos
Características: son estructuras C15 formadas a través de la
condensación isoprénica. Se encuentran frecuentemente formando
parte de los aceites esenciales pero también hay sesquiterpenos
distintos de los que se encuentran en dichos aceites. Entre ellos
destacan las láctonas sesquiterpenicas presentes en el árnica o los
sesquiterpenos que contiene la valeriana. Láctonas Sesquiterpenicas:
dichas estructuras se localizan casi de forma exclusiva en la familia de
las Compuestas (Asteraceae). Destacan sobre todo las láctonas
sesquiterpenicas del árnica. Están identificados más 120 compuestos
químicos, en Matricaria chamomilla, se encuentran metabolitos
31
secundarios; en donde se identificaron: 28 terpenos, 36 flavonoídes y
52 compuestos que poseen el efecto de potenciar la actividad
farmacológica del aceite esencial (Mann et al, 1992).
• Compuestos fenólicos
Generalmente todos los vegetales, como producto de su metabolismo
secundario normal, son capaces de biosintetizar un elevado número de
compuestos fenólicos, muchos son indispensables para sus funciones
fisiológicas y otros son de utilidad para defenderse ante situaciones de
estrés (hídrico, luminoso, etc). Los compuestos fenólicos se originan a
partir de dos rutas biosintéticas: la ruta del ácido sikímico que conduce,
mediante la síntesis de aminoácidos aromáticos (fenilalanina, tirosina),
y la ruta de los poliacetatos. Igualmente, algunos de los compuestos
fenólicos que son principios activos de plantas medicinales se originan
a través de rutas mixtas que combinan la vía del sikimato y del acetato,
es el caso por ejemplo de los flavonoides. (Adzet, 1987)
• Taninos
Los taninos son compuestos polifenólicos, complejos, de origen
vegetal, masa molecular relativamente elevada, sabor astringente,
conocidos y empleados desde hace muchos siglos por su propiedad de
ser capaces de convertir la piel en cuero, es decir de curtir las pieles.
Esto se debe a su capacidad para unirse a macromoléculas como
hidratos de carbono y proteínas. Dentro de los vegetales los taninos
suelen encontrarse en las vacuolas celulares, combinados con
alcaloides, proteínas u osas. Clásicamente se han distinguido dos tipos
de taninos:
a).Taninos hidrolizables, llamados también gálicos o pirogálicos.
Estos taninos como su denominación indica se hidrolizan con facilidad
tanto por ácidos y álcalis como por vía enzimática y son generalmente
de formación patológica. Se localizan en algunas Dicotiledoneae
especialmente en Fagaceae, Anacardiaceae y Leguminosae.
32
b).Taninos condensados o proantocianidinas. Se conocen también
como no hidrolizables, ya que se hidrolizan con dificultad y por el
contrario, el tratamiento con calor y ácidos minerales origina polímeros
de alto peso molecular (flobáfenos). Los taninos presentan también
propiedades antioxidantes. Actúan como inhibidores enzimáticos al
precipitar la fracción proteica de los enzimas. (Hartisch, 1997).
2.3.6 Mecanismos y sitios de la acción ansiolítica. Diazepam
Los estudios experimentales de los ansiolíticos sobre la conducta en
animales demuestran de manera constante la capacidad de las
benzodiazepinas para liberar una respuesta que previamente había
sido suprimida mediante la presentación de un estímulo desagradable.
Las benzodiazepinas restablecen la prontitud de esta respuesta, sin
afectar la actividad motora o el estado de vigilia o atención del animal.
Los estudios electrofarmacológicos demuestran que la región más
sensible a la acción de las benzodiazepinas es el sistema límbico y,
dentro de él, el hipocampo y la amígdala. Esta acción se diferencia de
la ejercida por barbitúricos y otros hipnóticos, los cuales ejercen su
acción más generalizada en la formación reticular. Dado el papel que el
hipocampo, el septo y la amígdala desempeñan en la ansiedad, se
puede relacionar la actividad ansiolítica con la acción depresora
ejercida selectivamente a este nivel, tal acción farmacológica se debe a
su capacidad de incrementar la actividad inhibidora del GABA, ya sea
directamente sobre el cerebro límbico o bien indirectamente inhibiendo
la actividad serotonérgica de los núcleos del rafe que proyectan hacia la
amígdala y el hipocampo. (Flores 1988).
2.3.6 a) Acción miorrelajante de las benzodiazepinas
El diazepam y otras benzodiazepinas producen relajación de la
musculatura esquelética en estados distónicos, discinéticos,
hipertónicos y espásticos. La acción miorrelajante se ejerce sobre el
SNC (no en la placa motriz ni en el músculo) a varios niveles: a) en la
33
propia médula espinal, donde facilita fenómenos de inhibición
presináptica; b) en la formación reticular activadora descendente del
tronco del encéfalo; c) en los ganglios basales, y d) en el cerebelo. En
la práctica, la acción miorrelajante se observa con dosis que también
producen sedación, lo que limita su utilidad. (Chopin et al, 1987).
2.3.7 El receptor NMDA (activado selectivamente por el N-metil-D-
aspartato)
Es un receptor que funciona como un canal que, además de permitir el
flujo de Na+ y K+, también es permeable para el Ca+2, por lo que su
activación desencadenará además respuestas derivadas del
incremento de calcio intracelular. Este receptor muestra varias
singularidades. Es altamente sensible al Mg+2 en situación de reposo,
los receptores de NMDA son escasamente afectados por los agonistas
si existen concentraciones submilimolares de Mg+2 pero cuando la
membrana es despolarizada, el bloqueo por Mg+2 deja de ser activo y el
canal se abre en respuesta al agonista. Esto significa que el Mg+2
muestra afinidad por un sitio que se encuentra situado en la
profundidad del canal; esta afinidad disminuye conforme la membrana
se despolariza, lo cual significa que para que un receptor NMDA pueda
ser activado por un agonista, la célula ha de ser previamente
despolarizada (p. ej., por activación previa de un receptor no-NMDA).
Además, el receptor NMDA contiene varios sitios de regulación. Uno de
ellos ha de ser ocupado obligadamente por la glicina para que el
receptor pueda ser activado por un agonista, comportándose así como
un coagonista; la D-serina muestra similar actividad. El segundo sitio de
regulación fija determinados compuestos (fenciclidina o PCP, ketamina,
dizocilpina o MK801) que antagonizan selectiva, pero no
competitivamente, la activación producida por NMDA. Su utilización es
uso-dependiente, lo que significa que estos compuestos sólo son
activos si el receptor ha comenzado a estar estimulado. Los otros sitios
de regulación son para el Zn+2 que bloquea el canal con independencia
34
de su estado de actividad y para poliaminas (espermina y espermidina)
que facilitan la activación del canal. (McBain et al, 1994).
El receptor NMDA es una proteína muy compleja y tremendamente
regulada. Su conductancia al Ca2+ es notablemente alta y es ésta
quizá su característica más destacable y la responsable de muchas de
sus funciones. Otra característica especial del receptor NMDA es que
para que el canal se abra se necesita, además del glutamato, la
presencia de un co-agonista (el aminoácido glicina). Ciertas poliaminas,
al igual que la glicina, modulan positivamente el canal, mientras que el
cinc y un exceso de protones lo modulan negativamente. Sin embargo,
lo más llamativo de este receptor es que comparte características
funcionales de canales regulados por ligando y de canales sensibles al
voltaje y dependientes de uso. Esta propiedad está relacionada con el
bloqueo efectivo del canal del receptor NMDA por el ion Mg2+, cuando
el potencial de membrana está próximo al valor de reposo.
Una gran parte de las acciones mediadas por los receptores NMDA se
basa en la regulación del flujo de Ca2+ hacia el interior de la célula. La
activación de los receptores NMDA permitiría un rápido influjo de Ca2+,
con la consiguiente elevación intracelular de Ca2+, lo cual dispararía
una cascada de sistemas de segundos mensajeros que podría producir
acciones muy diversas.
Glutamato y receptores NMDA están involucrados en numerosas
funciones dentro del sistema nervioso. Uno de los procesos más
estudiados en el que los receptores NMDA parecen jugar un papel
clave es la plasticidad sináptica. La maduración de los circuitos
nerviosos (establecimiento de conexiones funcionales) durante el
desarrollo, y también en el adulto, depende de la activación y
consolidación de ciertas sinapsis, mediante mecanismos de plasticidad
en el que están involucrados los receptores NMDA.
35
Si bien éstas y otras funciones normales dependen de la precisa
activación de los receptores NMDA en el momento y lugar adecuados,
es cierto también que un desequilibrio producido por la sobre activación
del receptor (por liberación excesiva de glutamato, por ejemplo) podría
conducir a ciertas enfermedades como la epilepsia o a la muerte
neuronal por sobreexcitación en situaciones de hipoxia. (Ohno, 2008).
2.3.8 Estudio de toxicidad de las plantas
Uno de los primeros estudios farmacológicos a realizar a una sustancia,
producto o principio activo a la que se le atribuye un efecto terapéutico,
es la toxicidad. Toda sustancia o mezcla de sustancias a ser utilizadas
en medicina no solo deben de poseer efectos terapéuticos sino además
deben de ser inocuas. Todo producto sintetizado o de origen natural
que contengan principios activos, pueden producir efectos no deseados
a corto o largo plazo. Por ello en la elaboración de medicamentos
resulta esencial seleccionar sustancias que ofrezcan un margen de
seguridad adecuado. La toxicidad e inocuidad de un producto, no solo
depende de la sustancia en sí, sino también del tipo del envase con el
que está en contacto y las condiciones y procedimientos empleados
para su elaboración y/o dispensación. (Lock Sing, 1999).
Las enfermedades mentales son causa de gran sufrimiento personal
para quienes la padecen y para las personas en su entorno. En un país
donde la atención psiquiatrita no está disponible en varias regiones y
donde los seguros privados no están obligados por ley a cubrir tales
atenciones, la enfermedad mental empobrece rápidamente a la familia.
Por otro lado, la falta de un sistema de atención y rehabilitación con
base en la comunidad, obliga a que los pacientes con síntomas graves,
que dificultan significativamente la interacción familiar, deban vivir y
permanecer todo el día en sus casas, el resultado es el rechazo
familiar, la discriminación y exclusión del enfermo y del familiar que lo
cuida, con graves consecuencias para el cuidador. (Prados-Atienza,
2005).
36
Las pérdidas en términos de años de vida sana son también
importantes, se sabe que para el año 2002 los DALY (disability adjusted
life year) perdidos por enfermedades neuropsiquiatricas en el Perú
(estimados por OMS) eran del orden de 1078, de los cuales 336
correspondían a las perdidas por depresión unipolar. La complejidad
multifacético del sistema nervioso central es tal que se puede aceptar
que es el sustrato de toda la vida mental y de la conducta humana.
Partiendo del reconocimiento que todas las experiencias psicológicas
son finalmente codificadas en el cerebro, y que todos los fenómenos
psicológicos representan procesos biológicos, la moderna neurociencia
de la mente ofrece un entendimiento enriquecido de la inseparabilidad
de la experiencia humana, el cerebro y la mente. (Aliaga, 2009).
Por lo tanto, las repercusiones de la exposición a la pobreza, la
violencia, la frustración se traduce en alteraciones del sistema nervioso
central. Las manifestaciones de estas modificaciones, que son las
enfermedades mentales deben ser atendidas prioritariamente, con una
perspectiva de salud pública, equidad y derechos humanos, pues su
alta prevalencia y su impacto individual y colectivo hacen de los
trastornos mentales un verdadero problema de salud pública en el
Perú.
2.4 Definición de términos
Ansiedad: Es un mecanismo defensivo. Es una respuesta de alerta
ante situaciones consideradas amenazantes. Es un mecanismo
universal, se da en todas las personas, es normal, adaptativo, mejora el
rendimiento y la capacidad de anticipación y respuesta. La función de la
ansiedad es movilizar al organismo y mantenerlo alerta y dispuesto
para intervenir frente a los riesgos y amenazas, de forma que no se
produzcan o perjudiquen. La ansiedad pues, nos empuja a tomar las
medidas convenientes (huir, atacar, neutralizar, afrontar, adaptarse,
etc.).
37
DAP-7: (ácido D-2- animo-7-fosfonoheptanoico). Es uno de los
antagonistas competitivos más potentes de los receptores de NMDA,
pertenece a la serie D (no natural) de los aminoácidos y presentan un
grupo ácido fosfónico separado de la unidad básica, glicinato, por una
cadena de más de tres eslabones. Además, las formas insaturadas o
con conformaciones restringidas por la presencia de sustituyentes o
anillos lipofílicos presentan mayor potencia, selectividad y accesibilidad
al sistema nervioso central. Los antagonistas del receptor NMDA
poseen interesantes propiedades farmacológicas (carácter
anticonvulsionante, relajante muscular, gran eficacia en la prevención
de la degeneración neuronal por excitotoxicidad, etc.) por lo que ya
existen varios fármacos patentados y en las últimas etapas de
desarrollo clínico.
Diazepam: Es un fármaco derivado de la 1,4-benzodiazepina, con
propiedades ansiolíticas, miorrelajante, anticonvulsivantes y sedantes.
El diazepam se utiliza para tratar estados de ansiedad y está
considerada como la benzodiazepina más efectiva para el tratamiento
de espasmos musculares.
Hipnótico: Una droga hipnótica produce somnolencia y facilita el inicio
y el mantenimiento de un estado de sueño parecido al normal. A este
efecto se le ha llamado hipnosis, sin que esto tenga relación con ese
estado inducido artificialmente por sugestibilidad.
Metabolito secundario: Son sustancias de origen natural que no son
vitales para el organismo que las produce, son menos abundantes que
los metabolismos primarios, frecuentemente se observan en células u
órganos especializados y están implicados en la regulación de las
plantas con otros organismos de su entorno.
Plantas medicinales: Se denomina así a aquellas plantas cuyas partes
o extractos se utilizan como drogas o medicamentos para el tratamiento
de alguna afección o enfermedad que padece un individuo o animal. La
38
mencionada parte de este tipo de plantas es conocida popularmente
como droga vegetal y puede ser suministrada a través de diferentes
vías: cápsulas, comprimidos, cremas, elixir, decocción, infusión, jarabe,
pomada, tintura, y ungüento, entre otras.
Receptor de NMDA: Los receptores NMDA o NMDAr (de N-metil-D-
aspartato) son receptores ionotrópicos de glutamato, un
neurotransmisor, que actúan como componentes prioritarios en la
plasticidad neuronal y memoria. El acrónimo NMDA procede de N-metil
D-aspartato, un agonista selectivo que une a este tipo de receptores de
glutamato pero no a otros tipos. Su activación conduce a la apertura de
un canal iónico no selectivo para toda clase de cationes.
Sedante: Una droga sedante disminuye la actividad, modera la
excitación y calma al que la recibe. La sedación puede ser también un
efecto adverso de muchos fármacos que no son sedantes propiamente,
ni son capaces de producir anestesia. Las BDZ, a pesar de que
tampoco producen anestesia, se consideran como sedantes e
hipnóticos.
Toxicidad crónica: Efectos adversos que ocurren como resultado de
dosis repetidas con una sustancia química sobre una base diaria, o
exposición a la sustancia química durante la mayor parte de vida de un
organismo (generalmente, más del 50%). Con animales
experimentales, esto generalmente significa un período de exposición
de más de tres meses. Los estudios con exposición crónica durante dos
años, se hacen con ratas o ratones para evaluar el potencial
carcinogénico de las sustancias químicas.
39
CAPITULO 3: METODOLOGÍA
3.1 Tipo y Diseño de Investigación
El presente trabajo es un estudio de investigación experimental debido
a que se manipularan deliberadamente una o más variables
independientes para analizar las consecuencias que la manipulación
tiene sobre estas variables dependientes. (Hernández, 1998).
Por las características del diseño es un estudio:
• Experimental
• Prospectivo
• Transversal
40
3.2 Unidad de análisis
Animales de experimentación, entre ellos ratas y ratones que fueron
sometidos a los métodos de inducción de la ansiedad y a la observación de
los datos conductuales en el Bioterio de la Facultad de Medicina de la
UNMSM,
3.3 Población de estudio
Población: Animales de experimentación ratas y ratones obtenidos del
Instituto Nacional de Salud INS. Chorrillos – Lima.
3.4 Tamaño de muestra
Muestra:
Animales de experimentación; 36 ratones divididos en 6 grupos, en el test de
inducción del sueño y 36 ratones divididos también en 6 grupos, en el test de
hiperactividad y/o cambios conductuales; 10 ratas machos y 10 hembras,
para el ensayo de toxicidad.
3.5 Selección de muestra
Se obtuvo los animales de experimentación del Instituto Nacional de Salud
INS. La selección de los animales se realizó en base al cumplimiento de los
siguientes criterios:
Criterios de Inclusión:
1. Material Botánico
• Para el presente trabajo se utilizaron muestras frescas con hojas y flores
de la planta entera sin raíz de Melissa oficinalis “Toronjil” y Matricaria
chamomilla “Manzanilla” del Distrito de Huasahuasi (2754 m.s.n.m.),
Provincia de Tarma, Departamento de Junín, colectadas en el mes
Septiembre.
41
2. Animales de experimentación
• Se utilizaron ratones albinos machos de 27.5 ± 2.5 g. de peso corporal.
• Ratas albinas de cepa Holtzman machos y hembras de 175 ± 25 g. de peso
corporal. Ambos obtenidos del Bioterio del Instituto Nacional de Salud
ubicado en el Distrito de Chorrillos de la Ciudad de Lima, mantenidos en un
ambiente a temperatura de 21 ºC con dieta y agua a libertad.
Criterios de exclusión:
• Muestras vegetales recolectadas de otro lugar de origen distinto al
propuesto en el presente estudio.
• Ratones albinos hembras y de peso mayores a 30 g.
• Ratas albinas de cepa diferente a Holtzman de peso mayores a 200 g.
3.6 Técnicas de recolección de datos.
La principal técnica fue la de observación y el registro directo de los datos a
través de la ficha de investigación (Anexo 6).
Se realizaron los siguientes procesos:
1. Realización del estudio fitoquímico preliminar del extracto
alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria
chomomilla “Manzanilla”.
Se realizó el análisis fitoquímico preliminar en forma cualitativa, para
detectar los diferentes metabolitos secundarios presentes en las
plantas, estas pruebas fueron basadas en la aplicación de reacciones
fisicoquímicas de coloración y/o precipitación según Lock de Ugaz,
1988.
42
Determinación de los principales grupos de metabolitos
primarios / secundarios.
A una solución acuosa de la muestra (5 mg/mL), se realizó las
siguientes pruebas:
a) Determinación de aminoácidos libres (metabolito primario)
A 5 mg. del extracto etanólico de Melissa officinalis “Toronjil” más
Matricaria chamomilla “Manzanilla” se le agregó 3 gts del reactivo
Ninhidrina, se agitó, el color violáceo indica presencia de
aminoácidos libres.
b) Determinación de taninos
Con gelatina – cloruro de sodio: A 1 mL de muestra se agregó 3 gotas
de reactivo, en un principio se forma en la solución una sustancia en
forma de nube, luego de centrifugar queda en el fondo un precipitado
de color blanco. Este confirma la presencia de taninos.
Con cloruro férrico o alumbre férrico: A la muestra se agregó unas
gotas de cloruro férrico o alumbre férrico; una coloración negra
azulada nos indica que el tanino pertenece a los derivados del ácido
pirogálico, mientras que la coloración verde nos indica que deriva de
la catequina.
c) Determinación de alcaloides
Reactivo de Dragendorff: Se disolvió 8g de Bi (NO3)3.5H20 en 20
mL de HNO3 y mezcló con 50 mL de una solución acuosa
conteniendo 27,2 g de KI, se dejó reposar la solución, decantó el
sobrenadante y diluyó a un volumen de 100 mL. Al agregar unas
43
cuantas gotas de este reactivo a una solución ácida de la muestra se
observó la aparición de un precipitado que va del naranja al rojo.
Reactivo de Mayer: Se disolvió 1,36 g de HgCl2 en 60 mL de agua y
se adicionó 10 mL de una solución conteniendo 5 g de KI y se diluyó
hasta un volumen de 100mL. Al agregar un exceso de reactivo a una
solución acidulada de la muestra se observa la aparición de un
precipitado de blanco a crema.
d) Determinación de azucares (metabolito primario).
A 5 mg del extracto etanólico de Melissa officinalis “Toronjil” más
Matricaria chamomilla “Manzanilla” se le adicionó 3 gotas del reactivo
de Molish, más 1 Ml de H2SO4 concentrado, se le mezcló y la
presencia de un anillo violáceo indicó la presencia de azúcares
formando parte de glicósidos.
e) Determinación de quinonas
Se pesaron dos gramos de muestra y se trituró hasta un polvo muy
fino en un mortero, luego se realizarán los siguientes ensayos
químicos:
Solubilidad en NaOH al 5%
En un tubo de ensayo se introdujeron 10 mg de la muestra, se añadió
0,2 mL de etanol y 0,4 mL de NaOH al 5%. El cambio de coloración
nos indicó la presencia de compuestos quinónicos.
Reacción de Bornträger
Un gramo de muestra se trató con NaOH 5% en caliente, se filtró,
enfrió y se aciduló con HCl 20%, se añadió benceno, agitó y se dejó
en reposo. Luego se separó la fase bencénica a la cual se le añadió
NH4 OH.
44
La formación de una coloración rosada a roja, indicó la presencia de
antraquinonas. Fue necesario dejar un buen tiempo, para que la
reacción ocurra.
f). Determinación de saponinas
Prueba de la espuma
A una solución acuosa de la muestra conteniendo 5 mg/mL, se
sometió a una agitación vigorosa durante 30 segundos. La presencia
de la saponina se manifestó por la formación de una espuma
persistente durante 3 min.
Reactivo de Liebermann – Buchard
A una pequeña cantidad de la muestra se añadió unas pocas gotas
de ácido acético más 3 mL de anhídrido acético/H2SO4 (50:1), con lo
cual las saponinas triterpenoidales dan color rosado a púrpura,
mientras las esteroidales dan azul – verdoso.
g). Determinación de flavonoides
Con reactivo Shinoda: En un tubo de ensayo se colocó 1 mL de
muestra con 1 limadura de magnesio pequeña, con un gotero se
añadió 3 gotas de HCl concentrado. Se observó un intenso burbujeo
por la reacción de las limaduras y la solución adquiere una débil
coloración naranja al principio; conforme va reaccionando más, la
coloración naranja se va intensificando, hasta que después de 10
minutos la solución tiene un color tono rojo. Lo que indica un resultado
positivo.
45
2. Evaluación del efecto sedante del extracto alcohólico de Melissa
officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
sobre la ansiedad inducida en ratones albinos, estableciendo la
dosis efectiva 50 ansiolítica.
Método de inducción de hiperactividad y/o cambios
conductuales.
Para inducir los cambios conductuales en los ratones se utiliza el test
de N-metil-D-aspartato (NMDA), descrito por (Ngo Bum et al, 2002),
(Shmutz, et al. 1990), en el diseño experimental se consideró de 2
grupos control: uno con solvente twen 5 mL/Kg. y otro controlado
recibiendo 0.33 ηmol/Kg. DAP7 (ácido D-2- animo-7-
fosfonoheptanoico) un competitivo antagónico (Croucher et al, 1982).
Procedimiento de inducción de hiperactividad y/o cambios
conductuales.
Se realizó mediante la observación por 30 minutos. Los animales que
no exhibieron un cambio de conducta dentro del periodo de
observación de los 30 minutos fueron declarados protegidos.
Los animales fueron mantenidos en jaulas de crianza acondicionados
al ambiente de laboratorio con un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas a
una temperatura ambiente, de igual manera recibirán su alimento y
agua ad libitum. El día del ensayo se empezó privando de agua y
alimentos 12 horas antes del ensayo para la determinación de la
hiperactividad y los cambios conductuales. Se utilizaron 36 ratones
divididos al azar en 06 grupos de 6 animales a quienes se les observó
su comportamiento conductual antes de la inducción con N-metil-D-
aspartato (NMDA). Los animales marcados, pesados y distribuidos al
azar se identificaran en los siguientes grupos:
46
Grupo 1: Normal (Solucion de twen 80, 5 mL/Kg.)
Grupo 2: N-metil-D-aspartato (NMDA) en una dosis de 75 mg/Kg.
Grupo 3: EAMM a dosis de 1 g/kg, + (NMDA) dosis de 75 mg/Kg.
Grupo 4: EAMM a dosis de 2 g/kg,+ (NMDA) dosis de 75 mg/Kg.
Grupo 5: EAMM a dosis de 4 g/kg,+ (NMDA) dosis de 75 mg/Kg.
Grupo 6: DAP7 a dosis de 0.33 ηmol/Kg,0 + (NMDA) dosis de 75
mg/Kg.
Para el cálculo de la dosis efectiva media (DEM 50) se utilizó el
Método de Litchfield-Wilcoxon un método estadístico para la
determinación de DEM 50. (Ruiz et al, 2004).
INDICADOR DE MEDIDA: La DEM 50 fue expresada en mg/Kg.
3. Determinación del efecto sedante comparativo de la
administración del extracto alcohólico de Melissa officinalis
“Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla” presenta
efecto sedante en comparación con estándares farmacológicos
en la ansiedad inducida en ratones albinos.
Método de inducción del sueño.
Se utilizó el test de Inducción del sueño en ratones por diazepam,
método descrito por Beretz et al, 1978 y modificado por Rakotonirina
et al, 2001 donde se estudia los efectos potenciales de la planta sobre
el sueño. (Ngo bum et al, 2004).
47
Procedimiento de inducción del sueño.
Los animales de experimentación adaptados a las condiciones de
laboratorio. Los animales fueron marcados y pesados periódicamente
hasta la culminación del ensayo experimental. Los animales de
experimentación fueron distribuidos en los siguientes grupos:
Grupo 1: Solución de twen 80, 5 mL/Kg.
Grupo 2: EAMM a dosis de 1 g/kg + diazepam (50 mg/Kg.).
Grupo 3: EAMM a dosis de 2 g/kg + diazepam (50 mg/Kg.).
Grupo 4: EAMM a dosis de 4 g/kg + diazepam (50 mg/Kg.).
Grupo 5: Diazepam (50 mg/Kg.)
El tiempo de observación entre la desaparición y la recuperación del
reflejo directo; se mide el tiempo de dormir.
4. Determinación de la seguridad del extracto alcohólico de Melissa
officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla “a
nivel bioquímico y anatomopatológico al ser administrado por vía
oral en ratas normales durante 60 días.
Método de evaluación de toxicidad crónica.
Se utilizó el modelo de toxicidad crónica en ratas. (OECD, 1996)
Procedimiento de observación por dosis repetida, inducción de
toxicidad crónica.
Se agrupo a los animales 10 machos y 10 hembras, ratas Holtzman
de un promedio de 175 ± 25 g. y de 2 meses de edad, a los cuales se
le dividió en 2 grupos por género. A 5 machos se les administrٕó
diariamente el solvente (Solución de twen 80, 5 mL/Kg.) mientras que
a los 5 restantes se les administró el extracto diariamente, de la
misma manera se realizó con las hembras; se fueron observando los
48
efectos diarios que se presentaron (aumento de secreciones,
palpitaciones, etc).
La dosis a administrar fue de 4 g/Kg del extracto alcohólico de
Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
en forma repetida por vía peroral diariamente hasta la culminación del
ensayo experimental (60 días) y al grupo control solución de twen 80,
5 mL/Kg. (emulsificante). Luego los animales fueron sacrificados
administrándoles pentobarbital a dosis de 100 mg/kg. Se procedió a
la obtención de sangre por punción cardiaca para la realización de los
análisis bioquímicos: colesterol, urea, creatinina, transaminasas,
lipoproteína HDL. Todos los órganos fueron conservados en formol al
10% para posterior examen anatomopatológico y determinar los
posibles cambios histológicos, en relación al grupo control.
Rango de toxicidad crónica
DOSIS CLASIFICACIÓN
< 25 mg/kg Muy tóxica
< 200 mg/kg Tóxica
< 2 000 mg/kg Dañina
> 2 000 mg/kg No clasificada
(OECD, 1996)
Se observó el comportamiento de los animales durante 60 días.
Prueba de hipótesis
Hipótesis nula (H0): El extracto alcohólico de hojas y flores de
Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
no ejerce efecto sedante sobre la ansiedad inducida en ratones
albinos.
49
Hipótesis alternativa (H1): El extracto alcohólico de hojas y flores de
Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
ejerce efecto sedante sobre la ansiedad inducida en ratones albinos.
Por los datos obtenidos en el presente estudio rechazamos la
Hipótesis Nula (H0) y aceptamos la Hipótesis Alternativa (H1);
concluimos que “hay suficiente evidencia estadística para inferir que
la Hipótesis Nula (H0) es falsa” con (p<0.05).
4.1 Análisis, interpretación y discusión de los resultados
Procesamiento estadístico
Los datos fueron expresados utilizando la estadística descriptiva
haciendo uso de valores medios ± error estándar, porcentajes,
intervalos de confianza al 95%, valores mínimos y máximos. Así como
también se aplicó análisis estadístico interferencial de las variables
cuantitativas empleándose el análisis de varianza de una vía (One-
way ANOVA) que permitió determinar si existe diferencia
estadísticamente significativa para la variable evaluada intergrupos e
intragrupos, luego se realizó un análisis de múltiples comparaciones
tipo post hoc mediante el test de LSD. Se consideró un nivel de
significancia fijado en p< 0.05. Se usó el software estadístico SPSS
for Windows 13.0 año 2005.
Consideraciones éticas
En el estudio experimental al utilizar animales de experimentación
específicamente ratones y ratas se tuvieron en cuenta las normas y
los procedimientos éticos para el manejo de animales de laboratorio
establecidos internacionalmente. (Guide for the care and use of
laboratory animals, 1996).
50
CAPITULO 4: RESULTADOS Y DISCUSIÓN
RESULTADOS
4.1 Presentación de resultados
4.1. Obtención del extracto etanólico de las hojas y flores de Melissa
officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla ”Manzanilla”
4.1 a Recolección de la muestra vegetal
Las plantas en estudio fueron recolectadas en el Distrito de Huasahuasi
(2754 m.s.n.m.), Provincia de Tarma, Departamento de Junín. Se recolecto
la planta entera en su estado silvestre (hojas, tallos y flores), sin raíz con
tijera podadora, en un día soleado, y fueron colocados en una bolsa de
papel, previamente con la colocación de alcohol al 96 %. (Sharapin, 2000).
4.1 b. Identificación de la especie
Taxonómicamente las plantas fueron identificadas como: Melissa
officinalis “Toronjil" y Matricaria chamomilla” Manzanilla” (Ver
Anexo Nº 1 y 2).
4.1 c. Preparación del extracto alcohólico
Secado y molienda de la planta
Se sometió la muestra a un ligero secado natural en un área sombreada,
ventilada y a temperatura ambiente en tendales de papel kraf que se fue
cambiando constantemente. Se seleccionó la muestra y se realizó la
preparación del extracto primero por separado cada planta midiendo el peso
de la muestra a utilizar.
51
Preparación del extracto
Se obtuvieron los extractos alcohólicos de “Manzanilla” y “Toronjil” en una
proporción del 50% (P/V) para lo cual se procedió a la extracción alcohólica.
(Sharapin, 2000). Ambos extractos fueron conservados a una temperatura
de 4 a 8 °C.
Una vez obtenido ambos extractos estos fueron mezclados en proporciones
iguales y resuspendidos en twen 80, tuvo el aspecto de masa homogénea,
de consistencia blanda, color verde petróleo, libre de partículas extrañas.
Los rendimientos se obtuvieron por diferencia de peso húmedo y seco de
planta entera (hojas y flores), cuyos resultados fueron de 3.4 % por 100 g de
Matricaria chamomilla “Manzanilla” y de 2.2 % por 100 g de Melissa
officinalis “Toronjil”.
52
4.2 Marcha fitoquímica
Tabla 1. Marcha fitoquímica del extracto alcohólico de Matricaria
chamomilla “Manzanilla”
_________________________________________________________ Reactivo: Metabolito primario/secundario Resultado _________________________________________________________ Ninhidrina Aminoácidos libres -
Gelatina Taninos -
Tricloruro férrico Compuestos fenólicos ++
Dragendorff Alcaloides -
Molisch Azúcares +
NaOH 10% Quinonas -
Mayer Alcaloides -
Liebermann Esteroides y triterpenos ++
Shinoda Flavonoides +
_________________________________________________________
Leyenda: (+++) = abundante cantidad; (++) = regular cantidad;
(+) = poca cantidad; (-) = ausencia
Tabla 2. Marcha fitoquímica del extracto alcohólico de Melissa
officinalis “Toronjil”
_________________________________________________________ Reactivo: Metabolito primario/secundario Resultado _________________________________________________________ Ninhidrina Aminoácidos libres -
Gelatina Taninos +
Tricloruro férrico Compuestos fenólicos ++
Dragendorff Alcaloides -
Molisch Azúcares ++
NaOH 10% Quinonas +
Mayer Alcaloides -
Liebermann Esteroides y triterpenos ++
Shinoda Flavonoides + _______________________________________________________
Leyenda: (+++) = abundante cantidad; (++) = regular cantidad;
(+) = poca cantidad; (-) = ausencia
53
Tabla 3. Marcha fitoquímica del extracto alcohólico de Melissa
officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
_________________________________________________________
Reactivo: Metabolito primario/secundario Resultado
_________________________________________________________
Ninhidrina Aminoácidos libres -
Gelatina Taninos ++
Tricloruro férrico Compuestos fenólicos +++
Dragendorff Alcaloides -
Molisch Azúcares ++
NaOH 10% Quinonas +
Mayer Alcaloides -
Liebermann Esteroides y triterpenos +++
Shinoda Flavonoides +
_________________________________________________________
Leyenda: (+++) = abundante cantidad; (++) = regular cantidad;
(+) = poca cantidad; (-) = ausencia
4.3 Efecto del extracto alcohólico de las hojas y flores de Melissa
officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla” sobre la
hiperactividad y los cambios conductuales sobre la ansiedad.
Tabla 4 y figura 1, muestran el efecto del extracto alcohólico de hojas y
flores de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
(EAMM) sobre la hiperactividad estimulados por NMDA, donde se midió el
tiempo de duración de hiperactividad expresado en número de animales
declarados protegidos, observándose un mejor efecto a dosis de 4 g/Kg.
54
Tabla 4: Animales con hiperactividad por NMDA, y porcentaje de
protección por el antagónico DAP7 y el extracto de EAMM.
Dónde: hiperactividad, es movimientos involuntarios medidos hasta 30
minutos.
% de Protección = [((control – tratamiento)/control)] x 100
Figura 1. Porcentaje de animales protegidos frente a la inducción de
hiperactividad de cambios conductuales con NMDA (N-metil-D-aspartato).
Está dado por los datos obtenidos por el grupo control menos tratamiento
sobre control por 100.
Tratamiento n
N° animales con
hiperactividad Protección
%
Sol. Twen 80 6 0 0
NMDA 6 6 0,00
NMDA + DAP7 6 0 100,00
EAMM 1 g/kg 6 2 67,00
EAMM 2 g/kg 6 1 83,00
EAMM 4 g/kg 6 0 100,00
% d
e P
rote
cci
ón
55
Figura 2. Duración de tiempo expresado en minutos de los episodios de
hiperactividad y cambios conductuales, producidos por la administración
de NMDA y antagonizadas por DAP7 y EAMM.
Figura 3. Dosis efectiva media del extracto alcohólico de hojas y flores de
Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
sobre la hiperactividad y los cambios conductuales inducidos con NMDA.
56
4.4 Efecto sedante del extracto alcohólico de las hojas y flores de
Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
en comparación con el estándar Farmacológico diazepam.
La figura 4, muestra el efecto sedante del extracto alcohólico de hojas y
flores de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla
”Manzanilla” (EAMM) en comparación con el estándar farmacológico
diazepam, observándose un mejor efecto a dosis de 4 g/Kg.
Figura 4. Tiempo de dormir en minutos, comparado con el estándar
farmacológico diazepam 50 mg/Kg.
Figura 5. Porcentaje de hipnosis (tiempo de dormir), comparado con el
estándar farmacológico diazepam.
% d
e H
ipn
os
is
57
5. Seguridad del extracto alcohólico de las hojas y flores de Melissa
officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
Tabla 5. Observaciones histopatológicas agrupadas en comparación entre
Solución Twen 5 ml/Kg. (Solvente del extracto) y extracto alcohólico 4 g/Kg.
de hojas y flores de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria
chamomilla” Manzanilla” (EAMM) durante 60 días.
Graf. Nº Tratamiento durante 60 dias Observaciones
1 Solución Twen 80, 5 ml/Kg Cerebro: Sin alteraciones
2 EAMM 4 g/Kg. Cerebro: Sin alteraciones
3 Solución Twen 80, 5 ml/Kg Bazo: Sin alteraciones
4 EAMM 4 g/Kg. Bazo: Sin alteraciones
5 Solución Twen 80, 5 ml/Kg Corazón: Sin alteraciones
6 EAMM 4 g/Kg. Corazón: Sin alteraciones
7 Solución Twen 80, 5 ml/Kg Hígado: Sin alteraciones
8 EAMM 4 g/Kg. Hígado: Sin alteraciones
9 Solución Twen 80, 5 ml/Kg Pulmón: Sin alteraciones
10 EAMM 4 g/Kg. Pulmón: Sin alteraciones
11 Solución Twen 80, 5 ml/Kg Riñón: Sin alteraciones
12 EAMM 4 g/Kg. Riñón: Sin alteraciones
58
Figura 6. Tejido cerebral, sin alteraciones. Solución Twen 80. (40X).
Figura 7. Tejido cerebral, estructuras celulares conservadas. EAMM.
(40X).
59
Figura 8. Bazo, sin alteración. Solución Twen 80. (40X).
Figura 9. Bazo, estructuras celulares conservadas. EAMM. (40X).
60
Figura 10. Corazón, sin alteraciones. Solución Twen 80. (40X).
Figura 11. Corazón, estructuras celulares conservadas. EAMM. (40X).
61
Figura 12. Hígado, sin aleteraciones. Solución Twen 80. (40X).
Figura 13. Hígado, estructuras celulares conservadas. EAMM. (40X).
62
Figura 14. Pulmón, sin alteraciones. Solución Twen 80. (40X).
Figura 15. Pulmón, estructuras celulares conservadas. EAMM. (40X).
63
Figura 16. Riñón, sin alteraciones. Solución Twen 80. (40X).
Figura 17. Riñón, estructuras celulares conservadas. EAMM. (40X).
64
Figura 18. Niveles de urea en plasma de ratas normales luego de 60 días de administración de solución twen 80, 5mL/Kg. y de extracto alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla” EAMM, 4 g/Kg. (p< 0.05).
Figura 19. Niveles de TGP en plasma de ratas normales luego de 60
días de administración de solución twen 80, 5mL/Kg. y de extracto
alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla
“Manzanilla” EAMM, 4 g/Kg. (p< 0.05).
65
Figura 20. Niveles de colesterol en plasma de ratas normales luego de
60 días de administración de solución twen 80, 5mL/Kg. y de extracto
alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla
“Manzanilla” EAMM, 4 g/Kg. (p< 0.05).
Figura 21. Niveles de HDL en plasma de ratas normales luego de 60
días de administración de Solución Twen 80, 5mL/Kg. y de extracto
alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla
“Manzanilla” EAMM, 4 g/Kg. (p< 0.05).
66
Tabla 6. Evolución de pesos durante 8 semanas.
Semana Tratamiento Valor Error Intervalo confianza 95% Mínimo Máximo
Medio (g) Estándar D.E. +/- Límite inferior Límite superior
Basal Machos Solvente 5 mL./kg. 146,2 2,8 138,3 154,1 140 154
Hembras Solvente 5 mL./kg. 66,8 6,1 49,9 83,7 55 85
Machos EAMM 4 g./kg. 144,8 4,6 132,1 157,5 128 154
Hembras EAMM 4 g./kg. 61,6 6,4 43,9 79,3 41 76
Primera Machos Solvente 5 mL./kg. 156,6 1,7 151,9 161,3 153 162
Hembras Solvente 5 mL./kg. 82,8 4,9 69,1 96,5 72 97
Machos EAMM 4 g./kg.. 157,2 5,8 141,2 173,2 135 168
Hembras EAMM 4 g./kg.. 81,6 3,4 72,2 91,0 69 88
Segunda Machos Solvente 5 mL./kg. 166,6 3,1 158,1 175,1 159 174
Hembras Solvente 5 mL./kg. 95,8 5,1 81,7 109,9 87 115
Machos EAMM 4 g./kg.. 163,8 5,5 148,6 179,0 143 174
Hembras EAMM 4 g./kg.. 94,6 2,4 88,1 101,1 88 100
Tercera Machos Solvente 5 mL./kg. 180,6 5,0 166,7 194,5 164 192
Hembras Solvente 5 mL./kg. 103,6 6,5 85,5 121,7 93 129
Machos EAMM 4 g./kg. . 171,8 3,4 162,3 181,3 160 179
Hembras EAMM 4 g./kg. 108,4 3,1 99,7 117,1 97 115
Cuarta Machos Solvente 5 mL./kg. 200 7,1 180,3 219,7 174 213
Hembras Solvente 5 mL./kg. 113,2 8,8 88,7 137,7 101 148
Los valores están dados en promedio +/- D.E. de 5 ratas en cada grupo comparados con test de diferencia significativa mínima con una p < 0.05.
67
Semana Tratamiento Valor Error Intervalo confianza 95% Mínimo Máximo
Medio (g) Estándar D.E. +/- Límite inferior Límite superior
Machos EAMM 4 g./kg. . 194,8 7,4 174,3 215,3 179 215
Hembras EAMM 4 g./kg. . 120,2 3,2 111,2 129,2 112 128
Quinta Machos Solvente 5 mL./kg. 220,2 11,2 189,2 251,2 182 246
Hembras Solvente 5 mL./kg. 135,6 9,9 108,0 163,2 123 175
Machos EAMM 4 g./kg.. 217 12,5 182,2 251,8 185 255
Hembras EAMM 4 g./kg. . 142,4 5,9 126,1 158,7 128 153
Sexta Machos Solvente 5 mL./kg. 236,8 12,6 201,8 271,8 190 261
Hembras Solvente 5 mL./kg. 156,2 9,1 131,0 181,4 140 191
Machos EAMM 4 g./kg. . 239,2 17,8 189,9 288,5 189 290
Hembras EAMM 4 g./kg.. 159,8 7,5 139,0 180,6 141 178
Séptima Machos Solvente 5 mL./kg. 254,2 13,0 218,0 290,4 208 279
Hembras Solvente 5 mL./kg. 177 9,7 150,1 203,9 164 215
Machos EAMM 4 g./kg.. 252,8 16,9 205,8 299,8 207 300
Hembras EAMM 4 g./kg. . 177 8,1 154,4 199,6 159 205
Los valores están dados en promedio +/- D.E. de 5 ratas en cada grupo comparados con test de diferencia significativa
mínima con una p < 0.05.
68
Figura 22. Evolución de pesos durante la administración de la asociación de
Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla” en dosis
de 4 g /Kg. y del solvente twen 80, 5 mL/Kg.
69
DISCUSIÓN
La etnobotánica es la ciencia que estudia el uso popular de la flora de una
región y sus propiedades curativas de la planta, tal es así que las plantas
utilizadas en el estudio, Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria
chamomilla “Manzanilla” refieren ser requeridos por la población por sus
propiedades tranquilizantes. Huamán (1996). El “Screening” fitoquímico,
llamado también marcha fitoquímica o tamizado fitoquímico, es una de las
etapas iniciales de la investigación fitoquímica, que permite determinar
cualitativamente los principales grupos de constituyentes químicos de la
planta. (Domínguez, 1979).
En la (Tabla 1) se muestran las concentraciones importantes de los
compuestos fenólicos y flavonoides del extracto alcohólico de Matricaria
chamomilla “Manzanilla” esto se debería a la presencia de un flavonoide muy
importante en la composición química de la Manzanilla, que es la Apigenina,
que también fueron encontrados en estudios anteriores al nuestro. (Della
LLogia, et al 1981).
La (Tabla 1) hace referencia a la importante cantidad de compuestos
terpenicos dentro del extracto presente en Matricaria chamomilla
“Manzanilla”, las concentraciones halladas son relevantes y esto se debería
a la presencia de compuestos terpenoídes, matricin, proazulenos como el
alfa bisabolol, los cuales nos permiten reforzar los hallazgos realizados en
estudios previos. (Pirzard, et al 2006).
La colina un compuesto químico importante muchas veces considerado
nutriente vital y muy bien distribuidos en otros compuestos tales como los
mucilagos, en la (Tabla 1) se evidencia relativas concentraciones de
mucilagos y azucares lo que podríamos asumir por la presencia de colina en
el extracto alcohólico de Matricaria chamomilla “Manzanilla”, lo cual
contrasta con otros estudios realizados anteriormente. (Pirzard, et al 2006).
70
El citronnelal o dehidrogeraniol es un monoterpenoide de origen natural,
estudios anteriores demuestran que mencionado terpenoide se encuentra en
concentraciones muy considerables en el extracto de Melissa officinalis
“Toronjil” lo mismo sucede con otro metabolito secundario como el eugenol a
los cuales se les atribuye acciones sedativas pues evidencian interacción y
afinidad con los receptores GABA-A; como muestra la (Tabla 2), nuestro
extracto alcohólico evidencia concentraciones relevantes de esteroides y
triterpenos, también se muestra relevancia en compuestos fenólicos y esto
se debería a un compuesto fenólico muy importante como lo es el eugenol a
los cuales se les atribuye propiedades sedantes. (Aoshima 1999)
El ácido rosmarínico es considerado un compuesto fenólico al cual se le
atribuye propiedades ansiolíticas por la interacción con el receptor implicado
en la génesis de los estados de ansiedad, en el presente estudio al realizar
la marcha fitoquímica se encontraron concentraciones considerables de
compuestos fenólicos como muestra la (Tabla 2) por lo cual reafirmamos los
efectos ansiolíticos del extracto alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil”
(Pereira, et al 2005)
La (Tabla 2) muestra la presencia de flavonoides en pequeñas cantidades en
nuestro extracto alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” esto se debería a
la presencia de luteolin-3'-O-beta-glucorónido un flavonoide con ciertas
propiedades antioxidantes, lo cual reafirma estudios anteriores realizados en
el extranjero. (Heitz, et al 2000)
La (Tabla 2) evidencia la presencia de azucares en el extracto alcohólico de
Melissa officinalis “Toronjil”, esto se debe a la presencia de mucilagos
presentes en la planta dentro de estos mucilagos resalta la presencia de
colina y nos permite reafirmar estudios anteriores al nuestro (Wake, et al
2000).
71
Los hallazgos encontrados en el presente estudio nos evidencia el aumento
de concentración de los compuestos fenólicos, de compuestos terpenicos,
flavonoides y de mucilagos (Tabla 1) presente en el extracto alcohólico de
“Manzanilla” que posterior a la asociación con el extracto alcohólico de
“Toronjil” aumento considerablemente su concentración (Tabla 3), esto se
debería al efecto de suma que presentan los metabolitos secundarios
sujetas a estudio, el cual podría ser el responsable del efecto sedante
encontrado. (Solinas et al, 1996).
El estudio fitoquímico del extracto alcohólico de las hojas y flores Melissa
officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla” ha evidenciado
regular cantidad de compuestos polifenólicos y compuestos esteroides y
triterpenos (Tabla 3), por lo que se hace necesario mayores investigaciones
al respecto, para conocer si estaría presente el compuesto monoterpenico:
citral (geranial + neral) del “Toronjil” y diversos sesquiterpenos con esqueleto
bisabolano de la “Manzanilla”, y así explicar los postulados anteriores.
(Soulimani et al, 1991; Perry et al, 1996).
Es posible que los compuestos polifenólicos y compuestos triterpenoides
presentes en el extracto alcohólico de las hojas y flores de Melissa officinalis
“Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla” (Tabla 3) contribuyan en
mejorar los estados de ansiedad y estrés. (Mann et al, 1992).
La activación de los receptores inotrópicos de NMDA son estimulados con su
neurotransmisor glutamato y también por parte de un agonista
correspondiente, en el presente estudio es NMDA provocando una serie de
flujo de iones en estos receptores donde resalta la entrada de los iones Na+
y Ca+ y salida de los iones K+ de las células neuronales manifestándose
hiperactividad de estas células, que se evidencia con hiperactividad y
cambios en la conducta dosis dependiente que pueden llevar a la epilepsia.
En el ensayo de hiperactividad y cambios conductuales como muestra la
(Figura 1) se utilizó DAP-7 un antagónico de NMDA como control positivo;
quedando reflejado que el EAMM a 4 g. /Kg posee el mismo porcentaje de
protección que el antagónico DAP-7, esto se debería a que compuestos
72
presentes en el EAMM estarían interactuando con los receptores de NMDA
estimulados, desplazando a su agonista y mejorando los estados de
conducta, además que se debería a sus compuestos terpenicos como
citronelal y alfa bisabolol que estarían presente en el EAMM. Los datos
también sugieren, como muestra la (Figura 2), la disminución en el tiempo de
latencia de los cambios conductuales evidenciados con hiperactividad de los
animales de experimentación se debería a la interacción de los flavonoides
apigenina y luteolin-3'-O-beta-glucorónido. (Abuhamdah, et al 2008).
Con los hallazgos podríamos postular como muestra la (Figura 3) una dosis
efectiva 50 (DE50) de 3198.00 mg. / Kg. del extracto alcohólico de hojas y
flores de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla
“Manzanilla”, ejerce efectos tranquilizantes sobre la hiperactividad y los
cambios conductuales inducidos con NMDA. Esto se debería a la
participación de sus metabolitos secundarios en suma por la asociación de
estas 2 plantas al administrarse a los animales de experimentación.
El GABA es un receptor que está implicado en el origen de estados de
ansiedad, puesto que su interacción con determinados ligandos generan
estados ansiolíticos como sucede con el diazepam en el presente estudio;
nuestro estándar farmacológico la (Figura 4) muestra la potenciación por
estimulación de los receptores GABA reflejados en el tiempo de dormir por
parte de los ratones a los cuales se les administró diazepam mas EAMM,
donde observamos que el tiempo de dormir son muy considerables en
aquellos que recibieron diazepam mas EAMM, esto se debería a la
participación de los metabolitos secundarios como , eugenol, ácido
rosmarinico, apigenina, y colina que estarían interactuando con el receptor
GABA produciendo efectos ansiolíticos reflejados en el tiempo de dormir.
(Aoshima y Hamamoto 1999), (Avallone, et al 2000).
Con los hallazgos descritos, se postula que el extracto alcohólico de las
hojas y flores de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla
“Manzanilla” posiblemente actuaría directamente interactuando con el
receptor GABAa inhibiendo la liberación de serotonina cuando estos valores
73
se encuentran demasiados altos, permitiendo la disminución de los estados
de ansiedad. Por otro lado, al administrar el extracto alcohólico de las hojas
y flores de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla
“Manzanilla” en ratones normales se desarrollaría el efecto sedante (Figura
2), posiblemente por metabolitos secundarios presentes en las plantas
(Tabla 3), que actuarían a nivel del receptor GABAa (Wolfman et al, 1994).
En la (Tabla 5) evaluación de la toxicidad crónica por vía peroral del extracto
alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla
“Manzanilla” no presentó mortalidad así, como también no presentó cambios
significativos en los tejidos analizados postmortem a dosis de 4 g/Kg., que
es considerado límite para los estudios de toxicidad crónica oral. El extracto
alcohólico de hojas y flores de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria
chamomilla “Manzanilla” se considera no toxica ya que no presenta una
mortalidad mayor a la dosis estudiada estando en el rango de no clasificado
como lo muestra el método para toxicidad crónica en ratas. (OECD, 1996).
La insuficiencia renal crónica es el resultado de la destrucción progresiva e
irreversible de las nefronas, esto sucede cuando un organismo vivo se
somete a numerosos agentes tóxicos que puedan causar daño renal así
como también a muchas enfermedades una de ellas por ejemplo la diabetes
mellitus, esta destrucción produce hipertrofia estructural y funcional de las
nefronas. (Brener, 1993). Como muestra la (Figura 18) los valores para urea
se encuentran dentro de los niveles normales e inclusive muestran un ligero
descenso de las concentraciones medidas, en el grupo de animales
expuestos a toxicidad crónica, esto se debería a la presencia de un
metabolito presente en el extracto que sería colina, el cual ha demostrado
que en concentraciones bajas en un organismo vivo causa lesiones renales
acompañadas de daño ocular, y sucede lo contrario cuando los niveles de
colina se encuentran estables o en concentraciones considerables. Nuestro
extracto proporcionaría concentraciones adecuadas de colina aunque falta
realizar estudios que demuestren este efecto. (Ossani, et al 2006).
74
Las transaminasas son indicadores de la función hepática sobre todo del
nivel de necrosis de los hepatocitos (Soza, 2004). El nivel normal de TGP de
una rata sana es de 38 UI/dl. (Troncozo, 2007), en nuestro estudio, así como
en otros, los niveles de transaminasas se elevan por la presencia de un
agente hepatotóxico. Estudios de toxicidad con tetracloruro de carbono
demuestran que se elevan los niveles de transaminasas, cuando existe
lesión de los hepatocitos. (EMEA, 1999). Como se muestra en la (Figura 19)
los valores de TGP de los animales que recibieron la asociación del extracto
sujeta a estudio durante 60 días, no mostraron alteraciones de los niveles de
TGP, esto se debería a que el extracto posee metabolitos secundarios como
flavonoides antioxidantes que mejorarían la función hepática aunque falta
realizar estudios para demostrar el mecanismo de acción por la cual se
estarían evidenciando este efecto.
En la (Figura 20) se observa valores de colesterol de significancia en los
animales machos a diferencia de las hembras esto se debería al sistema
hormonal, en la (Figura 21) muestran los valores de HDL que después de la
administración crónica muestran que los niveles han sido elevados
considerablemente con respecto al grupo control, esto se debería a que los
metabolitos presentes en el extracto asociado elevan el HDL en este ensayo
de toxicidad crónica. (OECD, 1996).
El extracto alcohólico de hojas y flores de Melissa officinalis “Toronjil” más
Matricaria chamomilla “Manzanilla” presenta actividad sedante a dosis de 4
g/Kg este efecto se explicaría por la suma de los metabolitos secundarios de
ambas plantas entre ellos compuestos terpenicos, fenólicos, flavonoides y
mucilagos como la colina, como se muestran en la (Tabla 3), dado a que los
compuestos terpenicos como citral, citronellal, eugenol, ácido rosmarico, alfa
bisabolol, matricin, flavonoides como apigenina, estarían interactuando con
los receptores GABA evidenciando efectos sedantes ansiolíticos. (Aoshima y
Hamamoto 1999), (Avallone, et al 2000). Así como también importante
participación en el desplazamiento del glutamato neurotransmisor, por
competencia sobre los receptores de NMDA implicado en la génesis de la
hiperactividad, por parte de mencionados metabolitos, reflejándose una
75
considerable disminución de los estados de hiperactividad como lo muestra
la (Figura 2). (Abuhamdah, et al 2008).
En el presente estudio se hace referencia a Matricaria chamomilla
“manzanilla” pero sin embargo como muestra el certificado de taxonomía
emitido por el museo de historia natural, hace referencia a Matricaria reculita
“manzanilla” esto se debe a que ambos nombres científicos son sinónimos y
por lo tanto al referirnos a uno de ellos, sabremos que estamos identificando
a ambos de la misma manera. (Ríos, et al 2008).
El extracto alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria
chamomilla “Manzanilla” no poseen efectos tóxicos y su actividad sedante ha
sido demostrada por los pobladores que usan este extracto en estados de
preocupación como también para poder conciliar el sueño. Los estudios
preclínicos y clínicos pueden ampliar el campo de acción, extendido en
formas farmacéuticas tales como tinturas, jarabes o capsulas.
76
CONCLUSIONES
1. El estudio fitoquímico cualitativo del extracto alcohólico de hojas y flores
de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria reculita “Manzanilla” muestran
que de manera individual poseen considerables metabolitos, pero una vez
asociadas estas aumentan considerablemente indicando la presencia
abundante cantidad de compuestos terpenicos, compuestos fenólicos,
seguido de mucilagos y flavonoides.
2. El extracto alcohólico de hojas y flores de Melissa officinalis “Toronjil” más
Matricaria chamomilla “Manzanilla” en condiciones experimentales al
administrarse por vía oral, presenta actividad sedante sobre la ansiedad
inducida a dosis de 4 g/Kg. Mostrando una (DE50) de 3198.00 mg. /Kg.
3. La administración por vía oral en animales de experimentación del
extracto alcohólico de hojas y flores de Melissa officinalis “Toronjil” más
Matricaria chamomilla “Manzanilla” evidencian efectos sedantes al ser
comparado con el estándar farmacológico diazepam.
4. El estudio de toxicidad crónica en ratas, del extracto alcohólico de hojas y
flores de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
demostró que la dosis letal 50 (DL 50) es mayor a 2000 mg/Kg. Además de
no mostrar alteraciones patológicas en los estudios bioquímicos realizados.
77
RECOMENDACIONES
1. La procedencia de las plantas durante un estudio experimental deben de
ser de un lugar conocido puesto que se ha demostrado que, pueden
pertenecer al mismo grupo de familia pero de diferentes zonas de cultivo;
estas variaran sus concentraciones de metabolitos secundarios de acuerdo a
la zona de cultivo.
2. Las técnicas de preparación del extracto vegetal deben de realizarse
según los métodos establecidos que permitan garantizar la adecuada
extracción de los metabolitos secundarios y su máxima concentración que
será administrada a los animales de experimentación.
3. Si bien es cierto en el presente estudio los métodos utilizados para
demostrar el efecto sedante y/o tranquilizante han sido descrito por autores
en otros trabajos de investigación se debería buscar nuevos métodos que
permitan evaluar el efecto sedante de un extracto vegetal administrado a
animales de experimentación.
4. Los ensayos de toxicidad, deben ajustarse a las adecuadas técnicas de
recolección de muestras, porque un mal manejo de los órganos obtenidos,
podrían proporcionar datos erróneos a una investigación
78
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Abuhamdah, S., Huang, L., Elliott, M., Howes, M., Ballard, C., Holmes,
C., et al. (2008). Pharmacological profile of an essential oil derived
from Melissa officinalis with anti-agitation properties: focus on ligand-
gated channels. J Pharm Pharmacol, 60 (3): 377–84.
2. Adzet, T., Camarasa, J., Laguna, J. (1987). Hepatoprotective activity
of polyphenolic compounds from Cynara scolymnus against CCl4
toxicity in isolated rat hepatocytes. J. Nat. Prod, 50: 612–619.
3. Aliaga, K., Gonzáles, S., Solís, R. (2009). Fallecimiento temprano de
padres y ansiedad o depresión ulterior en adultos de la sierra
peruana: Cajamarca-Ayacucho-Huaraz 2003. Informe de
Investigación.
4. Aoshima, H., Hamamoto, K. (1999). Potentiation of GABAA receptors
expressed in Xenopus oocytes by perfume and phytoncid. Biosci
Biotechnol Biochem 63 (4): 743–748.
5. Apak, R., Güçlü, K., Ozyürek, M., Esin- Karademir S., Erçağ, E.
(2006). The cupric ion reducing antioxidant capacity and polyphenolic
content of some herbal teas. Int J Food Sci Nutr, 57 (5): 292–304.
6. Avallone, R., Zanoli P., Corsi, L., Cannazza, G., Beraldi M. (1966).
Benzodiazepine-like compounds and GABA in flower heads of
Matricaria chamomilla. Phytotherapy Research 10: 177-179.
7. Avallone, R., Zanoli, P., Puia G., Kleinschnitz, M., Schreier P., Baraldi
M. (2000). Pharmacological profile of apigenin, a flavonoid isolated
from Matricaria chamomilla. Biochem Pharmacol, 59 (11): 1387-94.
8. Ballard C., O’Brien J., Reichelt, K., Perry, E. (2002). Aromatherapy as
a safe and effective treatment for the management of agitation in
severe dementia: the results of a double-blind, placebo-controlled trial
with Melissa. J Clin Psychiatry 63 (7): 553-558.
9. Battaglia, M., Ogliari, A. (2005). Anxiety and panic: from human
studies to animal research and back. Neuroscience and Biobehavioral
Reviews, 29:169-179.
79
10. Beretz, A., Hagg-Berruie,r, M., Anton R. (1978). Choix de méthodes
pharmacologiques pour I´etude des activités de I´aubépine. Plantes
médicinales et phytothérapie. 4: 305-314.
11. Bermúdez, D., Monteagudo E., Boffil M., Díaz, L., Roca A., Betancourt
E., et al. (2007). Evaluación de la toxicidad aguda de extractos de
plantas medicinales por un método alternativo. REDVET. Revista
electrónica de Veterinaria, 8 (3): 1695-7504.
12. Brain, F., McAllister H., Walmsley V. (1989). Drug effects on social
behaviour. Neuromethods. New Yersey. pp 687-739.
13. Brener, B., Lazarus, J. (1993). Acute renal Failure. 3d ed. New York,
Churchill livestong.
14. Briceño, R. (1974). Estudio fitoquímico y extracción del aceite esencial
de las hojas de la especie Melissa officinalis. Tesis para Optar el
Título Profesional de Químico Farmacéutico. Trujillo-Perú. Facultad de
Farmacia y Bioquímica. Universidad Nacional de Trujillo.
15. Brown T., O’Leary T., Barlow D. (2001). Generalized anxiety disorder.
En D.H. Barlow (Ed.), Clinical handbook of psychological disorders: A
step-by-step treatment manual. Nueva York: Guilford. pp. 154-208.
16. Bruneton J. Farmacognosia, Fitoquímica Plantas Medicinales. Ed.
Acribia 2ª Edición. 2001. p. 524-526, 514-519.
17. Centro de Investigación de la Producción Industrial CIPI. (1998).
Universidad de Lima, Facultad de Ingieneria “Industrialización de
plantas Medicinales”. pp. 30-40
18. Chopin, P., Briley M. (1987). Animal models of anxiety: the effect of
compounds that modify 5-HT neurotransmission. Trends Pharmacol.
Sci., 8, 383-388.
19. Comte, A. (1973). Curso de Filosofía Positiva, Editorial Aguilar
Argentina S.A., Buenos Aires-Argentina. pp 75.
20. Croucher J., Collins J., Meldrum, B. (1982). Anticonvulsant action of
excitatory amino acids antagonists. Science, 216: 899-902.
80
21. De Lope, C. (2007). Psiquiatra. Clínica de la Ansiedad. Tratamiento de
la ansiedad en Barcelona y Madrid.
22. Della Loggia, R., Tubaro A., Redaelli C.( 1981) Evaluation of the
activity on the mouse CNS of several plant extracts and a combination
of them. Riv Neurol, 51.5: 297–310.
23. Dominguez, B. (1998). “Bilateral Skin Temperature as an Index of
Disclosure with Chronic Pain Pediatric Patients”, Applied
Psychophysiology and Biofeedback, 23(2), 113.
24. EMEA/MRL. The Europian Agency for the Evaluation of Medicinal
Products Veterinary Medicines Evaluation Unit – final July; 548(14):99.
25. Fisher R. (1989). Animals models of the epilepsies. Brain Res. Rev,
14: 245-278.
26. Flinday, G., Wick, M., Mascia, M., Millier, G., Harris, R., Blednov, Y.
(2002). Transgenic expression of a mutant glycine receptor decreases
alcohol sensitivity of mice. J. Pharmacol. Exptl. Ther, 300: 526-534.
27. Flores, J. (1998). Farmacología Humana. Ed. Edil Masson S.A., 3ª
Edicion.
28. Gomaa, A., Hashem, T., Mohamed, M., Ashry, E. (2003). Matricaria
chamomilla extract inhibits both development of morphine
dependence and expression of abstinence syndrome in rats. J
Pharmacol Sci, 92. (1): 50–5.
29. Greden, F. (1974) Anxiety or caffeinism: a diagnostic dilemma,
American.
30. Gross, C., Hen, R. (2005). The development origins of anxiety. Nature
Reviews Neuroscience, 5: 545-552.
31. Harttisch, C., Kolodzeeij, H., Von Bruchhausen, F. (1997). Dual
inhibitory activities of tannins from Hamamelis virginiana and related
on 5-lipoxygenase and lyso-PAF. Acetyl-CoA acetyltransferase. Planta
Médica, 63(2): 106-110.
32. Heitz, A., Carnat, A., Fraisse, D., Carnat, A., Lamaison, J. (2000).
Luteolin 3'-glucuronide, the major flavonoid from Melissa officinalis
subsp.officinalis. Fitoterapia. Apr; 71 (2): 201-2
33. Hernández, R. (1998). Metodología de la Investigación. Segunda
Edición. Mc Graw – Hill Interamericana. México.
81
34. Huamán J. (1996). Evaluación de Mellissa officinalis (toronjil) como
cardiotónico en insuficiencia cardiaca experimental. Tesis para Optar
el Título Profesional de Medico-Cirujano. Cuzco-Perú. Facultad de
Medicina. Universidad Nacional san Antonio Abad del Cuzco-Perú.
35. Instituto Especializado de Salud Mental “Honorio Delgado – Hideyo
Noguchi”. (2002). Estudio epidemiológico metropolitano en salud
mental. Informe general. Lima: IESM HD-HN.
36. Instituto Especializado de Salud Mental “Honorio Delgado – Hideyo
Noguchi”. (2003). Estudio epidemiológico en salud mental en la sierra
peruana 2003. Lima: IESM HD-HN.
37. Instituto Especializado de Salud Mental “Honorio Delgado – Hideyo
Noguchi”. (2004). Estudio epidemiológico en salud mental en la selva
peruana 2004. Lima: IESM HD-HN.
38. Kazuaki, S., Toshio, I., Yoshiaki, U., Shin, T., Takayoshi, M., Asae, O.,
et al. (2005). Hypnotic activities of chamomile and passiflora extracts
in sleep-disturbed rats. Biol. Pharm Bull, 28: 808-810.
39. Kendler, K., Neale, M., Kessler, K., Heath, A., Eaves, L. (1992). The
genetic epidemiology of phobias in women: The interrelations of
agoraphobia, social phobia, situational phobia, and simple phobia.
Archives of General Psychiatry, 49, 273-281.
40. Kennedy, D., Little, W., Haskell, C., Scholey, A. (2006). Anxiolytic
effects of a combination of Melissa officinalis and Valeriana officinalis
during laboratory induced stress. Phytother Res, 20. 2: 96–102.
41. Kennedy, D., Wake, G., Savelev, S., Tildesley, N., Perry E., Wesnes,
K., et al (2003). Modulation of mood and cognitive performance
following acute administration of single doses of Melissa officinalis
(Lemon balm) with human CNS nicotinic and muscarinic receptor-
binding properties. Neuropsychopharmacology, 28.10: 1871–81.
42. Kennedy D., Scholey A., Tildesley N., Perry E., Wesnes K. (2002).
Modulation of mood and cognitive performance following acute
administration of Melissa officinalis (lemon balm). Pharmacol Biochem
Behav.; 72 (4):953-64.
43. Kommissión E. Monograph. Melissenblatter; Bundesanzeiger. (1984);
5: 12-16.
82
44. Kuklinski C. (2003). Farmacognosia. Ediciones Omega S.A. Plató 26-
08006 Barcelona. p. 271-276.
45. Lobo, A., Campos, R. (1997). Factores etiopatogénicos. En:
Trastornos de ansiedad en atención primaria. Madrid: Editorial
EMISA; pp.41-76.
46. Lock De Ugaz O. (1988). Investigación Fitoquímica – Métodos en el
estudio de Productos Naturales. Fondo Editorial de la Pontificia
Universidad Católica del Perú. Lima.
47. Lock Sing, O. (1999). Registro y control de calidad de recursos y
productos naturales de uso en salud. Pontificia Universidad Católica
Del Perú Fondo Editorial. Lima.
48. López-Ibor, J., Valdés, M. (2004). editores. DMS-IV-TR-AP. Manual
diagnóstico y estadístico de los trastornos mentales. Texto revisado.
Atención Primaria. Barcelona: Masson.
49. Manelic, R., OrtegaSoto H. (1995). La depresión en los estudiantes
universitarios de la escuela nacional de estudios profesionales plantel
de Aragón. Salud Mental. 18 (2) 31 – 34.
50. Mann, C., Staba, E. (1992). The chemistry pharmacology and
commercial formulations of chamomile. In: Craker, L. E. and J. E.
Simon (Eds.). Herb, Spice and Medicinal Plants. Recent Advances in
Botany, Horticulture and Pharmacology. Food Product Press, New
York, USA. 1: 235-280.
51. Mann, C., Staba, E. (2002). The chemistry, pharmacology and
commercial formulations of chamomile. In: Craker LE, Simon JE,
editors. Herbs, spices and medicinal plants- recent advances in
botany, horticulture and pharmacology. USA: Haworth Press Inc; pp.
235–80.
52. Mantle, D., Eddeb, F., Pickering, A. (2000). Comparison of relative
antioxidant activities of British medicinal plant species in vitro. J
Ethnopharmacol 72: 47–51.
53. Martín-Lopez, M., Navarro, J. (1999). Efectos de la administración de
midazolam sobre la conducta agonística en ratones machos.
Psicothema. Málaga España; 11: 367-374.
83
54. McBain, J., Mayer, M. (1994). N-Methyl-D-aspartic acid receptor
structure and function. Physiol Rev, 74: 723–760.
55. Mestanza, G. (2000). Contribución al desarrollo de la Fitoterapia en el
Centro de Medicina Complementaria EsSalud La .Libertad - Trujillo.
Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad Nacional de Trujillo.
56. Montgomery, C. (1990). Oncolgic and Toxicologic Research:
Alleviation and Control of Pain and Distress in Laboratory Animals.
Cancer Bull; 42: 230-7.
57. Mrlianova, M., Tekel'ová, D., Felklová, M., Reinöhl, V., Tóth, J. (2002).
The influence of the harvest cut height on the quality of the herbal
drugs Melissae folium and Melissae herba. Planta Med, 68.2: 178–80.
58. Navarro, R., Diamiao, C., Pereira, L. (2011). Efeito da Matricaria
chamomilla CH12 na resposta de estresse em caes. Colloquium
Agrariae, 7(2): 01-07.
59. Ngo Bum, E., Gwa, C., Ntchapda, F., Nyunai Nyemb, C., Rakotonirina,
S., Rakotonirina, A. (2002). Effect of the decoction of rhizomes of
Cyperus articulatus on bicuculline, N-methyl-D-aspartate and
strychnine-induced behavioural excitation and convulsions in mice.
Journal Cameroon Acad. 2002; 2: 91-95.
60. Ngo Bum, E., Ngah, E., Benoite, C., Dong, C., Ayissi Mbomo, R.,
Rakotonirina, S., et al. (2004). Sedative and anticonvulsant properties
of Pasiflora edulis dried leaves decoction in mice. African Journal
Traditional. 1: 63-71.
61. OECD, Guideline for the testing of chemicals Nº 143. Acute Toxic
Class Method (Adopted 22.03.96).
62. Ohno, K., Sakurai, T. (2008). Orexin neuronal circuitry: role in the
regulation of sleep and wakefulness. Front Neuroendocrinol, 29:70-87.
63. Ossani G., Pelayes D. Diaz M., Lago N., Fariña S., Monserrat A. et al.
(2006). Ocular lesions and experimental choline deficiency.
MEDICINA (Buenos Aires); 66: 415-420.
64. Peña, A., Paco, O. (2007). Medicina alternativa: intento de análisis.
Anales de la Facultad de Medicina. 68(1): 87-96.
84
65. Pereira, P., Tysca, D., Oliveira, P., Da Silva, B., Picada, J., Ardenghi,
P. (2005). Neurobehavioral and genotoxic aspects of rosmarinic acid.
Pharmacol Res, 52.3: 199–203.
66. Perry, N., Court, G., Bidet, N., Court, J., Perry, E. (1996). European
Herbs with cholinergic activities: potential in dementia therapy. Int J
Geriatric Psychiatry, 11: 1063-1069.
67. Pirzard, A., Alyari, H., Shakiba, M., Zehtab-Salmasi, S., Mohammadi,
A. (2006). Essential Oil Content and Composition of German
Chamomile (Matricaria chamomilla L.) at Different Irrigation Regimes.
Journal of Agromony 5.3: 451-456.
68. Prados-Atienza, J. (2005). Pensamiento y emoción: el uso científico
del término preocupación. Ansiedad y Estrés, 11, 37-48.
69. Primer Congreso Internacional FITO (2002). 1ª Edición. “Instituto de
Fitoterapia Americano”, Lima-Perú. pp. 31-38
70. Primer Simposio Internacional de Plantas Medicinales y Fitoterapia
FITO (2000). “Instituto de Fitoterapia Americano”.1ª Edición. Lima-
Perú. pp. 28-30.
71. Rakotonirina, S., Ngo Bum, E., Rakotonirina, A., Bopelet, M. (2001).
Sedatives properties of the decoction of the rhizome of Cyperrus
articulatus. Fitoterapia, 72: 22-29.
72. Riker, R., Picard, J., Fraser, G. (1999). Prospective evaluation of the
Sedation-Agitation Scale for adult critically ill patients. Crit Care Med,
27: 1325-1329.
73. Ríos, Y., Otero, A., Muñoz, D., Echeverry, M., Robledo, S., Yepes, M.
(2008). Actividad citotóxica y leishmanicida in vitro del aceite esencial
de manzanilla (Matricaria chamomilla). Rev. Colomb. Cienc. Quím.
Farm. Vol. 37 (2), 200-211.
74. Riveros, M., Hernandez, H., Rivera, J. (2007). Niveles de depresion y
ansiedad en estudiantes universitarios de Lima Metropolitana. Revista
de investigación en Psicología; 10 (1): 91-102.
75. Roberts, A., Williams, J. (1992). The effect of olfactory stimulation on
fluency, vividness of imagery and associated mood: a preliminary
study. Br J Med Psychol, 65.2: 197–9.
85
76. Rojas, C. (2005). Pensamientos y Sentimientos. Guadalajara –
México.
77. Rondón, M. (2006). Salud Mental: Un Problema de Salud Pública en
el Perú. Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Publica.
Instituto Nacional de Salud Perú; 23 (4): 237-238.
78. Salah, S., Jager, A. (2005). Screening of traditionally used Lebanese
herbs for neurological activities. J Ethnopharmacol, 97: 145–9.
79. Salamon I. (1992). Chamomile a medical plant. The Herb, Spice and
medicinal.10: 1-4.
80. Sanchez-Medina, A., Etheridge, C., Hawkes, G., Hylands, P., Pendry,
B., Hughes, M., et al. (2007). Comparison of rosmarinic acid content in
commercial tinctures produced from fresh and dried lemon balm
(Melissa offcinalis). J. Pharm Pharmaceut Sci; 10 (4): 455-463.
81. Schmutz, M., Portet, C., Jeker, A., Klebs, K., Vassout, A., Allgeir, H.,
et al. (1990). The competitive NMDA receptor antagonist CGP 37849
and CGP 39551 are potent, orally active anticonvulsants in rodents.
Naunyn-Schmiedebergs Archives Pharmacol, 342: 61-66.
82. Sevillano, A. (2003). Enciclopedia de Plantas Medicinales. A.F.A.
editores importadores S.A. Tomo I. 1ª Edición. pp. 160-167.
83. Sharapin, N. (2000). Fundamento de Tecnología de productos
Fitoterapéuticos. Santa Fe de Bogota. Publicación del programa de
Andrés Bello – Programa Iberoamericana de Ciencia y Tecnología
para el Desarrollo.
84. Shinomiya, K., Inoue, T., Utsu, Y., Tokunaga, S., Masuoka, T.,
Ohmori, A., et al. (2005). Hypnotic activities of chamomile and
passiflora extracts in sleep-disturbed rats. Biol Pharm Bull, 28.5: 808–
10.
85. Shnitzler, A., Nolan, L., Labbe, R. (1996). Screeming of medicinal
plants for antileshmanial and antimicrobial activity. Acta Hortic, 426:
235-242
86. Solinas, V., Deina C., Gessa, A., Bazzoni, M., Loddo D. (1996).
Effects of water and nutritional conditions on the Rosmarinus
86
officinalis L. phenolic fraction and essential oil yield. Rivista Italiana
Epps, 19: 189-198.
87. Soulimani, R., Fleurentin, J., Mortier, F., Misslin, R., Derrieu, G., Pelt
J. (1991). Neurotropic action of the hydroalcoholic extract of Melissa
officinalis in the mouse. Planta Med; 51: 105-109
88. Soza, A. (2004). Hepatitis tóxica: acentaminofeno y otras. Gastr
Latinoam; 15 (2):158-162.
89. Thomas, K., Coleman, P. (2004). Use of complementary or alternative
medicine in a general population in Great Britain. Results from the
National Omnibus Survey. Journal of Public Health; 26 (2):152-157.
90. Troncoso, L. (2007). Efecto antioxidante y hepatoprotector del
Petroselinum sativum (perejil) y de una mezcla de vitaminas
antioxidantes (A, E, C) en ratas con intoxicación hepática inducida por
pararacetamol [tesis doctoral] Lima, Perú: Universidad Nacional
Mayor de San Marcos.
91. Tyrer, P., Baldwin, D. (2006). Generalised anxiety disorder. Lancet;
368: 2156–66.
92. Vega, M. (2001). Etnobotanica de la amazonia peruana. Primera
Edición. Editorial Abya Yala. Cusco-Perú. pp. 113.
93. Viola, H., Wasowski, C., Levi de Stein, M., Wolfman, C., Silveira, R.,
Dajas, F., et al. (1995). Apigenin, a component of Matricaria recutita
flowers, is a central benzodiazepine receptors-ligand with anxiolytic
effects. Planta Med, 61.3: 213–16.
94. Virues, R. (2005). "Estudio sobre Ansiedad" México: Universidad
Autónoma de Nuevo León, obtenido el 11 de abril del 2008 en
www.psicologiacientifica.com.
95. Vizoso, A., Ramos, A., Villaescusa, A., Decalo, M., Betancourt, J.
(1997). Estudio genotóxico in Vitro e in Vivo en tinturas de Melissa
officinalis L. (Toronjil) y Mentha piperita L. (toronjil de Menta). Rev.
Cubana de Plant. Med; 2 (1): 6-11.
96. Wagner, H., Sprinkmeyer, L. (1973). Ber die pharmakologische
Wirkung von Melissengeist. Dtsch Apoth Ztg; 113: 1159-1166.
97. Wake, G., Court, J., Pickering, A., Lewis, R., Wilkins, R., Perry, E.
(2000). CNS acetylcholine receptor activity in European medicinal
87
plants traditionally used to improve failing memory. J Ethnopharmacol,
69.2: 105–14.
98. Wolfman, C., Viola, H., Paladini, A., Dajas, F., Medina, J. (1994).
Possible anxiolytic effects of chrysin a central benzodiazepine
receptor ligand isolated from Passiflora coerulea. Pharmacol.
Biochem. Behaviour; 47: 1-4.
99. Yamada, K., Miura, T., Mimaki, Y., Sashida, Y. (1996). Effect of
inhalation of chamomilla oil vapour on plasma ACTH in
ovariectomized-rat under restriction stress. Biological &
Pharmaceutical Bulletin; 19: 1244-1246.
100. Yamada, K., Miura, T., Mimaki, Y., Sashida, Y. (1996). Effect of
inhalation of chamomile oil vapour on plasma ACTH level in
ovariectomized-rat under restriction stress. Biol Pharm Bull, 19.9:
1244–6.
88
ANEXO N° 1
89
ANEXO N° 2
90
ANEXO N° 3
MARCHA FITOQUÍÍMICA
Marcha fitoquímica del extracto alcohólico de Melissa officinalis
“Toronjil”
A) Extracto + Reactivo Ninhidrina.
B) Extracto + Reactivo Gelatina.
C) Extracto + Reactivo Tricloruro férrico.
D) Extracto + Reactivo Dragendorf.
E) Extracto + Reactivo Molisch.
F) Extracto + Reactivo NaOH 10%.
G) Extracto + Reactivo Lieberman.
H) Extracto + Reactivo Shinoda.
A B C D E F G H
91
ANEXO N° 4
Marcha fitoquímica del extracto alcohólico de Matricaria chamomilla
“Manzanilla”
A) Extracto + Reactivo Ninhidrina.
B) Extracto + Reactivo Gelatina.
C) Extracto + Reactivo Tricloruro férrico.
D) Extracto + Reactivo Dragendorf.
E) Extracto + Reactivo Molisch.
F) Extracto + Reactivo NaOH 10%.
G) Extracto + Reactivo Lieberman.
H) Extracto + Reactivo Shinoda.
A B C D E F G H
92
ANEXO N° 5
Marcha fitoquímica del extracto alcohólico de Melissa officinalis
“Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”
A) Extracto + Reactivo Ninhidrina.
B) Extracto + Reactivo Gelatina.
C) Extracto + Reactivo Tricloruro férrico.
D) Extracto + Reactivo Dragendorf.
E) Extracto + Reactivo Molisch.
F) Extracto + Reactivo NaOH 10%.
G) Extracto + Reactivo Lieberman.
H) Extracto + Reactivo Shinoda.
A B C D E F G H
93
ANEXO N° 6
Ficha de recolección de investigación N° 1
Tratamiento Animales estimulados % de protección
Sol. Twen 80
NMDA
NMDA + DAP7
EAMM 1 g/Kg
EAMM 2 g/Kg
EAMM 4 g/Kg
Ficha de recolección de investigación N° 2
Tratamiento Número de animales Tiempo de dormir
Solución Twen 80
Diazepam 50 mg/Kg
Diazepam + EAMM 1 g/Kg
Diazepam + EAMM 2 g/Kg
Diazepam + EAMM 4 g/Kg
Blanco
Ficha de recolección de investigación N° 3
Semana Valor promedio de los
animales hembras
Valor promedio de los
animales machos
Primera semana
Segunda semana
Tercera semana
Cuarta semana
Quinta semana
Sexta semana
Septima semana
94
Ficha de recolección de investigación N° 4
Prueba Bioquímica Valores normales Valores obtenidos
Urea
Transaminasas
Colesterol
Lipoproteína HDL
95
ANEXO N° 7 OPERACIONALIZACION DE LA VARIABLE
Variables (Variable independiente) (Variable dependiente)
DEFINICIÓN CONCEPTUAL
Extracto alcohólico de hojas y flores de Melissa officinalis
“toronjil” más Matricaria chamomilla “manzanilla”
1. Ansiedad 2. toxicidad
DEFINICIÓN OPERACIONAL Preparación del extracto
alcohólico, (Sharapin, 2000).
1. Test. de inducción de la ansiedad a través de la prueba de hiperactividad, cambios conductuales por (Ngo Bum et al, 2002) y (Shmutz et al, 1990), test de inducción del sueño en ratones (Beretz et al, 1978) y modificado por (Rakotonirina et al, 2001)
2. Capacidad de causar efectos tóxicos acumulativos o efectos carcinogénicos, mutagénicos o teratogénicos. (Bermúdez et al, 2007).
INDICADORES Residuo seco
1. Tiempo de Hiperactividad expresado en minutos; tiempo de dormir.
2. Comparación de cambios en los diferentes órganos con una muestra estándar para evaluar algún daño.
UNIDAD DE MEDICIÓN g / mL. 1. Tiempo latencia de hiperactividad y tiempo de dormir en
minutos 2. Comparación de órganos
96
ANEXO N° 8
MATRIZ DE CONSISTENCIA
Problema Objetivo General
Objetivos Específicos Variables Técnica de
Recolección de Datos
Metodología Consideraciones
Éticas
¿La administración vía oral del extracto alcohólico de Matricaria chamomilla “Manzanilla” más Melissa officinalis “Toronjil” tiene efecto sedante sobre la ansiedad inducida en ratones albinos?
Demostrar el efecto sedante del extracto alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla” sobre la ansiedad inducida en ratones albinos.
• Realizar el estudio fitoquímico preliminar del extracto alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla”.
• Evaluar el efecto sedante del extracto alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla” sobre la ansiedad inducida en ratones albinos, estableciendo la dosis efectiva 50 ansiolítica.
• Determinar si la administración del extracto alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla
Variable independiente Extracto alcohólico de hojas y flores de Melissa officinalis “toronjil” más Matricaria chamomilla “manzanilla” Variable dependiente 1. Ansiedad 2. toxicidad
La principal técnica fue la de Observación y el Registro directo de los datos a través de la Ficha de Investigación
Realización del estudio fitoquímico preliminar del extracto alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chomomilla “Manzanilla”. Según Lock de Ugaz, 1988. Evaluación del efecto sedante del extracto alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chomomilla “Manzanilla” sobre la ansiedad inducida en ratones albinos, estableciendo la dosis efectiva 50 ansiolítica Descrito por Ngo Bum, Shmutz, et al. 1990, Croucher et al, 1982 Determinación del efecto sedante comparativo de la administración del extracto alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chomomilla “Manzanilla” presenta efecto sedante en
En el estudio experimental al utilizar animales de experimentación específicamente ratones y ratas se tuvieron en cuenta las normas y los procedimientos éticos para el manejo de animales de laboratorio establecidos internacionalmente. (Guide for the care and use of laboratory animals, 1996).
97
Problema Objetivo General
Objetivos Específicos Variables Técnica de
Recolección de Datos
Metodología Consideraciones
Éticas
“Manzanilla” presenta efecto sedante en comparación con el estándar farmacológico en la ansiedad inducida en ratones albinos.
• Observar la seguridad del extracto alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chamomilla “Manzanilla” a nivel hematológico, bioquímico y anatomopatológico al ser administrado por vía oral en ratas normales durante 60 días.
comparación con estándares farmacológicos en la ansiedad inducida en ratones albinos. Descrito por Beretz et al,. 1978, Rakotonirina et al, 2001, Ngo bum et al, 2004 Observación de la seguridad del extracto alcohólico de Melissa officinalis “Toronjil” más Matricaria chomomilla “Manzanilla”a nivel bioquímico y anatomopatológico al ser administrado por vía oral en ratas normales durante 60 días. Descrito por OECD, 1996