UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
MAESTRÍA EN MICROBIOLOGÍA AVANZADA MENCIÓN
BIOMÉDICA
“TRABAJO DE TITULACIÓN ESPECIAL”
PARA LA OBTENCIÓN DEL GRADO DE MAGISTER EN
MICROBIOLOGÍA BIOMÉDICA
“SEROVARES CIRCULANTES DEL GÉNERO LEPTOSPIRA ENTRE BOVINOS DEL CANTÓN LOJA”
AUTOR: Segundo Germán Barragán Fierro
TUTOR: Dr. Manuel Ricardo Palacios Chacón
GUAYAQUIL – ECUADOR
2016
ii
REPOSITORIO NACIONAL EN CIENCIAS TECNOLOGÍA
FICHA DE REGISTRO DE TRABAJO DE TITULACIÓN ESPECIAL
TITULO: “SEROVARES CIRCULANTES DEL GÉNERO LEPTOSPIRA ENTRE BOVINOS DEL
CANTÓN LOJA”
AUTOR: Segundo Germán Barragán Fierro TUTOR: Dr. Manuel Ricardo Palacios Chacón
REVISOR: Dr. Jhony Joe Real Cotto
INSTITUCIÓN: Universidad de Guayaquil FACULTAD: Ciencias Médicas
PROGRAMA: Maestría en Microbiología - Mención Biomédica
FECHA DE PUBLICACIÓN: N° DE PÁGS.: 79
ÁREA TEMÁTICA: Microbiología
PALABRAS CLAVES: Leptospirosis bovina, prueba microscópica de aglutinación (MAT), títulos.
RESUMEN: La Leptospirosis bovina es una enfermedad infecciosa, con alta morbilidad y baja mortalidad
en los hatos ganaderos, originada por uno o varios serovares de L. interrogans, y tiene la característica de
producir en los bovinos: abortos, mastitis, mortinatos, septicemias y nacimiento de crías débiles, que mueren
poco después de nacer. El objetivo de esta investigación es establecer la presencia de los serovares circulantes
de L. interrogans entre el ganado bovino del cantón Loja, mediante la prueba de MAT. Se recolecto 157
muestras de sangre, por medio de la punción de la vena yugular, y se procedió a analizar los sueros por medio
de la prueba de micro aglutinación en placa (MAT) contra batería de antígenos de serovares de L. interrogans
(L. pomona, L. grippotyphosa, L. canícola, L. icterohaemorrhagiae, L. hebdomadis, L. autumnalis, L. wolffi,
L. hardjo, L. sejroe y L. bataviae). Se encontró que 58,60% de muestras resultaron reactivas para L.
interrogans, las que fueron analizadas por MAT para determinación de serovares y sus respectivos títulos. Se
evidenció predominio de circulación de tres serovares: L. canícola (43,44%), L. sejroe (40,16%) y L. hardjo
(13,12%); la presencia de reactividad para L. icterohaemorrhagiae y L. grippotyphosa fue detectada en 1,64
% de las muestras. Existe una alta serología positiva para Leptospira en una población de bovinos
asintomáticos y condiciones favorables para la presencia en estas zonas, debido a esto se necesita elaborar
actividades de prevención usuales tomando en cuenta los resultados de esta investigación.
N° DE REGISTRO: N° DE CLASIFICACIÓN:
N°
DIRECCIÓN URL:
ADJUNTO PDF SI X NO
CONTACTO CON AUTOR TELÉFONO:
2107774
E-MAIL: [email protected]
CONTACTO DE LA INSTITUCIÓN NOMBRE: Escuela de Graduados
TELÉFONO:
2288086
E-MAIL:
iv
AGRADECIMIENTO
A la Universidad Estatal de Guayaquil, porque
en sus aulas recibí el conocimiento intelectual
y calor humano de cada uno de los docentes de
la Facultad en Microbiología Avanzada
Mención Biomédica.
Especial agradecimiento a mi Tutor de Tesis,
Doctor Manuel Ricardo Palacios Chacón, por
su sabiduría, amistad, empeño para que logre
mis ideales, debido a su paciencia, dedicación,
conocimientos, motivación y experiencia, que
han conseguido que pueda concluir mis
estudios con éxito.
Segundo Germán Barragán Fierro
v
DEDICATORIA
A Dios, quien me ayuda en todo momento de
mi vida.
A la memoria de mis padres, Joaquín y Rosa,
hermano e hija.
A Beatriz, Andrés, Pablo, Gabriela, Camila y
David Luis, quienes son mi motivación,
inspiración y felicidad.
Segundo Germán Barragán Fierro
vii
ABREVIATURAS
ADN: ácido desoxirribonucleico
AGROCALIDAD: Agencia Ecuatoriana de Aseguramiento de la Calidad Agraria
CDC: Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades
EMJH: Medio Ellinghausen McCullough Johnson Harris
IgG: Inmunoglobulina G
IgM: Inmunoglobulina M
IFNγ: Interferón Gamma
INHMT: Instituto Nacional de Higiene y Medicina Tropical
INIA: Instituto Nacional de Innovación Agraria
iNOS: Óxido nítrico sintasa
INSPI: Instituto Nacional de Investigación en Salud Pública
LipL32: Lipoproteína L32
LPS: Lipopolisacáridos
MAGAP: Ministerio de Agricultura, Ganadería, Acuicultura y Pesca
MAT: Micro Aglutination Test
MSP: Ministerio de Salud Pública
NET: Neutrophil Extracellular Traps
OIE: Organización Mundial de Sanidad Animal
OMP: Outer Membrane Proteins
OMS: Organización Mundial de la Salud
OPS: Organización Panamericana de la Salud
TLRs: Toll-like receptor
TLR2: Toll-like receptor 2
viii
TLR4: Toll-like receptor 4
TSCL: Subcomité para la Taxonomía del genero Leptospira
URSS: Unión de Repúblicas Socialistas Soviéticas
WHO: World Health Organization
ix
TABLA DE CONTENIDO
Págs.
Resumen
Introducción 1
Capítulo 1 MARCO TEÓRICO 3
1.1 TEORÍA GENERAL 3
1.1.1 HISTORIA 3
1.1.2 ETIOLOGÍA Y MANIFESTACIÓN DE INFECCIÓN 4
1.1.2.1 Agente etiológico 4
1.1.2.2 Manifestación y manejo de infección 4
1.1.3 TRANSMISIÓN, CONTROL Y PREVENCIÓN 5
1.1.3.1 Distribución geográfica y mecanismos de transmisión 5
1.1.3.2 Monitoreo, control y prevención 7
1.1.4 GENERO LEPTOSPIRA 8
1.1.4.1 Taxonomía y Clasificación 8
1.1.5 MORFOLOGÍA, FISIOLOGÍA Y METABOLISMO 10
1.1.5.1 Morfología y fisiología 10
1.1.5.2 Hábitat y requerimientos metabólicos 10
1.1.6 PATOGENICIDAD Y VIRULENCIA 11
1.1.7 INFECCIÓN Y RESPUESTA INMUNE 12
1.1.8 MÉTODOS DE ESTUDIO Y DIAGNÓSTICO 14
1.1.8.1 Test de Aglutinación Microscópica (MAT) 14
1.2 TEORÍAS SUSTANTIVAS 16
1.2.1 SEROVARES DE MAYOR INCIDENCIA EN BOVINOS 16
1.3 REFERENTES EMPÍRICOS 19
1.3.1 OTROS SEROVARES 19
Capítulo 2 MARCO METODOLÓGICO 20
2.1 Metodología: 20
2.2 Métodos: 20
2.3 Hipótesis 20
2.4 Universo y muestra 20
2.4.1 Universo 20
2.4.2 Muestra 21
2.5 Operacionalización de variables 22
2.6 Gestión de datos 22
x
2.6.1 Criterios de inclusión 22
2.6.2 Criterios de exclusión 23
2.7 Criterios éticos de la investigación 23
Capítulo 3 RESULTADOS 24
3.1 Antecedentes de la población 24
3.2 Estudio de campo: 24
Capítulo 4 DISCUSIÓN 34
4.1 Contrastación empírica 34
4.2 Limitaciones 36
4.3 Líneas de investigación 36
4.4 Aspectos relevantes 36
Capítulo 5 PROPUESTA 37
Conclusiones y recomendaciones 39
Bibliografía 41
Anexos 43
xi
ÍNDICE DE TABLAS
Página
TABLA 1 PRESENCIA DE ANTICUERPOS CONTRA LEPTOSPIRA
INTERROGANS EN GANADO BOVINO EN EL CANTÓN
LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
24
TABLA 2 PRESENCIA DE ANTICUERPOS DE LEPTOSPIRA
INTERROGANS EN GANADO BOVINO, SEGÚN SEXO EN
EL CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
25
TABLA 3 MUESTRAS REACTIVAS PARA L. INTERROGANS EN
GANADO BOVINO, SEGÚN SEXO, DISTRIBUIDAS EN
LAS PARROQUIAS RURALES Y URBANAS, CANTÓN
LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
25
TABLA 4 PRESENCIA DE ANTICUERPOS PARA L. INTERROGANS
EN GANADO BOVINO EN PARROQUIAS RURALES Y
URBANAS DEL CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE
2014
27
TABLA 5 SEROVARES CIRCULANTES DE L. INTERROGANS EN EL
GANADO BOVINO DEL CANTÓN LOJA, JULIO-
DICIEMBRE DE 2014
28
TABLA 6 SEROVARES CIRCULANTES DE L. INTERROGANS EN EL
GANADO BOVINO EN LAS PARROQUIAS URBANAS Y
RURALES DEL CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE
2014
29
TABLA 7 TÍTULOS PARA SEROVARES DE L. INTERROGANS
DETECTADOS POR MAT EN SUEROS DE GANADO
BOVINO, CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
31
TABLA 8 DISTRIBUCIÓN DE LOS TÍTULOS DETECTADOS POR LA
PRUEBA DE MAT EN MUESTRAS DE GANADO BOVINO,
SEGÚN SEROVARES DE L. INTERROGANS, CANTÓN
LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
32
xii
ÍNDICE DE GRÁFICOS
Página
GRÁFICO 1 MUESTRAS REACTIVAS PARA L. INTERROGANS EN
GANADO BOVINO, SEGÚN SEXO, DISTRIBUIDAS EN
LAS PARROQUIAS RURALES Y URBANAS, CANTÓN
LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
26
GRÁFICO 2 PRESENCIA DE ANTICUERPOS PARA L. INTERROGANS
EN GANADO BOVINO EN PARROQUIAS RURALES Y
URBANAS DEL CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE
2014
27
GRÁFICO 3 SEROVARES CIRCULANTES DE L. INTERROGANS EN EL
GANADO BOVINO EN LAS PARROQUIAS URBANAS Y
RURALES DEL CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE
2014
30
GRÁFICO 4 TÍTULOS PARA SEROVARES DE L. INTERROGANS
DETECTADOS POR MAT EN SUEROS DE GANADO
BOVINO, CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
31
GRÁFICO 5 DISTRIBUCIÓN DE LOS TÍTULOS DETECTADOS POR LA
PRUEBA DE MAT EN MUESTRAS DE GANADO BOVINO,
SEGÚN SEROVARES DE L. INTERROGANS, CANTÓN
LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
32
xiii
ÍNDICE DE ANEXOS
Página
ANEXO 1. TAXONOMÍA DE LEPTOSPIRA 43
ANEXO 2. CLASIFICACIÓN DE LEPTOSPIRA INTERROGANS 44
ANEXO 3. LUGAR DE ESTUDIO 45
3.1. MAPA PARROQUIAS URBANAS Y RURALES, CANTÓN
LOJA 45
3.2. CARACTERÍSTICAS FÍSICO – CLIMÁTICAS 46
ANEXO 4. FICHA DE RECOLECCIÓN DE DATOS 47
4.1. ANIMAL Y MUESTRA 47
4.2. LABORATORIO 48
ANEXO 5. BASE DE DATOS PRIMARIOS 49
ANEXO 6. PERMISOS Y AUTORIZACIONES 55
xiv
RESUMEN
La Leptospirosis bovina es una enfermedad infecciosa, con alta morbilidad y baja mortalidad
en los hatos ganaderos, originada por uno o varios serovares de L. interrogans, y tiene la
característica de producir en los bovinos: abortos, mastitis, mortinatos, septicemias y
nacimiento de crías débiles, que mueren poco después de nacer. El objetivo de esta
investigación es establecer la presencia de los serovares circulantes de L. interrogans entre el
ganado bovino del cantón Loja, mediante la prueba de MAT. Se recolecto 157 muestras de
sangre, por medio de la punción de la vena yugular, y se procedió a analizar los sueros por
medio de la prueba de micro aglutinación en placa (MAT) contra batería de antígenos de
serovares de L. interrogans (L. pomona, L. grippotyphosa, L. canícola, L.
icterohaemorrhagiae, L. hebdomadis, L. autumnalis, L. wolffi, L. hardjo, L. sejroe y L.
bataviae). Se encontró que 58,60% de muestras resultaron reactivas para L. interrogans, las
que fueron analizadas por MAT para determinación de serovares y sus respectivos títulos. Se
evidenció predominio de circulación de tres serovares: L. canícola (43,44%), L. sejroe
(40,16%) y L. hardjo (13,12%); la presencia de reactividad para L. icterohaemorrhagiae y L.
grippotyphosa fue detectada en 1,64 % de las muestras. Existe una alta serología positiva para
Leptospira en una población de bovinos asintomáticos y condiciones favorables para la
presencia en estas zonas, debido a esto se necesita elaborar actividades de prevención usuales
tomando en cuenta los resultados de esta investigación.
Palabras clave: Leptospirosis bovina, hospedero, antígeno, prueba de micro aglutinación en
placa (MAT), títulos.
xv
SUMMARY
Bovine Leptospirosis is an infectious disease, with high morbidity and low mortality in cattle
herds, caused by one or more serovars of L. interrogans, and has the characteristic of producing
in cattle: abortions, mastitis, stillbirth, septicemia and birth of Weak offspring, dying shortly
after birth. The objective of this investigation is to establish the presence of the circulating
serovars of L. interrogans among the bovine cattle of the Loja canton, through the MAT test.
A total of 157 blood samples were collected by jugular vein puncture and the sera were
analyzed by means of the plate agglutination (MAT) test against the battery of serovar antigens
from L. interrogans (L. Pomona, L. grippotyphosa, L. canícola, L. icterohaemorrhagiae, L.
hebdomadis, L. autumnalis, L. wolffi, L. hardjo, L. sejroe and L. bataviae). It was found that
58.60% of samples were reactive for L. interrogans, which were analyzed by MAT for
determination of serovars and their respective titles. There was a predominance of circulation
of three serovars: L. canícola (43.44%), L. sejroe (40.16%) and L. hardjo (13.12%); The
presence of reactivity for L. icterohaemorrhagiae and L. grippotyphosa was detected in 1.64%
of the samples. There is a high positive serology for Leptospira in a population of asymptomatic
cattle and favorable conditions for the presence in these areas, due to this it is necessary to
elaborate usual prevention activities taking into account the results of this investigation.
Keywords: bovine Leptospirosis, host antigen test, micro agglutination (MAT), titles.
1
INTRODUCCIÓN
La leptospirosis es una enfermedad zoonótica ocasionada por especies y serovares de
Leptospiras interrogans, que se transmite a través de hospederos habituales o accidentales,
afectando tanto a animales como a seres humanos.
En estudios realizados en los últimos años, se evidenció el incremento de la presencia de
Leptospirosis en el ganado bovino del Cantón Loja, este problema está afectando tanto a la
salud, como economía de los ganaderos y habitantes del Cantón Loja, ya que es una zoonosis
que afecta directamente a los trabajadores vinculados con el manejo de los hatos ganaderos, y
para la población que consume productos contaminados, y en cuanto a la economía porque se
producen perdidas en la producción ganadera.
El incremento de bovinos afectados de los hatos ganaderos del cantón Loja se debe a la
deficiente bioseguridad, debido a los escases de recursos para la construcción de ambientes
adecuados para su hábitat, sumado a falta de capacitación adecuada para su control. Las
infecciones de Leptospira interrogans en los bovinos, representan un importante riesgo para el
consumo de alimentos que pongan en riesgo la salud. En el presente estudio se analizó 157
sueros de bovinos de parroquias urbanas y rurales del cantón Loja procesados en el Instituto
Nacional de Investigación en Salud Pública (INSPI), para conocer sus títulos y serovar con
fines de valorar casos sospechosos, negativos o positivos con el fin de tener programas de
control epidemiológico.
Se debe a la falta de un programa articulado a las políticas del Ministerio de Agricultura,
Ganadería, Acuacultura y Pesca, las capacitaciones, infraestructura y planificación deficientes
no han permitido realizar una vigilancia epidemiológica activa, para la implementación y
mantenimiento de programas oficiales de prevención y control sanitario.
La Leptospirosis representa un problema de importancia desde el punto de vista zoonótico, por
transmitirse del animal al ser humano, y el impacto de la enfermedad en la producción ganadera,
produciendo una disminución de la capacidad reproductiva debido a la presencia de abortos,
disminución de la producción de leche, sustitución de vientres, entre otros. A esto se debe
agregar, los gastos que tendrán los productores, para la prevención de la enfermedad,
tratamiento clínico, así como la inversión del Estado, en la implementación y mantenimiento
de programas oficiales de prevención y control de la enfermedad.
Es de suma importancia la investigación, ya que los resultados permitirán obtener la
información necesaria acerca de los serovares que no han sido estudiados en las parroquias
2
urbanas y rurales que deben ser incluidos en el biológico, proporcionarán la pauta a futuras
investigaciones y servir de estímulo en el sector de salud ya que solo el estudio con base
científica puede expresar la gravedad del problema.
Con la presente investigación, se tuvo como objeto de estudio el obtener la información acerca
de los serovares y títulos circulantes entre el ganado bovino presentes en los hatos ganaderos
de las parroquias del Cantón Loja por primera vez, favoreciendo a la salud humana y animal,
por medio de la soberanía alimentaria. Los resultados obtenidos permitirán establecer un
programa de control organizado a nivel local o regional.
Estudio de serovares y títulos de Leptospira interrogans que circulan entre bovinos, según las
diversas características físicas altitudinales y climáticas de las parroquias urbanas (El Valle,
San Sebastián, El Sucre, El Sagrario) y rurales (El Cisne, Gualel, Chantaco, Malacatos,
Chuquiribamba, Taquil, San Pedro de Vilcabamba, Vilcabamba, Yangana y Quinara, Jimbilla,
Santiago y San Lucas) del cantón Loja, que causan daños a la salud humana y animal, y afectan
a la producción ganadera.
Para llevar a cabo la presente investigación se plantearon los siguientes objetivos:
Objetivo General
Establecer la presencia de los serovares circulantes de L. interrogans entre el ganado
bovino del cantón Loja mediante la prueba de MAT, durante los meses de julio a
diciembre del 2014.
Objetivos Específicos
Detectar por medio de la prueba de aglutinación microscópica (MAT), frente a
antígenos vivos de diferentes serovares de L. interrogans las muestras de sueros
bovinos negativas, positivas, y sospechosas, frente a una batería de antígenos vivos:
grippotyphosa, icterohaemorrhagiae, canícola, autumnalis, hebdomadis, hardjo,
sejroe, wolffi, pomona, bataviae.
Determinar en los sueros positivos los títulos correspondientes a los serovares
reconocidos de L. interrogans.
Identificar de los serovares de L. interrogans presentes entre los bovinos de ambos
sexos dentro del Cantón Loja.
Novedad científica
Elaborar un registro de datos para desarrollar programas de control epidemiológico de la
Leptospirosis bovina, con la finalidad de educar y evitar que esta zoonosis se distribuya y
aumentar la producción lechera, la fertilidad y el descarte del ganado bovino en el cantón Loja.
3
CAPÍTULO 1
MARCO TEÓRICO
1.1. TEORÍAS GENERALES
La leptospirosis bovina es una enfermedad infecciosa, con alta morbilidad y baja
mortalidad en el rebaño, producida por uno o más serovares de Leptospira interrogans, y que
produce en los bovinos abortos, septicemias, mastitis, mortinatos y nacimiento de crías débiles,
que mueren poco después de haber nacido (Ojeda, 2012).
Las pérdidas económicas causadas por la leptospirosis no han sido cuantificadas,
debido a las dificultades para el diagnóstico de la enfermedad y por la subestimación de la
problemática. En los animales, especialmente el ganado, las pérdidas económicas están
relacionadas con los efectos de la patología sobre la producción de ganado vacuno (infertilidad,
abortos, nacimiento de terneros muertos o de crías débiles) y pérdidas indirectas, como caída
en la producción de leche o agalactia transitoria. En terneros puede presentarse un cuadro agudo
grave con ictericia, hemorragia, fiebre, y hemoglobinuria de curso fatal. Aunque no existen
datos precisos, pero se estima una mortalidad aproximada del 5%, la cual afecta más a los
terneros que en adultos, y una morbilidad que puede llegar hasta más del 100% en animales
susceptibles (Hurtado & Uribe, 2013).
1.1.1. HISTORIA
El agente etiológico causante de la enfermedad, ha sido descrito en publicaciones
recientes. Adolf Weil en 1886, realizó la primera descripción detallada de la infección. En el
1907, Stimson logró visualizar el microorganismo por medio de un corte de tejido renal
obtenido de un paciente que falleció después de haber tenido una epidemia de fiebre amarilla
y los japoneses Inada e Ido en 1915, cultivaron y aislaron el agente al que denominaron
“Spirochaeta icterohemorrhagiae” (Fernández, 2012).
Las primeras informaciones sobre la enfermedad por leptospira en los animales,
datan de 1852, cuando Hofer describió una enfermedad que afectaba a los perros la cual la
denominó “Tyfus Seu Febris Nervosa Canum”. En el 1898 Keff le cambió el nombre por la de
“Enfermedad de los perros de Stuttgarte” o “Stuttgarte Handesenchue”. La etiología de esta
enfermedad fue conocida hasta el año 1922 cuando el checoslovaco Lukes demostró que el
agente encontrado era una espiroqueta, pero la primera descripción de las leptospira en
4
animales se realizó en 1933, cuando Klarenbeck y Schuffner demostraron que la L. canícola
fue la causante de la enfermedad Stuttgart en los perros.
En el 1935, Michin y Azinov notificaron la afectación de la enfermedad hacia
bovinos en la antigua URSS, la cual fue denominada: "hemoglobinuria infecciosa aguda",
logrando obtener el aislamiento del agente infeccioso Leptospira icterohaemorrhagiae bovina.
Estudios posteriores mostraron que Leptospira grippotyphosa, también es responsable de
aquella enfermedad. Freund en el 1941, y Jungherr en el 1944, reportaron la enfermedad, tanto
en Israel como en los Estados Unidos de América, quedando el último como autor de la primera
notificación en el continente americano. El primer reporte de la enfermedad en bovinos en Gran
Bretaña fue a cargo de Field y Wellers en 1950, mientras que en 1952, Smith y Perry,
publicaron los primeros casos en Canadá (Fernández, 2012)
1.1.2. ETIOLOGÍA Y MANIFESTACIÓN DE INFECCIÓN
1.1.2.1. Agente etiológico
El agente etiológico de la leptospirosis pertenece al género Leptospira, el cual
abarca dos especies: L. interrogans, que afecta tanto a los animales como al hombre y la L.
biflexa, que se caracteriza por ser de vida libre, la L. interrogans se divide en 25 serogrupos y
226 serovares. Los serovares que afectan al ganado bovino son: pomona, wolffi, bratislava,
icterohaemorrhagiae, pyrogenes, hebdomadis, grippotyphosa, panamá, hardjo y tarassovi
(Fernández, 2012)
La Leptospira es una bacteria muy fina, que mide de 0,1 a 0,2 µm de ancho y 6 a
20 µm de largo, aerobia estricta, flexible, helicoidal, tiene las extremidades en forma de gancho,
móvil, fácil de cultivar en medios artificiales. Sobrevive por mucho tiempo en el agua o en
ambientes húmedos, templados, que tenga un pH ligeramente alcalino o neutro.
1.1.2.2. Manifestación y manejo de infección
La manifestación de la enfermedad y su evolución están establecidos por factores
del huésped (estado nutricional, sexo, especie, edad, susceptibilidad, inmunidad), del agente
(serovar, virulencia de la cepa, dosis infectante) y del medio (ecosistema, temperatura,
humedad). La leptospirosis se presenta de forma clínica o subclínica, y puede presentar un
carácter leve o letal (Rossetti, 2014).
En todas las especies animales los signos clínicos que presentan a causa de la
leptospirosis son parecidos, a excepción de la L. icterohaemorrhagiae, que ocasiona una grave
5
septicemia. Las crías de un mes o menos son más susceptibles a contraer la enfermedad, la cual
se caracteriza por fiebre de 40,5 a 41,5 °C, anorexia, petequias en mucosas, septicemia,
congestión pulmonar, anemia hemolítica con hemoglobinuria, ictericia, palidez de la mucosa,
en ocasiones, meningitis, y falta de actividad, en la cual el animal muestra la falta de
coordinación. Las vacas adultas presentan signos adicionales que guardan relación con la ubre
y el nivel de producción de leche; esta última casi cesa y la secreción es de color rojo o contiene
coágulos de sangre, teniendo un aspecto similar al del calostro. La retención placentaria
posterior al aborto se produce a consecuencia de la infección (Zoetis, 2015).
El manejo en las infecciones por leptospirosis consiste en controlar antes de que
sucedan daños irreparables a los riñones o hígado; se puede aplicar el tratamiento cuando
aparecen los primeros signos, pero que en realidad pasan desapercibidos y los animales son
sometidos a tratamiento cuando ha desaparecido la septicemia.
Es importante separar los animales infectados de los demás y prestarles asistencia
médica veterinaria. De la forma clínica en que se presente leptospirosis depende el tratamiento
a utilizarse. En 1958, Vander Hoeden manifiesta que puede utilizarse una amplia gama de
preparados para el tratamiento de la infección. El tratamiento con dihidroestreptomicina reduce
en gran medida el número de microorganismos eliminados en la orina, pero éste puede
infectarse de nuevo; el fármaco es muy útil para frenar los abortos que se producen por una
infección serovar de L. hardjo. Michna y Thiermann consideran el uso de dihidroestreptomicina
como una parte del programa general del control del hato, conjuntamente con la vacunación y
la profilaxis higiénico-sanitaria (Alonso & García, 2012) Por lo tanto es necesario realizar la
prueba de MAT.
1.1.3. TRASMISIÓN, CONTROL Y PREVENCIÓN
1.1.3.1. Distribución geográfica y mecanismos de trasmisión
De acuerdo a World Health Organization y al Centro para el Control y Prevención
de Enfermedades, las enfermedades zoonósicas muestran su ascenso a escala mundial. Existe
una distribución universal del 43,6 % de enfermedades zoonósicas. Dentro de las cuales hay en
América del Sur y Europa un 56%, en América del Norte el 60%, en África y Asia se reconocen
el 63,3%, y en el Caribe y en América Central el 50%. La zoonosis de mayor importancia en
América Latina es la leptospirosis, ya que tienen objeto de notificación obligatoria y vigilancia
(Fernández, 2012).
6
Las características del agente etiológico, y el comportamiento epidemiológico de
la enfermedad, determinan la variabilidad en cuanto a la prevalencia entre países, regiones y
zonas agroecológicas. Es habitual en las áreas tropicales y subtropicales con altos índices de
precipitación
En América Latina se ha descrito la presencia de leptospirosis bovina y humana en
todos los países. En el año 2014 en el Estado de Yucatán, México, se realizó un estudio, con
74 trabajadores de 20 unidades ganaderas que interactúan con bovinos, reveló 12,16% de
seropositividad a L interrogans. Cinco serovar estuvieron presentes, siendo L. canícola el más
frecuente, seguido por L. hardjo y L. australis. Los títulos de anticuerpos cuantificados por la
Prueba de MAT oscilaron entre1:100 - 1:3600 (Vado, 2014).
Un estudio de muestras de sueros de 137 vacas y 26 toros del Municipio de
Montería, Colombia, identificó la presencia de anticuerpos aglutinantes para los siguientes
serovar: L. hardjo y L. icterohaemorrhagiae (20,8% y 11,41%), L. grippotyphosa (29,85%)
(Hurtado & Uribe, 2013).
En los datos estadísticos del Instituto Nacional de Higiene y Medicina Tropical
(INHMT) “Leopoldo Izquieta Pérez”, del Ecuador, la especie que tiene mayor número de los
casos reportados (6652) hasta el año 2007 fue la bovina, siendo las provincias de Loja y
Pichincha, con mayor número de casos, se obtuvo un número total de 982 y 4924 casos
(Instituto Nacional de Higiene y Medicina Tropical., 2015).
El contagio se provoca por tener contacto con orina infectada, heces y secreciones
placentarias, uterinas, o por relación indirecta con el ambiente contaminado. Las leptospiras
que afectan al ganado pueden ser excretadas a través de la orina durante 542 días, y sobreviven
fuera del animal hospedador hasta seis meses cuando las condiciones ambientales son cálidas
y húmedas. El semen es otra fuente de infección, debido a que un toro puede contagiar a la
hembra durante la monta (Zoetis, 2015).
La transmisión de un animal portador a otro, ocurre cuando el animal tiene contacto
directo o indirecto con fluidos infecciosos que contengan leptospiras. También se transmite por
la vía congénita o neonatal. Se reportó la transmisión sexual de leptospira en el apareamiento
de ratas, vacas, cerdos y perros (Organizacion Mundial de la Salud, 2012).
Las personas que trabajan con animales, corren el riesgo de infectarse y bajo
determinadas circunstancias, pueden alterar su salud. El huésped puede infectarse por medio
de las siguientes vías: por inhalación, por contacto directo a través de mucosas o piel, por
ingestión, por vía percutánea, ocular y traumática, la adquisición de una enfermedad zoonótica
7
es el resultado de la combinación de los factores del huésped, del ambiente y del agente (Vado,
2014).
Se consideran como grupos de riesgo a la personas que laboran en un medio
ambiente contaminado, tales como: veterinarios, trabajadores del matadero, trabajadores
agrícolas, ganaderos, procesadores de pescado y de aves, especialmente los cañeros y de los
arrozales, mineros, trabajadores del alcantarillado, constructores, los que laboran en las
canteras, y de las pisciculturas, servicios comunales, las movilizaciones agrícolas y los
militares en campaña (Vado, 2014).
Las leptospiras persisten en una población de huéspedes naturales de
mantenimiento por transmisión horizontal y vertical, tal población constituye el reservorio de
la infección. El huésped natural de mantenimiento asegura la circulación continua de un serovar
de leptospira particular en un área geográfica (foco natural), no necesita que otro huésped
accidental esté involucrado. Los huéspedes naturales de mantenimiento pueden portar una cepa
particular en su riñones y la cual es eliminada por la orina durante largos períodos de tiempo,
inclusive durante toda su vida. Varias cepas de leptospira están adaptadas a sus huéspedes
naturales que producen infección en el animal (Organizacion Mundial de la Salud, 2012).
El riesgo de infección humana puede depender del contacto directo o indirecto con
la orina de uno de los huéspedes naturales de mantenimiento de leptospira. Cabe recalcar que
cualquier animal contagiado puede ser fuente de infección para su misma especie u otras
especies, incluyendo a los seres humanos. Huéspedes accidentales o incidentales, desarrollan
una enfermedad evidente y, si sobreviven, usualmente se recuperan y limitan el crecimiento de
las leptospira infectantes en pocas semanas. Los seres humanos y otros huéspedes accidentales
son huéspedes “terminales” para leptospiras, ya que no son reservorios de la infección. Los
casos humanos con leptospirosis representan poco riesgo para otras personas. La transmisión
persona a persona de leptospira ocurre muy rara vez (Organizacion Mundial de la Salud, 2012).
1.1.3.2. Monitoreo, control y prevención
Para disminuir las posibilidades de contagio frente a la exposición a fuentes de
contagio, se recomienda el uso de mandiles u overoles, botas, guantes, a los trabajadores que
están en contacto con los animales, con agua contaminada, fluidos del animal infectados (orina,
sangre). De ser posible se debe drenar aguas y suelos contaminados.
Es fundamental el correcto tratamiento de residuos, ya que de esta manera se evita
que los roedores propaguen la infección. Deben ser guardados en recipientes cerrados, si es
8
posible lejos del suelo, para luego ser depositados en lugares de tratamiento de residuos sólidos
o rellenos sanitarios, evitando que sea fuente de alimento para roedores y cerdos. Es necesario
impedir el ingreso de animales domésticos en el interior del domicilio, o lugar de
almacenamiento de alimentos, y es necesario realizarse la limpieza y desinfección del área de
trabajo, se deben implementar prácticas de limpieza e higiene, principalmente con la orina de
los animales infectados. Es importante evitar el contacto de perros, roedores, cualquier otro
animal silvestre con pozos, aguas estancadas, tanques de almacenamiento, fuentes de agua, ya
que son lugares donde se pueden diseminar las leptospiras. (Organización Mundial de Sanidad
Animal, 2013).
El ingreso de animales nuevos al establecimiento deberán ser puestos en
cuarentena, y de esta manera observar si presentan signos de la enfermedad, evitando la
introducción de la enfermedad a los hatos ganaderos. Si se identifica animales domésticos
infectados, estos deben ser separados de los demás y tratados por un médico veterinario, con el
fin de eliminar el microorganismo en la orina por medio de terapias. Es muy eficaz aplicar la
dihidroestreptomicina a 25 mg/kg de peso en cerdos y bovinos contra la leptospiruria (Romero
& Veloza, 2014).
Es indispensable la utilización de vacunas para poder prevenir la enfermedad y se
utiliza con buenos resultados entre animales, aunque existe experiencia de uso en humanos en
China. En el Ecuador están disponibles varias formulaciones de vacunas para animales, con un
número variable de serovares con adyuvantes oleosos y acuosos; dependiendo de su
composición varía la persistencia de la inmunidad y el número de las dosis en el esquema de
inmunización. Es necesario utilizar dosis de “refuerzo”, de forma anual o semestral,
dependiendo de las indicaciones y recomendaciones del laboratorio productor.
1.1.4. GÉNERO LEPTOSPIRA
1.1.4.1. Taxonomía y Clasificación
El género Leptospira está incluido en la familia Leptospiraceae, orden
Spirochaetales. Las leptospirosis tienen una clasificación muy compleja e incluso difícil de
entender, esto se debe a la existencia de sistemas de clasificación basados en diferentes
criterios: genéticos, fenotípicos o antigénicos. El género Leptospira tiene una descripción
mayoritariamente morfológica y características de cultivo (Zoetis, 2015).
Las especies de este género son definidas por homologías en su ADN,
recientemente se reconoció el concepto de genoespecies como grupos de serovar de leptospiras
9
cuyos ADN están relacionados. El primer nivel de agrupamiento por debajo de la especie es la
serovar que se define basándose en patrones de aglutinación-absorción. Con fines prácticos, los
serovar antigénicamente relacionadas se organizan en serogrupos (Zoetis, 2015).
EL género Leptospira se divide en dos especies fenotípicas: la L. interrogans,
donde se encuentran agrupadas las leptospiras patógenas y la L. biflexa, que se encuentra en
vida libre principalmente en las aguas superficiales. Las cepas de L. biflexa no se encuentran
asociadas con infecciones hacia animales o humanos infecciones y en los animales de
laboratorio son a virulentas. Tanto la L. interrogans como la L. biflexa, se clasifican en
serovares y serogrupos, dependiendo de sus características serológicas. Los serogrupos
contienen los serovares antigénicamente relacionados, y se han identificado 25 serogrupos para
las cepas patógenas. Recientemente fueron descritos dos nuevos serovares patógenos. Es
importante la identificación de los serovares para poder comprender la epidemiología de la
enfermedad, sin embargo depende de la disponibilidad de anticuerpos monoclonales (AcM)
(Fernández, 2012).
En la reunión de “Subcomité para la Taxonomía del género Leptospira” (TSCL) en
Praga, en 1994, se recomendó que el sistema de clasificación taxonómica se siga basando en el
serovar, aunque se permite la utilización de otros métodos opcionales para la identificación y
clasificación, como: anticuerpos monoclonales e investigación de los patrones de fragmentos
de ácidos nucleicos, obtenidos por tratamiento con enzimas de restricción mediante sonda de
ADN, estudios de la actividad aminopeptidasa y microscopia electrónica (Anexo 1, 2).
En la actualidad, además de la clasificación fenotípica, existe la tipificación
genética, sin existir relación directa o correspondencia entre ambas. La caracterización genética
mediante la hibridación ADN-ADN permite la división del género en 20 especies genómicas
diferentes o genomo-especies. Debido a la falta de correspondencia entre ambas clasificaciones
(fenotípica y genética), existen especies genómicas que incluyen serovar patógenos y no
patógenos, así como serovares incluidos en más de una especie genómica. De esta forma, la
especie genómica es típica de la cepa y ningún serogrupo o serovar predice la especie genómica
a la cual pertenecerá una cepa en cuestión. En la reunión del TSCL del 2007, desarrollada en
Quito, Ecuador, se decidió dar el estatus de especies a las genoma-especies 1, 3, 4 y 5, (descritas
previamente), resultando en un género que comprende 13 especies patógenas de Leptospira con
más de 260 serovares y seis especies saprófitas con más de 60 serovares (Fernández, 2012).
10
1.1.5. MORFOLOGÍA, FISIOLOGÍA Y METABOLISMO
1.1.5.1. Morfología y Fisiología
Las leptospiras tienen forma semejante a la de un sacacorchos y se diferencian de
otras espiroquetas por la presentar ganchos en los extremos. Son muy delgadas para ser
observadas en un microscopio normal. La microscopía de campo oscuro es la más usada en su
observación microscópica. Todas las leptospiras tienen un parecido, por lo que es difícil
diferenciar su morfología (Organizacion Mundial de la Salud, 2012).
Las leptospiras son gérmenes de forma helicoidal, constituida por un axostilo y un
cuerpo. Sus estructuras están recubiertas por una membrana envolvente. El axostilo, tiene dos
filamentos axiales que se insertan en la terminación del cuerpo protoplasmático, el cual está
encargado de la movilidad del microorganismo. Tienen movimientos de rotación, aunque no
presenta flagelos. Se puede observar las leptospiras por medio de un microscopio de campo
oscuro solo como una cadena de diminutos cocos, mide de 6 - 12 micras de largo y un diámetro
de 100 milimicras. Son difíciles de teñir, pero pueden ser impregnadas con la plata.
Las leptospiras son sensibles al calor, desecación, excesivo frio, y a las variaciones
de pH, Teniendo un pH óptimo de 7,2 a 7,4 para su multiplicación. Sobreviven en el agua dulce,
principalmente si esta almacenada aproximadamente 180 días.
Son microorganismos aerobios obligados, catalasa y oxidasa positivas, los ácidos
grasos insaturados de cadena larga establecen su principal fuente de energía y carbono, pueden
utilizar sales de amonio como fuente de nitrógeno. En la zona media del microorganismo,
durante la fisión binaria, se produce la formación del tabique transversal, permitiéndole que la
división se haga en sentido transversal. Son muy lábiles a altas temperaturas, a los detergentes,
a los medios ácidos y a la desecación (Compendio de Microbiología Médica, 2014).
1.1.5.2. Hábitat y requerimientos metabólicos
Las leptospiras, tanto patogénicas como saprofíticas, pueden ocupar diversos
ambientes, hábitats y ciclos de vida. Generalmente, se reconoce que estas bacterias son
virtualmente ubicuas en términos de su distribución geográfica, estando presentes en todo el
Planeta con excepción de la Antártida (Romero & Veloza, 2014).
Las leptospiras son hidrofílicas, para sobrevivir requieren de humedad y un pH
neutral de 6,9 a 7,4 en reservorios naturales, como: en estanques, lagunas, pantanos, aguas
estancadas, y charcos. Se ha implicado la bacteria con frecuencia en ratas y ratones, a excepción
del hámster (Cricetinae) y los cuyes (Cavia porcellus) (Zoetis, 2015).
11
Se pueden cultivar las leptospiras en un medio Ellinghausen-McCullough-Johnson-
Harris (EMJH) a 30º C, el cual se suplementa con suero de conejo de 0,2 a 1%, que facilitan el
crecimiento de cepas muy exigentes. El crecimiento de la leptospira es notable dentro de los 4
a 7 días. Son aerobias, por lo que las leptospiras usan al carbono y a la energía como fuente
principal.
La temperatura mínima de crecimiento de especies patógenas es de un rango de 13-
15 °C. El crecimiento de las especies saprofíticas tiene una temperatura mínima de crecimiento
de 5-10°C, es por eso que las leptospiras tienen la habilidad de crecer a 13°C, y pueden ser
distinguidas entre los organismos patógenos de las saprofitas. La leptospira tiene un pH óptimo
para su crecimiento de 7,2 a 7,6 (Zoetis., 2015).
1.1.6. PATOGENICIDAD Y VIRULENCIA
La orina de los animales infectados puede contener hasta unas 100 000 bacterias
por mililitro, que se dispersan rápidamente en aguas superficiales, constituyendo la principal
fuente de infección. Estas bacterias ingresan al organismo a través de lesiones y abrasiones
que liberan hemoglobina, sustancia con la cual las leptospiras patógenas son afines, hecho que
fue estudiado y documentado por Kasuyo Ellis, quien realizo investigaciones sobre otra
importante vía de transmisión, el contacto venéreo, ha destacado la necesidad de exigencia
sobre la ausencia de títulos serológicos contra leptospira para los animales que se promueven
como sementales (Román & Chávez, 2014).
Una vez que la leptospira penetra por la piel, esta invade la corriente sanguínea y
se disemina por todo el cuerpo, incluyendo el humor acuoso y el Sistema Nervioso Central. En
algunos órganos como: el corazón, musculo esquelético, hígado y riñones, se presenta tropismo.
Esto ha sido observado en procesos patogénicos provocados experimentalmente. Se puede
producir la penetración también por las mucosas, en especial la mucosa ocular o mucosa nasal.
Las toxinas (fibrinalísima, endotoxinas catalore, lifosas, hemolísima, y
hioluvidore) y enzimas producidas por la leptospira contribuirían en su patogenicidad. Los
síntomas clínicos y las evidencias de anatomopatología de esta enfermedad apoyan la presencia
del efecto de una endotoxina.
Las hemolisinas se encuentran en un gran número de serovares (Leptospira hardjo,
tarassovi, pomona, y ballum) y las cuales fueron descritas por Alder y De la Peña como
esfingomielinasas, con ellas las cepas virulentas presentan quimiotaxis hacia la hemoglobina.
Adler y De la Peña han estudiado las proteínas superficiales de adherencia que se encuentran
12
en la estructura de doble membrana de las leptospiras y consideran que estas constituyen los
antígenos principales, que son parecidas estructuralmente e inmunológicamente a los
lipopolisacáridos (LPS) de los organismos Gram negativos.
Las leptospiras cuentan con una lipoproteína L32 (LipL32), también conocida
como Hap1, que constituye más del 50% de las sub-proteínas de la membrana externa,
(lipoproteínas de superficie expuestas). Son las proteínas más abundantes en la célula y se
encuentran exclusivamente en leptospiras patógenas, se expresan “in vivo” y son altamente
inmunogénicas (Romero & Veloza, 2014).
De Brito y colaboradores, utilizando técnicas de inmunoelectromicroscopía,
estudiaron la participación de antígenos de leptospiras en el proceso de lesión de la célula del
hospedero, que produce por la interacción de la bacteria con proteínas de la superficie de la
membrana celular, terminando con la penetración y posterior agresión celular. El endotelio
capilar es afectado por una lesión, provocada, por la acción de las interleucinas; en la célula
endotelial de capilares del pulmón, diafragma y riñón, se observa las alteraciones de los
organelos, similares a las encontradas en los hepatocitos.
La ictericia es el principal síntoma de las alteraciones hepáticas y se debe a la
disfunción hepatocelular. El daño hepático es subcelular y rara vez se puede observar la
leptospira en el hígado. En casos graves la ictericia es muy intensa y el mecanismo de su
producción todavía se encuentra en discusión. La agresión pulmonar, se manifiesta por cuadro
grave de neumonía hemorrágica. Todo indica que el compromiso de otros órganos, el cerebro,
páncreas, meninges y las suprarrenales, obedece a los mismos mecanismos de lesión. La
intensidad de la anemia es variable, es usual en las formas graves y puede aparecer aun cuando
no hay sangrado (Compendio de Microbiología Médica, 2014).
1.1.7. INFECCIÓN Y RESPUESTA INMUNE
La primera línea de defensa del huésped contra cualquier organismo extraño es el
sistema inmune innato. El sistema de complemento forma parte de la respuesta innata, jugando
un papel esencial y la activación de la vía alternativa de este sistema, es uno de los mecanismos
efectores más importantes durante las primeras horas de una infección, a pesar de no ser
eficiente contra las leptospiras. Las leptospiras pueden evadir la respuesta inmune, lo que les
permite llegar a los tejidos de órganos distantes como los pulmones, bazo, hígado, riñones y así
poder colonizarlos. Estos mecanismos incluyen la resistencia a la lisis por complemento y a la
fagocitosis por macrófagos y neutrófilos.
13
Estudios “in vitro” han permitido observar que, las especies patógenas de
leptospira son capaces de resistir la acción lítica del sistema de complemento y sobrevivir,
principalmente si son virulentas, mientras que la saprófita L. biflexa muere a pocos minutos de
estar en presencia con el suero normal humano (no inmune), Fue demostrado en estudios “in
vitro” que la fagocitosis de las leptospiras por macrófagos y neutrófilos, es segura solo cuando
el patógeno anteriormente fue opsonizado por anticuerpos específicos, de lo contrario, la
fagocitosis inexistente o mínima. Debido a esto, la fagocitosis no es efectiva para eliminar las
leptospiras cuando las infecciones se producen en individuos no inmunizados (Malia, 2014).
En el trabajo realizado por Shiju y colaboradores se evidenció que en una línea
celular de macrófagos humanos de L. interrogans se replicaba en el citosol de las células y
luego producía la apoptosis celular liberando las bacterias al medio extracelular. Esto propone
que en un entorno no inmune, con ausencia de anticuerpos específicos, las leptospiras tienen
capacidad de ingresar a los macrófagos humanos de manera activa a través de mecanismos que
aún se desconocen, convirtiendo a estas células en reservorios de bacterias (Malia, 2014).
Se ha descubierto que las leptospiras, principalmente las saprófitas, son
susceptibles a los elementos de los gránulos primarios, los péptidos catiónicos y el peróxido de
hidrógeno, que bajo la estimulación de los neutrófilos, estos son liberados. Recientemente fue
descrita una nueva función de los neutrófilos conocida como NETosis (del inglés, Neutrophil
Extracellular Traps), la cual consiste en ser liberada la cromatina junto con componentes de
los gránulos, algunas proteínas citoplasmáticas e histonas, para inmovilizar o matar patógenos
extracelulares. Este proceso está siendo muy estudiado, pero aún no se conoce su efecto sobre
las leptospiras (Malia, 2014).
La infección por leptospira produce una respuesta humoral con producción de
inmunoglobulinas IgM e IgG que son específicas de serovar. La inmunoglobulina IgM, es la
primera inmunoglobulina que se produce en la respuesta inmunitaria reciente. La IgG es la
respuesta a largo plazo del organismo a una enfermedad, aparece a los pocos días después de
la IgM. Debido a que la producción de IgG es inconstante durante el transcurso de la
enfermedad, la respuesta humoral puede ser detectada mediante el test de aglutinación
microscópico MAT (del inglés, microscopic agglutination test) a partir de los 5 a 7 días de
infección. El título llega a su máximo en las semanas posteriores y permanece de meses a años,
aunque puede verse afectado por el tratamiento. Los anticuerpos específicos que se producen
en la mayoría son contra el LPS leptospiral, el antígeno más perceptible, aunque su potencial
endotóxico es menor, comparado al LPS de las bacterias Gram negativas. Otros antígenos de
14
importancia en generación de la respuesta humoral son las lipoproteínas de la membrana
(Malia, 2014).
La inmunidad mediada por linfocitos B con producción de inmunoglobulinas es
necesaria para conferir protección contra la leptospirosis; se conoce poco acerca de la respuesta
celular, la inmunidad mediada por linfocitos T.
Estudios en ratones acerca del desarrollo de la respuesta inmune demostraron que
ésta depende de los receptores TLR2 y TLR4 y está compartimentalizada. Mientras que en la
circulación se produce IgM dependiente de TLR 4, en el hígado se produce interferón gamma
(IFNγ) dependiente de TLR2/4. Se ha demostrado que las leptospiras activan los linfocitos T
y las células renales parenquimales del riñón para producir IFN e iNOS (sintasa inducible de
óxido nítrico). Inicialmente, esto produce una inflamación que es necesaria para atraer
leucocitos y matar a las bacterias, pero se ha observado que los linfocitos B y T también
participan en los procesos proinflamatorios, que son independientes de los TLRs y que
contribuyen al daño de los tejidos.
Se han identificado 184 genes que codifican lipoproteínas putativas, además de
proteínas putativas extracelulares y de membrana externa u OMP (del inglés Outer Membrane
Proteins), las cuales están bien conservadas en diferentes cepas, se desconoce en la mayoría de
ellas su función (Malia, 2014)
Los antígenos protectores que se lograron identificar hace algunos años atrás,
fueron de naturaleza glicolipídica, hoy en día se conoce que estos antígenos son derivados de
LPS de leptospiras y los cuales tienen características independientes en cuanto a su actividad
endotóxica y biológica.
Nally y sus colaboradores demostraron que el LPS es la biomolécula con la mayor
capacidad para provocar una respuesta inmune protectora tanto en animales domesticos como
humanos cuando se usan en vacunas las células enteras de leptospiras. Yang, Xue y
colaboradores, demostraron que la protección proporcionada por lipopolisacáridos es serovar-
específica (Fernández, 2012)
1.1.8. MÉTODOS DE ESTUDIO Y DIAGNÓSTICO
1.1.8.1. Test de Aglutinación Microscópica (MAT)
La prueba de aglutinación microscópica, MAT, (Micro Aglutination Test) es la
prueba serológica estándar recomendada por la Organización Mundial de Sanidad Animal
(OIE) para el diagnóstico de la leptospirosis (Organizacion Mundial de la Salud, 2012)
15
Para la obtención de información útil se recomienda examinar no menos de diez
animales, pero el número óptimo es no menos del 10% del hato, y documentar el historial de
vacunación de los animales. El incremento en el tamaño de la muestra mejora la calidad de
información epidemiológica, los rastreos retrospectivos de salud pública y las investigaciones
de la enfermedad clínica (Ojeda, 2012).
La MAT es muy útil para determinar un diagnóstico de la infección aguda en un
animal aislado; la OIE establece que un aumento de cuatro veces en los títulos de anticuerpos
en las muestras pares de sueros procedentes de animales enfermos agudos o convalecientes
tiene valor.
Para un diagnóstico de leptospirosis, se pueden basarse los hallazgos de títulos muy
elevados en un animal con un cuadro clínico bien definido. La prueba tiene restricciones en el
diagnóstico de la infección crónica en un solo animal, tanto en el diagnóstico de abortos como
en la identificación de portadores genitales o renales. Esto tiene lugar en las infecciones por
leptospiras adaptadas al hospedador, como en la infección de bovinos por el serovar L. hardjo.
La MAT no puede diferenciar entre anticuerpos aglutinantes producidos por una
infección actual, reciente o pasada, normalmente se toma una solo una muestra de sangre de la
fase aguda de la enfermedad; el significado de los títulos en muestras únicas es un tema de
debate, y en diferentes áreas pueden utilizarse los distintos puntos de corte. Algunos pueden
considerar a un título de 1:100 como positivo, mientras que otros aceptan 1:200, 1:400 o 1:800,
como diagnóstico de una infección actual o reciente (Ojeda, 2012).
El significado clínico de un título en una muestra única, se lo determina
enfrentándolo a los antecedentes de la seroprevalencia de anticuerpos resistentes debido a
infecciones sufridas antes por la población, y el diagnostico de otras enfermedades productoras
de anticuerpos que pueden causar reacciones cruzadas, tales como la hepatitis, legionelosis y
enfermedades autoinmunes (Organizacion Mundial de la Salud, 2012).
Al realizar un diagnóstico serológico de leptospirosis, se debe tener en cuenta el
serovar infectante y el estado clínico implicado. Cuando se produce un aborto provocado por
el serovar L. pomona en el ganado vacuno, se puede encontrar un título alto durante el aborto,
debido a que el suceso tiene lugar relativamente después de la infección. Al momento de
interpretar los resultados de la MAT, es muy importante tener en cuenta el historial de
vacunación, ya vacunación extendida ayuda de forma importante al número de animales
seropositivos, y puede enmascarar la presencia de infecciones crónicas en el hato ganadero, en
particular, si es por el serovar L. hardjo.
La presencia de un serogrupo está indicada por la reacción frecuente en la selección
16
serológica, pero puede identificarse definitivamente por medio del aislamiento de un serovar
proveniente de animales afectados. Para mejorar la sensibilidad de la prueba, se puede utilizar
aislamientos locales, en vez de cepas de referencia, pero estas ayudan en la interpretación de
los resultados.
La prueba de micro aglutinación tiene una especificidad buena; normalmente los
anticuerpos frente a otras bacterias no tienen una reacción cruzada con leptospira de manera
significativa. No obstante, existen reacciones serológicas cruzadas significativas entre
serovares y serogrupos de Leptospira y, posible, que un animal infectado con un serovar tenga
anticuerpos frente al serovar infectante, y de esta manera de una reacción cruzada con otros
serovares en la prueba de MAT. Cuando los animales han sido vacunados contra la
leptospirosis, estos tienen anticuerpos frente a los serovares presentes en la vacuna utilizada.
Por lo tanto se debe considerar como objeto de estudio al historial de vacunación de los
animales (Ojeda, 2012)
MAT es una prueba de referencia en la que se evalúan las otras pruebas serológicas
y es necesaria para realizar la exportación e importación del ganado (Organizacion Mundial
de la Salud, 2012).
1.2. TEORÍAS SUSTANTIVAS
1.2.1. SEROVARES DE MAYOR INCIDENCIA EN BOVINOS
Todas las leptospiras patógenas se encuentran clasificadas bajo un sola especie:
Leptospira interrogans, de la cual se distinguen 212 serovares, que se encuentran en 23
serogrupos. Se han aislado de bovinos, por lo menos, 13 serovares. Entre los serovares más
comunes que afectan al ganado bovino, están: icterohaemorrhagiae, hebdomadis, bratislava,
pyrogenes, grippotyphosa, pomona, panama, wolffi, hardjo (exclusiva del ganado bovino) y
tarassovi (Zoetis, 2015)
En el continente americano se ha encontrado que los serovares predominantes en
bovinos son grippotyphosa, hardjo y pomona; a veces se reportan infecciones por
icterohaemorrhagiae y canícola, como también de otros serovares. Los serovares pomona y
hardjo son universales. Los brotes por hardjo se han comprobado cada vez con mayor
frecuencia.
En el cantón Loja, se realizó un trabajo serológico de 449 muestras de hembras
bovinas, resultando positivos para Leptospira interrogans, señalando entre los serovar
identificados a L. grippotyphosa, L. wolffi, L. icterohemorrhagiae, L. sejroe, L. pomona, L.
17
canícola, L. autumnalis, L. hardjo, L. bataviae swart, L. djasiman, L. hebdomadis, , L.
tarassovi, L. castellonis, L. javanica, L. saxkoebing, L. australis, L. pyrogenes, L. panamá, L.
shermani, y de Leptospira biflexa fue encontrada la L. patoc (Román & Chávez, 2014)
a) Leptospira icterohaemorrhagiae
La bacteria se trasmite al ganado vacuno vía hospedadores de mantenimiento; los
reservorios de mantenimiento son un origen constante de la infección y no presentan las señales
clínicas típicas, la trasmisión es eficiente y alta, pueden ser reservorios por meses, años, incluso
toda la vida. Las ratas transmiten las bacterias, contagiándose a sí y a otros animales, ganado
vacuno y cerdos, volviéndoles anfitriones accidentales, no llevan las bacterias y solo son
contagiados por un periodo breve; la enfermedad no es perpetuada.
Los signos clínicos en las Leptospirosis son muy parecidos en todas las especies
animales, salvo que la L. icterohaemorrhagiae produce septicemia grave (Zoetis., 2015).
b) Leptospira canícola
Las infecciones por L. canícola, generalmente son prevalentes en algunas
poblaciones de perros, siendo frecuentemente la causa de leptospirosis de tipo ictérico y
hemorrágico, no producen infecciones graves en bovinos; los bovinos pueden ser infectados
por medio de la orina de perro, ya que pueden ser portadores durante meses, años e inclusive
por toda la vida.
El perro es el único huésped de mantenimiento para L. canícola, puede infectarse
entre sí y a otros animales como los porcino y bovinos; los bovinos son huéspedes accidentales,
que solo se encuentran infectados por un corto tiempo; aunque la L. canícola no es la causa
más común de leptospirosis bovina, pero es importante controlarla e implementar las medidas
de prevención para evitar el contagio de la enfermedad (Zoetis, 2014).
c) Leptospira pomona
La presentación clínica más grave en leptospirosis se halla asociada a la L. pomona.
En el ganado vacuno puede observarse desde fiebre, inapetencia, flacidez mamaria, con
descenso de la producción de leche, hasta la eliminación de leche sanguinolenta, aborto, anemia
hemolítica, muerte y raramente ictericia. Draghi de Benítez y colaboradores, en Argentina,
reportaron entre los sueros positivos a L. interrogans, provenientes de vacas que sufrieron
aborto, con 2,08% correspondió al serovar pomona (Fernández, 2012)
18
En las infecciones por L. pomona el aborto se produce entre los 4-5 meses, que
alcanza entre 10-40% de los vacas en gestación, pero generalmente puede afectar solo al 5%
de animales en gestación. La hemoglobinuria, aparentemente observada solamente en los
rumiantes, parece depender de la presencia de la hemolisina, que producen algunas cepas. Este
serovar puede producir abortos en varias especies (ovejas, yeguas, cerdos y vacas), pero el
principal hospedero que sostiene la infección en el ecosistema es el cerdo (Enciclopedia, 2013).
d) Leptospira wolffi
Afecta tanto a animales domésticos como salvajes, incluido el perro, los humanos
son hospedadores accidentales, la presentación de los primeros síntomas es dentro de los 4 a
10 días, diseminándose hacia el líquido cefalorraquídeo, pulmones, riñones, hígado, y tracto
reproductor, después viaja varios días por la sangre, donde puede aislar, hasta que disminuye
la fiebre; 6 días después de que inicio la leptospiremia, se puede observar anticuerpos presentes
en el torrente sanguíneo y la presencia de la leptospira en la orina (Achilles, 2012).
e) Leptospira hardjo
L. hardjo se subdivide en dos genotipos hardjo hardjo-bovis y hardjo hardjo-
prajitno. El serovar hardjo es el más importante en la población bovina por su carácter
endémico, si un animal es infectado con este serovar y que no es eliminado por los anticuerpos,
la leptospira puede establecerse en los riñones o en el tracto genital, ocasionado fallas
reproductivas. L. hardjo, además del síndrome de la disminución de la producción de leche,
produce problemas de esterilidad en los bovinos (Zoetis, 2015)
Leptospira hardjo bovis es una cepa adaptada al bovino, persistiendo la infección
por largos períodos, especialmente en el riñón, y que actúa como reservorio de la misma,
contaminando el medio ambiente. Pueden nacer terneros infectados y ser portadores crónicos
que mantienen a esta cepa en su ecosistema. Este serovar de leptospira fue identificado, aparte
de América Latina, en Australia, N. Zelanda, Gran Bretaña y América del Norte (Hurtado &
Uribe, 2013)
L. hardjo bovis produce una enfermedad silente, con signos subclínicos (a veces
mastitis e infección renal persistente) y pérdidas reproductivas importantes en la producción
lechera, infertilidad temprana y, más frecuentemente, abortos a término. Puede presentarse
entre los animales vacunados con vacunas que no tienen antígeno de L. hardjo bovis.
19
1.3. REFERENTES EMPÍRICOS
1.3.1. OTROS SEROVARES
En 1992, Benenson señaló que tanto los animales domésticos como los salvajes
son reservorios de distintos serovares de leptospira, los cuales se mantienen en los túbulos
renales de algunos animales huéspedes, ocasionando infecciones crónicas asintomáticas y la
excreción de los patógenos durante grandes periodos a lo largo de su vida (Alonso & García,
2012)
Draghi de Benítez y colaboradores descubrieron que la leptospirosis fue la causante
infecciosa de aborto o muerte perinatal más importante en el nordeste argentino y han reportado
la reactividad de sueros para serovar L. tarassovi. Este serovar fue reportado por Albarracín en
un estudio que realizó en la Hoya de Loja, al encontrarse en un porcentaje de 2,9 % de muestras
estudiadas de sueros bovinos (Draghi, 2012)
Las ratas, especialmente las ratas pardas (Rattus norvegicus), sirven como
reservorios para L. interrogans, serovar L. copenhageni. El ganado es el más importante
reservorio para serovares L. hardjo y L. pomona y puede ser accidental para L. grippotyphosa;
el topillo de campo o campesino (Microtus arvalis), la rata almizclera (Ondatra zibethicus) y
los marsupiales son los más importantes reservorios para el serovar grippotyphosa.
20
CAPÍTULO 2
MARCO METODOLÓGICO
2.1. METODOLOGÍA
Para esta investigación se realizó un enfoque cuantitativo, por medio de la
utilización de una batería de antígenos vivos con 10 diferentes serovares que se enfrentarán a
anticuerpos del suero de bovinos en diferentes diluciones.
2.2. MÉTODOS
Diseño No experimental transversal correlacional. Las muestras de sangre de
animales bovinos incluidos en el estudio se tomaron en la Hoya de Loja, en las fincas de las
parroquias urbanas y rurales del cantón Loja (Anexo 3).
Los sueros obtenidos de las muestras fueron trasladados en una nevera portátil al
proceso de Zoonosis del Instituto Nacional de Investigación en Salud Pública (INSPI). Se
utilizó la técnica de microaglutinación en placa (MAT), para el screening y titulación de
Leptospira interrogans en sueros de sangre bovina.
2.3. HIPÓTESIS
El cantón Loja presenta el 30% de positividad en el ganado bovino, para Leptospira
interrogans, con mayor circulación de los serovares L. wolffi, L icterohaemorrhagiae. L.
pomona, L. hardjo y L. canícola.
2.4. UNIVERSO Y MUESTRA
Se aplicó el muestreo probabilístico aleatorio estratificado, para calcular el número
de muestras de población bovina, la prevalencia se determinó con el uso de la fórmula, en donde
se dividirá el número de animales reactores entre el número total de animales.
2.4.1. Población
Según registro de la Agencia Ecuatoriana de Aseguramiento de la Calidad Agraria
(Agrocalidad) del año 2012, la población de ganado bovino del cantón Loja contaba con 40109
21
animales, distribuida en los hatos ganaderos de las cuatro parroquias urbanas y 13 parroquias
rurales del cantón Loja (Agrocalidad, Loja 2012, segunda fase).
2.4.2. Muestra
Para calcular el tamaño de la muestra se aplicó la siguiente fórmula:
PQ
K
EN
PxQxNN
2
2
1
, donde
N = Tamaño de la muestra
P = Probabilidad que se cumpla (0,05)
Q = Probabilidad que no se cumpla (0,05)
E2= Constante (0,05 – 0,11)
K2= Constante (2)
N= Número de animales
25.0
2
08.01109.40
)109.40(25,0
2
2
n ;
25.00016,0108.40
027.10n ; ;
25.017.64
027.10n ; 157n
Se utilizó el cálculo de la fracción para muestreo por parroquias siguiente:
100xN
nF ; 100
109.40
157xF ; 391,0F
El tamaño muestral requerido fue conformado por 157 animales de la población
total de bovinos del cantón Loja, de ambos sexos, que cumplieron criterios de inclusión,
procedentes de la Hoya de Loja, parroquias urbanas y rurales.
22
2.5. OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES
2.6. GESTIÓN DE DATOS
Se utilizó registros para la toma de muestras y análisis de los sueros de la sangre
bovina, tomando en cuenta los criterios de inclusión y exclusión así como los permisos de los
propietarios del ganado bovino.
2.6.1. Criterios de inclusión
1. Bovinos hembras y toros sementales, ≥ de 3 meses de edad.
2. Muestras tomadas durante el período de estudio en el cantón Loja.
3. Muestras que cumplan con la calidad requerida.
4. Permiso de propietarios - miembros de la Asociación de Ganaderos del Cantón Loja
para la toma de muestras.
5. Animales no vacunados.
Variable Definición Dimensión Indicador Instrumento Expresión
Leptospira Género de Bacterias
espirochaetales,
incluye especies
patogénicas y
saprofíticas
Positivo
Crecimiento
Negativo
Crecimiento en
medios artificiales
107 -108 Cultivo Nominal
Ganado
Bovino
Mamífero rumiante
de una subfamilia
de los bóvidos.
vacas, toros, toretes Sexo: macho y
hembra
Observación:
características
fenotípicas.
Nominal
Serovares de
Leptospira
Microorganismos
infecciosos,
clasificados, según
los antígenos que
presentan en la
superficie celular,
que permite
diferenciar a un
microorganismo a
nivel de subespecie.
L. pomona,
L. canícola.
L.
icterohaemorrhagia
e
L. wolffi
L. hardjo etc.
Títulos 1:100 –
1:3200
Prueba de
Microaglutinacion en
Placa MAT
Nominal
MAT Prueba de
aglutinación
microscópica basad
en la reacción
antígeno anticuerpo
Positiva Negativa
para antígenos de
Leptospira
+
++
+++
++++
Prueba estándar para
detección y titulación
de anticuerpos
antileptospira
Nominal
23
2.6.2. Criterios de exclusión
1. Machos no sementales y hembras < de 3 meses de edad.
2. Animales procedentes de otros cantones.
3. Muestra tomadas fuera del periodo de estudio.
4. Calidad de la muestra no apta para el ensayo.
5. Animales vacunados.
6. Falta de permiso para la toma de muestras de propietarios - miembros de la Asociación
de Ganaderos del Cantón Loja.
2.7. CRITERIOS ÉTICOS DE LA INVESTIGACIÓN
Los derechos humanos de las personas en particular los propietarios de los hatos
ganaderos con animales enfermos con Leptospirosis aceptaron voluntariamente su análisis,
serán informados confidencialmente sobre el objetivo de estudio aplicando los principios
bioéticos con autonomía y respeto de las personas (Anexo 6).
24
CAPÍTULO 3
RESULTADOS
3.1. ANTECEDENTES DE LA POBLACIÓN
La sangre fue obtenida de la vena yugular de los bovinos, previa sujeción de los
animales de un universo de 40.109, y un tamaño muestral de 157 bovinos del Cantón Loja, en
las 4 parroquias urbanas y 13 rurales, estas se analizaron en el INSPI Quito-Ecuador, los cuales
fueron transportados en una nevera portátil con hielo seco o picado a 4ºC y conservados hasta
su análisis.
3.2. ESTUDIO DE CAMPO
El universo de la presente investigación se constituyó con 40109 de cabezas de
ganado registradas en el cantón Loja, provincia de Loja; el tamaño muestral se conformó, de
acuerdo con la fórmula aplicada para el cálculo, por 157 muestras de animales procedentes de
cuatro parroquias urbanas y 13 rurales del cantón, 45 machos y 112 hembras, los que
cumplieron los criterios de inclusión. La información requerida para el estudio sobre cada
animal y de la muestra de suero correspondiente fue registrada en la ficha de recolección de
datos. (Anexo 4). Las muestras, recolectadas durante el periodo de estudio, julio - diciembre
de 2014, fueron transportadas en una nevera portátil para análisis por la prueba de
microaglutinación en tubo (MAT) en el laboratorio del Instituto Nacional de Investigación en
Salud Pública (INSPI) del proceso de Zoonosis, en la ciudad de Quito, Ecuador.
TABLA 1. PRESENCIA DE ANTICUERPOS CONTRA LEPTOSPIRA INTERROGANS EN
GANADO BOVINO EN EL CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
Sueros bovinos Número Porcentaje
Negativos 65 41,4
Positivos 92 58,6
Total 157 100
Fuente: Investigación Directa
Elaboración: El Autor
Análisis de la Tabla 1: Para detección de reactividad para L. interrogans por MAT se
utilizaron las diluciones de sueros bovinos 1:100 frente a antígenos de diferentes serovares de
leptospiras. Los resultados revelaron una seroprevalencia de 58,60 %, lo que evidenció que
más de la mitad del ganado del muestreo ha tenido el contacto con las cepas de leptospiras.
25
TABLA 2. PRESENCIA DE ANTICUERPOS DE LEPTOSPIRA INTERROGANS EN GANADO
BOVINO, SEGÚN SEXO EN EL CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
Sexo
Muestras Total
Negativos Positivos
∑ % ∑ % ∑ %
Machos 16 35,56 29 64,44 45 28,66
Hembras 49 43,75 63 56,25 112 71,34
Total 65 41,4 92 58,6 157 100
Fuente: Investigación directa
Elaboración: El Autor
Análisis de la Tabla 2: El tamaño muestral estuvo conformado por 71,34% de hembras y 28,66
% de machos del ganado bovino. A través de la técnica MAT se detectó el 64,44% de las
muestras positivas para L. interrogans entre machos, a pesar que las hembras tenían la mayor
representación en muestreo.
TABLA 3. MUESTRAS REACTIVAS PARA L. INTERROGANS EN GANADO BOVINO,
SEGÚN SEXO, DISTRIBUIDAS EN LAS PARROQUIAS RURALES Y URBANAS, CANTÓN
LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
Parroquias Cantón Loja
Muestras de Machos Muestras de Hembras Total
∑ % ∑ % ∑ %
Parroquias urbanas
El Valle 0 0 12 100,00 12 100
San Sebastián 1 20,00 4 80,00 5 100
Sucre 0 0 1 100,00 1 100
Sagrario 2 50,00 2 50,00 4 100
Subtotal 3 13,64 19 86,36 22 23,91
Parroquias rurales
El Cisne 1 100,00 0 0,00 1 100
Gualel 5 45,45 6 54,55 11 100
Chuquiribamba 1 14,29 6 85,71 7 100
Taquil 1 50,00 1 50,00 2 100
Chantaco 0 0 3 100,00 3 100
Santiago y San Lucas 7 43,75 9 56,25 16 100
Jimbilla 4 80,00 1 20,00 5 100
Malacatos 2 28,57 5 71,43 7 100
San Pedro de Vilcabamba 0 0 1 100,00 1 100
Vilcabamba 0 0 5 100,00 5 100
Quinara y Yangana 5 41,67 7 58,33 12 100
Subtotal 26 37,14 44 62,86 70 76,09
Total 29 31,52 63 68,48 92 100,00
Fuente: Investigación Directa
Elaboración: El Autor
26
GRÁFICO 1. MUESTRAS REACTIVAS PARA L. INTERROGANS EN GANADO BOVINO,
SEGÚN SEXO, DISTRIBUIDAS EN LAS PARROQUIAS RURALES Y URBANAS DEL
CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
Análisis de la Tabla 3: De los 92 sueros bovinos positivos, provenientes de las distintas
parroquias rurales del cantón Loja, el 31,52% correspondió a las muestras de los machos y el
68,48%a las de hembras. De todas muestras reactivas a leptospiras, procedentes de las
parroquias urbanas, 86,36% fueron obtenidas de hembras, mientras que las 13,64 eran
machos. En general, el mayor número de muestras reactivas se presentó entre hembras en
todas las parroquias, a excepción de El Cisne y Jimbilla, donde la mayor positividad se
presentó entre machos.
100%
80%
100%
50%
86,36%
0%
54,55%
85,71%
50%
100%
56,25%
20%
71,43%
100% 100%
58,33%62,86%
68,48%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
120%
Machos Hembras
27
TABLA 4. PRESENCIA DE ANTICUERPOS PARA L. INTERROGANS EN GANADO
BOVINO EN PARROQUIAS RURALES Y URBANAS DEL CANTÓN LOJA, JULIO-
DICIEMBRE DE 2014
Cantón Loja Muestras
Parroquias Positivos Negativos Total
∑ % ∑ % ∑ %
Parroquias urbanas
El Valle 12 52,17 11 47,83 23 100
San Sebastián 5 55,56 4 44,44 9 100
Sucre 4 66,67 2 33,33 6 100
Sagrario 1 100,0 0 0 1 100
Subtotal 22 56,41 17 43.59 39 24,84
Parroquias rurales
El Cisne 1 20,00 4 80,00 5 100
Gualel 11 68,75 5 31,25 16 100
Chantaco 3 75,00 1 25,00 4 100
Chuquiribamba 7 87,50 1 12,50 8 100
Taquil 2 25,00 6 75,00 8 100
Malacatos 7 70,00 3 30,00 10 100
San Pedro de Vilcabamba 1 50,00 1 50,00 2 100
Vilcabamba 5 83,33 1 16,67 6 100
Yangana y Quinara 11 52,38 10 47,62 21 100
Jimbilla 5 71,43 2 28,57 7 100
Santiago y San Lucas 17 54,84 14 45,16 31 100
Subtotal 70 59,32 48 40,78 118 75,16
Total 92 58,60 65 41,40 157 100,00
Fuente: Investigación directa
Elaboración: El Autor
GRÁFICO 2. PRESENCIA DE ANTICUERPOS PARA L. INTERROGANS EN GANADO
BOVINO EN PARROQUIAS RURALES Y URBANAS DEL CANTÓN LOJA, JULIO-
DICIEMBRE DE 2014
0
20
40
60
80
100
125 4 1 1
113 7 2 7 1 5 11 5
17
52,17 55,5666,67
100
20
68,7575
87,5
25
70
50
83,33
52,38
71,43
54,84
Muestras Positivos ∑ Muestras Positivos %
28
Análisis de la Tabla 4: En esta tabla se aprecia que la seroprevalencia de L. interrogans dentro
del grupo de animales de las parroquias rurales (59,32%) y parroquias urbanas (56,41%) es
similar, a pesar de que el segundo grupo es más representativo. Entre las parroquias urbanas,
en El Valle se recolectó el mayor número de las muestras de animales bovinos, pero la
positividad dentro de este grupo fue más baja, entre todas. De las parroquias rurales, con la
mayor representatividad de muestras fueron Santiago y San Lucas, Yangana y Quinara, y
Gualel, donde se detectó la seroprevalencia del 54,84%, 52,38 % y 68,75%, en su orden,
mientras que el más alto nivel de positividad se reportó en Chuquiribamba, con 87,50%,
Vilcabamba, con 83,33% y Chantaco, con 75,00%, pero debido al pequeño número de animales
incluidos al estudio de estas parroquias, los resultados no pueden considerarse como
concluyentes.
TABLA 5. SEROVARES CIRCULANTES DE L. INTERROGANS EN EL GANADO BOVINO
DEL CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
Serovares Reacción positiva por MAT
Número %
L. grippothyphosa 2 1,64
L. icterohaemorrhagiae 2 1,64
L. canicola 53 43,44
L. autumnalis 0 0
L. hebdomadis 0 0
L. hardjo 16 13,12
L. sejroe 49 40,16
L. wolffi 0 0
L. pomona 0 0
L. bataviae 0 0
Total 122 100,00
Fuente: Investigación directa
Elaboración: El Autor
Análisis de la Tabla 5: se representan los serovares de L. interrogans que fueron identificados
por la prueba MAT en los 92 sueros que resultaron ser positivos para presencia de anticuerpos
para este género patógeno; cabe destacar que algunas de las muestras de bovinos se mostraron
reactivas a varios serovares simultáneamente. Los resultados obtenidos demostraron que el
serovar L. canícola fue de mayor circulación (43,44%), seguido por L. sejroe (40,16%) y L.
hardjo (13,12%).La reactividad para los serovares L. grippothyphosa y L. icterohaemorrhagiae
fueron detectadas en 2 ocasiones para cada uno (1,64%) (Anexo 5).
29
TABLA 6. SEROVARES CIRCULANTES DE L. INTERROGANS EN EL GANADO BOVINO
EN LAS PARROQUIAS URBANAS Y RURALES DEL CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE
DE 2014
Fuente: Investigación Directa
Elaboración: El Autor
Parroquias L.
grippothyphosa
L. ictero-
haemorrhagiae L. canícola L. hardjo L. sejroe Total
Urbanas # % # % # % # % # % # %
El Valle - - 1 7,14 10 71,43 - - 3 21,43 14 100
San Sebastián - - - - 4 57,14 - - 3 42,86 7 100
Sucre - - - - 2 33,33 - - 4 66,67 6 100
Sagrario - - - - - - 1 100,00 - - 1 100
Subtotal: - - 1 3,57 16 57,14 1 3,57 10 35,72 28 23
Rurales
El Cisne - - - - - - 1 100,00 1 100
Gualel 1 5,88 - - 4 23,53 4 23,53 8 47,06 17 100
Chantaco - - - - 3 50,00 2 33,33 1 16,67 6 100
Chuquiribamba - - - - 5 50,00 5 50,00 10 100
Taquil - - - - - - 2 100,00 2 100
Malacatos - - - - - - 5 62,50 3 37,50 8 100
San Pedro de
Vilcabamba - - - - 1 33,33 1 33,33 1 33,33 3 100
Yangana y Quinara - - 1 7,14 11 78,57 - - 2 14,29 14 100
Jimbilla 1 20,00 - - 2 40,00 - - 2 40,00 5 100
Santiago y San Lucas - - - - 7 33,33 - - 14 66,67 21 100
Vilcabamba - - - - 4 57,14 - - 3 42,86 7 100
Subtotal 2 2,13 1 1,06 37 39,36 15 15,96 39 41,49 94 77
Total 2 1,64 2 1,64 53 43,44 16 13,12 49 40,16 122 100
30
GRÁFICO 3. SEROVARES CIRCULANTES DE L. INTERROGANS EN EL GANADO
BOVINO ENLAS PARROQUIAS URBANAS Y RURALES DEL CANTÓN LOJA, JULIO-
DICIEMBRE DE 2014
Análisis de la Tabla 6: Durante el periodo de estudio se evidenció la mayor circulación entre
animales del serovar L. canícola (43,44%), que tuvo la más alta presencia entre ganado bovino
de las parroquias urbanas (57,14%), especialmente El Valle (71,43%) y San Sebastián
(57,14%); solo en la parroquia Sagrario que aportó con un pequeño número de muestras para
el estudio, no fueron detectados los casos positivos para el mencionado serovar.Entre bovinos
de las parroquias rurales se observó la circulación del serovar L. canícola de 39,36%, con la
más alta entre ganado de las parroquias Yangana y Quinara (78,57%) y Vilcabamba (57,14%).
Las parroquias El Cisne, Taquil y Malacatos, que aportaron al presente estudio con 1-5
muestras positivas para L. interrogans, no revelaron la circulación de este serovar.
El serovar de L. sejroe fue el segundo de los de mayor circulación entre ganado
bovino del cantón Loja (40,16%), tuvo presencia en las parroquias rurales con 41,49%, y en
parroquias urbanas con 35,72%; se registró el mayor nivel en Sucre (66,67%), Santiago y San
Lucas (66,67%), que fueron las parroquias que aportaron con mayor número de muestras para
estudio. El serovar L. hardjo, tercero por circulación entre ganado bovino del cantón Loja
(13,12%), tuvo la mayor presencia en las parroquias rurales, con 15,96%, sin encontrarse en
las muestras provenientes de Chuquiribamba, Yangana y Quinara, Jimbilla, Santiago y San
Lucas, y Vilcabamba. La circulación del serovar L. hardjo en las parroquias urbanas fue
0,00%
10,00%
20,00%
30,00%
40,00%
50,00%
60,00%
70,00%
80,00%
90,00%
100,00%
L. grippothyphosa L. icterohaemorrhagiae L. canícola L. hardjo L. sejroe
31
considerablemente menor (3,57%), y la única muestra positiva provino de la parroquia
Sagrario. En las muestras provenientes de la parroquia Gualel se reportó la mayor diversidad
de serovares circulantes (4): L. grippothyphosa, L. canícola, L. hardjo y L. sejroe. En las
parroquias Quinara, Yangana, Jimbilla, Chantaco, San Pedro deVilcabamba se evidenció la
circulación de 3 serovares: L. icterohaemorrhagiae, L. canícola, L. sejroe o L. hardjo. En las
parroquias rurales de Santiago, Vilcabamba, Chuquiribamba, Malacatos y en las parroquias
urbanas Sucre y San Sebastián la L. interrogans fue representada con 2 serovares: L. canícola,
L. hardjo o L. sejroe. En la parroquia Taquil durante el periodo de investigación se detectó la
presencia de un solo serovar: L. hardjo.
TABLA 7. TÍTULOS PARA SEROVARES DE L. INTERROGANS DETECTADOS POR MAT
EN SUEROS DE GANADO BOVINO, CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
Títulos Casos
∑ %
1: 100 84 68,85
1 : 200 32 26,23
1 : 400 5 4,10
1 : 800 1 0,82
1 : 1600 - -
1: 3200 - -
Total 122 100,00
Fuente: Investigación directa
Elaboración: El Autor
GRÁFICO 4. TÍTULOS PARA SEROVARES DE L. INTERROGANS DETECTADOS POR
MAT EN SUEROS DE GANADO BOVINO, CANTÓN LOJA, JULIO-DICIEMBRE DE 2014
Análisis de la Tabla 7: Indica la determinación de títulos correspondientes. El título más
frecuentemente determinado fue 1:100, con el 68,55 %, seguido por el título 1:200 con el
26,23%. Los títulos de 1:400 fueron establecidos en 5 muestras con el 4,10%, el titulo 1:800
0
20
40
60
80
1;100 1;200 1;400 1;800 1;16001;3200
68,85
26,23
4,1 0,82 0 0
1;100
1;200
1;400
1;800
1;1600
1;3200
32
de encontró una sola muestra con el 0,82%, los títulos más elevados no estuvieron presentes.
TABLA 8. DISTRIBUCIÓN DE LOS TÍTULOS DETECTADOS POR MAT EN MUESTRAS
DE GANADO BOVINO, SEGÚN SEROVARES DE L. INTERROGANS, CANTÓN LOJA,
JULIO-DICIEMBRE DE 2014
Títulos
Serovar
Total
L. gryppothyposa L. ictero -
haemorrhagiae L. canícola L. hardjo L. sejroe
∑ % ∑ % ∑ % ∑ % ∑ % ∑ %
1:100 2 2,37 - - 38 45,24 11 13,10 33 39,29 84 100
1: 200 - - 2 6,25 11 34,38 3 9,37 16 50,00 32 100
1: 400 - - - - 3 60,00 2 40,00 - - 5 100
1: 800 - - - - 1 100,00 - - - - 1 100
1: 1600 - - - - - - - - - - - -
1: 3200 - - - - - - - - - - - -
Total 2 1,64 2 1,64 53 43,44 16 13,11 49 40,16 122 100
Fuente: Investigación directa
Elaboración: El Autor
GRÁFICO 5. DISTRIBUCIÓN DE LOS TÍTULOS DETECTADOS POR MAT EN MUESTRAS
DE BOVINO, SEGÚN SEROVARES DE L. INTERROGANS, CANTÓN LOJA, JULIO-
DICIEMBRE DE 2014
Análisis de la Tabla 8: Al realizar el análisis para identificación de serovar por prueba MAT
de los 92 sueros bovinos positivos para L. interrogans se detectaron 122 títulos, debido que
algunas de las muestras reaccionaron con tres y dos antígenos de diferentes serovar.
En los sueros probados, el título 1:100 fue el más frecuente y se detectó para los
serovares L. canícola (45,24%), L. sejroe (39,29%), L. hardjo, (13,10%) y L. grippothyphosa
(2,37%). El título 1:200 fue más frecuentemente para serovar L. sejroe (50,00%), seguido por
0,00%
20,00%
40,00%
60,00%
80,00%
100,00%
1;100 1;200 1;400 1;800 1;1600 1;3200
2,37% 0 0 0 0 006,25%
0 0 0 0
45,24%34,38%
60%
100%
0 0
13,10% 9,37%
40%
0 0 0
39,29%50%
0 0 0 0
L. gryppothyposa L. ictero - haemorrhagiae L. canícola L. hardjo L. sejroe
33
L. canícola (34,38 %), L. hardjo (9,37%) y L. icterohaemorrhagiae (6,25%).El titulo 1:800 se
detectó para el serovar L. canícola en una sola muestra; el título 1:400 para antígenos del mismo
serovar se encontró en 3 muestras (60%), y para antígenos del serovar L. hardjo en 2 muestras
(40%).
De las 92 muestras de sueros bovinos positivos para L. interrogans, 27 fueron
reactivos para dos o tres diferentes serovares de Leptospira al mismo tiempo. Seis muestras
provenían de las parroquias urbanas y el resto (21) de las rurales. En tres parroquias rurales,
Gualel, San Pedro y Chantaco, reaccionaron con antígenos de tres serovares: L. canícola, L.
sejroe, y L. hardjo. Las otras 24 muestras de sueros reaccionaron con antígenos de dos
diferentes serovares. Los 21 sueros fueron positivos para L. canícola y L. sejroe, 6 de ellos
fueron obtenidas del ganado bovino de las parroquias urbanas y 18 de las parroquias rurales,
de las cuales 12 reaccionaron a L. canícola y L. sejroe, 2 a L. sejroe y L. hardjo, 1 a L.
grippothyphosa y L. sejroe, 1 a L. canícola y L. hardjo, 1 a L. hardjo y L. sejroe, y 1 L.
icterohaemorrhagiae y L. canícola. De las muestras recolectadas en las parroquias rurales, dos
reaccionaron con antígenos de serovares L. sejroe y L. hardjo y otras dos con sueros de L.
canícola y L. sejroe; una muestra fue reactiva para la L. canícola y L. icterohaemorrhagiae y
una para la L. canícola y L. hardjo. (Anexo 9.12)
34
CAPÍTULO 4
DISCUSIÓN
4.1. Contrastación empírica: Esta investigación demostró una seroprevalencia de 58,60 %
de anticuerpos contra leptospira spp en los hatos ganaderos del cantón Loja provincia de Loja
– Ecuador. A diferencia del estudio publicado por Román et al., 2014 informo una
seroprevalencia del 75% en el cantón Loja (Román & Chávez, 2014).
Otras publicaciones mencionan cifras muy elevadas como el 82,20 % al estudiar
253 muestras de sueros bovinos en Brasil, y muy bajas en Sudáfrica al analizar 860 muestras
encontró el 2% de prevalencia Cervantes 2002 (Meza & Moreira, 2011)
A través de la técnica de MAT, se detectó el 64, 44 % de las muestras positivas
para leptospirosis entre machos, a pesar que las hembras tenían mayor representación en el
muestreo. Estos resultados no concuerdan con los obtenidos por Betancur, et al., 2013, en
Montería Colombia que al estudiar sueros de 26 toros y 137 vacas procedentes de 28 fincas
con antecedentes de problemas reproductivos, encontró 11 toros positivos y 47 vacas positivas.
En este sentido, es probable que la infección sea por transmisión horizontal como producto de
la relación con otras especies animales en la zona, o por las condiciones agroecológicas del
lugar.
En el mismo año 2011, Ojeda, en el cantón Quilanga, provincia de Loja, al analizar
96 sueros bovinos por la prueba de MAT, estableció la presencia de los serovares de la siguiente
manera: L. sejroe - 39 casos positivos (40,6%), L. autumnalis - 32 (33,3%), L.
icterohaemorrhagiae - 5 (5,2%), L. pomona, L. wolffi y L. australis - 4 (4,2 %) de cada uno, L.
canícola y L. hebdomadis -3 (3,1%) de cada uno, y de L. bataviae y L. grippothyphosa - un
caso de cada uno o 1%. (Ojeda, 2012)
Así mismo Román et al., en el 2014 al estudiar 449 muestras de sueros por la prueba
de MAT, en el cantón Loja, encontró que el mayor porcentaje de serovares fueron en L.
bataviae swart (24,6%), L. javanica (21,3%), L. sejroe (15,9%), L. canícola (7.9%), L.
icterohemorragiae (7,7%) (Román & Chávez, 2014)
Los serovares circulantes de leptospira interrogans en el ganado bovino en las
parroquias urbanas y rurales del cantón Loja dependen de las características meteorológicas de
los lugares de estudio de las distintas parroquias, tanto urbanas como rurales, que están
localizadas en una altitud desde los 1618 msnm hasta los 2720 msnm son diversas, con climas
35
temperados húmedos, subtropical subhúmedo, subtropical seco, temperado húmedo,
subtemperado, muy húmedo y temperado subhúmedo. La variación y diversidad de serovares
circulantes, aparte de la influencia del clima, dependen del suelo, estaciones, condiciones
ambientales y de la presencia de tipo de los reservorios de mantenimiento y accidentales (Ojeda,
2012).
La interpretación de los resultados obtenidos por el MAT es fundamental para
diseñar estrategias de control preventivo o curativo; los aspectos que deben tomarse en
consideración son los títulos de anticuerpos, serovares circulantes, manifestaciones
reproductivas y su persistencia, mostrando diferencias entre animales infectados y vacunados.
Los animales que poseen títulos bajos, de 1:100 a 1:400, y que tienden a desaparecer, se
observan entre animales vacunados, también corresponden a casos de la exposición previa a las
leptospiras, o inicio del proceso infeccioso.
Cabe destacar que para conocer la situación sanitaria del rebaño es necesario
determinar el promedio de los títulos de anticuerpos de la población animal. Resultados
negativos o sospechosos con títulos bajos requieren una segunda muestra para prueba; en caso
de presentarse tormenta de abortos en bovinos y descartadas otras patologías, con títulos de
anticuerpos mayores de 1:200 en una sola muestra de suero, se debe considerar una infección
activa. Durante el presente estudio fueron detectados cinco animales con los títulos de 1:400
(2,65%) y uno con 1:800 (0,53%), niveles que, generalmente, se relacionan con el proceso
infeccioso en curso.
En la presente investigación al analizar 92 sueros bovinos positivos se detectaron
para L. interrogans 122 títulos, debido a que algunas de las muestras reaccionaron con tres y
dos antígenos de diferentes serovares. En los sueros probados, el título 1:100 fue el más
frecuente y se detectó para los serovares L. canícola (45,24%), L. sejroe (39,29%), L. hardjo,
(13,10%) y L. grippotyphosa (2,37%). El título 1:200 fue más frecuentemente para serovar L.
sejroe (50,00%), seguido por L. canícola (34,38 %), L. hardjo (9,37%) y L.
icterohaemorrhagiae (6,25%).El titulo 1:800 se detectó para el serovar L. canícola en una sola
muestra; el título 1:400 para antígenos del mismo serovar se encontró en 3 muestras (60%), y
para antígenos del serovar L. hardjo en 2 muestras (40%).
Román et al., al estudiar 321 muestras en el cantón Loja, encontró los siguientes
títulos de 1/100 (71,5%), 403 títulos de 1/200 (89, 8%), 134 títulos de 1/400 (29,8%), y una
muestra de 1/800 (0,2%) (Román & Chávez, 2014)
36
Varios autores, al detectarse reactividad por MAT, sugieren aplicar protocolo de
observación clínica y monitoreo activo, incluyendo análisis de muestras de sueros por
microaglutinación. Se conoce que los títulos elevados y persistentes que muestran los animales
infectados, descienden después de un tratamiento (Vado, 2014).
Cada serovar tiene un hospedador reservorio, al cual está bien adaptado, con
cuadros asintomáticos y periodos de excreción prolongados, y hospedadores accidentales, con
curso agudo y periodo de excreción limitado. El hospedador de mantenimiento de la L. canícola
es el perro, y accidentales son: la vaca, cerdo, caballo, gatos y personas; para la L. sejroe el
reservorio es el bovino, y accidental los animales salvajes; para serovares L. hardjo, L. pomona,
L. grippothyphosa el hospedador de mantenimiento es el bovino y hospedadores accidentales
son ovinos y animales salvajes, y personas; para la L. icterohaemorrhagiae el hospedador de
mantenimiento son las ratas, y accidentales: perros, vacas, caballos, cerdos, ovejas y personas.
La principal fuente de infección es la orina, por contacto directo o indirecto, a través
del agua, suelo, alimentos contaminados, su control es difícil debido al alto número de
reservorios naturales presentes en la fauna endógena y exógena de los predios. La diversidad
de las condiciones y cambios climatológicos asociados al calentamiento global, que ponen en
evidencia estaciones lluviosas prolongadas o atípicas, alternando con periodos de verano
extremo, constituyen otro factor de importancia que influye a la dinámica de circulación y
propagación de L. interrogans con su diversidad de serovares. La prevalencia de los serovares
en una población tanto animal como humana, depende del tipo de serovares que portan, de los
diferentes hospedadores encontrados en la zona, así como de las condiciones climáticas locales
y los diferentes regímenes de producción agrícola en dichas áreas (Organización Mundial de
Sanidad Animal, 2013).
4.2. Limitaciones: En la recolección de muestras de sangre no hubo la predisposición de
parte de los ganaderos para la toma de muestras, debido al daño que se puede ocasionar y
algunas veces no se encontraron en el lugar, por lo que fue necesario volver por segunda
ocasión.
4.3. Líneas de investigación: Se recomienda técnicas de biología molecular para la
diferenciación de cepas de los serovares en estudio.
4.4. Aspectos relevantes: La enfermedad se encuentra presente en todas las parroquias
urbanas y rurales del cantón Loja, con diferentes serovares y títulos.
37
CAPÍTULO 5
PROPUESTA EDUCATIVA Y TÉCNICA PARA LA PREVENCIÓN Y CONTROL
DE LA LEPTOSPIROSIS BOVINA EN EL CANTÓN LOJA
Antecedentes: La leptospirosis es una zoonosis de distribución mundial, la cual se encuentra
presente en países desarrollados y en vías de desarrollo, tanto en zonas rurales como urbanas,
por lo general es más frecuente en países que tiene un clima cálido y húmedo, esta zoonosis
presenta mayor transmisión en las épocas de lluvia en países como el Ecuador.
En los últimos años se evidenció el incremento de casos positivos de Leptospirosis en el ganado
bovino del Cantón Loja, este problema está afectando tanto a la salud, como economía de los
ganaderos y habitantes del Cantón Loja, el incremento de bovinos afectados de los hatos
ganaderos del cantón Loja se debe a la deficiente bioseguridad, debido a la escases de recursos
para la construcción de ambientes adecuados para su hábitat, falta de vacunaciones con los
serovares del lugar, sumado a falta de capacitación y conocimiento adecuado por parte de los
ganaderos para su control. Por lo que es importante una propuesta para la prevención y control
de la enfermedad.
Objetivo General
Realizar programas de capacitación y erradicación de la leptospirosis bovina en las
parroquias urbanas y rurales del cantón Loja.
Objetivos específicos
Capacitar a los ganaderos del cantón Loja, en el manejo de planes sanitarios para la
prevención y control de la leptospirosis bovina.
Implementar programas de erradicación de roedores y animales salvajes portadores de
la enfermedad para prevenir la propagación de la leptospirosis.
Colaborar en la organización de los ganaderos para gestionar en forma conjunta ante
los organismos de desarrollo, el apoyo económico y técnico para prevención y
erradicación de la leptospirosis.
Metodología
Elaboración de folletos técnicos con contenidos sobre el manejo de planes sanitarios
para la prevención y control de la leptospirosis, los cuales estarán dirigidos a los
ganaderos del cantón Loja.
38
Convocatoria a los ganaderos para eventos de capacitación, donde se reunirán a los
ganaderos de cada parroquia, con la finalidad de que participen en los eventos de
capacitación a desarrollarse.
Desarrollo de los eventos de capacitación, los cuales serán realizados de acuerdo a un
cronograma y los responsables de los mismos serán específicamente los funcionarios
del MAGAP, CONEFA, Y AGROCALIDAD.
Actividades
Preparación de planes sanitarios para la prevención y control de la leptospirosis, así
como programas de control de roedores y otros animales que propagan esta enfermedad.
Formación de agentes promotores del control sanitario.
Fortalecimiento de organizaciones comunitarias de ganaderos.
Difusión de resultados del proyecto.
Resultados Esperados
Diagnóstico de la prevalencia de leptospirosis: Concluido
Organización de promotores de control sanitario: Fortalecidos
Proyecto de control sanitario: Viable
Ganaderos: Capacitados
Aliados estratégicos: Comprometidos
Conclusión
El interés de la propuesta de prevención y control ha sido la de contribuir con
información, educación, salud y economía de los ganaderos que son afectados por la
Leptospirosis y se desarrollen actividades de higiene en sus comunidades.
Recomendaciones
Utilizar mandiles, botas, guantes los trabajadores que están en contacto con los bovinos.
Realizar vacunaciones periódicas al ganado vacuno.
Implementar lugares adecuados para el habitad de los bovinos, evitar y controlar el
ingreso roedores y otros animales portadores de la enfermedad
Si se identifica animales infectados, estos deben ser separados de los demás y tratados
por un médico veterinario.
Drenar aguas y suelos contaminados y correcto tratamiento de residuos infectados.
Vigilancia y control del ingreso de nuevos bovinos a los hatos ganaderos.
Tratamientos a base de dihidroestreptomicina.
39
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Conclusiones: los resultados de la investigación, permitieron llegar a las siguientes
conclusiones:
Se identificaron por la prueba MAT en los 92 sueros que resultaron ser positivos para
presencia de anticuerpos para L. interrogans en el cantón Loja; cabe destacar que
algunas de las muestras de bovinos se mostraron reactivas a varios serovares
simultáneamente. Los resultados obtenidos demostraron que el serovar L. canícola fue
de mayor circulación (43,44%), seguido por L. sejroe (40,16%) y L. hardjo (13,12%).
Los resultados revelaron por medio de la prueba de MAT en las muestras de sueros
bovinos para L. interrogans: positivos 58,60 % (92) y negativos el 41.4% (65), lo que
evidenció que más de la mitad del ganado del muestreo ha tenido el contacto con las
cepas circulantes de leptospiras.
Los títulos 1:100 predominaron entre sueros reactivos (68,85%) para los siguientes
serovares: L. canícola (45,24%), L. sejroe (39,29%), L. hardjo (13,10%), seguidos por
los títulos de 1:200 (26,23%), que fueron detectados para serovares L. sejroe (50%), L.
canícola (34,38%), L. hardjo (9,38%) y L. icterohaemorrhagiae (6,25%). Debido a que
los bovinos incluidos en el presente estudio no fueron vacunados contra leptospirosis.
De los 92 sueros bovinos positivos, provenientes de las distintas parroquias rurales
del cantón Loja, el 31,52% correspondió a las muestras de los machos y el 68,48%a
las de hembras. De todas muestras reactivas a leptospiras, procedentes de las
parroquias urbanas, 86,36% fueron obtenidas de hembras, mientras que las 13,64 eran
machos. En general, el mayor número de muestras reactivas se presentó entre hembras
en todas las parroquias, a excepción de El Cisne y Jimbilla, donde la mayor positividad
se presentó entre machos.
Recomendaciones
Concientizar a las autoridades respectivas y personal involucrado, sobre la necesidad
de disponibilidad de la prueba MAT estandarizada y su aplicación en el país, para
40
monitoreo de los casos reactivos, vigilancia epidemiológica de la enfermedad y control
de calidad de la población bovina de interés económico.
Promover y apoyar la aplicación de medidas preventivas y de control de los hatos
ganaderos, en el sector productivo, para evitar el contagio tanto del ganado bovino como
de los trabajadores con riesgo ocupacional, ya que la leptospirosis se transmite a través
del contacto con animales infectados o con ambientes contaminados.
Implementar laboratorios para la prueba de MAT, para un diagnóstico oportuno.
Difundir los resultados obtenidos en la presente investigación en el ámbito científico-
técnico de la salud humana y animal, así como en el sector productivo ganadero del
cantón Loja, recalcando hay mayor incidencia de L. interrogans en las hembras.
41
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42
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http://www.veterinaria.org/revistas/vetenfinf/vet_enf_inf_tripod/lepto/lepto.htm
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Provincia de Manabí. Manabí: Universidad Agraria del Ecuador. Obtenido de Tesis
Médico Veterinario Zottecnista de la Universidad Agraria del Ecuador.
17. Vado, A. S. (2014). Leptospirosis: una enfermedad ocupacional en trabajadores que
conviven con bovinos seropositivos en el Estado de Yucatán. Obtenido de
http://revista.medicina.uady.mx/revista/index.php/cienciayhumanismo/article/view/2/
3
18. Zoetis. (2014). Leptospira Canícola. Obtenido de
https://www.zoetisus.com/conditions/beef/leptospira-canicola.aspx
19. Zoetis. (2015). Leptospirosis. Obtenido de
https://ar.zoetis.com/conditions/bovinos/leptospirosis.aspx
20. Zoetis. (2015). Leptospira icterohaemorrhagiae. Obtenido de
https:///conditions/beef/leptospira-icterohaemorrhagiae.aspx
43
ANEXOS
ANEXO 1. TAXONOMIA DE LEPTOSPIRA
Reino: Monera Bacteria
Filo: Spirochaetes
Clase: Spirochaetes
Orden: Spirochaetales
Familia: Leptospiraceae
Género: Leptospira
Serogrupos: 25 Serotipos relacionados antigénicamente
Serotipos o serovares: 250 Taxón básico se diferencian entre sí por su
composición antigénica
Leptospira patogénicas
Leptospira Interrogans
Leptospira alstonni,
Leptospira borgpetersenii,
Leptospira santarosai,
Leptospira weilii,
Leptospira kirschneri,
Leptospira noguchii,
Leptospira alexanderi
Leptospira Intermedios u
Oportunistas
Leptospira broomii.
Leptospira fainei,
Leptospira inadai
Leptospira no Patogénica
Leptospira vanthielli
Leptospira meyeri,
Leptospira yanagawae
Leptospira terpstrae
Leptospira biflexa
Leptospira wolbachii
Fuente: (Salcán, 2012)
44
ANEXO 2. CLASIFICACIÓN DE L. INTERROGANS
Serogrupo Serovar
Icterohaemorrhagiae
bikini icterohaemorrhagiae ndambari
bog-vere ictero-No. 1 sarmin
budapest mankarso smithi
capenhageni monymusk weaveri
gem ndahambukuje naam
Pomona dania mozdok tropica
monjakov proechimis pomona
Sejroe
balcánica hardjo roumanica
caribe istrica ruparupae
dikkeni madanesis saxkoebing
geyawueera nyanza sejroe
guaricurus recreo wolffi
haemolytica ricardi
Canícola
bafani galtoni malaya
banjamin jonsis porttland-vere
bindjei kamituga scchueffneri
bronmi kasherski summeri
canícola
Autumnalis
alice fort-bragg rachmati
autumnalis lanka srebarna
bangkinang louisiana sumatra
bulcarica mooris tingo maria
erinacei-auriti orleans
Bataviae
argentiniensis belorussiae djatzi
balboa brasiliensis kobbe
bataviae claytoni paidjan
Hebdomadis
beye jules nona
borincana kabura perameles
georgia kambale szwajizak
goiano kremastos tabaquite
hebdomadis maru worsfoldi
jewaweera mini
Grippotyphosa canalzonae muelleri valbuzzi
gripotyphosa ratnapura venderhoedeni
Fuente: Prevalencia de leptospirosis en bovinos en el cantón Paján, provincia de Manabí, p. 5-
6. (Salcán, 2012)
45
ANEXO 3. LUGAR DE ESTUDIO
3.1. MAPA DE PARROQUIAS URBANAS Y RURALES DEL CANTÓN LOJA
Fuente: http://www.datuopinion.com/canton-loja. 2011
46
3.2. CARACTERÍSTICAS FÍSICO - CLIMÁTICAS
Nro. Cantón Loja
Altitud (msnm) Clima Parroquia
1 San Sebastián 2.080 Temperado Húmedo
2 El Valle 2.020 Temperado Húmedo
3 Sucre 2.100 Temperado Húmedo
4 El Sagrario 2.064 Temperado Húmedo
5 Yangana y Quinara 1.731 Subtropical Seco
6 Malacatos 1.470 Subtropical seco
7 Vilcabamba 1.570 Subtropical seco
8 San Lucas 2.430 Temperado Húmedo
9 Jimbilla 1.950 Temperado Húmedo
10 El Cisne 2.340 Temperado Húmedo
11 Santiago 2.430 Temperado Húmedo
12 Gualel 2.520 Temperado Húmedo
13 Taquil 2.280 Temperado Húmedo
14 Chuquiribamba 2.720 Subtemperado-muy
húmedo
15 San Pedro de
Vilcabamba 1.650 Subtropical seco
16 Chantaco 2.240 Temperado subhúmedo
Fuente: Plan Participativo de Fortalecimiento de la Democracia y Desarrollo del Cantón Loja.
Ilustre Municipio de Loja, 2011; Maldonado N, 2005.
47
ANEXO 4. FICHA DE RECOLECCIÓN DE DATOS
4.1. ANIMAL Y MUESTRA
Parroquia: Urbana Rural
Código:
Muestra: Suero
H M
Datos del animal: Edad ……….. Sexo
Vacunación contra leptospirosis: No SI
Tratado en antibióticos: No Si
Hábitat: Estabulado Semiestabulado No estabulado
Observaciones:…………………………………………………………………..
Fecha:…………………………………………………………………………….
Lugar:……………………………………………………………………………..
Responsable
48
4.2. LABORATORIO
Microaglutinación en placa (MAT). “Screening” para Leptospira interrogans
dilución de muestra de suero 1:100
Positivo Negativo
Microaglutinación en placa (MAT): titulación para serovares identificados
Dilución de suero
1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 1:3200
L. icterohaemorrhagiae,
L. canícola,
L. grippotyphosa
L. wolffi
L. pomona
L. bataviae
L. sejroe
L. autumnalis
L. hebdomadis
L. hardjo
Observaciones:……………………………………………………………………
Fecha:……………………………………………………………………………..
Lugar:………………………………………………………………………..............
Responsable
49
ANEXO 5. BASE DE DATOS PRIMARIOS
FECHA DE
RECOLECCION
CODIGO DE
LABORATORIO
IDENTIFICACIO
N PARROQUIAS
SEX
O
PROCEDENCI
A POR
PARROQUIAS
RESULTADO
TITULO SEROVAR
10-11-2014 68 6 Urbana H EL VALLE 1:200
L.
icterohaemorr
hagiae
10-11-2024 69 7 Urbana H EL VALLE 1:100 L. canícola
10-11-2024 70 3 Urbana M EL VALLE NEGATIVO NEGATIVO
10-11-2014 71 11 Urbana H EL VALLE 1:100 L. canícola
10-11-2014 72 4 Urbana H EL VALLE NEGATIVO NEGATIVO
10-11-2014 73 7 Urbana H EL VALLE NEGATIVO NEGATIVO
10-11-2014 74 6 Urbana H EL VALLE 1:100 L. canícola
10-11-2024 75 10 Urbana H EL VALLE 1:100 L. canícola
10-11-2024 76 3 Urbana H EL VALLE 1:100 L. canícola
10-11-2014 77 8 Urbana H EL VALLE NEGATIVO NEGATIVO
10-11-2014 78 10 Urbana H EL VALLE NEGATIVO NEGATIVO
10-11-2014 79 5 Urbana H EL VALLE 1:100 L. .canícola
10-11-2014 80 9 Urbana H EL VALLE
1:200
1:100
L. canícola
L. hardjo
10-11-2014 81 12 Urbana H EL VALLE NEGATIVO NEGATIVO
10-11-2014 82 11 Urbana H EL VALLE 1:100 L. canícola
10-11-2014 83 2 Urbana H EL VALLE NEGATIVO NEGATIVO
10-11-2014 84 1 Urbana H EL VALLE NEGATIVO NEGATIVO
10-11-2014 85 8 Urbana H EL VALLE NEGATIVO NEGATIVO
10-11-2014 86 2 Urbana H EL VALLE 1:100 L. canícola
10-11-2014 87 4 Urbana H EL VALLE 1:400
1:100
L. canícola
L. sejroe
10-11-2014 88 1 Urbana H EL VALLE NEGATIVO NEGATIVO
10-11-2014 89 5 Urbana H EL VALLE NEGATIVO NEGATIVO
10-11-2014 90 9 Urbana H EL VALLE 1:200 L. sejroe
50
FECHA DE
RECOLECCION
CODIGO DE
LABORATORIO
IDENTIFICACIO
N PARROQUIAS SEXO
PROCEDENCIA POR
PARROQUIAS
RESULTADO
TITULO SEROVAR
12-11-2014 149 1 Urbana H SAN
SEBASTIAN NEGATIVO NEGATIVO
12-11-2014 150 2 Urbana H SAN
SEBASTIAN NEGATIVO NEGATIVO
12-11-2014 151 3 Urbana H SAN
SEBASTIAN 1:100 L. canícola
12-11-2014 152 4 Urbana H SAN
SEBASTIAN NEGATIVO NEGATIVO
12-11-2014 153 5 Urbana H SAN
SEBASTIAN
1:100
1:200
L. canícola
L. sejroe
12-11-2014 154 6 Urbana H SAN
SEBASTIAN
1:100
1:200
L. canícola
L. sejroe
12-11-2014 155 7 Urbana H SAN
SEBASTIAN NEGATIVO NEGATIVO
12-11-2014 156 8 Urbana H SAN
SEBASTIAN NEGATIVO NEGATIVO
12-11-2014 157 9 Urbana H SAN
SEBASTIAN 1:100 L. canícola
13-11-2014 17 13 Urbana H EL SAGRARIO 1:200 L. hardjo
15-11-2014 91 36 Urbana M SUCRE NEGATIVO NEGATIVO
15-11-2014 92 29 Urbana M SUCRE 1:100
1:100
L. canícola
L. sejroe
15-11-2014 93 34 Urbana H SUCRE NEGATIVO NEGATIVO
15-11-2014 94 35 Urbana M SUCRE 1:100 L. sejroe
15-11-2014 95 OESTE Urbana M SUCRE 1:100
1:100
L. canícola
L. sejroe
15-11-2014 96 S/N Urbana H SUCRE 1:200 L. sejroe
7-11-2014 20 5 RURAL H EL CISNE NEGATIVO NEGATIVO
7-11-2014 21 1 RURAL H EL CISNE NEGATIVO NEGATIVO
7-11-2014 22 2 RURAL M EL CISNE NEGATIVO NEGATIVO
7-11-2014 23 4 RURAL H EL CISNE NEGATIVO NEGATIVO
7-11-2014 24 3 RURAL M EL CISNE 1:100 L. hardjo
20-11-2014 1 8 RURAL H GUALEL NEGATIVO NEGATIVO
20-11-2014 2 56 RURAL H GUALEL 1:200 L. sejroe
51
FECHA DE
RECOLECC
ION
CODIGO
DE
LABORA-
TORIO
IDENTIFICA
CION
PARROQUI
AS SEXO
PROCEDENCIA
POR
PARROQUIAS
RESULTADO
TITULO SEROVAR
20-11-2014 3 3 RURAL H GUALEL 1:200
1:100
L. canícola
L. sejroe
20-11-2014 4 53 RURAL H GUALEL NEGATIVO NEGATIVO
20-11-2014 5 9 RURAL H GUALEL 1:100
1:100
L. grippotyphosa
L. sejroe
20-11-2014 6 4 RURAL H GUALEL NEGATIVO NEGATIVO
20-11-2014 7 37 RURAL H GUALEL 1:100 L. canícola
20-11-2014 8 11 RURAL H GUALEL 1:200 L. hardjo
20-11-2014 9 30 RURAL M GUALEL 1:100
1:100
L. hardjo
L. sejroe
20-11-2014 10 94 RURAL M GUALEL NEGATIVO NEGATIVO
20-11-2014 11 55 RURAL M GUALEL 1:100
1:200
L. canícola
L. sejroe
20-11-2014 12 35 RURAL M GUALEL 1:100 L. sejroe
20-11-2014 13 47 RURAL M GUALEL 1:100 L. hardjo
20-11-2014 14 92 RURAL M GUALEL NEGATIVO NEGATIVO
20-11-2014 15 39 RURAL H GUALEL
1:200
1:200
1:100
L. canícola
L. hardjo
L. sejroe
20-11-2014 16 13 RURAL H GUALEL 1:100 L. sejroe
8-11-2014 134 40 RURAL H CHUQUIRIBAM
BA 1:100 L. canícola
8-11-2014 135 41 RURAL H CHUQUIRIBAM
BA 1:200 L. canícola
8-11-2014 136 42 RURAL H CHUQUIRIBAM
BA
1:100
1:100
L. canícola
L. sejroe
8-11-2014 137 44 RURAL H CHUQUIRIBAM
BA
1:200
1:200
L. canícola
L. sejroe
8-11-2014 138 45 RURAL H CHUQUIRIBAM
BA
1:100
1:200
L. canícola
L. sejroe
8-11-2014 139 84 RURAL H CHUQUIRIBAM
BA 1:200 L. sejroe
8-11-2014 140 85 RURAL M CHUQUIRIBAM
BA 1:100 L. sejroe
8-11-2014 141 98 RURAL H CHUQUIRIBAM
BA NEGATIVO NEGATIVO
9-11-2014 29 86 RURAL H TAQUIL NEGATIVO NEGATIVO
52
FECHA DE
RECOLECCION
CODIGO DE
LABORA-
TORIO
IDENTIFICACION PARROQUIAS SEXO
PROCEDENCIA
POR
PARROQUIAS
RESULTADO
TITULO SEROVAR
9-11-2014 30 87 RURAL H TAQUIL NEGATIVO NEGATIVO
9-11-2014 31 88 RURAL H TAQUIL NEGATIVO NEGATIVO
9-11-2014 32 89 RURAL H TAQUIL 1:100 L. hardjo
9-11-2014 33 90 RURAL H TAQUIL NEGATIVO NEGATIVO
9-11-2014 34 91 RURAL X TAQUIL NEGATIVO NEGATIVO
9-11-2014 35 92 RURAL M TAQUIL 1:100 L. hardjo
9-11-2014 36 93 RURAL H TAQUIL NEGATIVO NEGATIVO
10-11-2014 25 96 RURAL H CHANTACO 1:100 L. canícola
10-11-2014 26 97 RURAL M CHANTACO 1:100
1:100
L. canícola
L. hardjo
10-11-2014 27 94 RURAL H CHANTACO NEGATIVO NEGATIVO
10-11-2014 28 95 RURAL H CHANTACO
1:100
1:100
1:200
L. canícola
L. hardjo
L. sejroe
29-11-2014 97 2 RURAL H SANTIAGO 1:100
1:100
L. canícola
L. sejroe
29-11-2014 98 2 RURAL M SANTIAGO NEGATIVO NEGATIVO
29-11-2014 99 3 RURAL H SANTIAGO NEGATIVO NEGATIVO
29-11-2014 100 5 RURAL H SANTIAGO NEGATIVO NEGATIVO
29-11-2014 101 6 RURAL H SANTIAGO NEGATIVO NEGATIVO
20-11.2014 102 7 RURAL M SANTIAGO 1:200 L. sejroe
20-11-2014 103 7 RURAL H SANTIAGO 1:100 L. sejroe
20-11-2014 104 8 RURAL H SANTIAGO NEGATIVO NEGATIVO
20-11-2014 105 9 RURAL H SANTIAGO NEGATIVO NEGATIVO
20-11-2014 106 10 RURAL H SANTIAGO 1:100 L. sejroe
53
FECHA DE
RECOLECCIO
N
CODIGO DE
LABORA-
TORIO
IDENTIFICACION PARROQUIAS SEX
O
PROCEDENCIA
POR PARROQUIAS
RESULTADO
TITULO SEROVAR
21-11-2014 142 4 RURAL M JIMBILLA 1:200 L. canícola
21-11-2014 143 22 RURAL M JIMBILLA NEGATIVO NEGATIVO
21-11-2014 144 28 RURAL M JIMBILLA 1:100 L. sejroe
21-11-2014 145 32 RURAL M JIMBILLA 1:400 L. canícola
21-11-2014 146 42 RURAL H JIMBILLA NEGATIVO NEGATIVO
21-11-2014 147 51 RURAL H JIMBILLA 1:100 L. grippotyphosa
21-11-2014 148 52 RURAL H JIMBILLA 1:100 L. sejroe
19-11-2014 37 1 RURAL H MALACATOS NEGATIVO NEGATIVO
19-11-2014 38 2 RURAL H MALACATOS NEGATIVO NEGATIVO
19-11-2014 39 3 RURAL M MALACATOS 1:400 L. hardjo
19-11-2014 40 4 RURAL H MALACATOS 1:100
1:200
L. hardjo
L. sejroe
19-11-2014 41 5 RURAL H MALACATOS 1:100 L. hardjo
19-11-2014 42 6 RURAL M MALACATOS 1:100 L. sejroe
19-11-2014 43 7 RURAL H MALACATOS NEGATIVO NEGATIVO
19-11-2014 44 8 RURAL M MALACATOS 1:100 L. hardjo
19-11-2014 45 26 RURAL H MALACATOS 1:100 L. sejroe
19-11-2014 46 33 RURAL H MALACATOS 1:100 L. hardjo
20-11-2014 18 50 RURAL H SAN PEDRO
1:800
1:400
1:200
L. canícola
L. hardjo
L. sejroe
20-11-2014 19 49 RURAL M SAN PEDRO NEGATIVO NEGATIVO
17-11-2014 128 1 RURAL H VILCABAMBA NEGATIVO NEGATIVO
17-11-2014 129 2 RURAL H VILCABAMBA 1:200 L. canícola
17-11-2014 130 3 RURAL H VILCABAMBA 1:100 L. sejroe
17-11-2014 131 4 RURAL H VILCABAMBA 1:100
1:200
L. canícola
L. sejroe
54
FECHA DE
RECOLECCION
CODIGO DE
LABORATORIO
IDENTIFIC
ACION PARROQUIA SEXO
PROCEDENCIA
PARROQUIAS
RESULTADO
TITULO SEROVAR
17-11-2014 132 5 RURAL H VILCABAMBA 1:100 L. canícola
17-11-2014 133 6 RURAL H VILCABAMBA 1:200
1:100
L. canícola
L. sejroe
21-11-2014 47 18 RURAL H QUINARA
YANGANA NEGATIVO NEGATIVO
21-11-2014 48 22 RURAL H QUINARA
YANGANA 1:100 L. canícola
21-11-2014 49 28 RURAL H QUINARA
YANGANA NEGATIVO NEGATIVO
21-11-2014 50 23 RURAL M QUINARA
YANGANA NEGATIVO NEGATIVO
21-11-2014 51 39 RURAL H QUINARA
YANGANA
1:100
1:100
L. canícola
L. sejroe
21-11-2014 52 42 RURAL H QUINARA
YANGANA NEGATIVO NEGATIVO
21-11-2014 53 43 RURAL H QUINARA
YANGANA 1:100 L. canícola
21-11-2014 54 47 RURAL H QUINARA
YANGANA
1:100
1:100
L. canícola
L. sejroe
21-11-2014 55 49 RURAL M QUINARA
YANGANA NEGATIVO NEGATIVO
21-11-2014 56 60 RURAL M QUINARA
YANGANA NEGATIVO NEGATIVO
21-11-2014 57 63 RURAL M QUINARA
YANGANA 1:200 L. canícola
21-11-2014 58 57 RURAL H QUINARA
YANGANA 1:100 L. canícola
21-11-2014 59 58 RURAL M QUINARA
YANGANA NEGATIVO NEGATIVO
21-11-2014 60 45 RURAL H QUINARA
YANGANA 1:400 L. canícola
21-11-2014 61 48 RURAL M QUINARA
YANGANA NEGATIVO NEGATIVO
21-11-2014 62 56 RURAL M QUINARA
YANGANA NEGATIVO NEGATIVO
21-11-2014 63 48 RURAL H QUINARA
YANGANA 1:100 L. canícola
21-11-2014 64 52 RURAL H QUINARA
YANGANA NEGATIVO NEGATIVO
21-11-2014 65 56 RURAL M QUINARA
YANGANA
1:200
1:100
L. icterohaemorrhagiae
L. sejroe
21-11-2014 66 66 RURAL M QUINARA
YANGANA 1:100 L canícola
21-11-2014 67 62 RURAL H QUINARA
YANGANA 1:100 L. canícola
55
ANEXO 6: PERMISOS Y AUTORIZACIONES
56
57
58
59
60
61
62
63
64