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Tinciones especiales: Gram,
Ziehl Neelsen y cápsulaPráctica 5
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Coloración
• Favorece la observación
• Estudio de características
▫ Forma
▫ Agrupación
▫ Estructuras celulares
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Frotis o extendido
• Preparación del extendido obtener una monocapa separada de células
• Secado evaporar el líquido del extendido
• Fijado ▫ coagular las proteínas protoplasmáticas, ▫ adherir los microorganismos a la lamina y ▫ soportar los pasos de las tinciones
• Coloración
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Procedimiento
•Preparación del frotis
▫ Lámina 1: Staphylococcus aureus
▫ Lámina 2: Escherichia coli
▫ Lámina 3: Laminas preparadas
▫ Lámina 4: Klebsiella pneumoniae
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Tinción de gram
Las diferencias de la tinción se deben a los distintos grados de permeabilidad de las paredes celulares.
Gram positivo Gram negativo
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Fijar
Cristal violeta
Yodo
Alcohol-acetona
Safranina
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Tinción de Gram (lamina 1 y 2)
• Cristal violeta (1 minuto)▫ Lavar
• Lugol (1 minuto)▫ Lavar
• Alcohol-acetona (3-5 segundos)▫ Lavar
• Safranina (1 minuto)▫ Lavar
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Tinción de Ziehl Neelsen
Propiedad que presentan las bacterias para resistir la decoloración de ácidos fuertes después de teñirse con fucsina caliente
Bacterias alcohol ácido resistentes
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Tinción de Ziehl Neelsen(lamina 3)
• Fucsina feniciada (1 minuto)▫ Calentar con mechero de alcohol
producción de vapores
▫ Esperar 5 minutos
▫ Lavar
• Alcohol ácido (30 segundos)▫ Lavar
• Azul de metileno (30 segundos)▫ Lavar
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Tinción de la cápsula
CAPSULA: estructura superficial, que consiste en la acumulación de material mucoso o viscoso alrededor de la pared celular.
Tinción: se tiñe el entorno, no la cápsula.
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Tinción de Cápsula(lámina 4)
• Azul de metileno (5 minutos)
▫ Lavar
▫ Dejar secar
• Tinta Parker con otra lámina hacer
un frote sobre la lamina (ángulo de
45 )
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Observación al microscopio
• Dibujo en 100x
▫ Enfocar primero en 10 x
• Laminas:
▫ Gram positivo
▫ Gram negativo
▫ Alcohol ácido resistentes
▫ Cápsula
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Gram positivo Gram negativo
Alcohol ácido resistente Cápsula