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Taxonomía Fungal
La clasificación fungal es nueva y ha cambiado
Clasificación, según Bar (1988):División EumycotaSubdivisión MastigomycotaClase ChytridiomycetesOrden SpizellomycetalesFamilia Neocallimasticaceae
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Género
El género es distinguido por la morfología Thallus: Monocéntrico y policéntrico. Rizoide: Filamentos y bulbos. Zoosporas: Uni- o Multiflageladas
Todos los géneros rizoides tiene filamentos, excepto las especies caecomyces.
(Trinci et al. 1994)
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Especies
Son separadas por sus características morfológicas y estructurales.
Las Piromonas y Sphaeromonas se asumía que eran protozoarios por lo que fueron cambiados a:
Piromyces y Caecomyces
(Trinci et al. 1994)
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Fungis Policéntricos
Neocallimastix joyonii (Breton et al. 1989) Orpinomyces joyonii (Trinci et al.
1994) debido asu patrón de crecimiento policéntrico
Ruminomyces y Anaeromyces tienen características similares al monocéntrico
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Aislamiento y Enumeración Han sido aislados de: bovinos, ovinos, caballos, canguros y elefantes
En heces y tractos gastrointestinales y fluido ruminal
Orpinomyces fue aislado en charcos y pasturas de las vacas
La dieta animal tiene efectos sobre las poblaciones fungales
(Trinci et al. 1994)
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La biomasa fungal es difícil determinarLa estimación:método gravimétrico con
digestión enzimática con quitinaEl conteo (103 – 107 ml) no provee una
adecuada estimación fungal Para el tamaño de las poblaciones
fungales se han utilizado diluciones en agar y otra soluciones
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Condiciones para aislamiento Anaerobiosis pH de 6.5 a 6.7 T° de 39°
Materiales para aislamiento Bufer: Carbonato/Fosfato Fluido ruminal Resazurina (indicador redox) Carbohidratos Antibióticos
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Almacenamiento
T° de 39° CFibra en agarNitrógeno líquido DimetilsulfóxidoEnfriamiento a 1.5°C Glicerol
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Cultivos y Almacenamiento Mantenidos por transferencia frecuente ( 2 a 7 días). Algunas especies 24 a 48 horas. Otros Intervalos semanales. Isolados monocéntricos – 2 a 3 días. Isolados policéntricos – semanalmente. Mantenimiento largo en tiempo – 39 oC en fibra Sisal
embebida en agar. En nitrógeno líquido con dimetilsulfoxido como
crioprotector para “fungi” anaeróbico sirve también para largo tiempo.
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Preservación 1.5 oC por minuto hasta -70 oC con glicerol como crioprotector.
Resucitados a 39 oC.Restos de esporas “fungi” ruminales, Esporas anaeróbicas de heces.Inducidas in vitro, no germinadas in
vitro (Wubah et al., 1991b).
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proceso de manipulación de formación y germinación de esporas – método de conservación.
“Fungi” anaeróbicos no son listados en la ATCC (American Type Culture Collection) como “Fungi” filamentosos o Protistas.
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6. Protozoarios Ruminales6.1 Introducción
Basados en el tamaño relativo Primeros microorganismos ser descubiertos Muy móviles y viables en el rúmen y retículo Inmóviles y aparentemente desintegrados en
el omaso y abomaso. Los Protozoarios celulares no identificados en
intestino delgado. Utilizados como alimento.
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Explicación de SobrevivenciaEspecificidad del hábitat, esencialidad
para el huésped.Defaunación.Alta especialización al rúmen o hábitat.Actividades metabólicas (relación
bacterias y “fungi”).
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Protozoas Flagelados. Baja población Zoosporas Fúngicas (decrecimiento) Limitados Esquema de Clasificación ha cambiado
algunas veces en 30 años. Terminología difícil Referencia a “Holotrichs” y “Entodiniomorphs”
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Papeles en el rumen:
Clasificación de efectos
a) Medio ambiente del rumen
b) Componentes de la sangre
c) Metabolismo y digestión en el rumen
d) Sobre el animal
Fermentación de carbohidratos solubles
Holoctrichs como principal degradador
Entodinromorphs
Procurar incrementar la población de Holotrichs
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Digestión de almidónEntodiniomorphs como principales
degradadoresIsotrichaUso como fuente de energía o
síntesis intracelular de polisacáridos Principales productos
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Digestión de Carbohidratos Estructurales
Actividad celulolítica (orden entodiniomorfos) Epidinium caudatum, Eudiplodium maggii,
Ostrocadinium dilobum y varias Spp Entodinium
Holotricha Enzimas que degradan hemicelulosa (10
géneros, entodiniomorfos, subfamilias Diplodiniinae y Ophryoscoliceneae.
Baja actividad Orden holotricha
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Monosacáridos, disacáridos y oligosacáridos
Spp de protozoarios poseen la hidrolasa glicosidica
Pectina es depolimerizada por los protozoarios (metanol, ac. Galacturónico o poligalactoranidos)
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Digestión de la Proteína
Los entodiniomorfos digieren la caseína insoluble
Son importante en la degradación de proteínas insolubles
Sp isotricha (caseína soluble e insoluble)
Mayor actividad proteolítica en el citoplasma
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Absorción y digestión de bacterias
-Gutierrez 1955. Isotricha. No se desarrolla sin bacterias.
-Probablemente bacterias proveen mayoría de N para crecimiento.
-Inhabilidad para biosintetizar o interconvertir aminoácidos (E. caudatum.
-Pérdida gradual de enzimas. -Compuestos preformados por crecimiento de
bacterias -Protozoarios pueden “absorber” < 1% de total
bacterial / minuto concentrados.
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Productos de digestión de bacterias:Aminoácidos , 50% retenido
VFA Amonia
Amoniácidos bacterianos en el animal, digestibilidad de proteina protozoaria.
Limitado pasaje ruminal. Relacionado con normal después de
alimentación.
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Cambios en población de protozoarios
Establecimiento de poblaciones:
Contacto directo en etapas jóvenes.
Presencia en la boca de la madre
Saliva en las plantas
Aerosoles entre animales
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Variación en el horario
Diferencias entre entodiniomorfos y holotricosAlimentación 1 / día, entodiniomorfos 5-6
horas / gradual 20 a 22 hrs.Holotrichs, pico momentos antes o después
de alimentación / Entodiniomorfos Diluciones asociadas a
alimentación. Y cambios en crecimiento celular.
Migraciones celulares:Paredes rumen, retículo y porción
ventral.
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OTROS FACTORES QUE AFECTAN LA CONCENTRACION DE PROTOZOARIOS
DIETA forraje : concentrado 20 – 40 % de concentrado maximiza la Ι
protozoariosΙ 60 % entodinium
El efecto del concentrado se puede disminuir controlando el consumo
FRECUENCIA DE ALIMENTACION
GEOGRAFICAS i.e. Polyplastron multivesiculatum
VARIACION ANIMAL i.e. Ophryoscolecidae y Caloscolex
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DEFAUNACIÓN
Se han usado varios tipos de procedimientos paraobtener ruminantes libre de protozoarios ciliados.La manera más eficaz y simple de obteneranimales libres-protozoario es aislarlosinmediatamente de todos y de otros rumiantesdespués del nacimiento u obtenidos porhisterectomía normal.
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Defaunacion se han establecido e intentado por medios
físicos y dietéticos:
Físicos: Involucra el vaciando y lavado del rumen, mata
los protozoarios en los volúmenes y los devuelve al
“protozoario-libre” del rumen.
Dietéticos: Han ido de inanición y han alimentado con
pura leche, alimentando hidratos de carbono altos para
inducir acidosis apacible y los compuestos del antiprotozoal
alimentando como sulfato cobrizo, ácidos, o surfactantes.
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El aislamiento al nacimiento ha sido criticado en basea las mezclas de las poblaciones bacterianas yfungicas no desarrollan en el animal protozoario-libre. La efectividad de otras técnicas deldefaunación es inconstante, y los compuestosdiferentes mataban a los protozoarios pueden tenerefectos adversos en el animal, en losmicroorganismos de otros, o de ambos
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ANTIBIÓTICOS
Se han usado los antibióticos ionofosforados, principalmente la
monensin y lasalocid, ampliamente como promotores del
crecimiento para el ganado de carne y corderos. Dos de estos
compuestos tienen un efecto tóxico en los ciliados del rumen y han
disminuido su concentración notablemente en volúmenes del rumen
. Sus niveles de efectividad han reducción en números de
protozoarios. La mayoría de los antibióticos comúnes, a este
niveles son bactericida, no son tóxico a los protozoarios del rumen.
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Clasificación de los ProtozoariosRuminales
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Identificación de Protozoos ruminales
Como nombrar las partes de un protozoo.
Parte bucal hacia delante se le marca a las 12 hrs.
La parte mas cercana al observador se le denomina superficie superior y la contraria se le denomina superficie inferior.