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Rev. 1
Cuantificación del reordenamiento m-BCR: BCR-ABL p190 mediante PCR a tiempo real
REF : IMG-122
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6
Reactivos Color Viales Conservación
Master-Mix m-BCR Disco morado 2 x 24 reacciones 4ºC
Master-Mix ABL Disco amarillo 2 x 24 reacciones 4ºC
Control m-BCR-ABL Tapa morada 4 viales 4ºC
Tabla 1. Componentes del kit Imegen-m-BCR-ABL
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7
:
Equipos 1 Termociclador de PCR a tiempo real
2 Micropipetas (10 µL, 20 µL y 200 µL)
3 Vórtex
Materiales 1 Tubos ópticos de 0,2 mL
2 Tapas ópticas para tubos de 0,2 mL
3 Puntas de pipetas con filtro (10 µL, 20 µL y 200 µL)
4 Tubos estériles de 1.5 mL
5 Guantes de látex sin polvo
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8
Reactivos Rehidratación
Master-Mix m-BCR 130 μL de agua/vial
Master-Mix ABL 130 μL de agua/vial
Control m-BCR-ABL 50 μL de agua/vial
Tabla 2. Volumen de rehidratación de los componentes del kit
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9
VortexSpin
VortexSpin
VortexSpin
VortexSpin
VortexSpin
5 ll
C+ m-BCR-ABL
25x104
l45 lH20
VortexSpin
VortexSpin
VortexSpin
VortexSpin
VortexSpin
5 ll 5 ll 5 ll
C+ m-BCR-ABL
25x103
C+ m-BCR-ABL
25x102
C+ m-BCR-ABL
25x101
C+ m-BCR-ABL
25
l45 lH20
l45 lH20
l45 lH20
VortexSpin
VortexSpin
VortexSpin
VortexSpin
VortexSpin
5 ll5 ll
C+ m-BCR-ABL
25x104
l45 lH20l45 l
H20
VortexSpin
VortexSpin
VortexSpin
VortexSpin
VortexSpin
5 ll5 ll 5 ll5 ll 5 ll5 ll
C+ m-BCR-ABL
25x103
C+ m-BCR-ABL
25x102
C+ m-BCR-ABL
25x101
C+ m-BCR-ABL
25
l45 lH20l45 l
H20l45 l
H20l45 l
H20l45 l
H20l45 l
H20
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10
Reactivos Volumen por
reacción
Máster-Mix m-BCR o
Máster-Mix ABL 5 µL
Máster-Mix PCR 2x 10 µL
Tabla 3. Cantidad de reactivos necesaria por reacción
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Sonda Receptor Emisor o
Quencher m-BCR FAMTM TAMRA
ABL FAMTM TAMRA
Tabla 4. Información de las sondas
Campos Etapa 1
Activación enzimática
Etapa 2
PCR
Nº de Ciclos 1 ciclo inicial 1 ciclo inicial 50 ciclos
Desnaturalización Unión de
oligonucleótidos / Extensión
Temperatura 50ºC 95ºC 95ºC 60ºC
Tiempo 2 minutos 10 minutos 15 segundos 1 minuto*
Tabla 5. Programa de PCR óptimo para el 7500 FAST o StepOne
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12
NCN= m-BCR-ABLCN
ABLCN