UAPUniversidad Alas Peruanas
Facultad de Ciencias de la Salud Escuela Académica Profesional de Tecnología Médica
II CURSO DE AUTOMATIZACIÓN EN LABORATORIO CLÍNICO Y ANATOMÍA
PATOLÓGICA
Ponente: Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
TEMA: Pruebas especiales para el estudio de anemias en Hematología
ANEMIASSe define como la disminución de la
concentración de Hb que va acompañado de un descenso del valor de
Hto.
VARONES < 13 g/l
MUJERES < 12 g/l
MENORES DE14 AÑOS < 11 g/l
LA OMS CONSIDERA ANEMIA:
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
PRUEBAS DE ORIENTACIÓN DE DIAGNÓSTICO DE ANEMIAS
RECUENTOS CELULARES GR.
GB., PLAQUETAS,
ÍNDICES ERITROCITARIOS: VCM, HCM,CCM
ESTUDIO DE LÁMINA
PERIFÉRICA.
RECUENTO DE RETICULOCITOS.
Anemia regenerativa
Anemia arregenerativa.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
HEMOGRAMA Y RECUENTO DE RETICULOCITOS
• Informa sobre el estado general de las células de la sangre:
Eritrocitos. Leucocitos. Concentración de plaquetas.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
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ANEMIA ARREGENERATIVA
La médula ósea es incapaz de producir hematíes
por lesión de la célula madre.
Alteración de la maduración eritroblástica.
RETICULOCITOS : Disminuidos.
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ANEMIA ARREGENERATIVA
1) Desaparición de las células progenitoras de hematíes o de todas las líneas medulares granulocitos y plaquetas
anemia aplástica por:
Tóxicos industriales (benceno), drogas (cloranfenicol, dipirona, radiaciones ionizantes) y de causa
desconocida (anemia aplástica primaria).
La médula ósea es incapaz de producir hematíes por
lesión de la célula madre.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
ANEMIA ARREGENERATIVA
2) Las células eritropoyéticas son normales pero
no reciben material suficiente para producir
eritrocitos.
Alteración de la maduración eritroblástica.
ANEMIA ARREGENERATIVA
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
El aspirado medular muestra aspectos de los eritrocitos y
destaca la presencia de un síndrome mieloproliferativo,
linfoproliferativo o metástasis neoplásica.
La biopsia ósea es obligada ante sospecha de aplasia o
mielofibrosis.
ANEMIAS MEGALOBLÁSTICA
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Obedecen a la carencia de ciertos factores indispensables para la síntesis del ácido
desoxirribonucleico . Debido al déficit de vitamina B12 y ácido fólico.
Puede acompañarse de leucopenia y/o plaquetopenia.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Médula ósea megaloblástica: Hipercelularidad . Se observa aumento de la eritropoyesis. Megaloblatos con disociación núcleo – citoplasma. También se observan hipersegmentación de neutrófilos.
SERIE ROJA• Eritrocitos : disminuidos.• Hipercromía.• Macrocitosis.
SERIE BLANCA
• Hipersegmentación de neutrófilos.• Aumento del tamaño de los
leucocitos.• Leucopenia.
PLAQUETAS• Trombocitopenia.• Macroplaquetas.
Contantes corpusculares
• VCM: Aumentado.• HCM: Aumentado..• CHCM: Normal.
Vitamina B12: Disminuido.
Ácido fólico: Disminuido.
LDH: Aumentado.
Bilirrubina sérica:Aumentado.
Bioquímica
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Lám
ina
perif
éric
a
ANEMIAS FERROPÉNICAS
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Obedece casi siempre a la pérdida persistente de pequeñas cantidades de hierro.
Suelen aparecer en el curso de procesos inflamatorios o neoplasias
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Frotis de sangre periférica en la anemia ferropénica. Eritrocitos pequeños (microcitosis) y pálidos (hipocromía), con leucocitos y plaquetas normales.
SERIE ROJA
• Eritrocitos: Disminuidos. • Anisocitosis.• Hipocromía.• Microcitosis.
SERIE BLANCA
• Normal
PLAQUETAS • Normal.
Contantes corpusculares
• VCM: Disminuido.• HCM: Disminuido.• CHCM: Disminuido.
Hierro sérico: Disminuido.
Transferrina: Aumentado.
Ferritina: Disminuido.
Bioquímica
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Lám
ina
perif
éric
a
ANEMIA REGENERATIVA
• Aumento de la eritropoyesis que intenta
compensar el déficit de hemoglobina .
• Obedece a dos causas : hemorragia y hemólisis .
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RETICULOCITOS:Aumento
ANEMIA HEMOLÍTICA
Es una manifestación común la destrucción y/o remoción
de los glóbulos rojos de la circulación antes de que se
cumpla su vida media de 120 días.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
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• Hiperbilirrubinemia, predominio de la fracción indirecta no conjugada.
• Aumento de la LDH sérica con predominio de las isoenzimas LD1 y LD2.
• Disminución de la haptoglobina plasmática o ausencia total de la misma.
• Acortamiento de la vida media eritrocitaria.
ANEMIA REGENERATIVAHemolítica
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Anemias Hemolíticas Congénitas
Membranopatías • Esferocitosis hereditaria. (Minkowsky Chauffard)• Eliptocitosis congénita.• Estomatocitosis congénita.• Acantocitosis congénita (Abetalipoproteinemias).
Enzimopatías • Deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa.• Déficit de piruvato kinasa.• Otras enzimopatías.
Hemoglobinopatías • Hemoglobinopatía S (anemia drepanocítica o de células falciformes). • Disminución de la síntesis de globina (talasemias).
Defectos en alguno de los componentes estructurales de
la membrana.
GR obtiene energía en forma de ATP mediante la degradación de la glucosa
(glucólisis) la escases de enzimas que intervienen en la glucólisis puede dar lugar a que el GR carezca de energía suficiente para mantener sus funciones intactas.
Alteraciones congénitas de la hemoglobina en una de sus cadenas polipeptídicas
dando lugar a la formación de numerosas hemoglobinas anormales.
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Esferocitosis.
MEMBRANOPATÍAS
PRUEBAS DE LABORATORIO PARA MENBRANOPATÍAS
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
FRAGILIDAD OSMÓTICA
PRUEBA DE HAM - DACIE
PRUEBA DE SACAROSA
FRAGILIDAD OSMÓTICA
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
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FRAGILIDAD OSMÓTICA
• Valora la resistencia de los eritrocitos a soluciones de presión
osmótica decreciente (hipotónicas) en condiciones constantes de Ph y
temperatura.
• Esta prueba evalúa la capacidad que tiene los glóbulos rojos de
soportar un incremento de su contenido acuoso.
• En condiciones normales un eritrocito puede aceptar sin hemolizarse
una entrada de agua de 70% como máximo.
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Reactivos:
Solución hipotónica 0.9%
tamponado a pH 7.4.
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1. Se suspenden los eritrocitos en soluciones de hipotonía creciente de CINa.
2. Los eritrocitos aumentan su volumen por la penetración de agua para equilibrar la presión osmótica con la del medio.
3. La célula se vuelve esférica y al alcanzar un volumen crítico se rompe.
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Nº de tubo
ml. De solución salina al 9% tamponada
ml. De agua destilada
Concentración de la solución (%)
1 3,8 1,2 0,76
2 3,6 1,4 0,72
3 3,4 1,6 0,68
4 3,2 1,8 0,64
5 3,0 2,0 0,60
6 2,8 2,2 0,56
7 2,6 2,4 0,52
8 2,4 2,6 0,48
9 2,2 2,8 0,44
10 2,0 3,0 0,40
11 1,8 3,2 0,36
12 1,6 3,4 0,32
13 1,4 3,6 0,28
14 1,2 3,8 0,24
15 1,0 4,0 0,20
16 0,8 4,2 0,16
PRUEBA
DE HAM – DACIE
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
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En los eritrocitos normales, la acción lítica del
complemento no se desarrolla ni siquiera en
Presencia de suero acidificado , pero en los E-HPN basta
una pequeña disminución del pH
del medio para que dicha acción se desarrolle y
sobrevenga la hemólisis.
PRINCIPIO
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
PRUEBA DE HAM – DACIE
• Existe una enfermedad en la que los hematíes hemolizan cuando son
incubados en presencia del propio suero o un suero compatible
previamente acidificado. Esta enfermedad se le conoce con el nombre de
HPN en ella existe una alteración adquirida de la membrana.
• En los hematíes normales la acción lítica del complemento no se desarrolla
ni aún en presencia de suero acidificado, pero en los hematíes con HPN
basta una pequeña disminución del Ph para que dicha acción se desarrolle y
sobrevenga hemólisis.
Citrato de sodio
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
MÉTODO
Para la realización de Ham – Dacie se dispone de 5 tubos de hemólisis que se enumerar del 1 – 5.
1 2 3 4 5
Suero paciente 0,5 ml. 0,5 ml.
Suero paciente control 0,5 ml.
0,5 ml.
0,5 ml.
En el tubo 3 se introduce a Baño maria a 56ºC por 30 minutos.
Hcl 0,2 N a Tº ambiente 50 ul. 50 ul. 50 ul.
Suspensión de GR al 50% de hematíes lavados.
50 ul. 50 ul. 50ul. 50 ul. 50 ul.
Agitar suavemente todos los tubos y colocar a baño maría 37ºC por 1 hora. Centrifugar y observar hemólisis en los tubos 2 y 5
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
• En condiciones normales no debe observarse hemólisis en ningún tubo.
• Existe HPN si hay hemólisis en los tubos 2 y 5.
PRUEBA
DE LA SACAROSA
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
PRUEBA DE LA SACAROSA
• Consiste en situar los hematíes problemas en un medio de
baja fuerza iónica .
• Ejm: solución de sacarosa. En este medio, los eritrocitos tienden a fijar el complemento por lo que los glóbulos rojos presentes tienen una sensibilidad anormalmente alta al complemento y lisarse.
Citrato de sodio
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Suero Fisiológico Tubo control Tubo problema
Suero fisiológico 0,9 ml.Solución sacarosa 0,9 ml. 0,9 ml.
Sangre control 0,1 ml.Sangre problema 0,1 ml. 0,1 ml.
Agitar suavemente los tubos. Dejar en reposo a una Tº ambiente 3 minutos.
Centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
• La prueba de la sacarosa sale positiva en la HPN.
• Esta prueba es menos específica que la de Ham – Dacie para el diagnóstico de la HPN, pero en cambio es más sensible y más rápida .
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Glóbulo rojo obtiene energía en forma de ATP mediante la degradación de la glucosa (glucólisis) la escasez de
enzimas que intervienen en la glucólisis puede dar lugar a que el GR carezca de energía suficiente para mantener sus
funciones intactas.
ENZIMOPATIAS
Este déficit puede afectar a la vía de Embden – Meyerhof.
Carencia de piruvitoquinasa (PK).Carencia de glucosa – 6 fosfato deshidrogenasa.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Crisis hemolíticas a
consecuencia de sustancias
oxidantes como la de algunos
medicamento antipalúdicos,
antipiréticas, analgésicos, etc.
En determinados alimentos como
las habas (favismo).
Esto origina un acumulo de
peróxido de hidrógeno(H2O2) en el
interior de los eritrocitos.
La oxidación de la hemoglobina hace que se
precipite y formen cuerpos de Heinz.
ENZIMOPATÍAS
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
HEMOGLOBINOPATIAS
Son alteraciones cualitativas y cuantitativas de la globina, secundarias a mutaciones genéticas
ydan lugar a la formación de hemoglobinas
anormales.Son transmitidas por herencia.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Se debe al reemplazo de una glutamina por una valina en las cadenas polipeptídicas
beta.
HEMOGLOBINA SSe produce la llamada anemia
drepanocítica a la transformación de los eritrocitos
en células falciformes es favorecida por la disminución
del pH y por la hipoxia.
Es típica de la raza negra y puede ser descubierta mediante la electroforesis de
Hb.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Hemoglobina S.
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Se producen por defectos genéticos, hay una
disminución de la síntesis de las cadenas alfa.
TALASEMIAS
Mientras que en las beta talasemias se encuentra
disminución de la síntesis de cadenas beta.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Frotis de sangre periférica de un paciente con Talasemia beta mayor. Se observa eritrocitos en diana, hipocrómicos y microcíticos.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
DATOS DE LABORATORIO
• Microcitosis e hipocromía• Anisocitosis, dianocitosis,
poiquilocitosis y esquistocitos.• Moderada reticulocitosis• Hierro sérico : Normal.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
HEMOGLOBINOPATÍASELECTROFORESIS DE HEMOGLOBINA
Es una técnica que sirve para separar las
moléculas en función de su carga eléctrica
cuando se aplica una corriente eléctrica,
las moléculas cargadas negativamente
(aniones) se desplazan hacia el electrodo
positivo (ánodos).
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
HEMOGLOBINOPATÍASELECTROFORESIS DE HEMOGLOBINA
Como las cadenas polipeptídicas de la globina en
medio básico adquieren una carga eléctrica
negativa, las hemoglobinas se van desplazando
progresivamente hacia el ánodo.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
HEMOGLOBINOPATÍASELECTROFORESIS DE HEMOGLOBINA
Como las cadenas polipeptídicas de la globina en
medio básico adquieren una carga eléctrica
negativa, las hemoglobinas se van desplazando
progresivamente hacia el ánodo.
Al cabo de cierto tiempo las moléculas se
agrupan entre sí y adoptan aspectos de banda.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
• Permite detectar anomalías hemoglobínicas . • La hemoglobinosis se detecta en la
electroforesis debido a la aparición de bandas anormales. Este es el caso de anemias falciformes y de hemoglobina C.
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Se debe a la acción de autoAc* que se adhiere a la membrana de
los eritrocitos.
ANEMIAS HEMOLÍTICAS AUTOINMUNES
Si los anticuerpos funcionan en combinación con el complemento
producen una hemólisis directa de los hematíes pero si actúan solos forman unos aglutinados de glóbulos rojos y
son hemolizados.
Los anticuerpos se dividen de acuerdo a su temperatura óptima: calientes (termolisinas)y fríos que pueden ser a su vez hemolisantes
(criolisinas) o aglutinantes (crioaglutinantes).
La aparición de estos anticuerpos es de causa desconocida. Pero algunos antiC* acompañan a colagenosis.
Ejm: Lupus Eritematoso y enfermedades malignas (Leucemia
linfática crónica).
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
TEST DE COOMBS
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Pone de manifiesto la presencia de anticuerpos incompletos
fijados a la membrana eritrocitaria y que causa la
hemólisis.
La prueba de Coombs esta indicada siempre que exista sospecha clínica
de hemolisis por mecanismo inmune (AHAI), anemia hemolítica
medicamentosa, enfermedad hemolítica del recién nacido y
reacción hemolítica postransfunsional .
Cuando la prueba de Coombs es positiva debe investigarse la naturaleza del autoanticuerpo existente IGG o IGM.
TEST DE COOMBS
Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.
Hora de despertarse…
¡Muchas Gracias!