![Page 1: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/1.jpg)
Quorum sensing
Ing. Hana Sýkorová, Ph.D. 2014
![Page 2: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/2.jpg)
Vibrio fischeri
• G- mořská bakterie
• schopnost bioluminiscence
otázka: Kdy svítí?
odpověď: Jen za určité hustoty.
otázka: Jak to pozná?
odpověď: „Chemický jazyk“
![Page 3: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/3.jpg)
Vibrio fischeri
![Page 4: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/4.jpg)
Eupryma scolopes
• oliheň (sepiola kropenatá), max 35mm
• symbióza s V. fischeri
• modulace luminiscence (predátoři)
![Page 5: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/5.jpg)
Quorum Sensing
kvórum z lat. quorum = „z nichž“
kvantitativní podmínka pro platnost (voleb, referenda…)
Quorum sensing
• „vycítit kvórum“
• typ rozhodovacího procesu využívaného decentralizovanými skupinami k jednotné reakci
• sociální druhy hmyzu – včely, mravenci…
• bakterie – koordinace genové exprese v závislosti na místní hustotě populace
![Page 6: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/6.jpg)
Quorum Sensing - bakterie
mechanismus kterým pomocí signálních molekul bakterie reguluje expresi některých genů v závislosti na hustotě populace
60. léta – Alexander Tomasz (maďarský mikrobiolog) – přirozená kompetence (příjem DNA z prostředí) u Streptococcus pneumoniae
![Page 7: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/7.jpg)
Mechanismus QS
![Page 8: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/8.jpg)
LuxI
Luciferase Genes
LuxR
LuxR
Vibrio fischeri
![Page 9: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/9.jpg)
Co je to za molekuly?
N-(3-oxohexanoyl)-homoserin lakton (3-oxo-C6-HSL)
![Page 10: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/10.jpg)
Co je to za molekuly?
![Page 11: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/11.jpg)
Co je to za molekuly?
• AHL = N-acyl homoserin-lakton
• „Intra-species“ Communication
• molekuly specifické pro jednotlivé druhy
Autoinduktory typu 1 = AI-1
![Page 12: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/12.jpg)
Bacteria constantly produce molecules called acylated homoserine lactones (AHLs) and release them into the environment. (The LuxR proteins comes into play later.)
If other bacteria are not in the vicinity, the AHLs will soon degrade and bacterial “silence” will prevail.
![Page 13: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/13.jpg)
But if enough AHL-producing bacteria are nearby, the concentration of AHLs outside the bacteria will rise, signaling the increase in cell density around them.
(1) When a quorum (or critical number) of bacterial cells is reached, AHLs are able to bind to receptor proteins called LuxR. (2) That changes LuxR’s shape so that it can bind to DNA in the bacteria, like a key in a lock.
![Page 14: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/14.jpg)
The LuxR “key” turns on a string of genes (1) that produce the components (2) to make an enzyme called luciferase (3), which generates light (bioluminescence). By similar biochemical processes, bacteria can produce several other collective behaviors.
http://www.whoi.edu/page.do?pid=7501&tid=4142&cid=31613&i=1
![Page 15: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/15.jpg)
Systém LuxI-LuxR
Target Genes
systém G negat bakterií
• LuxI – AHL synthase - konstitutivní syntéza bazálního množství AHL
• volná sekrece AHL do prostředí
• při vzrůstu koncentrace AHL v prostředí – aktivace regulátoru LuxR
• vazba LuxR na specifické palindromní sekvence „lux box“
• zvýšení transkripce specifických genů (např. pro bioluminiscenci)
![Page 16: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/16.jpg)
V. fischeri Bioluminescence
P. aeruginosa Virulence Factors, Biofilms
A. tumefaciens Mating, Transfer of Mobile DNA
E. carotovora Virulence Factors, Antibiotic Synthesis
Systém LuxI-LuxR
Target Genes
systém G negat bakterií
![Page 17: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/17.jpg)
Autoindukce
![Page 18: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/18.jpg)
Systémy analogické „LuxI-LuxR“
![Page 19: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/19.jpg)
![Page 20: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/20.jpg)
A jak je to u G+ ?
Signály G+ bakterií:
• modifikované oligopeptidy
• autoinducer peptides AIPs („feromon-like“ peptidy)
• syntéza peptidu ve formě prekurzoru
• modifikace
• sekrece přes ATP-Binding Casette (ABC) transportní komplex
• detekční systém – dvě složky
• fosforylace
• exprese specifických genů
![Page 21: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/21.jpg)
Oligopeptidy jako induktory (AIP)
![Page 22: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/22.jpg)
G- x G+
• LuxI – autoinducer synthase
• AHL – acyl homoserine lactone
• LuxR – receptor
• LuxR/AHL → transcription
• LuxS – autoinducer synthase
• AIP – auto-inducing peptide
• transporter for secretion
• HK receptor – histidin kinase
• RR – response regulator
• activated RR → transcription
![Page 24: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/24.jpg)
Cross talk
![Page 25: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/25.jpg)
Vibrio harveyi
• 2 systémy komunikace: AI-1 • molekula = AHL • produkce LuxLM • senzor LuxN
AI-2 • molekula = furanon • produkce LuxS • senzor LuxP, LuxQ
Fosforylační kaskáda: LuxN (LuxQ) → LuxU → LuxO
LuxO – kontrola transkripce represoru X
exprese luciferázového operonu luxCDABE
![Page 26: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/26.jpg)
Vibrio harveyi
![Page 27: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/27.jpg)
LuxS systém – „bakteriální esperanto“
Actinobacillus actinomycetemcomitans Actinobacillus pleuropneumoniae Actinobacillus suis Bacillus anthracis Bacillus halodurans Bacillus subtilis Borrelia burgdorferi Campylobacter jejuni Clostridium acetobutylicum Clostridium difficile Clostridium perfringens Deinococcus radiodurans Escherichia coli MG1655 Escherichia coli O157:H7 Enterococcus faecalis Haemophilus influenzae Helicobacter pylori Klebsiella pneumoniae Lactococcus lactis Leuconostoc oenos Listeria monocytogenes Mannheimia haemolytica
Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis Pasteurella multocida Pasteurella trehalosi Porphyromonas gingivalis Proteus mirabilis Salmonella paratyphi Salmonella typhi Salmonella typhimurium Shewanella putrefaciens Shigella flexneri Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Streptococcus gordonii Streptococcus mutans Streptococcus pneumoniae Streptococcus pyogenes Vibrio cholerae Vibrio harveyi Vibrio parahaemolyticus Vibrio anguillarum Vibrio vulnificus Yersinia pestis
![Page 28: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/28.jpg)
Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms
Bacillus anthracis Growth
Bacillus cereus Biofilms
Bacillus subtilis Development
Borrelia burgdorferi Virulence
Campylobacter jejuni Motility, Toxins
Clostridium difficile Virulence, Toxins
Clostridium perfringens Virulence, Toxins
Escherichia coli K12 AI-2 transport, Biofilms, Cell division, DNA processing, Iron uptake
Escherichia coli EHEC O157:H7 Virulence, Type III Secretion , Motility
Escherichia coli EPEC Motility, Type III Secretion
Haemophilus influenzae Virulence, Cell invasion
Helicobacter pylori Motility, Biofilms
Klebsiella pneumoniae Biofilms
Lactobacillus reuteri Biofilms in mice
Listeria monocytogenes Biofilms
Mannheimia haemolytica Virulence, Encapsulation, Adhesion
Neisseria meningitidis Virulence, Bacteremia
Photorhabdus luminescens Antibiotic production
Porphyromonas gingivalis Virulence, Proteases Hemin acquisition, Stress response
Salmonella typhi Biofilms
Salmonella typhimurium AI-2 transport, Biofilms
Serratia marcescens Virulence in C. elegans, Hemolysin, Antibiotic production
Shigella flexneri VirB (virulence factor)
Staphylococcus epidermis Virulence, Biofilms
Streptococcus gordonii Mixed-species biofilms
Streptococcus mutans Virulence, Biofilms, Competence, Stress response
Streptococcus pneumoniae Virulence, Persistence, Competence
Streptococcus pyogenes Virulence factors, Protease, Hemolysin
Vibrio anguillarum Protease
Vibrio cholerae Virulence, Toxins, Biofilms
Vibrio fischeri Bioluminescence, Colonization
Vibrio harveyi Bioluminescence, Biofilms, Siderophore, Virulence, Type III Secretion, Protease
LuxS systém – vlastnosti pod kontrolou AI-2
![Page 29: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/29.jpg)
Bakteriální esperanto – LuxS systém
společný prekurzor = produkt LuxS :
• 4,5-dihydroxy-2,3-pentandion (DPD)
spontánní cyklizace → autoiduktor AI-2
• furanony
• někdy vázaný bór
![Page 30: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/30.jpg)
Syntéza AI-2
![Page 31: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/31.jpg)
Syntéza AI-1 a AI-2: společný prekurzor SAM
SAM – S-adenosylmethionin
SAH – S-adenosylhomocystein
SRH – S-ribosylhomocystein
AHL – acyl-homoserin lakton (AI-1)
DPD – dihydroxy-pentandion (prekurzor AI-2)
![Page 32: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/32.jpg)
Vibrio harveyi
![Page 33: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/33.jpg)
Salmonella typhimurium, E. coli
AI-2
![Page 34: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/34.jpg)
Jak spolu komunikují?
G+: AIP G-: AI-1 = AHL
Cross Talk: AI-2
![Page 35: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/35.jpg)
Jak spolu komunikují?
G+: AIP G-: AI-1 = AHL
Cross Talk: AI-2
![Page 36: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/36.jpg)
AI-3: Komunikace na vyšší úrovni
![Page 37: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/37.jpg)
AI-3/epinefrin/norepinefrin
• katecholaminy (adrenalin/noradrenalin) - krátké peptidy (neuropeptidy)
• AI-3 – podobná aromatická sloučenina
• „interkingdom communication“
• komunikace hostitel x mikroflóra
• produkce:
• bakterie
• houby
• rostliny
• vyšší živočichové
• člověk: ovlivnění mozkových funkcí
• hypotéza: složení střevní mikroflóry do jisté míry ovlivňuje chování
(myši x Lbc. rhamnosus)
![Page 38: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/38.jpg)
• poprvé popsáno u EHEC kmenů E. coli (např. E. coli O157:H7)
• kolonizují střevní epitel, produkce toxinu (shigatoxin/verotoxin)
• HUS – hemolyticko-uremický syndrom
• tvorba tzv. „attaching and effacing“ (AE) lézí – kódovány chromozomálními ostrovy patogenity LEE
• AI-3 a epinefrin/norepinefrin – shodný receptor (membrána)
• AI-3: produkce běžnou střevní mikroflórou
• epinefrin/norepinefrin: produkce hostitelem (kontrakce hladkého svalstva)
• obdobné systémy: Shigella, Salmonella, ….
AI-3/epinefrin/norepinefrin
epinefrin norepinefrin
![Page 39: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/39.jpg)
AI-3 systém u EHEC E. coli
Sekrece typu III = „injekce“ (G- patogeny)
![Page 40: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/40.jpg)
Konkrétní příklady podrobněji
![Page 41: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/41.jpg)
Vibrio harveyi – 3 paralelní systémy
AHL: HAI-1 (3OHC4-homoserin lakton); syntéza LuxM LuxN (senzor) histidin-kináza
AI-2: furanosyl-borát-diester; syntéza LuxS vazba na LuxP a následně na LuxQ (histidin kináza)
CAI-1: 3-aminotridekan-4-one; syntéza CsqA CsqS (senzor) histidin-kináza
![Page 42: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/42.jpg)
Role „Small RNA“ v regulaci QS
sRNA – small RNA Qrr – Quorum Regulatory RNA
nízká hladina AI = nízká hustota buněk P-LuxO → aktivace transkripce 5 regulačních sRNA (Qrr1-5); společně s chaperonem Hfq, destabilizace mRNA pro regulátor LuxR (luxR-mRNA). LuxR nutný pro aktivaci transkripce operonu luxCDABE → nesvítí vysoká hladina AI = vysoká hustota buněk defosforylovaný LuxO → translace luxR-mRNA → produkce LuxR → transkripce operonu luxCDABE → svítí
![Page 43: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/43.jpg)
Vibrio cholerae
• G- fakultativně anaerobní tyčinka
• původce cholery (inkubační doba 12-72h)
• vazba na některé druhy řas a zooplanktonu
• množí se v tenkém střevě (TCP – toxin coregulated pilus)
• produkce enterotoxinu – choleratoxin (CT)
![Page 44: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/44.jpg)
Vibrio cholerae
• analogie s V. harveyi • 2 systémy:
• AI-2/LuxPQ • CAI-1/CqsS
• absence systému AI-1/LuxN • analog LuxR = HapR
QS:
exprese virulentních faktorů + biofilm x
exprese proteázy
exprese virulentních faktorů a tvorba biofilmu –
za nízkých koncetrací
![Page 45: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/45.jpg)
Vibrio cholerae
vps - Vibrio polysaccharide synthesis CT - expression of cholera toxin TCP - toxin coregulated pilus (colonization factor) HapA – hemaglutin protease
Infekční cyklus V. cholerae: biofilm = ochrana (nízkému pH v žaludku) ↓ střevo – rozvolnění biofilmu ↓ kolonizace (exprese CT, TCP) ↓ nárůst počtu buněk ↓ aktivace proteázy (HapA) ↓ uvolnění buněk z epitelu ↓ ven z hostitele ↓ biofilm = přežití ve vnějším prostředí
![Page 46: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/46.jpg)
Vibrio harveyi x V. cholerae
![Page 47: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/47.jpg)
Pseudomonas aeruginosa
• G- aerobní pohyblivá nefermentující tyčinka
• často slizovitý obal
• v odpadních vodách, na rostlinách a v půdě
• často v nemocničním prostředí (katetry, dýchací přístroje)
• kolonizace sliznic dýchacího a močového ústrojí
• infekty popálenin, oka, sepse novorozenců
• vážný problém – pacienti s cystickou fibrózou
• QS kontrola:
faktory virulence (elastáza, exotoxin A, pyocyanin)
tvorba biofilmu
![Page 48: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/48.jpg)
Pseudomonas aeruginosa
dva systémy řízené AHL (Las, Rhl)
• N-(3-oxododecanoyl)-L-homoserine lactone (3OC12-HSL) x LasI/R
elastáza, proteáza, exotoxin A
• N-butanoyl-L-homoserine lactone (C4-HSL) x RhlI/R
rhamnolipidy, pyocyanin, elastáza, fosfatáza
Las
Rhl
![Page 49: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/49.jpg)
Pseudomonas aeruginosa
• LasI – produkce AHL1
• LasR-AHL1 komplex iniciace exprese
virulentních faktorů (lasB elastáza, lasA proteáza, toxA enterotoxinA, aprA alk. fosfatáza)
indukce transkripce rhlR
• RhlI – produkce AHL2
• RhlR-AHL komplex exprese virulentních
faktorů (lasB, aprA) exprese dalších specifických
genů (rhamnolipidy, pyocyanin, cytotoxický lektin)
Zjednodušené schéma QS u Ps. aeruginosa
![Page 50: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/50.jpg)
Pseudomonas aeruginosa
dva systémy řízené AHL (Las, Rhl)
• N-(3-oxododecanoyl)-L-homoserine lactone (3OC12-HSL) x LasI/R
elastáza, proteáza, exotoxin A, alkalická fosfatáza
• N-butanoyl-L-homoserine lactone (C4-HSL) x RhlI/R
rhamnolipidy, pyocyanin, elastáza, proteáza
třetí systém = PQS (Pseudomonas quinolone signal system)
• 2-heptyl-3-hydroxy-4(1H)-quinolone (PQS) x PqsR
• regulace mezi systémy Las a Rhl
Pqs
![Page 51: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/51.jpg)
Pseudomonas aeruginosa
nejde o pralalelní nezávislé systémy, ale o systémy navzájem komplikovaně propojené
• systém Las nadřazen
• systém PQS „propojovací“
• LasR → regulace syntézy PQS → exprese rhlR a rhlI
![Page 52: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/52.jpg)
Agrobacterium tumefaciens • gramnegativní bakterie
• infikuje dvouděložné rostliny (nádory v rostlinných pletivech)
• princip: průnik části DNA bakterie (Ti-plasmid = tumor inducing, T-DNA) do rostlinné buňky, začlenění do genomu rostliny
• inkorporovaná bakteriální DNA:
• geny pro produkci rostlinných hormonů, které vedou k vytvoření nádoru
• geny pro rostlinnou produkci opinů - energetický zdroj pro bakterii
• přenos Ti plasmidů kontrolován QS systémem (Tra systém) – analogie LuxI/R
![Page 53: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/53.jpg)
Agrobacterium tumefaciens
QS kontrola:
• konjugační přenos Ti-plasmidů
• TraI/TraR – lokalizace na Ti-plasmidu
• konjugace vyžaduje 2 typy signálů 1. AHL (TraI bakterie) 2. opin (od hostitele)
• funkce opinů • zdroj energie • signální molekula
2 typy regulačních opinů v procesu konjugace: • „octapine-type“ – octapin: indukce TraR přes aktivátor OccR • „nopaline-type“ – agrocinopin: indukce TraR přes inaktivaci represoru AccR
bazální hladina exprese traI → nízká hladina AHL → + opiny → exprese traR → TraR-AHL → vyšší exprese traI → vyšší hladina AHL…
TraR-AHL → exprese operonů tra (mobilizace Ti-plasmidu) + trb (tvorba pórů pro přechod plasmidu) + traM ( TraM - řada regulačních funkcí)
![Page 54: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/54.jpg)
Erwinia carotovora
• čeleď Enterobacteriaceae
• rostlinný patogen (měkká hniloba brambor)
• poprvé izolována z karotky
• produkce pektolytických a celulolytických enzymů (narušení rostl. pletiv)
QS – dva systémy LuxI/R
• produkce extracelulárních enzymů (ExpI/ExpR) – napadení pletiv až při dosažení dostatečné hustoty populace
• produkce karbapenemových antibiotik (CarI/CarR) – simultánně s exoenzymy = potlačení kompetitivní mikroflóry
• oba systémy - identický AHL
![Page 55: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/55.jpg)
Erwinia carotovora x Serratia sp.
podobné systémy, ale různá regulace
![Page 56: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/56.jpg)
Zástupci G+
![Page 57: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/57.jpg)
Streptococcus pneumoniae
• „pneumococcus“
• grampozitivní, aerobní, α-hemolytický, viridující kok (ve dvojicích)
• běžně kolonizuje sliznici horních cest dýchacích (v neopouzdřené formě) - kolonizováno je až 70 % dětí
• podmíněný patogen – v opouzdřené formě může vyvolávat závažné infekce – meningitidy, pneumonie, sepse
• faktory virulence - pneumolysin O, neuraminidáza, purpurogenní toxin, polysacharidové pouzdro (zabraňuje fagocytóze)
![Page 58: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/58.jpg)
Streptococcus pneumoniae
QS: • navození stavu přirozené kompetence (systém Com)
![Page 59: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/59.jpg)
Přirozená kompetence
• geneticky programovaný fyziologický stav dovolující příjem makromolekul DNA
• DNA vstoupí do recipientní buňky za určitých růstových podmínek → kompetentní buňka
• Bacillus subtilis, Streptococcus pneumoniae
1-Bacterial cell DNA 2-Bacterial cell plasmids 3-Sex pili 4-Plasmid of foreign DNA from a dead cell 5-Bacterial cell restriction enzyme 6-Unwound foreign plasmid 7-DNA ligase I 8-integated DNA
![Page 60: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/60.jpg)
Streptococcus pneumoniae
QS: • navození stavu přirozené kompetence (systém Com)
• podíl na regulaci virulence a tvorby biofilmu
• signální molekula: CSP (Competence Stimulating Peptide) – 17ak
• CSP – vyštěpením z prekurzoru ComC (41ak)
![Page 61: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/61.jpg)
Streptococcus pneumoniae
The precursor of the signaling molecules, ComC, is processed and secreted by the activity of the membrane-associated ComAB machinery. The competence stimulating peptide (CSP) interacts with membrane-associated histidine kinase ComD. This interaction results in the phosphorylation of the regulator ComE (ComE∼P). The activated regulator ComE∼P positively (+) stimulates the transcription rate of the Com-dependent promoters (Pcom). This leads to the increased production of the alternative sigma factor ComX, which in turn by interaction with the RNA polymerase core enzyme results in differential transcription of many secondary Com-dependent genes.
![Page 62: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/62.jpg)
Streptococcus pneumoniae
QS: • navození stavu přirozené kompetence (systém Com)
• podíl na regulaci virulence a tvorby biofilmu
• signální molekula: CSP (Competence Stimulating Peptide) – 17ak
• CSP – vyštěpením z prekurzoru ComC (41ak)
• rychlá odpověď – rychlé navození stavu kompetence a jeho ukončení
• důvod? – buňky ve stavu kompetence jsou citlivé k autolýze
Competence in Streptococcus pneumoniae (red line) rises sharply at a specific growth stage (blue line), followed by a rapid decline. Optical Density (OD550) was used to measure cell number and resistance to erythromycin (Ery-R) was used to assess competence (příjem DNA s rezistencí k Ery)
![Page 63: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/63.jpg)
Staphylococcus aureus
• gram-pozitivní kok
• člověk = přirozený hostitel (20-50%) - kůže, vlasy, sliznice
• záněty kůže a měkkých tkání
• výskyt v potravinách – masné produkty, lahůdkové saláty, mléčné výrobky, pudinky
• riziko – produkce termostabilních enterotoxinů (var 20min)
• enterotoxikóza – zvracení, průjem, křeče (během 1-6 hodin)
Elektronový mikroskop Světelný mikroskop (po obarvení dle Grama) Typické kolonie na selektivním médiu
![Page 64: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/64.jpg)
Staphylococcus aureus
systém arg = accessory gene regulator
• dva operony, dva promotory (P2 a P3)
P2: produkce a detekce signálu AIP
P3: RNAIII = regulační úloha + δ-hemolysin → inhibice biofilmu
AIP
![Page 65: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/65.jpg)
Staphylococcus aureus
1. exprese adhesinů – kolonizace
2. nárůst populace, nedostatek živin
3. exprese exoenzymů a toxinů
4. uvolnění buněk
5. nové působiště s dostatkem živin
![Page 66: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/66.jpg)
Bacillus subtilis
• G+ aerobní tyčinka
• tepelně odolné spóry (120°C/30min)
• QS: dva systémy pod kontrolou AIP
• ComX – regulace přirozené kompetence
• CSF – spolurace (Competence and Sporulating Factor)
• kompetence: příjem DNA na pomezí exponenciální a stacionární fáze
• sporulace: při limitaci živin
ComX
![Page 67: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/67.jpg)
Bacillus subtilis – kompetence (Com)
• cca 10% buněk B.subtilis na počátku stac. fáze ve stavu kompetence
![Page 68: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/68.jpg)
Bacillus subtilis
• „přepínání“ mezi procesy kompetence a sporulace
CSF
• role v obou mechanismech
• intracelulární signál
• při nízké hustotě stimulace aktivity ComP/A
• při vysoké hustotě „přepnutí“ do procesu sporulace
![Page 69: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/69.jpg)
DSF – diffusible signal factor
• poprvé u Xanthomonas campestris
• další G-: Burkolderia, Pseudomonas, Stenotrophomonas…
• zákl. struktura: mastné kyseliny
Jiné signální molekuly QS
indol
• podrobně popsáno u E. coli indol
![Page 70: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/70.jpg)
Xanthomonas campestris - DSF
• G- aerobní tyčinka
• rostlinný patogen – bakteriální skvrnitost
• produkce extracelulárních enzymů (proteázy, pektinázy, celulázy)
• kontrola QS: produkce enzymů, biofilm, rezistence k toxinům
• signální molekula: DSF = diffusible signal factor
![Page 71: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/71.jpg)
Xanthomonas campestris - DSF
• RpfF – signal synthesis
• RpfC – detection
• RpfG – signal transduction
RpfG
• fosfodiesteráza
• štěpí intracelulární cyklický nukleotid diguanosin-monofosfát (c-di-GMP) ; tzv. „second messenger“ – malé efektorové molekuly mající nezastupitelnou roli v řadě signálních drah a regulačních procesů
propojení mechanismů quorum sensing a c-di-GMP
![Page 72: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/72.jpg)
Xanthomonas campestris - DSF
At low cell densities, when the concentration of DSF is low, RpfC interacts with RpfF and decreases its activity. In this state RpfG (green) is unphosphorylated and inactive. This leads to an increase in c-di-GMP levels. C-di-GMP binds to the transcription factor Clp (gray) to abrogate its ability to bind DNA.
At high cell density, RpfC binds to DSF, leading to phosphorylation of RpfG, which activates its PDE activity and decreases the c-di-GMP pool. RpfF no longer binds to RpfC and produces more DSF. The decrease in c-di-GMP activates Clp, which then induces target gene expression either directly or through modulation of other transcription factors.
![Page 73: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/73.jpg)
Indol jako signální molekula QS
• produkce indolu - E. coli, některé kmeny Shigella, Enterococcus faecalis, V. cholerae, Aeromonas… (G- i G+)
• indol – různé funkce (extracelulární signál, tvorba biofilmu, kontrola virulence, stabilita plasmidů…
• signál QS – popsáno r. 2007
• řada podobností s AI-2
• TnaA – tryptofanáza (rozklad tryptofanu na indol + pyruvát + NH3)
![Page 74: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/74.jpg)
Indol jako signální molekula QS
• TnaA – tryptofanáza (rozklad tryptofanu na indol + pyruvát + NH3)
![Page 75: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/75.jpg)
Architektura systémů QS
• paralelní: V. harvey / V.cholerae
• propojené: Ps. aeruginosa (komplikovaně propojené Las, Rhl, Pqs)
• kompetitivní: B. subtilis (přepínání mezi kompetencí a sporulací)
• blesková reakce „On-Off“ : S. pneumonie (CSP - kompetence)
• odpověď na podnět hostitele: A. tumefaciens (opiny)
![Page 76: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/76.jpg)
Využití znalostí o QS
Quorum Quenching (QQ) = „zhášení“
inhibice QS na různých úrovních
Využití
• medicína – nový typ „antibiotik“
• potravinářství – konzervanty, prevence kontaminace
zaměřeno především na kontrolu virulence a tvorby biofilmu
![Page 77: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/77.jpg)
Inhibice QS
3 strategies can be applied
Targeting AHL signal
dissemination
Targeting the signal
receptor
Targeting signal
generation
Signal precursor
Signal
Signal receptor
Signal precursor Signal precursor
Signal Signal
Signal receptor Signal receptor
X
X X
![Page 78: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/78.jpg)
Inhibitory QS
malé molekuly • kompetitivní inhibice – vazba na signální receptor • nejčastěji AHL-dependentní inhibitory • přírodní furanony
• řasa Delisea pulchra • L-canavanine – luštěniny (až 5% sušiny) • grapefruit • cinnamaldehyd (skořicovník)
• modifikace přírodních látek – zvýšení účinnosti
makromolekuly – „QQ enzymes“ • řada bakterií (konkurenční boj) • nejčastěji degradace signální molekuly (AHL, AI-2, DSF, PQS)
• AHL laktonázy – hydrolýza laktonu • AHL acylázy – hydrolýza amidové vazby (lakton + m.kyselina) • AHL oxidázy a reduktázy – modifikace AHL
• např. Bacillus sp. – metalo-β-laktamáza AiiA
![Page 79: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/79.jpg)
Inhibitory QS – QQ enzymy
![Page 80: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/80.jpg)
Laktonázy x Erwinia carotovora
Lactonase AiiA expression in plants inhibits virulence effects of Erwinia carotovora. E. carotovora was inoculated onto leaves of tobacco (a and b) or potato tuber slices (c), transformed with an aiiA expression vector (top row) or untransformed (bottom row). The extent of tissue maceration was measured at 20 h (a), 40 h (b), and 48 h (c).
![Page 81: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/81.jpg)
Inhibice v systému LuxS
Possible AI-2-based druggable targets. (1) LuxS; (2) AI-2 transporter (such as LsrB); (3) efflux pump for AI-2; (4) extracellular receptor for AI-2 (such as LuxP); (5) intracellular receptor for AI-2; (6) AI-2-regulated transcription factor or repressor (such as LsrR); (7) small regulatory RNA (sRNA) mediated quorum sensing (QS) circuit.
![Page 82: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/82.jpg)
Pseudomonas aeruginosa - QQ
![Page 83: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/83.jpg)
Pseudomonas aeruginosa - QQ
Potenciální cíle QQ:
1. LasR / RhlR
2. AHL (3O-C12-HSL; C4-HSL)
3. lasI/lasR a rhlI/rhlR exprese
QS:
• systémy las, rhl (+ regulační pqs)
• faktory virulence
• problém - multirezistentní kmeny
• QQ – možná strategie terapie
![Page 84: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/84.jpg)
Pseudomonas aeruginosa - QQ
Cíl QQ: LasR / RhlR
• analogy AHL
• kompetice o LasR (RhlR)
• inhibice aktivace LasR → nedochází k expresi elastázy
• sloučeniny: s anilinovým kruhem, syntetické halogenované furanony
![Page 85: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/85.jpg)
Pseudomonas aeruginosa - QQ
Cíl QQ: AHL
• AHL-specifické protilátky
• enzymové štěpení – laktonázy (problém s distribucí do místa infekce)
• blokace na úrovni LasI
(inhibice produkce syntézy AHL - dráha SAM)
![Page 86: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/86.jpg)
Pseudomonas aeruginosa - QQ
Cíl QQ: lasI/lasR a rhlI/rhlR exprese
• inhibice regulačních faktorů potřebných pro expresi
• „antisense“ oligonukleotidy – vazba na lasR/lasI → inhibice translace
![Page 87: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/87.jpg)
Něco navíc
![Page 88: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/88.jpg)
Transgenní E.coli - produkce LasR – rozpoznání komunikace Ps. aeruginosa
zaznamenání signálu LasR - exprese dvou genů • pyocin • lyzační protein – uvolnění pyocinu
Účinnost – až 99% buněk Ps. aeruginosa v suspenzi; až 90% buněk v biofilmu (Saeidi, Wong, Lo, Nguyen, Ling, Leong, Poh & Chang. 2011. )
Transgenní E. coli
„The beauty of this solution is that it uses P.aeurginosa’s own weapons against it“
![Page 89: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/89.jpg)
„Odposlech“
Chromobacterium violaceum
• G- fakultativně anaerobní krátká tyčinka
• pigment violacein (atb účinek)
• produkuje pigment v přítomnosti AHL s krátkým řetězcem
• mutantní kmeny – blokace syntézy AHL (biosenzory)
Test látek s anti-QS účinkem test produkce AHL
![Page 90: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/90.jpg)
Biosenzory AHL
• neprodukují signál
• mají receptor (LuxR)
• reportérový gen (GFP, luciferáza…)
• biosenzory pro různá spektra AHL (AHL s krátkým nebo dlouhým řetězcem…)
TCL přeliv:
• extrakt rozdělem TCL • přeliv agarem s reportérovým kmenem • vznik „spotů“ • některé tvarově specifické
3-O-AHL kapky 3-OH-AHL kulaté
![Page 91: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/91.jpg)
Shrnutí
systémy komunikace
signální molekuly
fenotypy řízené QS
inhibice QS
![Page 92: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/92.jpg)
Systémy komunikace
intra-species AI-1, AIP
inter-species AI-2
inter-kingdom AI-3
![Page 93: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/93.jpg)
Systémy komunikace
![Page 94: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/94.jpg)
Signální molekuly QS
acyl-homoserin laktony (AHL) AI-1 G negativní analogie V. fischeri
furanony AI-2 Vibrio sp. – furanosyl-borát diester cross-talk (G+ i G-)
oligopeptidy AIP modifikace G pozitivní
AI-3
epinefrin/norepinefrin buňka-hostitel, EHEC
CAI-1 tridekanony (ketony s řetězcem C13) Vibrio harveyi, V. cholerae
PQS = 2-heptyl-3-hydroxy-4-chinolon Pseudomonas aeruginosa
DSF – nenasycené mastné kyseliny Difusible Signal Factor Xanthomonas campestris
indol mezidruhová komunikace , E. coli
Základní: Další:
![Page 95: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/95.jpg)
![Page 96: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/96.jpg)
Fenotypy regulované QS
![Page 97: Prezentace aplikace PowerPointold-biomikro.vscht.cz/vyuka/bm/Quorum_sensing_2014.pdf · Actinobacillus actinomycetemcomitans Periodontal virulence, Mixed-species biofilms Bacillus](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042810/5f9d3662669a705e5b558b61/html5/thumbnails/97.jpg)
Konkrétní příklady
• Vibrio fischeri - modelový systém LuxI/LuxR
• Vibrio harveyi / Vibrio cholerae – paralelní systémy, role small-RNA
• Pseudomonas aeruginosa – navzájem propojené systémy Las, Rhl, PQS
• E. coli – zákl. systém AI2 - Lsr, EHEC kmeny komunikace s hostitelem přes AI-3, indol
• Agrobacterium – přenos plasmidů, opiny
• Erwinia – extracelulární proteiny + antibiotika
• Xanthomonas – propojení se systémem c-di-GMP, DSF
• Streptococcus pneumoniae - kompetence
• S. aureus – systém Arg
• Bacillus subtilis – přepínání mezi stavem sporulace a kompetence