04/12/2015
2
Género Campylobacter: un grupo
de bacterias zoonóticas de
importancia en salud pública, transmitidos por alimentos
Dr. Heriberto Fernández
Instituto de Microbiología Clínica
Universidad Austral de Chile
Valdivia - Chile
e-mail: [email protected]
Red Interamericana de Laboratorios de
Análisis de Alimentos - RILAA
04/12/2015
3
¿Por qué estudiar Campylobacter?
• Infecciones por especies de la Familia Campylobacteraceae: campylobacteriosis
• La enteritis por Campylobacter
• campylobacteriosis de mayor importancia en salud pública
• agentes principales: C. jejuni y C. coli (también pueden producir infecciones sistémicas y complicaciones postinfección - SGB)
• El impacto de la campylobacteriosis en salud pública va en aumento
CAMPYLOBACTERIOSIS
04/12/2015
4
Laboratory reporting of selected GI pathogens in England & Wales - 1977 to 2002. CDSC
0
10000
20000
30000
40000
50000
60000
1977 1979 1981 1983 1985 1987 1989 1991 1993 1995 1997 1999 2001
Year
La
b r
epo
rts
(10
00
's)
Campylobacter
Salmonella
Rotavirus
Shigella
Cryptosporidium
Incidence and Trends of Foodborne Illness, U.S.A. 2011
04/12/2015
7
Vibrio fetus
Smith y Taylor,1919
Vibrio jejuni Jones y Little, 1931
Vibrio coli
Doyley, 1948
Campylobacter gen. nov.
Sebald y Véron 1963
Primera observación niños con diarrea Vibrio felinus Escherich 1886
1957: Elizabeth King relaciona V. jejuni y V. coli con diarrea en humanos
diferentes a V. fetus “Related Vibrios”
Hasta 1972 sólo se conocían 12 casos de infecciones por C. jejuni en humanos Todos con diarrea y con hemocultivos positivos Todos con coprocultivos negativos para Campylobacter
1972 diarrea en humanos C. fetus subsp. jejuni Jean Paul Butzler et al. - Bélgica
1977: medio selectivo Skirrow
1992: claridad taxonomía Familia Campylobacteraceae P. Vandamme
Descripción nuevas especies
04/12/2015
8
Reino: Procariotae
Phylum: Proteobacterias
Clase: Epsilonproteobacterias
Orden: Campylobacterales
Género
Campylobacter
Familia:
Campylobacteraceae
Familia:
Helicobacteraceae
Género
Arcobacter
Género
Helicobacter
Género:
Sulfuruspirillum
Género Campylobacter – C. jejuni – C. coli – C. lari – C. upsaliensis – C. lanieane – C. fetus – C. concisus – C. curvus – C. gracilis – C. helveticus – C. hominis – C. hyointestinalis – C. mucosalis
C. showae C. rectus C. sputorum C. insulaenigrae C. canadiensis C. peloridis C. avium C. cuniculorum C. subantarticus C. volucris C. ureolyticus C. troglodytis
Vandamme et al. (2011). IJSEM
Especies de Campylobacter
04/12/2015
9
¿Cómo es y quién es Campylobacter?
GÉNERO CAMPYLOBACTER
Bacilos Gram negativos curvos (alas de gaviota) Flagelación polar (8 ) Microaerófilos No utilizan azúcares Energía de aminoácidos Especies termotolerantes 42ºC Zoonóticos Las aves son un reservorio importante Agentes de diarrea en el hombre (1ª causa en los países industrializados; 2ª o 3ª en A. Latina) Agentes de síndrome de Guillain Barré 25 especies y 9 subespecies
04/12/2015
10
Características morfológicas de Campylobacter
Características morfológicas de Campylobacter
04/12/2015
13
Adherencia de Campylobacter jejuni a células HEp-2
1.4 ± 0.7 27.5 T-1
4.5 ± 2.3 70.0 O52
X bact/cel Adherencia % Cepa
Medicina (Bs. As.) 56:487-492, 1996
Adherencia de Campylobacter a células epiteliales HEp-2
Origen Cepas Especie Adhesión (%) Bacterias/celulas
H
U
M
A
N
O
052
456
372
77347
011-02
C. jejuni II
C. jejuni II
C. jejuni II
C. jejuni I
C. jejuni I
72,0%
81,0%
76,5%
60,0%
99,5%
1,90
3,02
2,31
1,96
11,75
AGUAS 68 M
40-2
C. coli II
C. jejuni II
59,0%
31,5%
2,26
1,57
ANIMAL
C 13
Gt 4
42-B
C. jejuni II
C. coli I
C. jejuni II
49,0%
52,5%
17,5%
1,79
2,99
1,27
AVES 67 Gr
P 8
C. jejuni I
C. coli I
69,5%
26,0%
1,67
1,63
04/12/2015
14
Inhibición de la adherencia de Campylobacter a
células HEp-2 por calostro humano
Cepas
Adhesión
convencional
%
Pre-incubación
Adhesión Inhibición
% %
Inc. simultánea
Adhesión Inhibición
% %
052
456
372
77347-2
011-02
T-1 **
72,0
81,0
76,5
60,0
99,5
3,5
21,0 70,8 *
5,0 93,8 *
12,0 84,3 *
22,5 62,5 *
62,0 37,7 *
1,0 71,4
16,0 77,8 *
18,5 46,7 *
28,0 63,4 *
28,0 46,7 *
70,5 29,1 *
0,0 100,0
** cepa aflagelada utilizada como control negativo.
* P < 0,01
Fernández H. Datos no publicados
04/12/2015
15
Capacidad invasora a células HEp-2 de C. jejuni según su origen
52 10 42 Total
1 0 1 Pavo
1 0 1 Tiuque
3 1 2 Agua
3 0 3 Bovino
2 0 2 Perro
5 0 5 Gorrión
6 1 5 Pato
9 3 6 Cerdo
9 2 7 H. pollo
13 3 10 Humano
Total Cepas - Cepas + Origen
Fernández et al. Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 97:509-511, 1997
04/12/2015
16
Célula VERO normales
CDT +
C. jejuni 74.2%
C. coli 64.7%
¿Cómo y por qué se adquiere Campylobacter?
04/12/2015
17
Etiología de las diarreas de origen alimentario
Vehículo principal Alimentos de origen animal
Agentes etiológicos más frecuentes > 90% de las enteritis producidas por
Campylobacter (SGB)
Salmonella Escherichia coli (EHEC - SUH)
Arcobacter
Campylobacter termotolerantes son agentes de gastroenteritis
Por consumo de:
• Leche
• Agua
• Mariscos
• Carnes: aves y otros animales
Por contacto con animales y otras fuentes de contaminación
04/12/2015
18
EN PAÍSES INDUSTRIALIZADOS
• pollos y aves
• alimentos (carne) - agua (no tratada) - leche (cruda)
• otros alimentos pueden contaminarse cruzadamente
• mascotas jóvenes (perros y gatos)
• viajes al exterior
Son las fuentes potenciales más frecuentes de infección humana
EN PAÍSES EN DESARROLLO
• transmisión hídrica
• contacto directo con animales
• fuentes alimentarias (incluyendo carne de ave)
• fuentes ambientales
• manipuladores de alimentos?
Pueden ser las rutas más importantes de infección humana
Factor de
riesgo
Presencia del factor de riesgo
en pares caso/control
si/si si/no no/si no/no p Odds
ratio
Pollos C.j + 2 25 2 75 <0.001 12.5
Animal C.j + 3 31 7 63 <0.001 4.4
Perros C.j + 0 6 2 96 NS 3.0
Sin baño
dom.
16 39 14 35 <0.001 2.8
Sin agua
potable
18 28 12 46 <0.025 2.3
Adaptado de: Grados, O. et al. WHO Bull. 66:369-374, 1988
FACTORES DE RIESGO ASOCIADOS A SANEAMIENTO AMBIENTAL EN LA DIARREA POR CAMPYLOBACTER
04/12/2015
19
Campylobacter en América Latina
4.0 14.1 Chile
15.0 23.0 Perú
4.9 16.8 Colombia
6.6 11.2 Brasil
9.6 10.5 Bolivia
6.1 Argentina
Normales Con diarrea País
Venezuela 9.2 9.6
Ecuador 10.0 7.5 7.0
04/12/2015
20
Aislamiento de Campylobacter en carnes, menudencias, huevos y leche en América Latina
5.0 Colombia Leche
25.0 Chile Huevos
95.1 Chile Hígados de ave
35.0 Brasil Carne de cerdo
57.0 Costa Rica Carne de ave
84.0 Chile Carcasa de ave
13.5 – 78.7 Brasil Carne de ave
% AISLAMIENTO PAÍS ALIMENTO
Hígados de ave en Loja, Ecuador: 51 muestras, 31 + (60,8%)
GALLINAS C. jejuni
N° %
C. coli
N° %
TOTAL
N° %
De crianza libre
n = 150 88 58.8 12 8.0 100 66.7*
Ponedoras
n = 143 32 22.4 10 7.0 42 29.4*
SPF
n = 150 9 6.2 2 1.3 11 7.3*
*p<0.05
Campylobacter en tres grupos de gallinas mantenidas en diferentes condiciones sanitarias
Fernández H., et al. Brazilian Journal of Microbiology (1993) 24:265-268
LOJA: 120 muestras trabajadas 49 muestras positivas (40,8)
04/12/2015
21
Frecuencia total de las especies de Campylobacter aisladas de carne de ave para consumo humano
A. Fernández. Tesis de Magíster en Microbiología UACh. 2010
Positivos
Negativos122 ( 87,1%)
18 ( 12,9%)
Distribución de géneros aislados en 80 muestras de mariscos bivalvos
GENEROS BACTERIANOS N° / n %
Escherichia 80 / 80 100
Enterococcus 71 / 80 88.8
Aeromonas 40 / 80 50
Arcobacter 25 / 80 31.3
Vibrio 22 / 80 27.5
Campylobacter 2 / 80 2.5
Salmonella 1 / 80 1.3
Shigella 0 0
Yersinia 0 0
C. Saldivia. Tesis de Licenciatura en Tecnología Médica. UACh.. 2002
04/12/2015
22
Aislamiento de especies de Campylobacter en muestras fluviales
METODO N/n % N/n % N/n %
Tórula de Moore 44/181* 24,3 34/44 77,3 10/44 22,7
MUESTRAS POSITIVAS C. COLI C. JEJUNI
Fernández, H. et al. Arch. Med. Vet. 35: 95-97, 2003
Antes de instalación planta de tratamiento de aguas servidas
Después de instalación planta de tratamiento de aguas servidas
Número de muestras estudiadas: 100 Cultivos + 12 (12%)
C. jejuni : 8 C. coli : 2 C. upsaliensis : 2
Rodríguez, R. Tesis Licenciatura en Tecnología Médica. UACh.
Algo sobre resistencia a los antibióticos en Campylobacter
04/12/2015
23
• En animales destinados a la producción de alimentos los antibióticos se usan para: • tratamiento • profilaxis y prevención • promotores del
crecimiento. • El abuso de su empleo en
estos animales tiene importantes consecuencias en salud pública pues promueve: • el desarrollo de
antibiótico-resistencia • aparición de genes de
resistencia • transmitidos a personas
• Ello ocurre usualmente por: • consumo de alimentos • contacto directo con
animales • mecanismos ambientales
• La resistencia en Salmonella y Campylobacter está claramente ligada al: • uso de antibióticos en
animales destinados a la producción de alimentos
• estas bacterias producen ETAs
04/12/2015
24
• Es de especial interés la resistencia a los antibióticos de uso crítico en medicina humana
• Ejemplo de ellos es el uso de fluoroquinolonas en estos animales: • ha generado la aparición
de resistencia en Salmonella y Campylobacter
• Problema emergente en salud pública
RESISTENCIA A LAS FLUOROQUINOLONAS EN
CAMPYLOBACTER JEJUNI Y C. COLI
• aparece inicialmente en Europa, segunda mitad de los 80’s
• después de la introducción de las fluoroquinolonas en la práctica veterinaria
• posteriormente aparece en muchos países industrializados
• también en países en vías de desarrollo
• en el sur de Chile:
• en 1989 y 1992 no fueron encontradas cepas resistentes
• las primeras cepas resistentes aparecen en 1995
• en otros países de América del Sur situación semejante
04/12/2015
25
FRECUENCIA DE AISLAMIENTO DE Campylobacter TERMOTOLERANTES RESISTENTES AL ÁCIDO NALIDÍXICO EN ANIMALES DOMÉSTICOS -1995
ORIGEN Nº de muestras
estudiadas
Nº (%*) de muestras positivas
C.jejuni ANR Nº (%**) biotipo
C.coli ANR Nº (%**)
biotipo
Cerdos 110 27 (24,5) 1 (3,7) I 1 (3,7) II
Perros 62 28 (45,2) 1 (3,6) I 0
Gatos 5 2 (40,0) 1 (50) III 0
TOTAL 177 57 (32,2) 3 (5,3) 1 (1,8)
ANR Ácido nalidíxico resistente (%*) sobre el número de muestras estudiadas (%**) sobre el número de muestras positivas
H. Fernández et al. Arch. Med. Vet. 28: 151-154, 1996
Resistencia antimicrobiana (%) de C. jejuni e C. coli en algunos países de América del Sur FLUOROQUINOLONAS - CIPROFLOXACINA
* resistencia cruzada con ácido nalidíxico, norfloxacina y enoxacina
** resistencia cruzada con ácido nalidíxico y norfloxacina
País - año fuente
C. jejuni resistencia %
C. coli resistencia %
Método
Chile – Valdivia 1989 gallinas 1992 niños, gallinas perros, agua, aves acuáticas hígados de pollo 1995 cerdos, perros , gatos 1999 gallinas 2000 humanas
Chile – Santiago 1999 gallinas
0
0
5.3* 12.5 2,1
50.0**
0
0
1.8* NS 1,9
MDDA
MDDA
Wilkins- Thiel E- test MDD
DDAM
Peru – Lima 2000 humanas 78.0 MDDA
Argentina - Bs. As. 1997 – 2000 humans 1999 - La Plata
hígados de pollo cerdos (fetos abortados, líquido amniótico)
59.6**
norfloxacina R norfloxacina R
49.1
norfloxacina R
MDD
MDD e MDDA
04/12/2015
26
0
10
20
30
40
50
60
70
80
galli-
nas
niños perros aves
acuá-
ticas
hígados
pollos
agua
de río
1992
1999
2000
2002
EVOLUCIÓN DE LA RESISTENCIA A
FLUOROQUINOLONAS EN C. JEJUNI Y C. COLI EN EL
SUR DE CHILE 1992 - 2002
H. Fernández. Datos no publicados
Antibiótico Especie carne de ave na nb % R CIM90 CIM50
Levofloxacina C. jejuni Pollo 57 11 19 16 4
Pavo 29 8 28 16 0.125
C. coli Pollo 36 19 53 16 8
Pavo 24 7 29 16 2
Ciprofloxacina C. jejuni Pollo 57 43 75 64 16
Pavo 29 12 41 64 2
C. coli Pollo 35 31 89 ≥ 128 32
Pavo 25 16 64 64 16
Ampicilina C. jejuni Pollo 57 6 11 16 8
Pavo 29 3 10 16 8
C. coli Pollo 35 2 6 16 8
Pavo 25 2 8 16 8
Comportamiento de 146 cepas de Campylobacter aisladas de las muestras de pollo y pavo, frente a tres antimicrobianos
A. Fernández .Tesis de Magíster en Microbiología UACh. 2010
04/12/2015
28
¿Otros reservorios?
¿Especie nueva?
Enviada a Universidad de Ghent en Bélgica laboratorio Dr. Peter Vandamme
Campylobacter insulaenigrae Resultado:
Braz. J. Microbiol. 42: 261-265, 2011
SOBREVIDA DE CAMPYLOBACTER
JEJUNI SSP. JEJUNI Y ARCOBACTER
BUTZLERI EN AMEBAS DE VIDA LIBRE
(ACANTHAMOEBA CASTELLANII)
Profesor Patrocinante: Dr. HERIBERTO FERNÁNDEZ
Alumno: MARÍA PAZ VILLANUEVA CORONADO
PROYECTO FONDECYT 1030245
04/12/2015
29
Interacción de C. jejuni con A. castellanii
• A los 50-60 minutos
– bacterias al interior de las amebas
– dentro de vacuolas
– gran motilidad
• No se observaron bacterias libres en el citoplasma de la ameba
Interacción de C. jejuni con A. castellanii
• Existencia de bacterias
intracelulares confirmada por – microscopía óptica (tinción de
Giménez o May Grünwald-Giemsa)
– microscopía electrónica de transmisión
• formas bacilares dentro de vacuolas
04/12/2015
30
Sobrevida de C. jejuni en A. castellanii expresado en ufc/ml en un período de 240 horas
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
24 48 72 120 168 240
tiempo (horas) postinfección
ufc
/ml
PUCp 190
GB-2004
ATCC 33560
CONTROL
Villanueva M.P. Tesis Licenciatura en Tecnología Médica. UACh. Fernández, H. et al. 13th Interntional Workshop on Campylobacter, Helicobacter and Related Organisms, 2007.
VER VIDEO 1
04/12/2015
31
STRAIN E 14 Chicken Culture 1 Culture 2 Culture 3
GROUP 1 1 positive positive positive
INOCULATION 2 negative negative positive
DAY 2 3 positive positive positive
González, M. Tesis de Magíster en Microbiología. UACh. Fernández et al. 14th Interntional Workshop on Campylobacter, Helicobacter and Related Organisms, 2007
POLLOS SPF
Colonización intestinal de pollos Broiler por C. jejuni como endosimbionte de A. castellanii
Días post-
inoculación
(coprocultivo)
GRUPO1
GRUPO2
GRUPO3
CONTROL
(+) ( - )
*Po1 Po2 Po1 Po2 Po1 Po2 PoA PoB
2 + + - - + + + -
4 + + + + + + + -
6 + + + + + + + -
* Po= pollo
Sandra Flores. Tesis Licenciatura en Ciencias 2010
04/12/2015
33
Infección por alimentos cárneos
1. Manipulación del producto crudo contaminado
2. Consumo de carne cruda o insuficientemente
cocida que esté contaminada
3. Contaminación cruzada de alimentos
Lancet 336:291, 1991
• Agua y alimentos:
– El aislamiento de Campylobacter a partir de muestras de alimentos o de muestras ambientales requiere de métodos más complejos que las muestras de deposiciones
– La utilización de un medio de enriquecimiento incubado a 37° C es necesaria para permitirle a la bacteria reparar los daños subletales producidos por el calor o el frío
Aislamiento de Campylobacter : muestras de alimentos y agua
04/12/2015
34
CONSERVACIÓN DE ALIMENTOS
FRÍO
REFRIGERACIÓN CONGELACIÓN
INJURIA
DAÑO CELULAR O METABÓLICO REVERSIBLE
POR ACCIÓN DE ELEMENTOS FÍSICOS O QUÍMICOS
INJURIA
• SENSIBILIDAD A LOS ANTIBIÓTICOS SELECTIVOS
(polimixina, rifampicina)
• INCUBACIÓN A 42ºC PRODUCE MAYOR PÉRDIDA
DE VIABILIDAD QUE A 37ºC
• ACCIÓN DE succinato de sodio y cisteína AYUDA A
LA REUPERACIÓN (10 células dañadas/ml)
J. Food Safety 6:183, 1984
04/12/2015
35
Características de las células de
Campylobacter dañadas por la congelación
• Sensibles a antibióticos selectivos
Polimixina Rifampicina
• Incubación a 42ºC produce mayor perdida
de viabilidad que a 37 ºC.
• Acción de Succinato de Na y Cisteína HCl
favorece la recuperación (10 células
dañadas / ml)
J.. Food. Safety 6:183, 1984
Crecimiento a 42º C con y sin antibióticos de células de
Campylobacter jejuni sometidas y no sometidas
congelación J. Food. Prot. 9:161,1986
Congelación
3
4
5
6
7
8
0 2 4 6 8 10
Tiempo (h) a 42 ºC
Caldo Brucella
Caldo Brucella + AB
Sin Congelación
3
4
5
6
7
0 2 4 6 8 10
Tiempo (h) a 42 ºC
Caldo Brucella
Caldo Brucella + AB
04/12/2015
36
4
5
8
6
7
9
Lo
g u
fc/m
l
0 h. 1 h.
B- V T P C A B- B+
Efecto de los antibióticos en la sobrevida de
Campylobacter dañados por congelación
(Incubación a 42 ºC)
J. Food. Prot. 49:161, 1986
MÉTODO DE RAY Y JOHNSON PARA OPTIMIZAR LA RECUPERACIÓN DE CAMPYLOBACTER EN ALIMENTOS CONGELADOS
J. Food Safety 6:183, 1984
MEDIO DE ENRIQUECIMIENTO: Caldo Brucella
succinato de sodio 0.3%
cisteína 0.01%
vancomicina
trimetoprim
cefalotina
anfotericina
TÉCNICA : - sembrar el medio y preincubar 37ºC - 6 h - microaerofilia
- adicionar polimixina
- reincubar 42ºC - 24 h - microaerofilia
- repicar a medio sólido para la obtención de colonias
04/12/2015
37
HÍGADOS DE POLLO PARA CONSUMO HUMANO
¿Tienen Campylobacter?
Hígados de
pollo
CALDO VCT
Sembrar el medio y preincubar
37 ºC – 6 hrs.
Microaerofilia
Adicionar polimixina B
Reincubar a 42ºC – 24 hrs.
Repicar
SKM AZCP
04/12/2015
38
Aislamiento de Campylobacter a partir de
hígados de pollo
- - 100 123 Total
- - 4.9 6 Muestras negativas
39 (42.4) 53 (57.6) 74.8 92 C. coli
15 (60) 10 (40) 20.3 25 C. jejuni
II I
Biovar % n Especie
Método ISO 10272
Muestra
Caldo Park y Sanders
+ Antibióticos suplemento A Vancomicina 0.1 g -
Trimetoprim 0.1 g
32 ºC – 4 h
Agregar suplemento B
Cefoperazona 0.032 g Cicloheximida 0.1 g
37ºC – 2 h
A. Karmali + 2º Medio
(A. Skirrow etc)
42 ºC hasta 5 días
Siembra directa
A. Karmali + 2º Medio
(A. Skirrow etc)
42 ºC hasta 5 días
Enriquecimiento en Caldo
Preston (selectivo)
modificación
incubación a 41.5ºC ( fines 2001)
04/12/2015
39
Método ISO 10272:2006
Muestra
Enriquecimiento en Caldo Preston
37 ºC x 4 a 6 h
Luego a 41,5°C x 44h microaerofilia
Agar mCCD + 2º Medio
41,5°C x 44h microaerofilia
Características de las colonias
Características morfológicas y
bioquímicas
0TROS MÉTODOS:
• Norma Francesa ISO/DIS 10272
• FDA BAM methods
• Australian Standard Method for detection of Campylobacter in foods (AS 5013.6:2015)
• UK Validated Procedure. Detection of Campylobacter species
• Norma Nórdica. Nordic Committee on Food Analysis
04/12/2015
40
Método ISO 10272:2006
Muestra
Enriquecimiento en Caldo
Preston 37 ºC x 4 a 6 h
Luego a 41,5°C x 44h
microaerofilia
Agar mCCD + 2º Medio
41,5°C x 44h
microaerofilia
Características de las colonias
Características morfológicas y
bioquímicas
Ensayo VIDAS® Campylobacter BIOMÉRIEUX
• 48 h de enriquecimiento
• prueba inmunoenzimática
• detecta de antígenos de
Campylobacter por el método
ELFA (Enzyme Linked
Fluorescent Assay)
• sistema automatizado
• resultados en 45 min
• indica presencia o ausencia
• confirmación
• validado en carne de pollo
• detecta C. jejuni/coli/lari
Método ISO 10272:2006
Muestra
Enriquecimiento en Caldo
Preston 37 ºC x 4 a 6 h
Luego a 41,5°C x 44h
microaerofilia
Agar mCCD + 2º Medio
41,5°C x 44h
microaerofilia
Características de las colonias
Características morfológicas y
bioquímicas
DuPont Qualicon BAX® System
REAL-TIME PCR ASSAY
FOR CAMPYLOBACTER
JEJUNI/COLI/LARI
• 24-48 h de enriquecimiento
• menos de 90 min de proceso
en tiempo real
• validado en cultivos
enriquecidos en muestras
aviares (pavos, pollos)
• sensibilidad equivalente a
ISO 10272-1:2006 (detecta 104
cfu/mL)
• especificidad >99%
04/12/2015
41
Método ISO 10272:2006
Muestra
Enriquecimiento en Caldo
Preston 37 ºC x 4 a 6 h
Luego a 41,5°C x 44h
microaerofilia
Agar mCCD + 2º Medio
41,5°C x 44h
microaerofilia
Características de las colonias
Características morfológicas y
bioquímicas
CampyFood ID
• La especificidad está dada
por la asociación específica
de un indicador de color y
de antibióticos
• Esta innovación permite
el crecimiento de colonias
rojo-anaranjadas en un
medio claro facilitando la
identificación de las
colonias
Método ISO 10272:2006
Muestra
Enriquecimiento en Caldo
Preston 37 ºC x 4 a 6 h
Luego a 41,5°C x 44h
microaerofilia
Agar mCCD + 2º Medio
41,5°C x 44h
microaerofilia
Características de las colonias
Características morfológicas y
bioquímicas API CAMPY
Campylobacter (19 especies)
SISTEMA ESTANDARIZADO
PARA IDENTIFICACIÓN DE
CAMPYLOBACTER
• ensayos miniaturizados
• una base de datos específica
• la galería API Campy consta de 20
microtubos con substratos
deshidratados
04/12/2015
42
Método ISO 10272:2006
Muestra
Enriquecimiento en Caldo
Preston 37 ºC x 4 a 6 h
Luego a 41,5°C x 44h
microaerofilia
Agar mCCD + 2º Medio
41,5°C x 44h
microaerofilia
Características de las colonias
Características morfológicas y
bioquímicas
DRYSPOT
CAMPYLOBACTER TEST
KIT (OXOID)
• test de aglutinación en látex
para identificar
Campylobacter en medios de
cultivo sólidos (colonias)
• partículas de látex
sensibilizadas con anticuerpos
de conejo contra antígenos de
superficie de Campylobacter
¿Y para el futuro…?
• Participación de otras especies en diferentes cuadros clínicos Periodontits
varias especies Enfermedad de Crohn
C. concisus Participación de otras especies en diarrea
C. concisus C. rectus C. ureolyticus
04/12/2015
43
Frequency Value of p (ᵡ ²)
Smokers (%) Non-smokers (%) Smokers v/s Non-smokers
Campylobacter spp. 100 86.7 0.143
C. rectus 93.3 66.7 0.068
C. concisus 73.3 60 0.439
C. gracilis 60 6.7 0.002 a
C. ureolyticus 6.7 13.3 0.543
Occurrence of different species of Campylobacter among smoker and non-smoker patients with periodontitis
a Statistically significant (p = <0.05)
¿Y para el futuro…?
• Descripción de nuevas especies Género en permanente expansión
04/12/2015
44
Género Campylobacter
• C. fetus
– subsp. fetus
– subsp. venerealis
• C. coli
• C. concisus
• C. curvus
• C. gracilis
• C. helveticus
• C. hominis
• C. hyointestinalis
– subsp. hyointestinalis
– subsp. lawsonii
• C. jejuni
- subsp. jejuni
- subsp. doylei
• C. lanienae
• C. lari
– subsp. lari
– subsp. concheus
• C. mucosalis
• C. rectus
• C. showae
• C. sputorum
• C. upsaliensis
Campylobacter insulaenigrae sp. nov. (2004)
Campylobacter canadensis sp. nov. (2007)
Campylobacter peloridis sp. nov. (2009)
Género Campylobacter
Campylobacter cunicolurom sp. nov. (2009)
Campylobacter avium sp. nov. (2009)
Campylobacter subantarticus sp. nov. (2009)
Campylobacter volucris sp. nov. (2009)
Campylobacter ureoliticus sp. nov. (2009)
Campylobacter molotri sp. nov. (2011)
Campylobacter californiensis sp. nov. (2011)
Campylobacter iguanorum sp. nov. (2011)
Campylobacter upsaliensis
ssp. upsaliensis
ssp. lastovicai (2011)
C. fetus ssp. tertudinum (2011)
04/12/2015
45
Biodiversidad
C. jejuni - C. coli
C. lari
C. upsaliensis
C. jejuni ssp. doylei
C. fetus
C. concisus
C. curvus
C. hyointestinalis
C. sputorum
C. peloridis
C. insulaenigrae
C. ureolyticus
A. butzleri
A. cryaerophilus
A. skirrowii
A. thereius
H. fenellinae
H. cinaedi
H. pullorum
Gentileza Dr. L. Collado