Download - Parasitologia clinica
Introducción a la Parasitología Clínica
Técnicas de Laboratorio II 2014
cultativa
ción
Relaciones entre individuos
Ambos organismos se beneficianMutualismo
Sólo uno se beneficia, el otro noComensalismoSimbiosis se beneficia ni se perjudica
Parasitismo
Asocia entre 2Uno se beneficia Parásito
Ser vivo que temporal o permanentemente vive a expensas de otro organismo de ≠ especie, obteniendo
nutricion y morada al cual le puede ocacionar
daño. Posee dependencia
metabólica total y está en contacto íntimo con
el H
organismos de ≠ especieestrecha y perdurablecapaz de modificar el
comportamientofisiológico de uno oambos organismos
El otro puede osufrir daño
no
HospedadorOrganismo que
alberga y da alimento a otro organismo
Facultativa Obligatoria
o
o P
¿Es lo mismo parasitismo yparasitosis?
≠ ParasitosisParasitismo
Interacción entre 2
individuos donde uno de ellos se
beneficia y el otro puede o
no sufrirdaño
Enfermedad infecciosa producida por parásitos (protozoos, artrópodos y helmintos)
Tipo de parasitismo según…
>Obligatorio
>Facultativo
>Accidental
>Temporal
>Periódico
>Permanente
>Ectoparásito
>Endoparásito
Extracelular Intracelular
Organos o tejidos
Clasificaciónsimplificada
SarcodinaMastigosphora
SEUDOPODIOS
Sarcomastigosphora FLAGELOS
Protista CiliophoraProtozoa CILIASE
U K A R IO
T A
COMPLEJOAPICAL
Apicomplexa
Fungi
Aphasmidea
PhasmideaNematelmintos
Plantae
Cestodes
TrematodesPlatelmintos
Animalia MetazoaArachnida
InsectaCrustacea
Artrópodos
ucee en el H
sexual y/asexual
• P Cumpl ciclo evol formas i
• H Par excepcte
• P alcanza la madurezy se reproducesexualmente
• H de mayor evolución filogenética
• P no alcanza madurezSexual o se multiplicaasexualmente en el H
Cumple parte de su ciclo evolutivo dando formas infectivas
Definitivo Intermediario
Habitual Accidental
• Es el Hcomúnmenparasitado
H. PasitadoExcepcionalmente
No permite desarrollo del ciclo
Desarrolla igual que en
HD u HI
Ciclo de vida=Ciclo biológico=Cicloevolutivo
Conjunto de etapas y transformacionesdesarrollo
que experimenta un P en su
Directo o monoxénico Indirecto o heteroxénico
P requiere un solo H paracompletar su ciclo
P requiere más de un H paracompletar su ciclo
Transmisión del parasitismo
Conjunto de fenómenos a través de los cuales un P pasa de una fuente o
reservorio a un H susceptible
Depende de…
>Fuente de Infección
>Modo de transmisión
>Estadío infectivo
>Susceptibilidad del H
Tipos de transmisión
>Directa (vertical/iatrogénica)
>Indirecta
A partir de la cual un H susceptible adquiere el P. Por ej:otros individuos (contacto directo), autoinfestación, a partirFuentede objetos, suelos, agua, alimentos contaminados, animales,artropodos contaminados, etc.
Hábitat (lugar o ser viviente) donde el P vive se multiplica y/o crece permitiendo su sobrevida en la naturaleza. Sirve como fuente de infección para H susceptibles.GARANTIZA LA SUPERVIVENCIA DEL P.
≠
Reservorio
Transmisión del parasitismo
• Inhalación
Respiratoria
Cutánea
Vías:
Oral
Parenteral
Vertical
Fuente Modo de transmisión
• Vertebrado
• Transplante/ tranfusión
• Contacto con heces, mordidas,accidente de laboratorio
• Ingesta predación
• Transmisión placentaria/perinatal/lactancia
• Autoinfección
•Invertebrado
• Picadura• Ingesta• Contacto
•Elemento inerte
• Contacto con algún elemento como: SábanasUtensillos
• Ingesta de alimentos y agua
Transmisión del parasitismo Pasa por el medio ambienteAbiertaDispersión en la
naturalezaNo pasa por el medio ambienteCerrada
Busca a su H por medio de moléculasorientativas y receptores que las perciben
Llega mediante alimentos o picaduras
ActivaLocalización de un
nuevo HPasiva
Mecanismo
Vías de infección
Modo
Lugar
•Activa: llega por sus propios medios
F
A S ES
Contacto con el H
Penetración •Pasiva: P no realiza acción alguna•Ectoparasitos! No penetran, se FIJAN
Establecimiento deun ecotopo
específico en el H
Multiplicación y diferenciación/
reproducción sexual
Barreras bióticas Sistema Inmune
pH, PO2 …Barreras abióticas
Salida del P o susptos para supropagación
Vector Invetebradoartrópodo capaz de
transmitir P entre unvertebrado infectado y
otro sano
Es el HD u HI.Es la principal Mecánico
Artrópodos que transportanpasivamente al P. La
asociación es inespecífica, se debe a la contaminación del
artrópodo
Biológico Artrópodo
hematófago que transmite alP en su alimentación.
Presenta asociación íntima yespecífica con el P. El P realiza
parte de su ciclo.
fuente del P
MultiplicativoEn él el P se diferencia y
divide
EvolutivoEn él el P sólo se
diferencia.
Especificidad Parasitaria
Restricción de desarrollo del P en ≠ H
Oligoxénica
≠ especies,=familia
Estenoxénica
≠ especies,=género
Eurixénica
≠ familias
Oioxénica
1 sola especie
Más definiciones…
Zoonosis • Enfermedad transmisible naturalmente entre animales vertebradosy el hombre, siendo = o ≠ el ciclo en ellos. Ambos parasitados!
• Condición en la cual el número y distribución geográfica de unaenfermedad permanecen estables con fluctuaciones dentro delímites esperables.
Endemia
Epidemia • Aumento del número de casos en una zona geográficadeterminada en un tiempo límitado.
Parasitosiscosmolpolitas
Parasitosisregionales
• Se encuentran distribuidas ampliamente ya que su existencia sehalla ligada a la presencia del humano (ciclo directo) o la presenciadel humano y sus otros hospedadores también cosmopolitas (cicloindirecto)
• Su existencia no depende sólo del hombre sino de la presenciatemporal o permanente de otros factores (físicos, biológicos osociales) que hacen posible la vida del P y la progresión en su ciclo.
Más definiciones…
• P que equivoca su hábitat dentro del H y se ubica en unsistema u órgano que no le permite desarrollarse.Parásito errático
Hiperparasitismo • Parásitos que parasitan otros parásitos
Multiparasitismo osuperparasitismo
• Cuando un H se encuentra parasitado por 2 o másespecies diferentes
Poliparasitismo • Presencia de gran carga de un P en un H
Seudoparásitos • Elementos de diversa naturaleza confundibles con P
• Helminto que requiere que su huevo pase por el medioambiente para madurar y ser infectivo (huevo larvado)Geohelminto
Protista Hongos Animalia Planta
Metazoa
Protozoos (heterótrofos)
Algas (autótrofos)
Mohos limosos (Quimio-heterótrofos:Digestión extracelular y/o absorción de sustancias del ambiente)
Procariotas(Monera)
Eucariotas
Seres vivos
PROTOZOOS
SARCOMASTIGOSPHORA APICOMPLEXACILIOPHORA
SARCODINA
MASTIGOSPHORA
METAZOA
FUNGIPLANTAEANIMALIAPROTISTA
SUPERREINO
REINO
SUBREINO
PHYLUM
CLASE
PROKARIOTA EUKARIOTA
Clasificación
Protozoarios
Definición: organismos eucariotas unicelulares que pueden replicarsepor mecanismos sexuales o asexuales.
64.000 especies de las cuales 30-40 son patógenas para el hombre
• Fagocitosis o pinocitosis
• Citostoma o peristoma• Difusión o transporte facilitado
Alimentación
• Flagelos
• Cilias• Pseudópodos
Locomoción
• Flagelados
• Amebas• Ciliados
Dimorfismo(trofozoito/quiste)
Pinocotosis ALIMENTACIÓN
Difusión facilitada
Cilias
Flagelo
Locomoción
Locomoción en Apicomplexa
Dimorfismo (flagelados)
TrofozoítoSe reproducen en el hospedadorSon lábiles en ambientes desfavorables Secretan pared muy resistente para generar quistes (supervivencia y diseminación)
QuisteInmóviles y no replicativosResistentes
Amebas tienen enquistamientoinducido por tasa reproducción
Dimorfismo (amebas)
Dimorfismo (ciliados)
Trofozoito Quiste
Reproducción
Sexualmaterial
genético de 2 ancestros diferentes
AsexualProgenie
recibe material genético de 1 solo ancestro
- Conjugación- Fisión binaria
- Fusión- Esquizogonia
PROTOZOOS
TREMATODA
ARTROPODOS
ARACHNIDA
INSECTA
CRUSTACEA
NEMATODES
APHASMIDEA
PHASMIDEA
PLATYHELMINTES
CESTOIDEA
METAZOA
FUNGIPLANTAEANIMALIAPROTISTA
SUPERREINO
REINO
SUBREINO
PHYLUM
CLASE
PROKARIOTAEUKARIOTA
Clasificación
Enteropárasitos
Amebas: Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar, Entamoeba hartmanni, Entamoeba coli, Entamoeba polecki, Endolimax nana, Iodamoeba butschlii, Blastocystis hominis.
Flagelados: Giardia lamblia, Chilomastix mesnili, Dientamoeba fragilis, Trichomonas hominis, Enteromonas hominis, Retortamonas intestinalis
Ciliados: Balantidium coli
Coccidios, microsporidios: Cryptosporidium parvum, Cyclospora cayetanensis, Isospora belli, Sarcocystis hominis, S. suihominis
Nematodes: Ascaris lumbricoides, Enterobius vermicularis, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Strongyloides estercoralis, Trichostrongylus spp., Trichuris trichiura, Capillaria philippinensis
Cestodes: Diphyllobotrium latum, Dipylilium caninum, Hymenolepis nana, Hymenolepis diminuta, Taenia solium, Taenia saginata
Trematodes: Fasciola hepatica, Fasciolopsis buski, Echinostoma ilocanum, Heterophyes heterophyes, Metagonimus yokogawai
ProtozoosHelmintos
Enteropárasitos
Única muestra en SF que debe mantenerse refrigerada y seranalizada antes de las 3 hs.
Ventaja: Identificación de formas vegetativas de P
Desventajas. Debe ser procesada rápidamente.Protozooarios: fases negativas/descargacíclica de quistes -> falsos negativos
Recolección de 5 a 6 muestras, una muestra por día.
Formol 5% - 10% (formalina); PVA (alcohol polivinilico)(PVA+EtOH+MgCl2 o ZnSO4); SAF (solución amortiguada de formol) (sodium acetate–acetic acid-formalin); MIF (merthiolate-Iodo-formol); PAF (fenol-EtOH-formol); líquido de Schaudinn (HgCl2, EtOH, AcH).
Ventajas. No requiere procesado inmediato.Se cubre fases negativas de protozoarios.
Desventaja. No se detectan las formas vegetativas de losprotozoarios.
Seriada/fijada
Frescas
Muestras
Examen directo
Técnicas deenriquecimiento(centrifugación o
sedimentación; flotación;métodos bifásicos)
Métodos Especiales(Baerman; Harada-Mori;
Graham; eclosión de huevos;
rto de huevos; cultivo)Coloraciones permanentes(colorante tricrómico de
Gomori; hematoxilina férrica; Ziehl Nelsen; Ziehl Nelsen
modificada) Tinciones-coloracionestransitorias (lugol; solucióniodoidura de D’Antoni; MIF;
azul de metileno)
Técnicas
Identificación de P por su forma y motilidad Examen directo
Montaje húmedo directoFrotis del material disuelto en SF
Pero… para la identificación detallada hace falta técnicas de coloración
Coloraciones transitorias:Lugol; Sn de Iodo-iodurada de D’AntoniMIF
Permiten observar las formas parasitarias con mayordetalle
Hymenolepis nanaMueren los trofozoítos
Strongyloides stercoralis
Observación de trofozoítos (40x), quistes (40x), huevos (10x), larvas (10x)
Fijación de la muestra, tinciones…
Técnicas de enriquecimiento(centrifugación o sedimentación;
flotación; métodos bifásicos)
Test de sedimentación o centrifugación
Líquidos menos densos que los elementos parasitarios P quedan en el sedimento
Desventaja: queda mucho residuo con la muestra a analizar
Técnicas de enriquecimiento(centrifugación o sedimentación;
flotación; métodos bifásicos)
Test de flotación
Líquidos más densos que los elementos P P quedan en la superficie de los líquidos
Variantes:** Faust : ZnSO4.** Willis: NaCl sat, dejando decantar 30–45 min.** Willis–Molloy: NaCl sat, llenando el tubo hasta el borde con la Sc sat y colocando un portaobjetos enla superficie del tubo, dejando decantar 30-45 min.** Sheather: Sc sat de sacarosa, centrifugando 1 min a 1500 rpm o siguiendo la técnica de Willis Molloy.
Técnicas de enriquecimiento(centrifugación o sedimentación;
flotación; métodos bifásicos)
Métodos bifásicos
Métodos bifásicos: Charles - Barthelemy (Ácido cítrico – formol – éter)
Métodos Especiales(Baermann; Harada-Mori; Graham;
eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo)Baermann
Strongyloides stercolaris
Métodos Especiales(Baermann; Harada-Mori; Graham;
eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo)
Baermann
Se basa en el termotropismo de las larvas.
H2O 40-42°C1-3 hs
Separación de las larvas de las heces.
Recuperación de larvas vivas de nematodes(Strongyliodes spp. y fitoparásitos)
Strongyloides stercolaris – larva rhabditiode
Métodos Especiales(Baermann; Harada-Mori; Graham;
eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo)
Harada-Mori
Basada en el hidrotropismo de las larvas.
Cultivo de larvas filariformes: Strongyloides spp.,Necator spp., Ancylostoma spp.
Métodos Especiales(Baermann; Harada-Mori; Graham;
eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo)
Test de Graham
Detección de huevos de Enterobiusvermicularis (oxiurus).
Toma de muestra con cinta de celulosa ogasa, a la mañana antes de levantarse ehigienizarse.
Al menos 4 muestras seriadas.
Cinta: sobre portaobjeto.Gasa: en Sc fisiológica, recuperando elsedimento por centrifugación.
Métodos Especiales(Baermann; Harada-Mori; Graham;
eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo)
Test de eclosión de huevos
Schistosoma spp.
Métodos Especiales(Baermann; Harada-Mori; Graham;
eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo)
Test de eclosión de huevos
Determinar viabilidad de huevos de Schistosoma spp. (miracidios vivos)
Basada en el fototropismo positivo de los miracidios liberados por los huevos.
Muestra: orina o materia fecal.
Métodos Especiales(Baermann; Harada-Mori; Graham;
eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo)
Recuento de huevos
Seguimiento de la evolución de una infestación, eficacia de un tratamiento.
Estimación de la carga parasitaria en el caso de:Ascaris lumbricoidesTrichuris trichiuraUncinarias
StollKato
Deposiciones de 24 hs4g heces + 15 ml NaOHRecuento en 150 µl
Deposiciones de 24 hs50 mg en porta - cubrir con papel celofán cglicerina, agua y verde de malaquita.Dejar 1h para que se aclare# huevos contados x 100 =
#huevos/4 g de heces
Métodos Especiales(Baermann; Harada-Mori; Graham;
eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo)
Técnica de cultivo
Cultivo de larvas filariformes: Strongyloidesspp., Necator spp., Ancylostoma spp.
Imita las condiciones de la naturaleza.
Coloraciones permanentes(colorante tricrómico de Gomori;
hematoxilina férrica; Ziehl Nelsen; Ziehl Nelsen modificada)
Colorante tricrómico de Gomori
Tinción de muestras frescas y fijadas.Observaciones:Fondo: verde,Citoplasma de protozoarios: azul – púrpuraCromatina: rojo o rojo - púrpura
Entamoeba histolytica – dispar- quistes
Entamoeba histolytica –GR en el citoplasma - trofozoíto
Entamoeba coli - quiste
Coloraciones permanentes(colorante tricrómico de Gomori;
hematoxilina férrica; Ziehl Nelsen; ZiehlNelsen modificada)
Hematoxilina férrica deHeindenhain
Método largo y engorroso.Observaciones:Tinción azul grisáceaNúcleos e inclusiones más
oscuras.
Tinción de muestras frescas y fijadas. D. fragilis
* Hematoxilina 5% p/v, EtOH 50%v/v, sulfato de amonioferroso 5% p/v, sulfato de amonio férrico 5%p/v, HCl cc5%v/v.
D. fragilis trofozoítos deGiardia intestinalisQuistes de Entamoeba
histolyticaI. buetschlii trofozoíto
Tinciones-coloraciones transitorias(lugol; solución iodoidura de D’Antoni;
MIF; azul de metileno)
Lugol
Entamoeba histolytica - quiste
E. coli - quiste
Blastocystis hominis - quiste
Clasificación
Platelmintos
Nematelmintos
Trematodes
Cestodes
Nematodes
Helmintos
Cestodes• Los cestodes son gusanos platelmintos que tienen
forma acintada• Son hermafroditas y no poseen aparato digestivo• El alimento lo absorben a través de la cutícula
externa• La cabeza o Escolex es el órgano de fijación, poseen
ventosas y en ocasiones ganchos• Ciclofilideos: losproglotides no presentan orificios de
postura• Pseudofilideos: los huevos se eliminan al exterior en
forma inmadura, a través de un orificio de postura
Taenias spp
hymenolepis nana
CESTODE
Hymenolepis diminuta
Nematodes
• Son gusanos cilíndricos• Tienen sexo separados: Dioicos, en general los
machos son mas pequeños que las hembras• La parte posterior de los machos termina en
forma enrollada, las hembras en forma recta• El gusano adulto tiene cutícula• Tienen migración larval a través de los tejidos
corporales
Enterobius Vermicularis
necator americanus y ancylostoma duodenale
Ascaris Lumbricoides
EJERCICIOS DEAPLICACIÓN…