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Objetivo: Conocer las técnicas básicas para el análisis microbiológico del suelo
1) Normas prácticas para el muestreo de suelo
2) Técnicas para el cultivo de microorganismos
3) Técnicas de observación al microscopio
4) Métodos de aislamiento y conservación
PRÁCTICO N° 1
Técnicas para el estudio de microorganismos del suelo
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1) Diseño de muestreo:
• Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del lote
• Forma de muestreo: cultivo, sistema de labranza
• Profundidad: 0 – 20 cm
2) Acondicionamiento de las muestras
3) Preparación de las muestras en laboratorio
Normas prácticas para el muestreo de suelo
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Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del lote
15 Submuestras = 1 MuestraLoma
Medialoma
Bajo
Imagen Satelital Mapa de Rendimiento Mapa de Ambientes
Agricultura de Precisión
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Elementos de muestreo
Barreno HidráulicoPala Barreno Manual
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Forma de muestreo: cultivo y sistema de labranza
Siembra directa Labranza convencional
Rastrojo de maíz Rastrojo de soja Suelo laboreado
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Forma de muestreo: profundidad
0 cm.
20 cm.
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Acondicionamiento de las submuestras
~200 g.
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Preparación de las muestras en laboratorio
Oreado
Tamizado
Embolsado y Rotulado
Conservación
Mínimo 24 hs.
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Requerimientos para el cultivo de microorganismos en laboratorio:
1) Condiciones de asepsia: esterilización
2) Medios de cultivos
3) Condiciones ambientales
Técnicas para el cultivo de microorganismos
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Condiciones de asepsia: esterilización
• Esterilización: eliminar todos los organismos vivos
• Métodos de esterilización:– Calor: húmedo y seco
– Radiación
– Filtración
– Productos químicos
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Calor húmedo: Autoclave
A gas con regulación manual
Eléctrica con regulación automática
Combinación de calor, presión y humedad
Para sustancias acuosas
Temperatura de esterilización: 121°C - 20 minutos
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Temperatura de esterilización: 160 °C Tiempo: 2 hs
Calor seco: Horno de esterilización
Para materiales estables al calor (vidrio, metal, porcelana etc.)
Vista exterior
Vista interior
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Otros métodos de esterilización
Filtración: soluciones lábiles
•Agua Oxigenada •Alcohol etílico•Hipoclorito•Formol•Bicloruro de mercurio
Radiación UV: superficies, aire y agua
Productos químicos: mesada,manos, tapones, etc.
Filtro
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Medios de cultivos
• Definición: mezcla balanceada de requerimientos nutritivos para el crecimiento de microorganismos
• Tipos: – Generales – Selectivos
• Composición química: fuente de carbono, fuente de nitrógeno, fuente de energía, base mineral y factores de crecimiento
• Características: líquidos o sólidos: agentes solidificantes
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Composición de medios de cultivos
FUENTE COMPUESTO CANTIDAD
Fuente de C y
energíaSucrosa 20 g
Base mineral
Fosfato di potásico 0.05 g
Fosfato monopotásico
0.15 g
Cloruro de calcio 0.01 g
Sulfato de magnesio
0.2 g
Molibdato de sodio 0.002 g
Cloruro férrico 0.01 g
Carbonato de calcio
0.1 g
Agua Agua destilada 1000 ml
pH = 7
FUENTE COMPUESTO CANTIDAD
Fuente de C y energía
Almidón 12 g
Fuente de N NO3 Na 0.5 g
Base mineral
PO4 HK2 1.0 g
SO4 Mg 7 H2O 0.5 g
Agente solidificante
Agar 15 g
Agua Agua destilada 1000 ml
pH = 7
Medio selectivo: Fijadores de NitrógenoMedio general
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Preparación de medios de cultivo
encender colocar recipiente para pesar
tarar
colocar el componente a pesarregistrar la
lectura
Pesar componentes sólidos:
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Disolver con agua destilada: hidratar
componentes sólidos agregar agua
disolver
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Regular pH: pHmetro
soluciones reguladoras encendido y lavado lectura
lavado del electrodoprotección del electrodo
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Preparación de medio sólido
agregar agar
fundir al calor
medio líquido
medio agarizado
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Fraccionar y acondicionar para esterilizar
Fraccionamiento demedio líquido
Fraccionamiento demedio sólido
(en caliente)
Acondicionado para esterilizar
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Esterilizar en autoclave
Medios en “Pico de flauta”
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Visualización de microorganismos: porta objeto enterrado
Suelo en estudio Portaobjeto enterradoRiego
Incubación
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Cultivo de microorganismos del suelo en medio líquido
Incubación
Siembra Dilución
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Muestreo de suelo
Cantidad de
muestras
Composición
Profundidad
Tamaño del lote
Topografía
Una muestra
n° submuestras
0-20 cm.con
rastrojos
Preparación de muestras en laboratorio
Oreado Tamizado Envasado y Rotulado Conservación en heladera
Guardar en conservadora
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Laboratorio
Esterilización
• Autoclave - horno• Radiación• Filtración• Productos químicos
Medio de cultivo Observación Aislamiento
Práctico 2
Composición química
• Base mineral• Fuente de carbono• Fuente de energía• Agua
Preparación de medios
Líquidos
• Pesar drogas• Disolver con agua destilada• Regular pH• Fraccionar
Sólidos
• Pesar drogas• Disolver con agua destilada• Regular pH• Agarizar• Fundir• Fraccionar
Esterilización en autoclave
Siembra de suelo
Incubación
Práctico 1
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Actividades
1) Preparación de muestras de suelo en laboratorio:
tamizar, embolsar y rotular.
2) Visualización de microorganismos de suelo:
enterrar un portaobjeto.
3) Cultivo de microorganismos de suelo: colocar una
alícuota de suelo en medios general y selectivo enterrar
un portaobjeto.
4) Visita al Laboratorio de Microbiología Agrícola F.C.A