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Medicina Molecular 2011
TP Citogenética Humana
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NÚMERO
MORFOLOGÍA
ESTRUCTURA
COMPORTAMIENTO CROMOSOMA PATOLOGiA GENETICA
CITOGENÉTICA
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OBJETIVO:
• Familiarizarse con la metodología empleada en la citogenética humana.
DESARROLLO:
1) Observación de preparados al MO y fluorescencia.
2) Realización de extendidos a partir de suspensiones celulares.
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OBJETIVO:
• Familiarizarse con la metodología empleada en la citogenética humana.
DESARROLLO:
1) Observación de preparados al MO y fluorescencia.
2) Realización de extendidos a partir de suspensiones celulares.
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1) Recolección de las células------MUESTRA.
2) Cultivo celular.
3) Agregado de un inhibidor de la mitosis para detener las células en metafase.
4) Separación de los cromosomas.
5) Fijación.
6) Preparación de los extendidos y coloración.
METODO PARA OBTENER PREPARACIONES DE CROMOSOMAS:
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1) Recolección de las células------MUESTRA.
2) Cultivo celular.
3) Agregado de un inhibidor de la mitosis para detener las células en metafase.
4) Separación de los cromosomas.
5) Fijación.
6) Preparación de los extendidos y coloración.
METODO PARA OBTENER PREPARACIONES DE CROMOSOMAS:
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1) Recolección de las células------MUESTRA.
2) Cultivo celular.
3) Agregado de un inhibidor de la mitosis para detener las células en metafase.
4) Separación de los cromosomas.
5) Fijación.
6) Preparación de los extendidos y coloración.
METODO PARA OBTENER PREPARACIONES DE CROMOSOMAS:
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En humanos, los estudios se realizan en células en activa división mitótica en metafase.
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1) Recolección de las células------MUESTRA.
2) Cultivo celular.
3) Agregado de un inhibidor de la mitosis para detener las células en metafase.
4) Separación de los cromosomas.
5) Fijación.
6) Preparación de los extendidos y coloración.
METODO PARA OBTENER PREPARACIONES DE CROMOSOMAS:
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1) Recolección de las células------MUESTRA.
2) Cultivo celular.
3) Agregado de un inhibidor de la mitosis para detener las células en metafase.
4) Separación de los cromosomas.
5) Fijación.
6) Preparación de los extendidos y coloración.
METODO PARA OBTENER PREPARACIONES DE CROMOSOMAS:
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1) Recolección de las células------MUESTRA.
2) Cultivo celular.
3) Agregado de un inhibidor de la mitosis para detener las células en metafase.
4) Separación de los cromosomas.
5) Fijación.
6) Preparación de los extendidos y coloración.
METODO PARA OBTENER PREPARACIONES DE CROMOSOMAS:
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Técnica standardColoración con colorante Giemsa
NúMERO
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Tamaño Posición del centrómero
21 – 22 - YAcrocéntricosPequeños
G
19 – 20MetacéntricosPequeños
F
16 – 17 - 18SubmetacéntricosPequeños
E
13 – 14 - 15AcrocéntricosMedianos
D
6–7–8-9-10-11-12-X
SubmetacéntricosMedianos
C
4 – 5SubmetacéntricosGrandes
B
1 – 2- 3MetacéntricosGrandes
A
PARES CROMOSÓMICOSMORFOLOGÍAGRUPO
MORFOLOGÍA
22 PARES AUTOSÓMICOS1 PAR SEXUAL XX ó XY
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ESTRUCTURA
Técnica de Bandeo “G”Tratamiento con tripsina 0.1%Coloración con colorante Giemsa
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Simbología citogenética
• 1-22 parescromosomas
• X Cromosoma X• Y Cromosoma Y• p Brazo corto• q Brazo largo• +Ej. +21 --crom. 21
adicional.13p+ -- duplicaciónparcial de una región.
• -Ej. -21 --crom. 21 de menos.
5p- --Pérdida brazo p del crom 5.
• / Presencia de un mosaico.
• del Deleción• dup Duplicación• S Satélite
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CROMOSOMA 1
SISTEMA INTERNACIONAL DE NOMENCLATURA CITOGENÉTICA
HUMANA (ISCN)
Landmarks o “puntos de referencia” Región Bandas Sub-bandas
Gentileza Centro Nacional de Genética Médica
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BANDEO G
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46,XYNivel de resolución = 400
46,XYNivel de resolución = 550
ALTA RESOLUCIÓNGentileza Centro Nacional de Genética Médica
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Ejemplos de Fórmulas Cariotípicas
Translocación (Síndrome Down)
46, XY, -13, +T (13q . 21q) Síndrome de Edwards47 , XY , +18Síndrome de Patou47 , XY , +13Síndrome Cri-du-chat46 , XX , 5p-Mosaico (Síndrome Down)46 , XX / 47 , XX , +21
Síndrome Down47 , XX , +21
Síndrome Klinefelter47 , XXY
Síndrome Turner45 , X
♂ normal46 , XY
♀ normal46 , XX
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OTRAS TÉCNICAS DEIDENTIFICACIÓN CROMOSÓMICA
BANDEO “Q” BANDEO “C”
FISHCen 21
FISHWCP 4
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FISH
Hibridación in situ fluorescente
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• Es una técnica que combina citogenética
clásica con biología molecular.
• Es una herramienta de utilidad en
investigación y diagnóstico en humanos.
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Se usa para detectar o confirmar anomalías
genéticas que generalmente
están más allá de la capacidad de
resolución de la
citogenética de rutina.
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Pasos• Obtener muestra• Cultivo celular• Inhibidores mitosis• Soluciones hipotónicas• Fijación• Extendidos• Coloración: Giemsa o
Bandeo
CITO-
GENETICA
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Pasos• Obtener muestra• Cultivo celular• Inhibidores mitosis• Soluciones hipotónicas• Fijación• Extendidos• Coloración: Giemsa o
Bandeo
CITO-
GENETICA
FISH
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FISH
ProtocoloProtocolo
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Tipos de sondas
• Sec ADN repetitivo: sondas centroméricas.
• Sec ADN específicas de una región: genes o loci de interés.
• Sondas de cromosomas enteros: secuencia específicade un determinado cromosoma.
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Marcación de la sonda:
Directa• FITC-12-dUTP• Rhodamine-6-dUTP• Cy3-dCTP
Indirecta
• Biotin-11-dUTP• Digoxigenin-11-dUTP
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Sindrome de Williams
Se trata de un desorden genético
(prevalencia: 1/7500 a 1/20000
RNV), causado por una deleción
en el brazo largo del cromosoma
7, específicamente en 7q11.23.
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• El Síndrome de Williams es un trastorno de origen genético, que cursa con trastornos relacionados al desarrollo.
• Esporádico.
• Se presenta desde el nacimiento y afecta igualmente a varones y mujeres.
• No tiene preferencia étnica.
• Suele manifestarse recién a los 2 ó 3 años.
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Los síntomas más destacados del síndrome consisten en:
• expresión fenotípica característica de la cara
• retraso mental
• dificultad en el habla
• defecto coronario de nacimiento, conocido como estenosis supravalvular aórtica (ESA), que se debe a un estrechamiento de la aorta en las proximidades del corazón.
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• La zona de la deleción varía entre 1.5-1.8 mega pares de bases (Mb), e involucra aproximadamente 30 genes.
• El gen más estudiado dentro de esta zona es el gen de la elastina, una proteína que brinda elasticidad a los vasos sanguíneos y otros tejidos corporales cuya deficiencia causa estenosis aórtica.
• La deleción se produce casi siempre durante la división celular que da origen al espermatozoide o al óvulo, es decir durante la meiosis.
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Secuencia ÚnicaSecuencia Única
7q11.23ELN
LIMK1D7S613
7q23 D7S486D7S522
normal
deleción
Síndrome deWilliams-Beuren
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![Page 37: Medicina Molecular 2011](https://reader031.vdocumento.com/reader031/viewer/2022012417/617289b419340e655f638733/html5/thumbnails/37.jpg)
Limitaciones:
1. Se debe tener un conocimiento previo o una
sospecha previa de la naturaleza de la aberración.
2. Se debe contar con la sonda de la región de
interés.
![Page 38: Medicina Molecular 2011](https://reader031.vdocumento.com/reader031/viewer/2022012417/617289b419340e655f638733/html5/thumbnails/38.jpg)
Ventajas:
•FISH de interfase.
• Un diagnóstico certero y precoz es
fundamental para evitar pasos
innecesarios y planificar las medidas
óptimas de seguimiento y tratamiento de
un paciente.
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DESARROLLO:
1) Observación de preparados con tinción standard o bandeo G al MO.
2) Realización de extendidos a partir de pellets celulares fijados.
3) Observación de preparados de pacientes con diagnóstico certero de
Sindrome de Williams al microscopio de fluorescencia.
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La realización de este TP es posible gracias al aporte de material biológico proveniente del Dpto.
Diagnóstico Genético del Centro Nacional de Genética Médica, ANLIS “Dr. C. Malbrán”,
Ministerio de Salud.
Los preparados de Sindrome de Williams fueron gentilmente cedidos por el
Dr. Eduardo Pastene, del mismo instituto.