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Manuscrito Aprobado del Autor Refuerzo mecánicode cemento inyectablede fosfatode calcio/ compuesto de fibroínade seda (SF) mediante SF mineralizada Chengbin Cao, Hao Li, Jun Li, Chen Liu, Huilin Yang, Bin Li
www.elsevier.com/locate/ceramint
PII: S0272-8842(14)00846-3 DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.ceramint.2014.05.123 Referencia: CERI8659 Para encontrarlo en: Ceramics International Fecha de recepción: 21 de abril de 2014 Fecha de revisión: 26 de mayo de 2014 Fecha de aprobación: 27 de mayo de 2014 Citareste artículocomo: Chengbin Cao, Hao Li, Jun Li, Chen Liu, Huilin Yang, Bin Li, Mechanical reinforcement of injectable calcium phosphate cement/silk fibroin (SF) composite by mineralized SF, Ceramics International,http://dx.doi.org/10.1016/j.ceramint.2014.05.123 Éstees un archivo PDF de un manuscritosin editar que se ha aprobado para su publicación. Como un serviciopara nuestros clientes, proporcionamos esta versióninicial del manuscrito. Se someterá el manuscritoa corrección de texto, redacción, y revisión de la galerada resultante antes de su publicación en su forma citable final. Por favor nótese que durante el proceso de producciónse pueden descubrir errores que afecten el contenido, y se atañen todos los descargos legales de responsabilidad que apliquen al acta.
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MANUSCRITO APROBADO
Revisiónpara: Ceramics International
Refuerzo mecánico de cemento inyectable de fosfato de calcio/compuesto de fibroína de seda (SF)
mediante SF mineralizada
Chengbin Cao a, Hao Li b, Jun Li b, Chen Liu b, Huilin Yang b,*, Bin Li a,b,*
aEscuelade Química, Ciencia de Ingeniería Química y Materiales, InstitutoOrtopédico, Universidad de Soochow,
Suzhou, Jiangsu 215123, China
bDepartamentodeOrtopedia, El Primer Hospital Afiliado de la Universidad de Soochow, 188 Shizi St, Suzhou,
Jiangsu 215006, China
* Correspondientea:
Bin Li, PhD
708 Renmin Rd, Rm 308 Bldg 1, Universidad de Soochow (Campus Sur), Suzhou, Jiangsu 215007,
China
Tel.: (+86) 512-6778-1163; Fax: (+86) 512-6778-1163
E-mail: [email protected]
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Resumen
Los cementos de fosfato de calcio (CPC) son materiales ortopédicos inyectables prometedores con una
excelente biocompatibilidady osteoconductividad. Sin embargo, la fuerza mecánica inferior limitasu uso
únicamente a las áreasde bajo soporte. En este estudio, sintetizamos un complejo de hidroxiapatita (HA)-fibroína
de seda (SF) mediante el método de co-precipitación y se utilizó para complementar un compuesto CPC/SF
inyectable. Descubrimos que la fuerza compresivadel compuesto de tres componentes, CPC/HA-SF/SF, se
mantuvo en incremento con el contenido HA-SF si no excedía un porcentaje en peso de 3%. Dicho efecto de
refuerzo fue probablemente el resultado de una integridad interfacial mejorada y un crecimiento orientado de
cristales HA en el compuesto CPC/SF tras la complementación con HA-SF. El tiempo de fijación de los
compuestos CPC/HA-SF/SF disminuyó como una funcióndel contenido HA-SF, sin efecto aparente en la
capacidad de inyección. Más aún, los compuestos CPC/HA-SF/SF mostraron buena biocompatibilidadtanto in
vitro comoin vivo. Dichos compuestos resultan bastante prometedores para muchas aplicaciones ortopédicas,
incluyendo servir como materiales de rellenopara cirugías mínimamenteinvasivaspara tratar fracturas
vertebrales.
Palabras clave: Cemento de fosfato de calcio; fibroína de seda; hidroxiapatita; complejo;
refuerzo mecánico
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1. Introducción
Las fracturas de compresión vertebral (VCFs) son la complicación más común de la osteoporosis en la
población de edad avanzada. Ocurren aproximadamente 1.4 millonesde nuevas fracturas anualmente a nivel
mundial [1]. Las técnicas de cirugía mínimamente invasiva, tales como la vertebroplastia (VP) y la cifoplastia
(KP), se han usado ampliamente para el tratamiento de VCF relacionadas conosteoporosis debido a su capacidad
de fortalecer de manera instantánea el cuerpo vertebral [2]. El cemento óseo de polimetilmetacrilato (PMMA) es
el material de relleno utilizado con mayor frecuencia para VP/KP, pero posee limitantes intrínsecas, incluyendo
nodegradabilidad, baja biocompatibilidad, incompatibilidad mecánicacon tejido óseo vertebral, y necrosis de
tejido exotérmica inducidapor la fijación [3]. En contraste, los cementos biodegradables de fosfato de calcio
(CPC) presentan un buen potencialdebido a su excelentebiocompatibilidady osteoconductividad [4], pero su
fuerza mecánicaa menudo es menor y no cumple con los requisitos de refuerzo como material de relleno para
VP/KP [5].
Se han realizado varioscomplementos de polímeros sintéticos o naturales biodegradablespara mejorar las
propiedades mecánicasde los CPC [6, 7]. Sin embargo, los polímeros sintéticos popularestales como el
poli(ácido láctico-co-glicólico) (PLGA) y la policaprolactona (PCL) a menudo se asocian con efectos
secundarios desfavorables, incluyendo reacciones inflamatorias noinfecciosasdebido a la acidez de los
productos degradados [8]. Los polímeros naturales, incluyendo proteínasy polisacáridos, son por lo tanto una
mejor opción ya que forman parte de los tejidos nativos e inducen respuestas mínimas a cuerpos externos [9].
La fibroínade seda (SF), una proteína naturalderivada de la seda, se ha explorado ampliamente en una variedad
de aplicaciones biomédicasdebido a su excelentebiocompatibilidad, degradabilidadcontrolable, y propiedades
mecánicas notables [10].
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Al incorporarlo con la hidroxiapatita (HA), la SF podría favorecer la regeneración ósea al aumentar la
osteoconductividady proporcionar sitios de nucleaciónpara la sedimentación de minerales nuevos [11-13]. Se
ha demostrado también que la modificaciónde SF promueve el crecimiento y la diferenciaciónosteogénica de
células estromales de la médula ósea en andamiajes mesoporosos de bioglass [14]. Recientemente, descubrimos
que complementar CPC conSF podía mejorar la fuerza mecánica y la resistencia a la erosión de éste. Sin
embargo, la fuerza compresivade los compuestos CPC/SF era aún insuficientepara propósitos de VP/KP, lo
cual idealmente sería de aproximadamente50-90 MPa [15, 16].
La adhesión interfacialentre las fases incompatibles es un factor crítico para determinar las propiedades
mecánicasde compuestos híbridos de inorgánicos-polímeros [17, 18]. En los compuestos CPC/SF, la baja
compatibilidad interfacialentre las fases CPC y SF limita aún más el refuerzo de sus propiedades mecánicas. En
compuestos a base de polímeros donde el polímeroes la fase dominante, se han desarrollado variosmétodos de
acoplamiento e injertospara modificar la superficie de rellenos inorgánicosy se ha demostrado la mejora de la
adhesión interfacial [19, 20]. Sin embargo, los métodospara mejorar la integración de compuestos a base de
inorgánicos, en los cuales el componentedominante son los compuestos inorgánicostales como los fosfatos de
calcio, permanecen muy limitados.
El objetivode este estudio fue mejorar la fuerza mecánicadel compuesto CPC/SF al mejorar la
integracióninterfacial entre las fases inorgánicasy orgánicas. Esto se logró al utilizar una SF mineralizada, un
complejo HA-SF, en el cual las fases de HA y SF se acoplaron a nivel molecular.
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Se preparó el complejo HA-SF mediante un método de co-precipitacióny se complementócon los compuestos
CPC/SF como un nuevo reactivo de acoplamiento interfacial. Después se evaluaron la propiedad mecánica
eventualy las características microestructuralesde los compuestos CPC/SF complementados con HA-SF
(CPC/HA-SA/SF), así como la biocompatibilidadtantoin vitro como in vivo.
2. Experimentos
2.1 Síntesisdel complejo HA-SF
Se preparó una solución SF de Bombyx mori (gusano de seda) siguiendo el protocolo publicado [21]. El
complejo HA-SF se preparó utilizando un método de co-precipitación [22]. Brevemente, se mezclaron33.3 ml de la
soluciónSF (porcentaje en peso de 18%) con una suspensiónque contenía 10.32 g de Ca(OH)2y 120 ml de agua
destilada, después se añadieron9.64 g de solución H3PO4 (porcentaje en peso de 85%) gota a gota. Después de
ajustar el pH a 9.0, se agitó la mezcla durante 3 horas,y el complejo precipitado (HA-SF) se secó al vació y se
pulverizó finamente.
2.2 Preparaciónde los compuestos CPC/HA-SF/SF
Para preparar los compuestos CPC/HA-SF/SF, HA-SF se complementó una mezcla de polvo CPC
(ɑ-fosfato tricálcico, a-TCP, porcentaje en peso de 75%; fosfato tetracálcico, TTCP, porcentaje en peso de 20%;
fosfato dicálcico anhidro, DCPA, porcentaje en peso de 5%) y una solución SF con porcentaje en peso de 7.5%
(proporción polvo/líquido de 3 g/ml) con HA-SF. La pasta se endureció durante 1 hora y luego se colocó a 37
°C, humedad relativa de 100% durante 3 días antes de la prueba.
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2.3 Caracterización del complejo HA-SF y los compuestos CPC/HA-SF/SF
Se caracterizaron los compuestos HA-SF y CPC/HA-SF/SF utilizando difracción de rayos X (XRD)
(X’Pert-Pro MPD, PANalytical, Holanda), espectroscopia infrarroja con transformada de Fourier (FTIR)
(Nicolet 6700, Thermo Scientific), microscopía electrónica de barrido (SEM) (Quanta 250 FEG, FEI), y prueba
mecánica (E10000, Instron). Se determinaron los tiempos iniciales y finales de secado utilizando el método de
aguja Gillmore de acuerdo con la bibliografía[23].
2.4 Pruebas MTT de los compuestos CPC/HA-SF/SF
Se examinó la citotoxicidadde los materialesin vitro usando un cultivo celular MC3T3-E1 en un formato de
cultivo de extracto(ISO 10993). Se sumergieron los discos de muestra en un medio
ɑ-MEM (proporción del área de la superficie del disco al volumen medio = 1.2 mm2/ml) a 37 °C durante 24
horaspara obtener los extractos de material. Se sembraron las células en una densidad de 40,000
células/pocilloen una placa de 96 pocillos. Después de 24 horas se reemplazó el medio de cultivocon ɑ-MEM
que contenía extractos de material. En intervalos de tiempo designados, se llevaron a cabo las pruebas MTT y
se midió la densidad ópticaa490 nm.
2.5 Pruebas en animales de los compuestos CPC/HA-SF/SF
El Comité Institucional para el Cuidado y Uso Animal (IACUC) de la Universidad de Soochow aprobó la
prueba in vivo. Se insertaron dos muestras de cada grupo de compuestos en bolsas bilaterales en el músculo dorsal
de los ratones. Se recolectaron los implantesy el tejido circundante después de dos semanas. Se sumergieron las
muestras de inmediato en formalina neutralizada amortiguada en 10% durante 24 horasy se les deshidrató usando
series de etanol seguidas de xileno.
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Después de retirar los cementoscuidadosamente, se integró parafina en los tejidos circundantes y
fueronseccionadospara una evaluación histológicausando coloración de hematoxilinay eosina (H&E).
2.6 Análisis estadístico
Se analizaron los resultados usando un análisis de varianza unilateral (ANOVA). Se considera la diferencia
entre grupos como estadísticamente significativasip es menor a 0.05.
3. Resultados y discusión
3.1 Síntesisdel complejo HA-SF
La Fig. 1A muestra los patrones XRD del complejoHA y HA-SF. Se identifican todos los picos típicos de
los planos de cristal, incluyendo (002), (211), (300), (202), (310), (222) y (213), delaHA en el espectro del
complejo HA-SF (verificadomediante el archivo JCPDS No.34-0010). En comparación con la HA pura
sintetizada bajo condiciones similares, la curva de difraccióndel HA-SF se amplía y una porción de los picos se
superpone. La anchura a media altura(FWHM) del plano (002) es de 0.385°, 0.278° para el HA-SF y la HA
pura, respectivamente, lo cual indica la cristalinidad relativamente baja de la HA en el complejo HA-SF [24].
Dicha cristalinidad baja podría favorecer la degradacióndel complejo HA-SF y promover la formación ósea.
En el análisis termogravimétrico (TGA, por sus siglas en inglés)del complejo HA-SF, la pérdida de peso
antes de aproximadamente 200oC, fue causada por la eliminación de agua libre o ligada, mientras que la pérdida de
peso a240 -700 oC fue el resultadode la descomposición térmica de la SF(Fig. 1B).
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Se puede estimar que el complejo HA-SF contenía alrededor de 12% de agua, 22% de SF, y 66% de HA,
respectivamente. La proporción de peso de HA a SF (66/22) fue similar a la proporción de peso de
mineral/orgánico del hueso humano (70/30) [25].
En el espectro de FTIR del complejo HA-SF, permanecen las bandas características de la SF a 1654 cm-1
(amida I), 1541 cm-1 (amida II) y 1239 cm-1 (amida III) (Fig. 1C). Sin embargo, ocurre un desplazamiento
notable en los picos debido a las interacciones molecularesentre el Ca2+en la HA y los grupos funcionales con
carga negativa tales como COO-y NH-de la SF [26]. Por ejemplo, la bandade amida II se desplaza de 1541 cm-
1a 1537 cm-1, mientras que la bandade amida III se desplaza de 1239 cm-1a 1228 cm-1. Al mismo tiempo,
aparece una nueva banda en 1634 cm-1debido a la absorciónde amida I en la conformación de hoja-P de la SF.
Morfológicamente, el complejo HA-SF presenta una apariencia de nano-cristalitos en forma de barras
uniformes con un diámetrode aproximadamente50 nm y una longitud de aproximadamente200 nm (Fig. 1D).
Esto es probablemente un resultado del efecto de regulación de la SF en la cristalización de la HA. La
presenciade la SF facilitó la cristalizaciónde la HA con un crecimiento orientado sobre el eje-c, dando como
resultado una estructura similar al hueso natural [12]. Aunque no existe evidencia directa, parece ser que una
porciónde la SF podría acumularse en los extremos de los nano-cristalitos (como lo indican las flechas en la
Fig. 1D). Es altamente probable que tales estructuras surgieran de las regiones amorfasde la SF, las cuales se
encontraban en conformación extendidaal mojarlas, pero que se agregaron al secarse.
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3.2 Preparaciónde los compuestos CPC/HA-SF/SF
La Fig. 2A muestra los espectros FTIR de los compuestos CPC/SF y CPC/HA-SF/SF. Las bandas a1454,
1422 y 874 cm-1se derivan a partir de CO32-, lo cual indica que los iones CO3
2- (sustitución de carbonato tipo-B)
reemplazaron parcialmente los iones PO43-en la HA. Por ende, los productos en secado tanto del CPC/SF como
del CPC/HA-SF/SF presentaron una HA con deficiencia de calcio (CDHA) [27]. En comparación con la HA, la
CDHA se degradamás rápido y es más similar en su composicióny estructura de cristalal mineral del hueso
natural, y por ende podría facilitar mejor el remodelado óseo [28]. Con la introduccióndel HA-SF en el CPC/SF,
las bandasde aproximadamente1536 cm-1 (amida II) y 1633 cm-1 (amida I en la conformación de hoja-ß de la SF)
se vuelven más fuertes.
La Fig. 2B muestra los patrones XRD de los compuestos CPC, CPC/SF, y CPC/HA-SF/SF, los cuales no
exhiben ninguna diferencia aparente entre sí y se pueden asignar al cristal HA. A juzgar por el FWHM, parece que
al complementar el CPC con SF redujo levemente la cristalinidadde su HA producido en el secado final, mientras
que complementarlo además con HA-SF ayudó a recuperar la pérdida de cristalinidad.
La Fig. 2C muestra la microestructurade la sección transversal de los especímenes CPC/SF y CPC/HA-
SF/SF. El CPC/SF consistede dominios formados por placas HA delgadas, y estos dominios están rodeados de
numerosas fibras en forma de barra con orientación aleatoria. En contraste, las barras HA al margen de los
dominios de la placa HA están orientados en el compuesto CPC/HA-SF/SF. Se cree que dicha orientación fina se
origina a partir de los aglomerados del complejo HA-SF [29]. Además, el análisis de espectroscopia dispersiva con
energía asociada a SEM (EDS) en el
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CPC/HA-SF/SF reveló una proporción Ca/P de 1.51 (no se muestran los datos), nuevamente indicando su
naturaleza deficiente de calcio.
3.3 Propiedades mecánicasy de manipulación de los compuestos CPC/HA-SF/SF
La fuerza compresivadel compuesto CPC/SF incrementó inicialmente de forma gradual al
complementarlo con HA-SF (Fig. 3A). Sin embargo, comenzó a disminuir cuando el contenido de HA-SF
excedió 3%. La mayor fuerza compresiva, 50.2±1.9 MPa, se logró cuando hubo 3% de HA-SF presente en el
compuesto. Esto fue un incremento notable (>50%) comparado con la fuerza compresivadel CPC/SF que no
contenía HA-SF (33.4±0.9 MPa). Además de esto, el modo de falla mayor de las muestras en las pruebas
compresivasfue de rompimiento axial para todos los compuestos que presentaban contenidos diferentes de HA-
SF (Fig. 3B). Esto implica que no hubo diferencia aparente en la macroporosidadde los especímenes [30].
La Fig. 4 muestra que el compuesto CPC/HA-SF/SF se podría inyectar fácilmente a través de una cánula
de KP. Con el incremento de HA-SF, los tiempos iniciales y finales de secado de los compuestos CPC/HA-
SF/SF se redujeron levemente (Tabla 1). Esta facilidad de inyección y reducción en los tiempos de secado
hacen viables los compuestos CPC/HA-SF/SF como materiales de relleno para VP/KP.
El refuerzo mecánicodel CPC/SF mediante un complejo HA-SF podría ser el resultado de los siguientes
mecanismos. En primer lugar, el complejo HA-SF, al ser un compuesto híbridoque contiene componentes tanto
orgánicos como inorgánicos, podría funcionar como un agente de acoplamiento para unir las fases CPC and SF que
de otra manera serían incompatibles. La integridad interfacial mejorada es propicia para las propiedades
mecánicasdel compuesto híbrido [18].
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Dicho mecanismo de refuerzo donde se mejora la adhesión interfacial mediante el uso de un complejo
inorgánico-orgánicose ha documentado adecuadamente en otros compuestos híbridos. Por ejemplo, cuando se
complementó el poli(L-lactida) (PLLA) con la misma cantidad de HA (porcentaje en peso de 4%), la HA sin
modificar causó una disminución en las propiedades mecánicas, mientras que la HA con injerto superficial de
PLLA (g-HA) resulto en propiedades mecánicas in considerablemente mejoradas [17]. En segundo lugar, el
complejo HA-SF mismo podría ayudar a mejorar la cristalinidadde la HA en el CPC al funcionar como semillas
de nucleación. Es bien sabido que la nucleación heterogénea es la causa del iniciode la cristalización [31]. Para
un CPC que contiene una pequeña cantidad de semillas de apatitatales como HA-SF, precipitarla
apatitapreferencialmente nucleadaalrededor de las semillas. Como resultado, ocurrió un crecimiento orientado, el
cual resultó en la fuerza mecánicaalta del compuesto CPC/HA-SF/SF. Sin embargo, una mayor concentraciónde
semillas HA limitó la tasa de disoluciónde TTCP o DCPA, posiblementemediante la formaciónde una capa de
HA en las partículas reactivas, y por ende debilitó la fuerza mecánicadel compuesto. Por tanto, existió un
contenido óptimo de HA-SF para el refuerzo de CPC/SF, el cual en este estudio fue de un porcentaje en peso
aproximado de 3%.
3.4 Biocompabilidadde los compuestos CPC/HA-SF/SF
En los ensayos MTT de las células MC3T3-E1, el valor OD para todas las muestras incrementó con el
tiempo de cultivo (Fig. 5). Además, los valores OD tanto para los gruposCPC/SF como para los grupos
CPC/HA-SF/SFson consistentemente mayores que aquellos del grupo de control (poliestireno de cultivo en
tejidos) a lo largo del transcurso completo del cultivo. Esto significa que todos los compuestos promovieron la
proliferaciónde células de tipo osteoblasto MC3T3-E1.
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Dicho fenómeno no es inesperado dado el hecho que tanto la SF como la HA son osteoconductivasy
promueven la proliferaciónde células osteoblásticas [11, 14, 21].La dureza moderada y la hidrofilicidade
hidrofobicidadbalanceadas de las superficies del compuesto también podrían considerarse de forma parcial para
esto [32, 33].
Tanto el CPC/SF como el CPC/HA-SF/SF no provocaron respuestas inflamatorias aparentes durante la
implantación subcutánea de 2 semanas en los ratones, lo cual se puede ver claramente a simple vista en los sitios
implantados (Fig. 6A). La evaluación histológicausando la coloración H&E reveló además una presencia muy
baja de células inflamatoriasen los tejidos circundantes (Fig. 6B). Juntas, tanto las pruebas in vitro como in vivo
confirmaron que los compuestos CPC/SF y CPC/HA-SF/SF tuvieron una biocompatibilidad decente.
4. Conclusiones
En este estudio, se sintetizó un complejo HA-SF uniforme mediante un método de co-precipitación. La
complementación de un compuesto CPC/SF con no más de 3% de porcentaje en peso de un complejo HA-SF
mejoró considerablemente su fuerza compresivaen una forma dependiente de contenido HA-SF. Sin embargo,
un incremento adicional de HA-SF debilitó el efecto de refuerzo mecánico. Dicho efecto de refuerzo del HA-
SF al CPC/SF fue posiblemente resultado de (a) una integridad interfacial mejorada entre los componentes
inorgánicos y orgánicoscon la incorporación del complejo HA-SF,y (b) la presencia de semillas de
nucleaciónlas cuales indujeron un crecimiento orientadode cristales HA. Junto con sus propiedades decentes de
manipulación y su biocompatibilidad, los compuestos CPC/HA-SF/SF presentan un buen potencial para
muchas aplicaciones clínicas, incluyendo servir como materiales de relleno para cirugías mínimamente
invasivaspara tratar fracturas vertebrales y otros defectos óseos.
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Agradecimientos
Este trabajo recibió el apoyo de la Fundación Nacional de Ciencias Naturalesde China (81171479), La
Fundación de Ciencias Naturales de la Provincia de Jiangsu (BK2011291), y el Programa Especial Provincial
de Jiangsu de Ciencia Médica (BL2012004).
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[Marca de agua: manuscrito aceptado] 17
MANUSCRITO APROBADO
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[Marca de agua: manuscrito aceptado] 18
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[Marca de agua: manuscrito aceptado] 19
MANUSCRITO APROBADO
Inscripciones de las figuras
Fig. 1. Caracterizacionesdel complejo HA-SF. (A) Curvas de XRD del complejo HA y HA-SF. (B) Análisis
TGA del HA-SF complejo. (C) Espectros FTIR de (a) SF; (b) HA; (c) complejo HA-SF. (D)
ImagenSEM del complejo HA-SF. Las flechas amarillas indican posiblesregiones SF.
Fig. 2. Caracterizacionesdel compuesto CPC/HA-SF/SF. (A) Espectros FTIR de (a) CPC/SF; (b) CPC/HA-
SF/SF. (B) Curvas de XRD de (a) CPC; (b) CPC/SF; (c) CPC/HA-SF/SF. (C) Imágenes SEM de (a)
CPC/SF y (b) CPC/HA-SF/SF. Las imágenes fueron tomadas en la sección transversal de los
especímenes.
Fig. 3. Pruebas compresivas de los compuestos CPC/HA-SF/SF. (A) La fuerza compresivade los compuestos
CPC/HA-SF/SF como una funcióndel contenido HA-SF. (B) Fotografías de las muestras fracturadas
tras la prueba.
Fig. 4. Fotografías de la inyecciónde un compuesto CPC/HA-SF/SF que contiene un porcentaje en peso de 3%
de HA-SF a través de una cánula de Cifoplastia.
Fig. 5. Proliferaciónde células MC3T3-E1 en los compuestos CPC/SF y CPC/HA-SF/SF. Se cuantificó la
proliferaciónde células mediante el valor de densidad óptica (OD) en 490 nm usando un ensayo MTT.
Las células en el grupo de controlcrecieron en platos de poliestireno para cultivo de tejidos.
Fig. 6. Prueba in vivo de los compuestos CPC/SF y CPC/HA-SF/SF. (A) Fotografías de los
especímenesimplantados subcutáneamente en un ratón durante 2 semanas. (B) Coloración H&E de los
especímenes en tejidos circundantes.
MANUSCRITO APROBADO Fi
gura
1
MANUSCRITO APROBADO
Temperatura
Intensidad
Peso
Número de onda
Transmitancia
MANUSCRITO APROBADO Fi
gura
2
MANUSCRITO APROBADO
Número de onda
Intensidad
Transmitancia
MANUSCRITO APROBADO Fi
gura
3
MANUSCRITO APROBADO
Fuerza compresiva
MANUSCRITO APROBADO Fi
gura
4
MANUSCRITO APROBADO
MANUSCRITO APROBADO Fi
gura
5
MANUSCRITO APROBADO
Valor OD
Tiempo (día)
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gura
6
MANUSCRITO APROBADO