Seminario en línea28 Junio 2010
Juan Aybar
Especialista GCMS/LCMS
AGILENT TECHNOLOGIES
LCMS Cuadrupolo Simple de Agilent. Un
modo sencillo de mejorar las
características de su método UV
Agenda
1. La nueva Agilent. Novedades en la gama de productos LC/MS
2. LC/MS Cuadrupolo Simple. La serie 6100 de Agilent Technologies. Mejoras en cada modelo
3. Un modo sencillo de mejorar el rendimiento de su método ultravioleta. Consideraciones prácticas y aplicaciones
Agilent 6150 SQ
Portafolio de productos de Agilent¡¡Crecimiento espectacular en los últimos años!!
GC-MS
GC/MS QQQGC/MS Sq
LC-MS
Sq
QQQQTOF
TOF
IPC-MS CE-MS
6490 Triple Quadrupole LC/MS System
with iFunnel Technology
4
6490 Triple Cuadrupolo LC/MS
¡Sensibilidad a nivel de zeptomoles!
Mucho mejor rendimiento en un equipo de tamaño reducido
iFunnel Technology
• Novedades en el sistema de muestreo iónico a Patm
• Mejoras en sensibilidad ESI 10X
• Mejora la robustez del ensayo, simplifica la preparación de muestra
Celda de colisión curva de diámetro disminuido
• Transmisión iónica eficiente, reducción de ruido
• Diseño Compacto
Nuevas capacidades de medida
• Aislamiento de precursores 0.4 m/z para reducción de interferencias
• Dynamic MRM
• Scanning dependiente de resultados
6540 Ultra High
Definition Q-TOF LC/MS
6540 UHD Q-TOF LC/MS¡Rendimientos de investigación en equipos de sobremesa!
Acceso rutinario a datos de alta resolución/masa exacta
• Mantenimiento automático de la calibración
• Sin influencia de las fluctuaciones de temperatura en el laboratorio
Rendimientos extraordinarios
• >40,000 resolución a 20 espectros /segundo
• 5 órdenes de magnitud de rango dinámico espectral
• <1 ppm MS; <2 ppm MS/MS
• Sensibilidad a niveles de QqQ
Hacia nuevas aplicaciones
• Análisis y caracterización de muestras complejas
• Mass Profiler Professional para análisis diferencial
• Screening de compuestos no-Target
• Qual / Quan – Capacidades cuantitativas garantizadas
Portafolio de productos de Agilent
Y ahora también…
Cromatografía Flash
Portafolio de productos de Agilent
Y ahora también…
Micro GC’s
GC/MS Ion Trap
Espectroscopía elemental
Absorción atómica ICP-OES
Espectroscopía molecular
UVIR
Portafolio de productos de Agilent
Y ahora también…
Difracción de Rayos X
Resonancia Magnética Nuclear
Agenda
1. La nueva Agilent. Novedades en la gama de productos LC/MS
2. LC/MS Cuadrupolo Simple. La serie 6100 de Agilent Technologies. Mejoras en cada modelo
3. Un modo sencillo de mejorar el rendimiento de su método ultravioleta. Consideraciones prácticas y aplicaciones
Agilent 6150 SQ
Demanda de sistemas LCMS SQ en función de la industria
SQ Market Data (SDI Report 2009)
Skimmer Torr to mTorr
Octopole ion guide
Atmosphere to Torr transfer
capillary
++ ++
++++
+
quadrupole
HED detector
LensesmTorr to uTorr
HPLC inlet
Nebulizer
Nebulizer gas inlet
heated N2
High voltage electrode
Esquema de sistemas cuadrupolo simple Agilent Technologies Serie 6100
Page 12
Agilent Technologies.Una apuesta segura en cuadrupolo simple
1. Más de 10 años de desarrollo de la plataforma LCMS SQ con mas de 3000 sistemas instalados
2. Líder de la industria en durabilidad y facilidad de uso
3. El más amplio rango de fuentes de ionización
4. La combinación 1290 Infinity LC/6150 ofrece la mayor capacidad de procesado y velocidad de scan con insuperable calidad espectral
5. Soluciones de software para entornos walk-up (EZ Access), rápida revisión de datos (Analytical Studio Reviewer) y trabajo con Mass Hunter para mejoras en análisis cuantitativo y reporting
6. Protección de la inversión con posibilidad de upgrades y crecimiento dentro de la plataforma usando el mismo software
Serie 6100B SQ. ¿Qué hay nuevo?
1290 Infinity LC1290 Binary
1290 Infinity LC1290 Binary
1200 Series1200 Isocratic
1200 Quaternary
1200 Binary
1200 Binary SL (RRLC)
1120 Compact LC1120 Isocratic
1120 Gradient
1260 Infinity LC1260 Isocratic
1260 Quaternary
1260 Binary
1220 Infinity LC1220 Isocratic
1220 Gradient
NUEVO Agilent 1200 Infinity SeriesPortfolio LC Analítico
LCMS
6130
LCMS
6150
LCMS
6120
Modelos de la Serie 6100B SQ
Nuevo LC/MS SQ portfolio dirigido a satisfacerlas necesidades de cada cliente y cada entornode trabajo:
6120 es el sistema que proporciona unamayor facilidad de uso y el punto de entradaideal para laboratorios que quieren añadir MSa sus capacidades
6130 es el sistema mas flexibleproporcionando el mayor rango de masa ysensibilidad
6150 es el sistema de mejor rendimientodirigido a entornos de trabajo de altaproductividad (velocidad de scan y fidelidadcromatográfica)
Especificaciones para la familia 6100B SQ
Specification G6120B G6130B G6150B
Mass Range 10-2000m/z 2-3000m/z 10-1350m/z
Scan Speed 2500u/s 2500u/s,
5250u/s
10000u/s,
2500u/s
POS/NEG Switching
Speed
300 msec 50 msec 20 msec
SIM Sensitivity *
reserpine
10pg
20:1 p-p
1pg
20:1 p-p
1pg
100:1 p-p
Scan Sensitivity
resperpine
None 50pg
20:1 p-p
50pg
20:1 p-p
Mass Accuracy
Mass Axis Stab.
+-0.13u
+-0.1u or 100ppm
12hrs
+-0.13u
+-0.1u or 100ppm
12hrs
+-0.13u
+-0.1u or 100ppm
12hrs
API-MS es un método de detección paramuestras en fase liquida (HPLC, FIA, Infusion).
La muestra se desolvata, ioniza y analizabasado en su relación masa/carga y finalmente detectada
Posibilidades ESI, APCI, APPI, MMI, nano-ESI, Chip-MS, ….
Algunas de sus principales aportaciones son: Compatibilidad con un amplísimo rango de compuestos Sensibilidad a nivel de fg - pg Información Cuantitativa/Cualitativa Mayor efectividad en trabajo en matriz compleja
Espectrometría de masas con ionización a presión atmosférica
Coulomb Explosions
Rayleigh
Limit
Reached
+ ++
++
++
++
+-
--
-
-
+ ++
++
++
++
+----
-+
+++++ --
+
+++++ --
Evaporation
+
+
Charged Droplets
Analyte Ion
Solvent Ion Cluster
Analyte Ions
Solvent Ion Clusters
Salts/Ion pairs
Neutrals
Ionización por ElectrosprayTeoría
Proceso de ionización que usa un campo eléctrico para generar gotascargadas e iones de los analitos de interés por evaporación iónica parasiguiente análisis MS. El proceso es asistido neumáticamente
1220 Infinity LC + Agilent 6120 SQLa solución más fiable y económica para entrar en LCMS
- Análisis POS/NEG- Rango de masas hasta 2000 m/z- Amplio rango de fuentes disponibles- Autotune- Sensibilidad a nivel de pg- Toda las herramientas de software disponibles
Agilent 1290 Infinity LC Infinitamente Mejor para UHPLC y HPLC
MásFlexible
Más Sensible
MásPotente
El mejor en su clase
Sensibilidad UV : 2 – 20x con celda 1 cm
8 – 80x con celda UHS de 6 cm
Independiente de las condiciones.
Sensibilidad MS/MS: < 1 fg con “Jet Stream”.
Contaminación cruzada: < 0.002% Clorhexidina.
Admite todo tipo de columnas analíticas SIN limitación.
Permite transferir métodos DE / A cualquier (U)HPLC.
Inyección flexible: “flow-through” y con “loop” fijo.
La mayor capacidad de muestreo: > 2000 muestras/día.
Soluciones Multi-método y de Desarrollo Automatizado de
Métodos: hasta 8 columnas, 26 disolventes y 6 zonas de
temperatura.
El mejor en su clase
Resolución y Velocidad: 1200 bar (2 ml/min)
800 bar (5 ml/min)
20ul volumen retardo
Columnas RRHD (1.8µm / 1200bar): N=50.000 en 3min
Agilent Jet Stream – Generación Iónica de alto rendimiento
Dinámica de Gases
El gas supercalentado colima el spray del nebulizador y crea una fuente capaz de generar un mayor número de iones
Nozzle voltage
Capilar de muestreodieléctrico
Gas de nebulizacion
Gas de apoyo super-calentado
Gas de secado
Nebulizador mejoradode alta eficiencia
Patent Pending
6150B LCMS Cuadrupolo SimpleMejoras en sensibilidad - 1pg reserpina SIM
Para cualquier laboratorio haciendo tareas
de cuantificación esto implica mejoras
dramáticas en los LODs / LOQs
4 Inyecciones
Replicadas de Reserpina
S/N media (peak to
peak) > 100:1
Agilent Jet Stream para diferentes clases de compuestos Ideal para mezclas complejas en etapas de “drug discovery”
Month ##, 200X
Positiv
eN
egative
Versatility APCI MM AJS
Indole 3 2 1
Carbazole 2 1 3
Myristicin 3 2 1
Praziquantel 1 2 3
Ergocalciferol 2 1 3
1-naphthol 2 1 3
2-phenylphenol 1 2 3
9-phenanthrol 2 2 3
Uracil 1 3 2
Rank (Normalized) 30.9 29.1 40.0
Chromatographic
Performance APCI MM AJS
Indole 2 1 3
Carbazole 3 1 2
Myristicin 2 1 3
Praziquantel 2 1 3
Ergocalciferol 2 1 3
1-naphthol 2 1 3
2-phenylphenol 2 1 3
9-phenanthrol 3 1 2
Uracil 2 1 3
Rank (Normalized) 37.0 16.7 46.3
Mayores valores aseguran mejores resultados
Mejor ionización Menor anchura de pico
Agilent Jet Stream vs. ESIMejoras en anchura de pico
min0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9
0
1000000
2000000
3000000
4000000
5000000
6000000
7000000
8000000
9000000
0.2
25
0.2
90
0.3
33
0.8
03
min*0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9
0
1000000
2000000
3000000
4000000
5000000
6000000
7000000
8000000
9000000
0.2
25
0.2
91
0.3
35
0.8
03
0.79 sec
0.89 sec
0.92 sec
0.96 sec
0.83 sec
1.06 sec1.08 sec
1.01 sec
Señal: 5.9 X
Anchuras de Pico: 12 -15 %
menores
Agilent Jet Stream
Standard ESI source
Sensibilidad
mejorada
Picos
cromatográficos
más estrechos
Menores
posibilidades de
perder un
compuesto
(hombro de un
pico)
Ionización mejorada con AJS Más compuestos ionizados – Mayor productividad
100pg 9-fenantrol (MeOH)
APCI
Multimodo (MM)
AJS ( 4 X vs. MM)
Ejemplo de
ionización
negativa
con flujos
de 0.5
mL/min
Time (min)
Resp
onse
Scan a frecuencias de 10,000 Da / sec con resolución
isotópica del pico cromatográfico
Mayor confianza en la identificación de compuestos
min0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8
0
200000
400000
600000
800000
1000000
12000000.1
99
0.3
50
1.1
65
1.3
23
1.5
49
1.7
08
284 286
286
287
285
C10H9ClN4O2S
Todas las contribuciones isotópicas están presentes
Adquisición multi-señal con sistemas 6150 LCMS SQ
Page 27
Adquisición de hasta 4 señales de modo simultáneo para maximizar el rendimiento del equipo
Modelo 6150 – Fast LC10.000 u/s20 ms POS/NEGMantenimiento de ratios isotópicos para una buena confirmación
Analytical Studio Reviewer (ASR) Rápida revisión de datos en entornos de máxima exigencia de procesado
Page 28
•Reportingadaptable al gustodel usuario
•Fácil de usar
•Fácil de interpretar
•Confirmación depresencia decompuesto o purezade pico por MS/UV
Page 29
Condiciones CEMuestra: 10mg/L alcaloides naturalesInyección: 500 mbar*sCapilar: 90 cm x 50 µm diámetro internoElectrolito: 50 mM ácido fórmico
200 mM trimethyl-b-CDPrecond.: run buffer, 4 min @ 1 barVoltaje: 30 kVTemp: 20 CDet.: Señal 200/10 nm
Condiciones MSSheath: 4 µL/min 5 mM acetato de
amonio en 50 % metanolGas nebulizador: nitrógeno, 10 psi Gas de secado: nitrógeno, 6 l/min, 300 CAcq.: pos. mode, Vcap - 4 kV, fragmentor 40 V, Gain 1, SIM (m/z 209.2, 304.1)
Análisis de pequeñas moléculas con CE-MS
min0 5 10 15 20 250
1000
2000
3000
4000SIM m/z = 290+304
m/z = 290
m/z = 304
Alcaloides naturales
El análisis en CE-MS
consigue detecciones
totalmente certeras en
matrices complejas Datos tomados de la Nota de
Aplicaciones 5968-9414E
Colección de fracciones basadas en m/z
Bomba auxiliar
Detector UV MSDDivisor
Colector fracciones
Flujo principal
Flujo dividido
Flujo auxiliar
El pico debe llegar al colector de fracciones DESPUÉS de ladetección en el espectrómetro
El retraso de tiempo entre el colector y el MS debe ser conocido y
REPRODUCIBLE FRACTION DELAY SENSOR
Configuración con MS
Mass based fraction collection
Colección basada en tiempo (6 fracciones)
Colección basada en picos (3 fracciones)
Colección basada en m/z (1 fracción)
Nota de aplicación: 5989-5937EN
HPLC-Chip/MSBeneficios
Columna de Enriquecimiento
Aguja de spray
µ-filtro
Columna Analítica
Poliimida Inerte Max. Eficiencia & Sensibilidad
Volumen muerto cero para mejorcromatografía
LC/MS sensibilidad
Sin problemas. Todo en Uno Canales creados por ablacion láser Columna Analítica Columna de Enriquecimiento Conexión con Microvalvula Punta de nano-electrospray Micro-filtros
Sin tiempos perdidos Sin obturaciones de la aguja de spray Recambios Plug-&-Play
HPLC-Chip Mejora Considerablemente las Prestaciones de la Nano-Cromatografía
10 12 14 16 18 20 22 24 Time [min]
0
2
4
6
x107
Intensity
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
x108
EIC m/z 985.6
Nanospray Convencional
75 µm x 150 mm
HPLC-Chip /MS
75 µm x 43 mm
NanoArea = ½ (46)(8e7) = 1.85e9
ChipArea = ½ (15.5)(2.3e8) = 1.78e9
Proporcionará mejor Sensibilidad y Resolución para la detección de
péptidos y componentes minoritarios
El HPLC-Chip puede también utilizarse como fuente nano-Electrospray convencional, con nano-columnas tradicionales y nano-agujas clásicas, o bien con el Chip de Infusión
15.7 secs
6 secs
• x2.5 capacidad de separación de picos• Reduce complejidad del MS • Reduce posibles supresiones ionización
HPLC-Chip/MS Mejora en Sensibilidad – Estudio Metabolitos: Incubación “in vitro” de 30µM Buspirona
Peaks 1 to 3 [M+H]+ = 376 N,N-desethyl hydroxybuspironePeaks 4 [M+H]+ = 360 N,N-desethyl buspirone
>100x sensibilidad
1 2
3
4
1
2
3
4
0 5 10 15 20 25 30 Time [min]
0
2
4
6
8
0 5 10 15 20 25 30 Time [min]
0
1
2
3
4
x10
1 2
3
4
1
2
3
4
0 5 10 15 20 25 30 Time [min]
0
2
4
6
8
0 5 10 15 20 25 30 Time [min]
0
1
2
3
4
6
x10 7
EIC m/z 360; 376Columna microbore
HPLC-Chip
Zorbax SB Aq 2.1 x 50 mm
Inj Vol = 5 µl
53 ng fármaco total inyectado
Enrichment : 40 nl Zorbax SB Aq 5umAnalytical 75 µm x 43mm Zorbax SB Aq 3.5umInj Vol = 5 ul
0.530 ng fármaco total inyectado
Posibilidad de trabajo MassHunter Qual/QuantBatch-at-a-glance. Vistas de batch procesado
Agenda
1. La nueva Agilent. Novedades en la gama de productos LC/MS
2. LC/MS Cuadrupolo Simple. La serie 6100 de Agilent Technologies. Mejoras en cada modelo
3. Un modo sencillo de mejorar el rendimiento de su método ultravioleta. Consideraciones prácticas y aplicaciones
Agilent 6150 SQ
Consideraciones para el acoplamiento MS – HPLC• El paso a detección MS REQUIERE la formacion de iones
• Una formación iónica consistente y reproducible es la base para la obtención de medidas efectivas
• La formación de iones sigue normas bien conocidas tanto en el trabajo ESI/APCI
• La formación de iones en la fuente (interfase gas-liquido) es la clave del éxito
• El resto del sistema MS trabajando en rutina no requiere de grandes atenciones una vez se ha realizado el proceso de optimizacion
Page 37
La importancia de la ionizacion
¿Cuándo es apropiado trabajar en ESI?
Electrospray puede usarse para trabajar con solutos ionizables de alto y bajo peso molecular
El analito de interés debe ser capaz de portar carga en solución
Ejemplos:
a) Muestras que contienen heteroátomos: carbamatos, benzodiacepinas
b) Acidos o bases
c) Especies iónicas: fosfatos, conjugados con grupos sulfato, aminas …
d) Muestras que se multi-cargan en disolucion (i.e. peptidos, proteinas, oligonucleotidos)
e) Compuestos que pueden aceptar carga inducida
A evitar – muestras con grupos no polares en los que la inducción de carga no se un proceso eficiente
¿Cuándo es apropiado trabajar en APCI?
Muestras
Compuestos de peso molecular/polaridad intermedias: PAHs, PCBs, ácidosgrasos, ftalatos.
Compuestos que no contienen grupos ácidos/básicos (e.g. hidrocarburos, alcoholes, aldehidos, cetonas y ésteres)
Muestras con heteroátomos: ureas, benzodiacepinas, carbamatos
Muestras que exhiben un mal comportamiento ESI
Parámetros en solución
Mucho menos sensible a las condiciones de disolución que ESI
Tolera mayores flujos que ESI
Acomoda algunos disolventes no compatibles normalmente con ESI
Muestras a Evitar
Debido a la evaporación previa – Muestras térmicamente lábiles
Muestras cargadas en disolución
Biomoléculas – Habitualmente no volatiles
Page 39
Page 40
MW = 308
100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420
6000
14000
22000
30000
38000
46000
m/z-->
Abundance 309
[M+H]+
API-ES spectrum of Phenylbutazone
¿Qué información espectral se obtiene? Iones monocargados en ESI or APCI
Page 41
650 700 750 800 850 900 950 1000 1050 1100 1150 1200 1250
Abundance
5000
10000
15000
20000
25000
30000
35000
40000
m/z-->
A+25
679.45
A+24
707.65
A+23
738.45
A+22
771.90
A+21
808.60 A+20
848.95A+19
893.55A+18
943.15A+17
998.55A+16
1060.85A+15
1131.50 A+14
1212.30
Abundance
16400 16600 16800 17000 17200 17400 17600m/z-->
40000
80000
120000
160000
200000
240000
280000A
16959.09Assume adduct is a proton:
M1=(A+n)/n
M2=(A+n+1)/(n+1)
Solve for A
API-ES spectrum of Myoglobin
¿Qué información espectral se obtiene? Iones poli-cargados en electrospray
Page 42
Adaptar métodos existentes de LC a LC/API-MS
Sustituir tampones no volátiles por tampones volátiles a concentraciones <10 mM en ESI o <100 mM en APCI
• Substituir fosfatos y boratos por acetato amónico, formiato amónico o TFA
• Si no hay más remedio que usar un tampón no volátil, seleccionar uno en el que solo su catión/anión sea no volátil y usarlo a la concentración menor que sea posible (i.e. ammonium phosphate) manteniendo el i.d. de columna en el entorno - 2.1 o 1.0 mm y el flujo lo más bajo posible
Mantener el pH de la separación original usando aditivos volátiles – formico, acetico, TFA, hidróxido amónico
Usar reactivos de par iónico sólo cuando sea necesario – acido heptafluorobutirico (HFBA) y tributilamina (TBA)
Efecto de la concentración de tampón volátil sobre la señal ESI
A concentraciones elevadas de tampón el analito tiene dificultades para escapar de la gota. Moleculas más pequeñas como la cafeína se desorben antes en el proceso de ionizacion
43
ESI
0.00E+00
6.00E+06
1.20E+07
0 50 100 150 200 250 300 350
Concentration (mM)A
rea
Reserpine Caffeine
Análisis de Inyección de Flujo por APCIChequeo de las condiciones LC para mejorar la respuesta MS
44
Abundance
mAU
10
20
50000
100000
150000
2000
4000
min1 2 3 40
UV
EIC, m/z 285
TICScan mode
Signal suppression!
La señal de la sulfacloropiridazina es claramente suprimida porla presencia de la sal – HBSS – disolución salina de Hank
Page 45
Ejemplo: Traslado de un método de identificación de impurezas en un formulado contral el asmaUso de tampón no volátil y necesidad de identificación de impurezas desconocidas
Situacion
• Método HPLC-UV contiene ácido fosfórico que se ha usado en fases de desarrollo y escalado
• Se observan picos inesperados al analizar controles de estabilidad
Solucion
• Desarrollo de un método HPLC-MS de rendimientocromatográfico compatible al HPLC-UV
• Identificación de impurezas por LC-MS
Comparación de métodos cromatográficos Análisis de ingredientes activos del formulado
Page 46
LC-UV method
Solvent A = 0.03%Triethylamine in Water, pH adjusted to 3.0 with phosphoric acid. Solvent B = Acetonitrile
LC-UV-MS method
Solvent A = 0.1% Formic acid in Water, pH = 2.7. Solvent B = Acetonitrile
100
0
25
50
75
Acquisition Time (min)
2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
DAD1 - B:Sig=280,10 Ref=550
mAU
API
- Mantener pH con aditivosvolatiles – i.e. formico
- Uso de reactivos de par-ionicosolo si estrictamente necesario
Comparación de resultados LC/UV - LC/MS Mezcla de test de Impurezas
Page 47
1
40
42
44
46DAD1 - B:Sig=280,10
Acquisition Time (min)
3 6 9 12 15 18 21 24
Resp
onse
(%
)
0
10
20
30
40+ TIC Scan
API*
Impurity A
Impurity G Impurity CImpurity D
Impurity E
*API- active pharmaceutical ingredient
Los cambioscromatográficos no han
afectado la separación/resolucion de
las impurezas
Page 48
Información extra con adquisiciones MSAnálisis de impurezas en controles de estabilidad (dos meses)
Acquisition Time (min)
3 6 9 12 15 18 21 24
Resp
onse
(%
)
-1.8
-1.2
-0.6
0.6
1.2
0
10
30
50
70
DAD1 - B:Sig=280,10
+ TIC Scan
Impurity A
Impurity GImpurity D
Unknown 358
Unknown 497
Impurity B
Dos nuevasimpurezas
desconocidasdeben ser
identificadas al superar el umbral
del 0.1%
MW: 358MW: 497
Aunque se ven en UV, no podemos
tener informacionestructural al
carecer de patrón
Page 49
MS y UV proporcionan informacion complementariaImpurezas conocidas – Impureza B
2x10
0
- Scan (4.02-4.19 min)136.0
163.9112.6
3x10 - Scan (3.82-4.17 min)136.0
164.0
113.0
Counts vs. Mass-to-Charge (m/z)100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 170 175 180 185
2x10 + Scan (3.94-4.16 min)138.0
166.0
3x10 + Scan (3.89-4.13 min)138.0
166.0
148.0111.0120.0 187.9 204.0 219.8 260.9100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280
MS+
MS-
Sample
Standard
Sample
Standard
Adquisicion y
evaluacion de
datos en +/-
Comparar muestra y
estandar para verificar la impureza
Revision de datos MS basandonos en DAD
La confirmacion de impurezas es sencilla cuando existen materiales de referencia
Page 50
El caso complicadoEncontrar impurezas desconocidas usando UV y MS
-1
-0.5
0
6x106
Acquisition Time (min)
18.2 18.4 18.6 18.8 19 19.2 19.4 19.6 19.8 20
TIC
DAD
+EIC 653
+EIC 498
Peak of Interest
Coeluting Peaks Not of Interest (See EIC for 653 below)
Peak of Interest
Not of Interest1.5x106
6x107
mA
U
• En el TIC, se observan picos coeluyendo
• El pico de interés se observa en DAD pero no
puede identificarse
• Los datos de espectro indican MW 653 y 498
a RTs similares
• Extracted Ion Chromatogram (EIC)
Ilustra cual es el pico de interés
• NO se requiere una gran resolucion cromatografica
para hacer el trabajo
Page 51
Los datos de espectro identifican el pico de interesPeso molecular 497 confirmado
70%
Mass-to-Charge (m/z)
100%
%B
PI
- Scan
496.0
100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000
+ Scan498.2
260.3
100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000
Datos espectrales en ESI
positivo/negativo usados para la confirmación
Especificaciones para la familia 6100B SQ
Specification G6120B G6130B G6150B
Mass Range 10-2000m/z 2-3000m/z 10-1350m/z
Scan Speed 2500u/s 2500u/s,
5250u/s
10000u/s,
2500u/s
POS/NEG Switching
Speed
300 msec 50 msec 20 msec
SIM Sensitivity *
reserpine
10pg
20:1 p-p
1pg
20:1 p-p
1pg
100:1 p-p
Scan Sensitivity
resperpine
None 50pg
20:1 p-p
50pg
20:1 p-p
Mass Accuracy
Mass Axis Stab.
+-0.13u
+-0.1u or 100ppm
12hrs
+-0.13u
+-0.1u or 100ppm
12hrs
+-0.13u
+-0.1u or 100ppm
12hrs
Gracias por su atención
Juan AybarEspecialista de Producto GCMS/LCMS
Agilent Technologies Spain901.11.68.90
http://www.chem.agilent.com/en-
us/products/instruments/ms/6100SeriesQuadrupoleLCMSSystems/pages/default.aspx