Download - Informe de Esterilización
DEPARTAMENTO CIENCIAS DE LA VIDA Y AGRICULTURA
CARRERA DE INGENIERÍA AGROPECUARIA
SANTO DOMINGO.
Asignatura: Microbiología.
Estudiantes: Alfonso Avila.
Dennis Macas.
Carlos Vera.
Cristina Carcelén
Nivel: Tercero “B”
Docente: Ing. Gustavo Núñez J. M.Sc
Práctica: N°2
Grupo: 1
Fecha: 09/11/2015
Tema: Esterilización.
Período
Octubre 2015 – Febrero 2016
I. INTRODUCCIÓN.
La eficacia de un proceso de esterilización depende de cómo se realice el proceso en sí y de múltiples factores relacionados con el objeto: estructura física, nivel de contaminación inicial, de limpieza, compatibilidad con el proceso de esterilización, tipo de envoltorio, etc. Todas las fases de un proceso de esterilización limpieza, preparación del equipo, esterilización, almacenaje y transporte deben validarse y controlarse.(Hidalgo, 2004)
La esterilización implica la destrucción de todos los microorganismos, incluyendo los esporos. La desinfección supone la destrucción de los microorganismos vegetativos que pueden causar enfermedades o en el contexto de las industrias de alimentos, los que pueden producir alteraciones, la desinfección no mata necesariamente a los esporos.(Montufar, 2001)
Pueden alterar y condicionar el proceso de esterilización y derivar al fracaso del mismo. La presencia de proteínas protege a los microorganismos frente a la acción de los agentes esterilizantes, específicamente los químicos. Con el fin de eliminar la materia orgánica y reducir la carga microbiana y garantizar con ello la eficacia del proceso de esterilización, el material debe descontaminarse previamente mediante una limpieza exhaustiva. Algunos autores demuestran que después de una limpieza minuciosa de material de difícil acceso contaminado artificialmente fibroscopios, agujas espinales se logra una reducción microbiana de entre un 99.90% y un 99.99%. (Montufar, 2001)
II. OBJETIVOS:
2.1 OBJETIVO GENERAL
Conocer las técnicas y principios de esterilización de materiales, instrumentos y otros insumos de laboratorio.
2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Cumplir las recomendaciones de utilización de las técnicas de esterilización específicas para cada elemento. .
Operar adecuadamente los equipos destinados a la esterilización en laboratorio
III. REVISION DE LITERATURA.
3.1 Esterilización
La esterilización es un proceso a través del que se logra la destrucción total de los
microorganismos viables presentes en un determinado material.
La esterilización microbiológica Puede desarrollarse a través de diferentes métodos
químicos y físicos. Una alternativa frecuente es someter aquello que se quiere esterilizar
a altas temperaturas que causen la muerte de los microorganismos. (Silóniz., 2010)
3.2 CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN
Agentes físicos El calor se puede aplicar como
agente esterilizante de dos formas: el calor
húmedo el cual destruye a los microorganismos
por desnaturalización de las proteínas y el calor
seco que destruye a los microorganismos por
oxidación de sus componentes celulares. Así
tenemos que las radiaciones ionizantes se pueden
utilizar para la esterilización de materiales
termolábiles, como por ejemplo materiales plásticos, y las radiaciones no ionizantes,
como la luz ultravioleta, puede ser empleada en el control (Silóniz., 2010)de áreas
cerradas.
Agentes mecánicos La filtración permite la remoción de todos los microorganismos
presentes en un líquido o un gas reteniéndolos sobre la superficie de un material.
(Silóniz., 2010)
Agentes químicos Algunas sustancias químicas pueden ser usadas como agentes
esterilizantes porque tienen la capacidad de promover una o más reacciones químicas
capaces de dañar los componentes celulares de los microorganismos (proteínas,
membranas, etc.) (Silóniz., 2010)
3.3Medios de cultivos:
El agar sangre es un medio de aislamiento especialmente diseñado para facilitar el
crecimiento de microorganismos exigentes, bacterias Gram-positvas y todas las especies
encontradas en muestras de origen clínico. Contiene una mezcla de peptonas
particularmente adaptada al cultivo de microorganismos exigentes
La presencia de sangre permite la determinación de la hemólisis, criterio básico en la
orientación hacia la identificación bacteriana. (Arroyo, 2013)
Agar MacConkey Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la recuperación de
enterobacterias y bacilos Gramnegativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares
y cristal violeta que inhiben el desarrollo de bacteriasGram positivas y de algunas Gram
negativas exigentes. (Arroyo, 2013)
Agar Mueller-Hinton Es un medio de cultivo rico, diseñado especialmente para hacer
ensayos de sensibilidad y recomendado por el Comité de la Organización Mundial de la
Salud sobre estandarización de pruebas de susceptibilidad. (Arroyo, 2013)
Agar MacConkey Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la recuperación de
enterobacterias y bacilos Gram negativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares
y cristal violeta que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y de algunas Gram
negativas exigentes. La lactosa es la única fuente de carbono. El indicador es el rojo
neutro. Las bacterias fermentadoras de lactosa formas colonias de diferentes tonos de
rojo. Los fermentadores fuertes de lactosa pueden provocar la precipitación de las sales
biliares por la gran cantidad de ácidos formados, lo que se observa fácilmente en el
medio por la aparición de zonas opacas alrededor de las colonias. Las bacterias que no
fermentan la lactosa forman colonias incoloras o transparentes. (Arroyo, 2013)
Agar glucosa de Sabouraud Este medio fue desarrollado para el cultivo de hongos
patógenos, especialmente de los productores de micosis superficiales. En la actualidad
se recomienda sólo para el aislamiento primario de dermatófitos, con el agregado de
cicloheximida y cloranfenicol. (Arroyo,
2013)
Medio de cultivo Agar de Dextrosa y Papa
es de la marca DIBICO, y es conocido como
PDA por sus siglas en ingles, tiene la
infusión de papa como fuente de almidones y
la dextrosa son la base para el crecimiento de hongos y levaduras. El bajo pH (3.5) evita
el crecimiento de las bacterias. Cuando se va a usar para el recuento de hongos y
levaduras, agregar al medio de cultivo una vez esterilizado y enfriado aproximadamente
a 45ºC, 14 ml de una solución estéril de ácido tartárico al 10% para obtener un pH
aproximado de 3.5. Sembrar el medio de cultivo por estría en la superficie o adicionar la
muestra para la técnica de vaciado en placa. Incubar hasta 7 días a temperatura
ambiente. (Arroyo, 2013)
IV. MATERIALES Y EQUIPOS.Equipos
Estufa de esterilización Cámara de flujo laminar Autoclave Cocineta eléctrica Parrilla de agitación.
Materiales
Probetas Vasos de precipitados Barrilla de ajitacion Caja petri Barrilla magnetica de agitación . Termometro Papel de encapuchado.
Reactivos e insumos
PDA. Alcohol. Leche fresca. Agua destilada.
V. PROCEDIMIENTO.
Como primer paso se conoce las técnicas correspondientes para proceder a una
esterilización adecuada por lo cual se realiza los pasos correspondientes:
1. Limpiar las cajas Petri de manera que no tenga ninguna suciedad.
2. Tener abierto el papel estraza.
3. Ubicar la caja Petri en el centro del papel estraza.
4. Realizar los dobles correspondientes.
5. Ubicar en la estufa esterizadora.
Como segundo proceso se procede a la elaboración del PDA para ser ubicado en la
autoclave para preparar el medio de cultivo y la pasterización de la leche.
La pasterización de la leche se la hizo con 10 litros para ello para que cumpla un
buen proceso debe de llegar a los 75°C, medidos con u termómetro de laboratorio,
luego se pasa por una fuente fría se adiciona las bacterias saprofitas Gram + que
ayudan a la elaboración de yogur, luego de 24 horas se aplica el saborizante
Para la elaboración del medio de cultivo se llena un vaso de precipitación con 240
ml de agua destilada a 80°C cuando ya está lista se aplica 9,36 gramos de PDA
manteniendo la temperatura caliente, para que se convierta en una mescla uniforme
se utilizó una varilla magnética para que la mescla sea sin desgate físico y sea
contante hasta terminar el proceso donde los grumos de PDA sean disueltos. Al
tener el medio de cultivo listo del vaso de precipitación se distribuyó de manera
homogénea al número grupos en laboratorio para que sean utilizados en las cajas
Petri.
VI. RESULTADOS.
Con la presente práctica se pudo realizar un correcto encapuchado de cajas Petri con
el papel estraza para que puedan ser ubicados en la estufa completando con el
proceso de esterilización.
Se realizó un medio de cultivo para microorganismos ente este caso con PDA, para
luego ser ubicados en la autoclave para que sea esterilizado.
Se hizo una buena pasterización de la leche con todos los requisitos posibles para un
buen proceso a 75° C.
VII. CONCLUSIONES.
Se conoció las técnicas de preparación, conservación, y uso de los
medios de cultivo para el crecimiento y desarrollo de microorganismos
existentes en el ambiente.
La técnica de esterilización de cajas Petri fue la más adecuada siguiendo
los pasos del docente del área.
Las técnicas de dispensación de medios de cultivos en cajas petri se
aprendió con éxito los procedimientos adecuados.
Se preparó medio de cultivo con PDA.
El procedimiento de pasterización fue el más correcto posible.
VIII. Recomendaciones.
Pesar bien los medios de cultivos para mezclar con el agua ya que el exceso o el
escás del medio no formara un medio de cultivo óptimo.
Esterilizar bien los envases de vidrio que contienen los medios de cultivos para evitar inconvenientes con la pureza del medio de cultivo
Tener a disposición los implementos adecuados de higiene tales como mascarillas, guantes etc.
Tener mucho cuidado al momento de manipular las herramientas o aparatos destinados a la esterilización
Al momento de ingresar a la cámara de flujo laminar saber cubrir bien las cajas con el medio de cultivo , ya que podremos contaminar fácilmente la muestra
IX. BIBLIOGRAFÍAArroyo, P. (2013). Medios de Cultivos. /asignatura.us.es/.
Hidalgo, T. (2004). Esterilizacion. Recuperado el 31 de 10 de 2015, de http://www.scfarmclin.org/docs/higiene/part6/6.pdf
Montufar, S. (2001). Medios de esterilización. Esterilización.
Silóniz., B. P.-U. (2010). Metodología de esterilización en el laboratorio microbiológico. Madrid.: Reduca.
X. ANEXOS
XI.
CUESTIONARIO.¿Cuál es la temperatura adecuada para la pasterización de la leche?
75° C
ARIAS 2015