Download - GUÍA de Biología -UNI- 2012-I
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 1/29
UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL QUIMICA
G U I A D E P R A C T I C A S
D E
B I O L O G Í A
SEMESTRE ACADEMICO 2012-1
PILAR GARCÍA AVELINO
Jefe de Prácticas
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 2/29
Prácticas de Biología
PRESENTACION
El propósito del Laboratorio es familiarizar al estudiante con la metodología de trabajo de labiología, proporcionarle un ambiente donde tenga oportunidad de encontrarse con sustancias einstrumentos que le motive a experimentar.
Considerando al laboratorio como un lugar donde el trabajo en equipo se facilita, da lugar a unproceso de constante integración, comunicación, investigación, construcción de ideas,surgimiento de nuevas preguntas, donde las actividades experimentales propician lareorganización de conocimientos y facilitan el alcanzar un aprendizaje significativo.
Para logra tales fines, se propone esta guía que, como material de apoyo didáctico, reforzara elproceso constante de enseñanza aprendizaje, requiriendo a participación y guía del profesor.
Material necesario para trabajar por alumno:
Individualmente: un mandil, gafas de seguridad, guantes.
Por equipo: plumón marcador, papel toalla. Y el que se indique para cada práctica.
INSTRUCCIONES GENERALES.
1. Busca conceptos, antecedentesprevios a la realización de las prácticas.
2. Construye la hipótesis de trabajo, antes de solicitar su material.
3. Lee cuidadosamente los experimentos antes de ejecutarlos.
4. Recurre a tus libros de texto y/o consulta para aclarar dudas después de realizadas las
practicas, o consulta al profesor responsable.
5. Al efectuar cada uno de los pasos del desarrollo experimental, observa minuciosamente
y anota los cambios ocurridos.
6. Al concluir el desarrollo experimental, resuelve el cuestionario para su futura revisión.
7. Elabora tus conclusiones.
PRECAUCIONES PARA EL DESARROLLO DE CADA EXPERIMENTO
Las medidas oportunas y la compresión de las prácticas a seguir, hará del laboratorio unlugar seguro como cualquier ambiente de clases.Para ello deberán tenerse en cuenta, en forma general las siguientes precauciones:
1. Observa donde dejas el material caliente, cerciorándote que este frio antes de tomarlo
con la mano.
2. Cuando calientes un tubo de ensayo, no lo apuntes hacia ti o hacia tus compañeros,
pude proyectarse su contenido.
3. Si cae sobre ti o en tu ropa un material corrosivo, lávate inmediatamente con abundante
agua, e infórmalo al profesor del curso.
4. Nunca pruebes una sustancia.
5. Al detectar el olor de un liquido, no coloques la cara sobre la boca del recipiente, con tu
mano abanica hacia ti el aroma.
6. Antes de usar un reactivo lee dos veces la etiqueta de su contenido.
7. Los tubos de ensayo no pueden calentar ser por el fondo sino por las paredes, para
evitar su expulsión del contenido.
8. No arrojes cuerpos sólidos en los lavaderos, no viertas directamente los ácidos.
9. Rotula tu material de trabajo, así te será fácil identificarlos.10. Cuando trabajes con el mechero mantén tu cabello recogido.
11. Nunca emplear papel para encender el mechero.
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 3/29
Prácticas de Biología
PRÁCTICA 1
RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS ORGANICAS
INTRODUCCIÓN
En los organismos se encuentran cuatro tipos diferentes de moléculas orgánicas en gran
cantidad: carbohidratos, lípidos, proteínas y nucleótidos. Todas estas moléculas contienen
carbono, hidrógeno y oxígeno. Además, las proteínas contienen nitrógeno y azufre, y los
nucleótidos, así como algunos lípidos, contienen nitrógeno y fósforo.
Se ha dicho que es suficiente reconocer cerca de 30 moléculas para tener un conocimiento que
permita trabajar con la bioquímica de las células. Dos de esas moléculas son los azúcares
glucosa y ribosa; otra, un lípido; otras veinte, los aminoácidos biológicamente importantes; y
cinco las bases nitrogenadas, moléculas que contienen nitrógeno y son constituyentes claves
de los nucleótidos.
En esencia, la química de los organismos vivos es la química de los compuestos que contienen
carbono o sea, los compuestos orgánicos.
El carbono es singularmente adecuado para este papel central, por el hecho de que es el
átomo más liviano capaz de formar múltiples enlaces covalentes. A raíz de esta capacidad, el
carbono puede combinarse con otros átomos de carbono y con átomos distintos para formar
una gran variedad de cadenas fuertes y estables y de compuestos con forma de anillo. Las
moléculas orgánicas derivan sus configuraciones tridimensionales primordialmente de sus
esqueletos de carbono. Sin embargo, muchas de sus propiedades específicas dependen de
grupos funcionales. Una característica general de todos los compuestos orgánicos es queliberan energía cuando se oxidan. Entre los tipos principales de moléculas orgánicas
importantes en los sistemas vivos están los carbohidratos, los lípidos, las proteínas y los
nucleótidos.
OBJETIVOS
Determinar cualitativamente los carbohidratos presentes en muestras biológicas.
Reconocer cualitativamente las proteínas presentes en muestras biológicas.
Demostrar la solubilidad de los lípidos en diferentes tipos de solventes.
MATERIALES Y REACTIVOSTubos de ensayo, mechero, placas petri, vasos de precipitado, gradillas, pipetas graduadas,propipetas, pinzas de madera, piceta, almidón
Reactivo de Fehling, solución de glucosa al 1%, solución de almidón 1%, acetona, cloroformo,sulfato de cobre al 1%, hidróxido de sodio al 5%
Por grupo: un gillette, 5 ml de leche, 5 ml de aceite, bilis de pollo (1), una manzana, una papa,un huevo.
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 4/29
Prácticas de Biología
IDENTIFICACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES
FUNDAMENTO
Reacción de Fehling:
Es una reacción cualitativa que sirve para determinar la presencia de un azúcar reductor que
no sea sacarosa (carece de carbono anomérico y no es azúcar reductor).
El reactivo de fehling presenta sulfato de cobre, carbonato de sodio, citrato de sodio, y agua.
En la reacción para determinar a los azucares reductores los agentes estabilizantes de la
reacción son el carbonato y citrato, el sulfato de cobre es el reactante específicamente el Cu
que va a reaccionar con los grupos químicos de aldehídos y cetonas. Que en reacciones de
oxido reducción el Cu se convierte en CuO dando un color rojo ladrillo que precipitará
posteriormente.
PROCEDIMIENTO
COMPONENTESTUBO DE ENSAYO
1 2 3
Solución de glucosa 1% 1 ml
Leche evaporada 1 ml
Manzana rallada 1 mlReactivo de Fehling 2 ml 2 ml 2 ml
- Mezclar por inversión el reactivo con cada uno de sus componentes
- Someter a la acción del calor.
- Observar la formación de un precipitado color rojo ladrillo (CH2O), en el baño de agua
fría.
GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 5/29
Prácticas de Biología
RECONOCIMIENTO DEL ALMIDÓN
FUNDAMENTO
Esta prueba se basa en la especificidad del almidón cuando está presente en solución, la cual
da un color azul en presencia del Yodo. El yodo presenta: yoduro de potasio y yodobisublimado, mas agua (solución de Lugol). El yodo de la solución tiene afinidad por losenlaces α 1-4 y α 1-6 de la moléculas de almidón, esta interacción del yodo por dichos enlacesproducen el cambio de coloración. La amilosa en disolución coloidal toma color azul, laamilopectina da una coloración rojo violácea.
PROCEDIMIENTO
COMPONENTESTUBO DE ENSAYO
1 2 3
Solución de almidón 1% 1 ml
Papa rallada 1 ml
Clara de huevo 1 ml
Reactivo de Lugol 2 gotas 2 gotas 2 gotas
- Observar los primeros cambios de coloración.
- Mezclar por inversión
GRAFICAR/ ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 6/29
Prácticas de Biología
RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS
FUNDAMENTO
Reacción de Biuret
Se debe a los componentes que presenta: el hidróxido de sodio y sulfato de cobre; el cual el
agente denaturante de las proteínas es el hidróxido y el reactante es el sulfato de cobre. Las
proteínas después de ser denaturadas facilitan la interacción del Cu con los pares de
electrones sin compartir del grupo amino del péptido mediante enlaces de coordinación con la
formación de un complejo coloreado púrpura – violáceo.
PROCEDIMIENTO
- Rotular tres tubos de ensayo, en el primero agregar 1 ml de albúmina (huevo), en el
segundo tubo leche, y en el tercero la solución de almidón.
- Añadir 0.5 ml de NaOH al 40%, y 4 gotas de sulfato de cobre al 1% a cada tubo.
COMPONENTESTUBO DE ENSAYO
1 2 3
Huevo 1 ml
Leche 1 ml
Solución almidón 1% 1 ml
NaOH 40% 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
SO4Cu2 1% 4 gotas 4 gotas 4 gotas
- Observe la formación del color violeta en los tubos que presentan proteínas, siendo
Biuret (+), caso contrario Biuret (-).
GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 7/29
Prácticas de Biología
RECONOCIMIENTO DE LÍPIDOS
FUNDAMENTO
En este experimento la identificación se da por el comportamiento de las moléculas de aceite
con el agua, las cuales no se homogenizan, debido a que estas presentan característicasdiferenciales, mientras que el agua es polar, el aceite es no polar, esto hace que
microscópicamente se note que el aceite forme micelas en solución acuosa. Donde las colas
hidrofóbicas de las moléculas de aceite se “esconden” del agua adoptando la forma de micelas.
PROCEDIMIENTO
COMPONENTESTUBO DE ENSAYO
1 2 3
Aceite 2 ml 2 ml 2 ml
Agregar por las paredes del tubo cada componente
Agua destilada 2 ml
Acetona 2 ml
Cloroformo 2 ml
- Hacer la primera observación
- Mezclar por inversión cada tubo, dejar en reposo por 5 minutos
GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 8/29
Prácticas de Biología
PRÁCTICA 2
AMILASA SALIVAL
INTRODUCCIÓN
Propiedades del almidón.
El almidón es el polisacárido de reserva más abundante en vegetales y constituye laprincipal
fuente de nutrición glucídica para la humanidad. Los almidones estánconstituidos por una
mezcla de dos componentes:
a-amilosa: cadena lineal de unas 200 unidades de D-glucosa unidas por enlaces α(1 4)
amilopectina: cadena lineal de D-glucosas unidas por enlaces tipo α (1 4) con
numerosas ramificaciones α (1 6). El polímero contiene unas 1000 unidades de glucosa.
La proporción en que se mezclan la a-amilosa y la amilopectina para formar el almidóndepende de la especie vegetal en que aparece el almidón. La α -amilosa se disuelve fácilmente
en agua, adquiriendo una estructura secundariacaracterística, de forma helicoidal, en la que
cada vuelta de hélice comprende seisunidades glucosa.
Esta estructura secundaria, en la que los grupos hidroxilo quedan hacia afuera, permite que el
iodo, al penetrar en el interior del helicoide, confiera a la disolución una coloración azul violácea
intensa característica que permite la identificación positiva de trazas de almidón. Como esta
coloración no es resultado de ninguna interacción covalente, el calentamiento origina la
desestabilización del helicoide y la pérdida de color, que se recupera al enfriar lentamente la
disolución. Lavariación en el pH tiene un efecto análogo.
Estructura repetitiva de la amilosa.
Hidrólisis del almidón.
El almidón puede hidrolizarse por medios químicos o enzimáticos.La ebullición con ácidos o
álcalis hidroliza aleatoriamente los enlaces glucosídicosentre unidades de glucosa, dando
polisacáridos de longitud intermedia denominados dextrinas, cada vez menores hasta la
obtención de unidades de glucosa individuales.
Los compuestos que se obtienen en la hidrólisis del almidón y el color que producen con el iodo
son los siguientes:
Almidón (azul).
Amilodextrinas(violeta).
Eritrodextrinas(rojo).
Acrodextrinas(incoloro*).
Maltosa (incoloro*).
Glucosa (incoloro*).
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 9/29
Prácticas de Biología
* Tener en cuenta el ligero color amarillo propio del iodo.
El almidón también puede hidrolizarse enzimáticamente.
Uno de los enzimas que hidrolizan el almidón es la amilasa, que se halla presente enel jugo
pancreático y la saliva. Este enzima ataca al azar los enlaces α(1 4) del interior de la cadena.Así, rinde finalmente unidades de glucosa libre y maltosa. Laamilasa no ataca los enlaces
α(1 6), base de las ramificaciones de la amilopectina.
Estos enlaces pueden ser hidrolizados por otro enzima desramificador. La ptialina o amilasa
salival es una proteína enzimática presente en la saliva. Comotodo enzima, la acción que
ejerce sobre su sustrato (almidón) depende de una serie deparámetros: pH, temperatura,
concentración de enzima...
OBJETIVOS
Ver el efecto del pH y la temperatura sobre la actividad enzimática. Ver el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática.
COMPARAR y DISCUTIR los resultados de la actividad de la amilasa a los diferentes
pH. Deducir el pH en el cual la enzima es más activa.
ELIMINACIÓN DE RESIDUOSLos residuos generados en esta práctica deben ser recogidos en el bidón de residuos acuosos.
PROCEDIMIENTO
I. OBTENCIÓN DEL ENZIMA.
1. Tras enjuagar la boca, se mastica un trozo de papel de filtro para estimular lasalivación. Los
líquidos segregados se van pasando a un embudo con un filtrohumedecido colocado sobre un
tubo de ensayo, hasta recoger la suficientecantidad de saliva para realizar la práctica.
2. La saliva así obtenida se diluye 1:10 con agua destilada, obteniendo así lapreparación de
enzima base.
II. EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD AMILASA SALIVAL.
1. Tomar tres tubos de ensayo y añadir respectivamente:
1 2 3
ClH 0.1 N 2 ml NaOH 01 N 2 ml Agua destilada 2 ml
Almidón 2% 2 ml Almidón 2% 2 ml Almidón 2% 2 ml
Saliva diluida 1:10 2 ml Saliva diluida 1:10 2 ml Saliva diluida 1:10 2 ml
2. Agitar bien y medir rápidamente el pH de cada tubo. Para medir el pH, se tomauna gota de
la disolución con una varilla limpia y seca y se humedece con ella untrocito de papel
indicador de pH, comparando el color obtenido con el de laescala.
Los tres tubos se colocan en un baño de agua termostatizado a 37ºC durante 15minutos,
dejando que la amilasa vaya hidrolizando al almidón. Una vez transcurridoslos 15 minutos,
se sacan los tubos y se efectúan las pruebas del iodo y de Benedict
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 10/29
Prácticas de Biología
Prueba del iodo o del lugol: permite identificar la presencia de almidón que con estereactivo
da un color azul-violeta característico. Tomar 1 ml de muestra de cada uno delos tubos y
añadirle unas gotas de la disolución de iodo iodurada. Si la actividadenzimática de la
amilasa no se ve afectada, catalizará la hidrólisis del almidón y portanto la prueba del iodo será
negativa.
Prueba de Benedict: permite identificar a los azúcares reductores, obtenidos por hidrólisis del
almidón, que con esta prueba dan una coloración rojiza (el almidón notiene poder reductor).
Tomar 1 ml de muestra de cada uno de los tubos y seguir elprotocolo para la reacción deBenedict en la práctica de azúcares.
III. INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA EN LA VELOCIDAD ENZIMÁTICA.
1. Preparar 8 tubos: cuatro de ellos con 2ml de almidón 2% y los otros cuatrocon 2 ml desaliva diluida 1:10.
2. Colocar dos tubos, uno conteniendo almidón y la otra saliva, a cada una de las cuatrotemperaturas siguientes (marcar cada pareja de tubos según latemperatura a la que se
ensaya):
en baño de hielo (OºC, si se añade un poco de agua al hielo enfría
más;cuidar que los tubos no vuelquen)
a temperatura ambiente (20ºC)
en baño a 37ºC
a ebullición en baño María* (100ºC).
3. Mantener así los tubos durante 15 minutos para que alcancen la temperatura del
experimento.
4. Añadir al tubo que contiene el almidón el contenido del tubo que tiene la saliva,agitar bien y
dejar que siga a su temperatura correspondiente. Empezar a contarel tiempo (los tubos
deben mantenerse bien inmersos en los respectivos bañospara que la acción de la amilasa
tenga lugar a las temperaturas indicadas).
Transcurridos 1, 2, 3, 4, 6 y 8 minutos coger una muestra de 0,5 ml de cada tubo y ponerla
en la placa de pocillos.
* En el caso del baño María basta con 5 minutos.
5. Añadir a cada muestra unas gotas de reactivo de iodo. Una vez realizada laprueba ANALICE
los distintos cambios de color observados y la razón deestos.
Cuando el almidón está hidrolizado no produce ningún cambio de color a la soluciónde iodo
(punto acromático). El tiempo necesario para alcanzar tal punto da idea de laactividad de la
enzima. La inversa de dicho tiempo equivale a la velocidad de lareacción enzimática.
CUESTIONARIO1. ¿Qué es y qué hace un enzima?2. El enzima empleado en esta práctica se denomina:
Su sustrato es:3. ¿Qué reactivo se emplea para la identificación del almidón? Explicar brevemente comoactúa.
4. Efecto del pH sobre la actividad (en resultados)
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 11/29
Prácticas de Biología
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3pHPrueba de LugolBenedict
5. ¿Cuál es el pH óptimo para la enzima?6. Efecto de la temperatura (en resultados)
0º C Ambiente:ºC 37º C 100 ºC
1´2´3´4´6´8´
7. ¿Cuál es la temperatura oprima para la actividad de la enzima?
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 12/29
Prácticas de Biología
PRACTICA N° 3
CROMOSOMAS
INTRODUCCIÓNLos Cromosomas, durante la vida, toda célula pasa por dos periodos que constituyen
un ciclo:
a) Período de interfase
b) Período de división, que conduce a la formación de 2 células hijas.
Este ciclo se repite de generación en generación celular siendo el mismo para un tipo
de célula, pero pudiendo variar en función del tejido que se trate. Durante el ciclo celular el
núcleo de la célula sufre una serie de cambios complejos: desaparición de membrana nuclear y
de los nucleólos y condensación de la cromatina en los cuerpos llamados cromosomas. En los
cromosomas, estructuras responsables de la transmisión de los caracteres hereditarios, se
localizan los genes.
Las células del cuerpo, o células somáticas, de cualquier organismo superior tienen un
número cromosómico definido y característico de la especie, representado por el número
cromosómico 2n o número diploide. Este número significa que los cromosomas en las células
somáticas existen formando pares, recibiendo cada miembro del par el nombre de homólogo.
Los gametos o células reproductoras, se forman por meiosis y tienen un número
cromosómico “n” o haploide (del griego: haplos que significa mitad).
En las especies en las que el sexo está determinado por cromosomas se pueden
distinguir: a) un par de cromosomas sexualesb) autosomas o cromosomas no sexuales
Las características más importantes que identifican los cromosomas durante la mitosis
son su número, tamaño relativo, estructura, comportamiento y organización interna.
El cariotipoes el complemento o conjunto cromosómico típico del individuo o de la
especie en el que se describe el número, forma y tamaño de los mismos. El cariotipo se
perpetúa normalmente en la progenie (Battaglia, 1953). Es decir, en términos generales, se
admite la constancia en forma, tamaño y número de los cromosomas, en todas las células que
componen el núcleo de un individuo y en los individuos de cada especie.
En el cariotipo se ordenan los pares de homólogos en series, de acuerdo a su longitud, en
forma creciente.
La representación esquemática del cariotipo se conoce con el nombre de Idiograma.
El análisis de la morfología cromosómica se lleva a cabo en el estado de metafase que
es el momento en el que los cromosomas presentan el mayor grado de espiralización, y
compactación. Es en este estado también cuando muestra las mejores condiciones de tinción
con tintes que presentan afinidad por los ácidos nucleicos; razón que favorece aún más el
estudio citogenético de una determinada especie en esta fase del ciclo de división celular.
OBJETIVO
El alumno observará células eucarióticas de vegetales y animales e identificará la
organización de genoma.
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 13/29
Prácticas de Biología
FUNDAMENTO
El estudio de los cromosomas de células eucarióticas con el microscopio óptico se hace
preferencialmente en metafase, cuando estos tienen la morfología y estructura definida.
La observación de la estructura del genoma en interfase, está fuera de la resolución delmicroscopio óptico, sin embargo, en algunas células es posible observar el cromosoma X
heterocromatizado que se identifica como un corpúsculo, el cuerpo de Barr o cromatina sexual.
MATERIALES Y REACTIVOS
Raíces primarias de Allium cepa (cebolla), células del epitelio bucal, barniz de uña
transparente, 2 portaobjetos, 2 cubreobjetos, 1 vidrio de reloj, 1 cuchilla, pinzas portalaminas,
microscopio, HCl 1N, Ac. Acético 45%, orceína acética o orceínalactopropiónica.
PROCEDIMIENTO
Preparación de los meristemos
1. Cinco días antes de la práctica, se retira con una navaja bien afilada, las raíces de un
bulbo de cebolla, colócala en un vaso con agua sostenido por medio de palillos de
dientes (la superficie del agua debe hacer contacto con el bulbo). Las raíces nuevas
que se reproduzcan serán el objeto de observación (ver la figura)
2. Obtención del material: Se cortan raíces jóvenes de cebolla, aproximadamente unos 20mm, comprobando que conservan el ápice radicular, que se distinguirá por el cambio de
color.
3. Fijación: Se prepara la mezcla fijadora. 3 Etanol:1 Acético (Carnoy).
Según el fijador utilizado el tiempo y temperatura de la fijación varía. Las raicillas de
cebolla se han fijado en 3 Metanol:1 Acético a 4ºC.
4. Conservación: Se lava el material varias veces con la mezcla fijadora y se conserva a
4ºC.
5. Preparación: Las raicillas de cebolla que se hallan en mezcla fijadora se hidrolizan en
HCl 1N durante 10 minutos a 60ºC.
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 14/29
Prácticas de Biología
Transcurridos los 10 minutos de la hidrólisis, se lavan las raicillas en agua destilada y
se colocan las raicillas sobre una gota de orceína acética o de orceína lactopropiónica
para su tinción, durante 10 a 15 minutos. A continuación se realiza la preparación.
Primeramente, se toma una raicilla y se coloca sobre un vidrio portaobjetos y se corta el
ápice radicular con un bisturí. Para realizar esta operación se utiliza la lupa. Este ápice
radicular se corta a su vez en 4 fragmentos, se hace un corte longitudinal y otrotransversal. Se separan los cuatro trozos y a continuación se añade una gota del
colorante. Seguidamente se coloca un cubreobjetos sobre el material que deseamos
observar. Con la ayuda de un bastoncillo de madera se golpea y extiende el material. A
continuación se presiona con el dedo pulgar y se retira el exceso de colorante con un
papel de filtro.
6. Se observa al microscopio empezando con el objetivo de menor aumento. No es
necesario utilizar el objetivo de inmersión. Se deben distinguir y dibujar, tal y como se
ven, todas las fases de la mitosis.
Método para la cromatina sexual-cuerpo de Barr
1. En porta objetos perfectamente lavados y desengrasados (alcohol etílico-ácido acético
45%, 3:1), coloque una muestra de epitelio bucal (enjuague varias veces la boca),
tomando por raspado suave con un baja lenguas, haga frotis de hombre y mujer,
etiquételos.
2. Hidrolice con HCl 1N por 30-60 seg. Y absorba el ácido acético por goteo, cubra con un
portaobjetos y selle con barniz. Observa al microscopio a 100X
RESULTADOS
PREGUNTAS
1. ¿Con qué se fin se presiona la preparación?
2. En la mitosis, ¿qué diferencias existen entre la célula original y las células hijas?
3. ¿Cuál es el significado que la mitosis mantenga la continuidad genética de una
generación de células a la siguiente?
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 15/29
Prácticas de Biología
ANEXO 2 (PRACTICA3)
MITOSIS
La mitosis es el proceso de formación de dos células idénticas (generalmente) por replicacióny división de los cromosomas de la original que da como resultado una "copia" de la misma.
Los estructura de los cromosomas replicados y condensados tiene varios aspectos de interés.El cinetocoro es el punto donde "anclan" los microtúbulos del huso. Los cromosomas replicadosconsisten en dos moléculas de ADN (junto con sus proteínas asociadas: las histonas) que seconocen con el nombre de cromátidas. El área donde ambas cromátidas se encuentran encontacto se conoce como centrómero, el cinetocoro se encuentra en la parte externa delcentrómero. Se debe hacer hincapié en que los cromosomas son cromatina (ADN máshistonas) y señalar la particularidad que en los extremos del cromosoma (que toman el nombrede telómero) se encuentran secuencias repetidas de ADN.
PROFASE es el primer estadio de la mitosis. La cromatina se
condensa (recordar que el ADN de la cromatina se replica en la
interfase), por lo que en este punto existen dos cromátidas
unidas. La membrana nuclear se disuelve, los centríolos (si se
encuentran presentes) se dividen y los pares migran a los polos,
se forma el huso mitótico. Los centrómeros (o constricciones
primarias) se vuelven claramente visibles, debido a que se le han
asociados placas proteicas a ambos lados: el cinetocoro. En el
citoplasma el retículo endoplasmático y el complejo de Golgi se
fragmentan en vesículas, se desorganiza el citoesqueleto por lo
que la célula pierde su forma original y se hace esférica.
METAFASE los cromosomas (que a este punto consisten en dos
cromátidas mantenidas juntas por el centrómero) alcanzan su
máxima condensación y migran al ecuador de la célula donde las
fibras del huso se "pegan" a las fibras del cinetocoro.
ANAFASE comienza con la separación de los centrómeros y
el arrastre de las cromátidas (los llamamos cromosomas luego
de la separación de los centrómeros) a los polos opuestos.
TELOFASE los cromosomas llegan a los polos de sus
respectivos husos, la membrana nuclear se reconstituye, los
cromosomas se desenrollan y pasan a formar la cromatina y el
nucleolo, que desapareció en la profase se vuelve a constituir.
Donde antes había una célula ahora existen dos pequeñas con
exactamente la misma información genética y númerocromosómico. Estas células pueden luego diferenciarse en
diferentes formas durante el desarrollo.
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 16/29
Prácticas de Biología
PRACTICA N° 4
OBSERVACIÓN DE BACTERIAS Y LA TINCIÓN GRAM(tinción diferencial)
INTRODUCCIÓN
La morfología de las bacterias puede examinarse de dos formas: observando bacterias
vivas sin colorear (en fresco) y observando bacterias muertas teñidas con colorantes.
La observación en fresco de las bacterias permite conocer algunas de sus
características (morfología, tamaño, movimiento). Sin embargo, las bacterias vivas son casi
incoloras no lográndose visualizar fácilmente al microscopio óptico normal cuando se
encuentran suspendido en agua, de ahí que se utilicen colorante para incrementar su contraste
con el entorno que los rodea y de esa forma hacerlos más visibles. Los colorantes son
compuestos aromáticos solubles en agua (generalmente en forma de sales) que contienen union orgánico coloreado y otro ión inorgánico.
Pueden dividirse en dos grupos: ácidos y básicos. El colorante es ácido si la porción
coloreada tiene carga negativa, es decir, si tiene un anión coloreado, siendo en este caso
repelido por estructuras de la célula que presenten la misma carga, como es el caso de la
superficie bacteriana. El colorante se denomina básico si la porción coloreada es el catión,
cargado positivamente y con afinidad por las estructuras de la célula con carga negativa, como
es la superficie celular.
La tinción Gram (tinción diferencial) es una técnica que se desarrollo en 1884, por Hans
Gram (bacteriólogo danés)
La tinción Gram permite
encontrar diferencias características
como la forma de las células
bacterianas, que puede ser individual :
cocos, bacilos, cocobacilos y espirilos;
agrupadas : pareja, racimo, cadenas.
La tinción Gram colorea
selectivamente a las bacterias, los
colorantes que se utilizan reaccionan de
un modo diferente con las distintasbacterias, debido a las diferencias en la
estructura y/o composición química de la
pared celular de éstos.
Debido al tamaño de la mayoría de los
microorganismos, se requiere de un
microscopio óptico, para hacer la
descripción morfológica de éstos.
El microscopio de uso más común es el de campo claro, en el que la observación de células
vivas es limitada debido a que las celular son incoloras y permiten el paso de una gran cantidadde luz.
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 17/29
Prácticas de Biología
OBJETIVO
Conocer el fundamento y la utilidad de la tinción Gram.
Aprender una técnica de coloración diferencial e interpretar los resultados obtenidos,
distinguiendo bacterias gram positivas y gram negativas.
FUNDAMENTO
Un primer colorante básico: CRISTAL VIOLETA, se aplica sobre la muestra y
reacciona con las bacterias (cargadas negativamente) coloreándolas.
Un mordiente: LUGOL, que incrementa la afinidad entre el primer colorante y las
bacterias. El mordiente se combina con el colorante para formar un compuesto
insoluble coloreado en el interior de la bacteria.
Un agente decolorante: como el ETANOL de 95% o la mezcla de ALCOHOL-ACETONA
(1:1), que son disolventes orgánicos capaces de eliminar el primer colorante de algunas
bacterias, decolorándolas.
Un colorante contraste: SAFRANINA, igualmente de carácter básico pero de distinto
color que el primer colorante. La safranina es de color rosa, que contrasta con el color
violeta (del primer colorante), y que teñirá solo a las bacterias decoloradas en el paso
anterior.
Las diferencias químicas en sus paredes celulares, son las que permiten o no la salida
del complejo cristal violeta-lugol.
Las bacterias GRAM POSITIVAS debido a la estructura y composición bioquímica de
su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después del tratamiento con eldecolorante conserva el colorante básico, por lo que se observan al microscopio de color azul
oscuro a violeta una vez concluida la técnica de tinción
Las bacterias GRAM NEGATIVAS pierden el colorante básico cuando son tratadas con
el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular lo que
aumenta la permeabilidad celular, dando como resultado la pérdida del complejo cristal violeta-
lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante contraste, razón por la cual estas
células bacterianas se observan al microscopio de color rosado una vez concluida la técnica de
tinción.
MATERIALES Y REACTIVOS
Cultivos bacterianos, láminas portaobjetos, asa de siembra (asa de kolle), pinzas para láminas,
mechero, vaso de precipitado 50 ml, pisceta con agua destilada, alcohol, microscopio, aceite de
inmersión, papel tissue.
Colorantes: la tinción Gram utiliza en estricto orden:
- Cristal violeta : colorante básico
- Lugol: mordiente
- Alcohol acetona: agente decolorante- Safranina (fucsina): colorante de contraste
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 18/29
Prácticas de Biología
PROCEDIMIENTO
1. Se proporcionará a los alumnos cultivos sólidos (placas petri con agar) y cultivoslíquidos (tubos de ensayos con caldo de cultivo) de: Escherichia coli , Staphylococcus aureus , Pseudomonas aeruginosa , Bacillus subtilis .
2. Se limpia la lámina portaobjetos con alcohol y papel tissue.
3. Se prende el mechero, para esterilizar el asa de siembra en la flama hasta que seponga al rojo vivo. Enfriar antes de tomar la muestra, para evitar que losmicroorganismos sean destruidos.
4. Acercar al mechero, la placa petri o el tubo de ensayo, para tomar la muestra
5. Preparación de un frotis bacteriano.
a. Extensión. Colocar una pequeña gota de agua destilada en la lámina portaobjeto.
Con el asa de siembra transferir una pequeña cantidad del cultivo bacteriano enmedio sólido a la gota. Remover la mezcla con el asa hasta formar una suspensiónhomogénea y extenderlabien con la propia asa), produciendo la extensión delinóculo, de 2 cm (Si el material de partida es un cultivo en medio líquido, realizardirectamente la extensión).
b. Fijación. Es imprescindible para que las bacterias queden inactivadas y adheridasalvidrio, permitir la evaporación espontánea del porta, ayudándose con la llamadelmechero de manera muy leve (en ningún caso el porta debe quemar al tacto). Sielporta alcanza una temperatura excesiva a la llama, las células pueden deformarseoromperse.
6. Realizar la tinción cubriendo la preparación con abundante colorante y dejarlo actuarpor un determinado tiempo.
a. Cristal violeta: 60 segundos.b. Lugol: 20 segundosc. Alcohol-Acetona: 10-15 segundos (moviendo el portaobjeto)d. Safranina: 20 segundos
Después de cada proceso de tinción, de acuerdo al tiempo señalado se enjuagalentamente con agua destilada
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 19/29
Prácticas de Biología
7. Se deja secar al aire después del último enjuague.
8. Observación al microscopio: colocar la lámina portaobjetos en la platina, empezar alocalizar la preparación con el objetivo de 10X, luego pasar al objetivo de 40X. Para laobservación con el objetivo de 100X, se coloca previamente una pequeña gota deaceite de inmersión sobre la preparación.
9. Resultados.
ELABORAR EL INFORME EN EL LABORATORIO
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 20/29
Prácticas de Biología
PRACTICA N° 5
METODOS DE AISLAMIENTO, SIEMBRA Y RECUENTO DE BACTERIAS
INTRODUCCION
Las bacterias deben ser cultivadas en medios de cultivo de laboratorio para caracterizar
su crecimiento, realizar su identificación y determinar sus actividades metabólicas. Se debe
acondicionar a la bacteria en un medio de cultivo de acuerdo a sus exigencias, para que en
condiciones óptimas de temperatura, tiempode incubación, pueda multiplicar y desarrollarse in
vitro . Un medio de cultivo está conformada por todos los elementos indispensables que
requieren los microorganismo para crecer (carbohidratos, proteínas, vitaminas, sales).
Las bacterias son inoculadas (ó introducidas) en medios líquidos (caldos) o solidificados con
agar para su propagación y/o conservación. La inoculación de los microorganismos en los
medios de cultivo, siempre debe realizarse en zona aséptica (cerca del mechero) en
condiciones que limiten la presencia de microorganismos indeseables o contaminantes.
El aislamiento de cultivos microbianos puede realizarse por métodos de dilución , donde cada
célula bacteriana que se separa dará origen a una población que formara una colonia
característica a simple vista medios sólidos; por estría en placa o en medios líquidos.
OBJETIVOS
Conocer las diferentes técnicas de aislamiento en medios de cultivo sólido para la
obtención de cultivos puros de bacterias Aprender diversos métodos de siembra.
FUNDAMENTO
Aislamiento: permite la separación de las bacterias al estado de pureza a partir de una
muestra. Se requiere medio solido con gran superficie para que las bacterias diseminadas
sobre el medio generes su propia progenie (cepa) por formación de colonias separadas.
Un cultivo puro es aquel que contiene una solo tipo demicroorganismos. Para
obtenerlo es necesario recurrir a las llamadas técnicas deaislamiento. Aunque existen otras, lastécnicas más utilizadas emplean un medio decultivo sólido, en el que los microorganismosgeneran colonias separadas. La obtención de un cultivo puro es indispensable para conocer lascaracterísticas morfológicas, propiedades de tinción, actividad bioquímica, patogenicidad,sensibilidad a antibióticos e identificación de las especies microbianas.
MATERIALES Y REACTIVOS
Asa de kolle, asa de vidrio (espátulas), placas petri con agar nutritivo, bacterias, pipetas
graduadas, plumón marcador, mechero.
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 21/29
Prácticas de Biología
PROCEDIMIENTO
Se proporcionará a los alumnos cultivos sólidos (placas petri con agar) y cultivos líquidos (tubosde ensayos con caldo de cultivo) de: Escherichia coli , Staphylococus aureus , Pseudomonas aeruginosa , Bacillus subtilis .
1. Estría múltiple en superficie
Con un asa de siembra, previamente esterilizada, se toma una pequeña
muestra del cultivo de bacterias y se extiende sobre un área pequeña de la superficie
de la placa con agra nutritivo, en forma de estrías muy juntas, pero sin hacer presión
para no dañar el agar.
Se flamea el asa de kolle, se enfría después de rozar la siembra realizada
previamente, se extiende de nuevo por otra zona de la placa haciendo nuevas estrías.
Este proceso se repite sucesivamente, flameando y enfriando el asa al comienzo de las
sucesivas siembras en estría. Se lleva la placa a incubar, a la temperatura adecuada yen posición invertida.
Mediante esta técnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que
contenga un elevado número de bacterias.
2. Dilución en masa ó Inmersión
Enunaplaca petri vacía, previamente estéril, se deposita u volumen conocido de
muestra y luego se adiciona el medio de cultivo: agar nutritivo fundido, atemperado
aproximadamente 45ºC., se mezclan ambos por rotación suave de la placa. De esta
forma los microorganismos se distribuirán de forma homogénea en el medio de cultivo
permitiendo el desarrollo de colonias separadas por todo el agar.
La homogenización se deja enfriar en las placas hasta que solidifique el medio y
posteriormente incubarlo a la temperatura adecuada.
MUESTRA
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 22/29
Prácticas de Biología
3. Aislamiento de bacterias en placas de agar. Extensión en superficie con asa devidrio.
Depositar sobre la superficie de una placa con agar nutritivo una gota ó 0.1 mlde una determinada dilución del cultivo de bacterias y extenderlos con ayuda de un asa
de vidrio (espátula), previamente esterilizado, en todas las direcciones hasta que esté
completamente seco. Incubar la placa en posición invertida a la temperatura deseada
(durante 24) según el tipo de microorganismo.
Es una técnica usada para el aislamiento de colonias, que permite igualmente el
recuento de bacterias viables en la muestra, si conocemos exactamente el volumen de
muestra sembrado.
RESULTADOS
Tras el periodo de incubación se examinaran las placas.
1. Estría múltiple en superficie. Se observarán las colonias aisladas en alguna región de
la placa inoculada, con esta técnica se logra la separación de los microorganismos que
se encuentren en un cultivo mixto, o bien que procedan de muestras homogéneas,
pero en las que existe un elevado número.
2. Dilución en masa ó Inmersión. Aparecen las colonias distribuidas por toda la masa
del agar. Aquellas que están en la superficie tendrán distintas características,dependiendo del tipo microbiano, mientras que las colonias que se desarrollan en el
interior, bajo la superficie del agar, tiene forma lenticular, aunque los microorganismos
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 23/29
Prácticas de Biología
que formen las distintas colonias sean de distinto tipo. Por lo tanto las colonias que
aparecen en la profundidad del agar son siembre biconvexas.
3. Aislamiento de bacterias en placas de agar. Extensión en superficie con asa devidrio. Las colonias aparecen sobre la superficie, distribuidas uniformemente si la
siembra se ha realizado en forma correcta. Podrán diferenciarse las colonias deacuerdo al tamaño, forma color, textura. El recuento viable de organismo se hace en
“unidades formadoras de colonias” (UFC) ya que cada una procede de un solo
microorganismo (o un grupo de microorganismos, en algunos éstos tienden a formar
agregados a partir de las colonias aisladas, los microorganismos pueden transferirse a
otros medios de cultivo para su posterior estudio.
RECUENTO DEL NÚMERO DE BACTERIAS POR MILILITRO
INTRODUCCION
El método que vamos a utilizar consiste en realizar diluciones sucesivasde la muestra
en condiciones de esterilidad con objeto de sembrar después cantidadesconocidas de las
mismas en una serie de placas de petri. Considerando que alguna delas diluciones será tal que
al distribuir una parte de ella en la placa, originará coloniasseparadas. Contando el número de
colonias, el volumen sembrado en la placa y ladilución correspondiente, podremos calcular elnúmero de unidades formadoras decolonias presentes en la muestra inicial.
MATERIAL Y REACTIVOS
Bacterias, Pipetas graduadas, Tubos de ensayo (para dilución 9 ml), Placas de agar nutritivo.
PROCEDIMIENTO
A partir de la muestra hacer una serie de 4 diluciones con tubos de agua destilada estéril (9ml)
Tomar 1 ml de las diluciones 10-1, 10-2, 10-3 y 10-4 en una placa, extender con el asa de vidrio
e incubar toda lanoche.
RESULTADO
A partir del número de colonias presentes en cada dilución, calcular el númerode bacterias por
mililitro en el cultivo original, el resultado se expresa en unidad formadora de colonias por
mililitro (UFC/ml)
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 24/29
Prácticas de Biología
PRACTICA N°6
RESISTENCIA DE ANTIBIOTICOS – ANTIBIOGRAMA
INTRODUCCION
Los antibióticos son sustancias químicas producidas por microorganismos o derivados
semisintéticos de éstas, mientras que los quimioterápicos son productos de síntesis química,
pero ambos tienen la propiedad de estar dotados de actividad antibacteriana.
Existen diferentes técnicas para estudiar la actividad de los antibióticos frente a distintos
microorganismos, utilizándose pruebas esencialmente cualitativas, aunque en muchos casos
se requieren determinaciones cuantitativas.
En esta práctica vamos a efectuar ensayos de ambos tipos. Las pruebas cualitativas o
antibiograma se van a efectuar con la bacteria problema mientras que las cuantitativas las
haremos con una bacteria conocida.
Las pruebas que vamos a realizar se basan en la difusión del antibiótico sobre una
placa de medio a partir de un punto central. En este caso, una cantidad concreta del antibiótico
se encuentra incluido en un disco de papel que se deposita sobre una placa de agar común,
que ha sido previamente inoculada con una fuerte dosis de la bacteria a ensayar. Así, el disco
de papel absorbe agua de la placa, se disuelve el antibiótico y se inicia el proceso de difusión
de éste hacia las zonas que lo rodean, generándose un gradiente de concentración cuyo nivel
máximo se encuentra bajo el disco. Las bacterias que se inocularon crecerán durante su
incubación allí donde la concentración del antibiótico sea lo suficientemente baja como para no
impedírselo (normalmente alejado del disco), mientras que no podrán hacerlo en las
proximidades del disco donde las concentraciones del antibiótico son elevadas. Puesto que loslímites de concentración de antibiótico que afectan al cultivo son por regla general muy
estrechos, se suelen formar halos de inhibición, esto es, zonas sin bacterias alrededor de los
discos, de bordes bastantes definidos y cuyo diámetro tiene que ver con la concentración de
antibiótico que había en el disco y con la sensibilidad a éste de las bacterias ensayadas.
Todas las bacterias no tienen la misma sensibilidad a los distintos antibacterianos. La
evaluación de esta sensibilidad nos va a ayudar en la selección del compuesto más adecuado
para el tratamiento de una infección bacteriana. Las pruebas más utilizadas para evaluar la
sensibilidad de una bacteria a un agente antibacteriano están basadas en el enfrentamiento in
vitro de la bacteria con distintas concentraciones del agente.
Concentración mínima inhibitoria (CMI) se define como la menorconcentración de
antimicrobiano capaz de inhibir el desarrollo de unacepa bacteriana dada.
Concentración mínima bactericida (CMB) se define como lamenor concentración de
antimicrobiano capaz de destruir una cepabacteriana dada
OBJETIVOS
Determinar la sensibilidad bacteriana de la bacteria problema a distintos antibióticos.
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 25/29
Prácticas de Biología
FUNDAMENTO
El antibiograma por el método de difusión en agar es una prueba en laque se enfrenta
la bacteria inoculada sobre la superficie de un medio de agar con unasolución antibiótica
absorbida en discos de papel de filtro. Este método estáestandarizado y los halos de inhibición
han sido obtenidos correlacionándolos con lasCMI.
Hay varios factores que afectan al halo de inhibición: la carga delantibiótico en los
discos, la difusión del antibiótico en el medio de cultivo, el tamañodel inóculo bacteriano, la
composición y grosor del medio de cultivo, la velocidad delcrecimiento bacteriano y el tiempo
de incubación.
Los discos de antibióticos son adquiridos comercialmente. Debencontener la cantidadestablecida de antibiótico y ser conservados a 4ºC protegidos dela humedad.
El inóculo bacteriano debe tener una turbidez similar al 0,5 de la escala de McFarland, yser preparado en solución salinaestéril o caldo de cultivo.
MATERIALES
Bacteria (cepa pura de Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa ),
antibióticos, discos de papel filtro estériles, tubos de ensayo con 3 ml de agua destilada estéril,
pipetas 1 ml, pinzas, placas con medio de cultivo (agar Luria-Bertini), mechero, asas de
siembra, asas de vidrio/hisopos estériles, escala de McFarland.
PROCEDIMIENTO
1. Preparación del inóculo. Partiendo de un cultivo puro tomar con el asa de siembra X
colonias de la bacteria e introducirlas en el caldo de cultivo. La turbidez del inóculo debe
equivaler al estándar 0,5 de McFarland.
2. Inocular la superficie de una placa de agar Müeller Hinton con el hisopo (estéril) pasándolo
uniformemente por toda la superficie en tres direcciones. Por último, pasar el hisopo por el
reborde de la placa de agar. Dejar secar 5 minutos.
Turbidez del
Inóculo
0.5 McFarland
Inoculación
Extensión con: asa
de vidrio ó
Hisopo esterilizado
Preparación delInoculo
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 26/29
Prácticas de Biología
3. Colocar los discos de antibióticos sobre la superficie del agar utilizando unas pinzas
estériles y apretándolos suavemente sobre la superficie del agar. Los discos no deben
estar a menos de 15 mm de los bordes de la placa y lo bastante separados entre ellos
para que no se superpongan sus zonas de inhibición. Dejar las placas 15 minutos a
temperatura ambiente para que comiencen a difundir los antibióticos.
4. Incubar la placa en posición invertida a 37ºC durante 18-24 horas.5. Medir los diámetros de los halos de inhibición con una regla.
PRUEBA CUALITATIVA.
Un mismo cultivo se enfrenta a distintas soluciones antibióticas.
PRUEBA CUANTITATIVA.
Se trata de determinar el grado de sensibilidad o concentración mínima inhibitoria (CMI)
de un antibiótico frente a la bacteria ensayada. Cada grupo sembrará de la forma descrita la
bacteria “X” , y colocará cinco discos con cantidades crecientes (diferentes concentraciones) de
un antibiótico.
Para preparar los discos, cada grupo preparará 5 diluciones seriadas (1:4 en agua estéril) a
partir de una disolución valorada que se le entregará, y añadirán 25ul de cada una de éstas
diluciones (ug/ml) a los respectivos discos de papel estériles. Puesto que los discos no están
marcados, es imprescindible indicar su concentración debajo de la placa. Siempre resulta
conveniente mantener un orden creciente en la disposición de los discos.
Una vez colocados los discos, las placas se incuban en posición invertida durante toda
la noche a la temperatura óptima de crecimiento de la bacteria. A la mañana siguiente hay que
medir el diámetro de los halos de inhibición y anotarlos en el cuaderno.
Colocación de
los discos de
antibióticos
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 27/29
Prácticas de Biología
RESULTADOS
En el caso del antibiograma, se hará un cuadro de sensibilidad (S) o resistencia (R)
para cada uno de los antibióticos frente a esta bacteria, y posteriormente serán utilizados como
criterio para la determinación de la bacteria problema. El criterio a seguir, internacionalmente
reconocido por National Committe for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), será:
Sensible : si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico en el caso de un tratamiento a
una dosis habitual.
Resistente: si la probabilidad del éxito terapéutico es nula o muy reducida. No es de esperar
ningún efecto terapéutico sea cual fuere el tipo de tratamiento.
Intermedia : cuando el éxito terapéutico es imprevisible. Se puede conseguir efecto terapéutico
en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento de la dosis)
Sensible (S) si el diámetro del halo es mayor de 15 mmResistente (R) si el diámetro del halo es menor de 13 mm
Intermedio (R/S) si el diámetro del halo está comprendido entre 13 y 15 mm
CUESTIONARIO.
1. ¿Para qué se emplean los antibiogramas?
2. ¿Qué significa la concentración inhibitoria mínima (CIM)?
3. Defina: bacteriostato y bactericida
4. ¿Qué es radio de inhibición?
5. ¿Qué relación existe entre el halo de inhibición y eficacia del antibiótico?
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 28/29
Prácticas de Biología
ANEXO 1 (Practica 6)
ESCALA NEFELOMETRICA DE MACFARLAND
TUBO Cl2Ba 1% SO4H2 1% BacteriasUFC/ml
1 0.1 9.9 3.0 x 108
2 0.2 9.8 6.0 x 108
3 0.3 9.7 9.0 x 108
4 0.4 9.6 1.2 x 109
5 0.5 9.5 1.5 x 109
6 0.6 9.4 1.8 x 109
7 0.7 9.3 2.1 x 109
8 0.8 9.2 2.4 x 109
9 0.9 9.1 2.7 x 109
10 1.0 9.0 3.0 x 10
Algunos Antibióticos y sus sitios de acción
Antibiótico Abrev.Cloranfenicol C Cefalotina CR Tetraciclina TEA. Nalidíxico NAEritromicina EEstreptomicina STrimetoprim TMPAzotromicima AZTGentamicina GEBactrim SX
Eritromicina EMTetraciclina TEAmplicilina AClindamicina DAL
5/17/2018 GUÍA de Biología -UNI- 2012-I - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-biologia-uni-2012-i 29/29
Prácticas de Biología
ANEXO 3
PRESENTACION DEL INFORME
Caratula
I. ObjetivosTema central de estudio.
II. Fundamento teórico¿Qué teorías lo sustentan?
III. Procedimiento experimental (Exp 1. Exp.2…) ¿Cómo se estudió dicho problema?Es el plan ordenado de la forma en que se realizó la práctica para lograr el objetivo dela misma
IV. Observaciones y datos tabulados (para c/exp)Qué se observó? Qué datos hubieron? Durante el desarrollo del experimento
V. Resultados y Cálculos¿Cuáles fueron los resultados? Se indican los resultados tal y como se dieron durante la investigación.Se pueden presentar los datos en tablas, gráficas, o figuras
VI. DiscusiónEs la etapa que encadena los resultados obtenidos por la investigación. Se pone aprueba la capacidad analítica y de autocrítica del autor.La discusión pone el toque personal al trabajo.
VII. Conclusiones¿Qué significan los resultados? Están relacionados con los objetivos.Es el análisis del cumplimiento de cada uno de los objetivos de la práctica
VIII. Bibliografía¿Qué autores se consultaron para fundamentar la investigación?Pueden revisar: Referencias Bibliografías al estilo Vancouver , en:http://www.unap.cl/p4_biblio/docs/Normas_VANCOUVER.pdf
IX. Cuestionario
Preguntas relacionadas al tema