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Dra. Nadia Gerhardt
Genética en el diagnósticode la enfermedad celiaca
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HLA- características
• Es poligénico; está constituido por varios genes clasificados entres regiones.
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HLA- características
• Es poligénico; está constituido por varios genes clasificados en tresregiones.
• Son altamente polimorficos, existen múltiples alelos para cadalocus.
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HLA- características
• Es poligénico; está constituido por varios genes clasificados en tresregiones.
• Son altamente polimorficos, existen múltiples alelos para cada locus• Presentan un fuerte desequilibrio de ligamento en el cual algunos
combinaciones de alelos se heredan juntos con más frecuencia delos esperado al azar.
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HLA Clase I -estructura
• Los heterodímeros HLA de clase I están constituidos por una cadenaα pesada y una molécula pequeña β2-microglobulina cuyos genesmapean en el cromosoma 15.
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HLA Clase II- estructura
• Los heterodímeros HLA de clase II ( cadena α y β) son especificadaspor los genes en la región HLA-D que comprende tres subregionesHLA-DP (DPA1 y DPB1), DQ (DQA1 y DQB1) o DR (DRA1 Y DRB1)
• Nomenclatura: HLA DQ A1/B1* (números de alelos)Región D Subregión Q Cadena α Cadena β
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HLA Clase II- estructura
• Los heterodímeros HLA de clase II ( cadena α y β) son especificadaspor los genes en la región HLA-D que comprende tres subregionesHLA-DP (DPA1 y DPB1), DQ (DQA1 y DQB1) o DR (DRA1 Y DRB1)
• Nomenclatura: HLA DQ A1/B1* (números de alelos)Región D Subregión Q Cadena α Cadena β
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HLA Clase II- estructura
• Los heterodímeros HLA de clase II ( cadena α y β) son especificadaspor los genes en la región HLA-D que comprende tres subregionesHLA-DP (DPA1 y DPB1), DQ (DQA1 y DQB1) o DR (DRA1 Y DRB1)
• Nomenclatura: HLA DQ A1/B1* (números de alelos)Región D Subregión Q Cadena α Cadena β
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HLA Clase II- estructura
• Los heterodímeros HLA de clase II ( cadena α y β) son especificadaspor los genes en la región HLA-D que comprende tres subregionesHLA-DP (DPA1 y DPB1), DQ (DQA1 y DQB1) o DR (DRA1 Y DRB1)
• Nomenclatura: HLA DQ A1/B1* (números de alelos)Región D Subregión Q Cadena α Cadena β
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HLA Clase II- estructura
• Los heterodímeros HLA de clase II ( cadena α y β) son especificadaspor los genes en la región HLA-D que comprende tres subregionesHLA-DP (DPA1 y DPB1), DQ (DQA1 y DQB1) o DR (DRA1 Y DRB1)
• Nomenclatura: HLA DQ A1/B1* (números de alelos)Región D Subregión Q Cadena α Cadena β
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HLA Clase II- estructura
• Los heterodímeros HLA de clase II ( cadena α y β) son especificadaspor los genes en la región HLA-D que comprende tres subregionesHLA-DP (DPA1 y DPB1), DQ (DQA1 y DQB1) o DR (DRA1 Y DRB1)
• Nomenclatura: HLA DQ A1/B1* (números de alelos)DQB1*02
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HLA- Función
• Las molécules de HLA son capaces de unirse a los péptidosantigénicos y presentarlos a los LT.
• Las moléculas de clase I/ antígenos endógenos son reconocidos porlos LT CD+8, desencadenando una rta citotóxica.
• Los heterodímeros HLA clase II/ antígenos exógenos sonreconocidos por los LT CD4+ y disparan una respuesta humoral.
• Las moléculas de HLA de clase I se expresan de maneraconstitutivas en practicamente todas las células nucleadas,mientras que las moleculas de clase II normalmente se expresansolo en células dendríticas, LB, macrófagos y algunos otros tiposcelulares
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HLA- Función
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• Alrededor del 30% de la población general presenta las moléculasDQ2/DQ8 sin enfermedad, solo un 3% desarrolla intolerancia algluten.
Población general
DQ2/DQ8
EC
HLA DQ2/DQ8
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DQ2/DQ8
• El heterodímero HLA DQ2 puede expresarse junto en el mismocromosoma (configuracion cis) o separados en los dos cromosomashomologos (trans)
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• El heterodímero HLA DQ2 puede expresarse junto en el mismocromosoma (configuracion cis) o separados en los dos cromosomashomologos (trans)
cis
DQ2/DQ8
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• El heterodímero HLA DQ2 puede expresarse junto en el mismocromosoma (configuracion cis) o separados en los dos cromosomashomologos (trans)
cis
trans
DQ2/DQ8
HLA-DQ2.5
HLA-DQ8
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• El heterodímero HLA DQ2 puede expresarse junto en el mismocromosoma (configuracion cis) o separados en los dos cromosomashomologos (trans)
• Numerosos estudios muestran que la homocigosis DQB1*02 (DR3/DR3o DR3/DR7) está asociado a un mayor y más agresivo riesgo de EC.
• La mayoría de los pacientes celiacos DQ2/DQ8 negativos (5%)presentan moléculas DQ2.X, codificadas por DQB1*02 de alto riesgo enausencia de DQA1*05.
• Muy raramente los pacientes celiacos llevan moléculas DQdiferentes:DQX.5 el heterodimero codificado por el alelo DQA1*05 enausencia de DQB1*02 o DQB1*0302. DQX.x moléculas formadas poruna cadena α DQA1≠*05 y una cadena β DQB1 ≠*02 o ≠*0302
DQ2/DQ8
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• El heterodímero HLA DQ2 puede expresarse junto en el mismocromosoma (configuracion cis) o separados en los dos cromosomashomologos (trans)
• Numerosos estudios muestran que la homocigosis DQB1*02 (DR3/DR3o DR3/DR7) está asociado a un mayor y más agresivo riesgo de EC.
• La mayoría de los pacientes celiacos de los DQ2/DQ8 negativos (5%)presentan moléculas DQ2.X, codificadas por DQB1*02 de alto riesgo enausencia de DQA1*05.
• Muy raramente los pacientes celiacos llevan moléculas DQdiferentes:DQX.5 el heterodimero codificado por el alelo DQA1*05 enausencia de DQB1*02 o DQB1*0302. DQX.x moléculas formadas poruna cadena α DQA1≠*05 y una cadena β DQB1 ≠*02 o ≠*0302
DQ2/DQ8
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• El heterodímero HLA DQ2 puede expresarse junto en el mismocromosoma (configuracion cis) o separados en los dos cromosomashomologos (trans)
• Numerosos estudios muestran que la homocigosis DQB1*02 (DR3/DR3o DR3/DR7) está asociado a un mayor y más agresivo riesgo de EC.
• La mayoría de los pacientes celiacos de los DQ2/DQ8 negativos (5%)presentan moléculas DQ2.X, codificadas por DQB1*02 de alto riesgo enausencia de DQA1*05.
• Muy raramente los pacientes celiacos llevan moléculas DQdiferentes:DQX.5 el heterodimero codificado por el alelo DQA1*05 enausencia de DQB1*02 o DQB1*0302. DQX.x moléculas formadas poruna cadena α DQA1≠*05 y una cadena β DQB1 ≠*02 o ≠*0302
DQ2/DQ8
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Contribución de los genes HLA en EC
DQ2.5
DQ8
DQA1*05DQB1*02
DQA1*03DQB1*0302
DQB1 ≠*02 y *0302DQA1*05
DQ2.x
DQB1*02 DQA1≠*05
DQX.5 DQX.x
DQB1 ≠*02 o ≠*0302DQA1≠*05
αβ
90- 95% 5- 10 % 5 % Muy raramente
αβ αβ
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• Otros genes están involucrados en la susceptibilidad ala EC: se han identificado tres regiones HLA como así tbgenes no-HLA tales como genes que codificancitoquinas, quimioquinas y sus repectores, móleculasde adhesion celular, activadores de celulas T y B. Sinembargo, su contribución es baja ( alrededor del 15% yno es considerado en el riesgo genético de EC.
• Solo la tipificación molecular del HLA tiene un rol en elmanejo clínico de la enfermedad
Otros genes asociados a EC
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Utilidad clínica
Significado clínico tipificación delHLA DQ2/DQ8
Positivo• Indica predisposición genética• Diagnóstico en pacientes con:-resultados discordantes serología, biopsia y /oclínica.-pacientes de alto riesgo como familiares deprimer grado-pacientes con otras enfermedades patologíasde origen autoinmune y no autoinmune (DBTtipo 1, enfermedad tiroidea autoinmune,hepatopatía autoinmune, déficit IgA, síndromede Down, síndrome de Turner, entre otros)
Negativo• Excluye la EC• Excelente VPN (99%)• EC resulta improbable cuando losalelos de predisposición están ausentes.
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Utilidad clínica
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• Cebadores secuencia especifica (sequence-specific primers,SSP)
• Sonda oligonucleotidos secuencia específica (sequence-specific oligonucleotide probe, SSOP) directo o indirecto
• Polimorfismo de conformación de la cadena simple (singlestrand conformation polymorphism, SSCP)
• Polimorfismo de la longitud de los fragmentos derestricción restriction (fragment-length polymorphism,RFLP)
• Secuenciación• Real Time PCR• Oligonucleotidos asociado a enzimas (enzyme-linked
oligonucleotide assay, ELONA)
Métodos moleculares
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Olerup SSP® DQA1*02,05; DQB1*02,0302
• Contiene 17 mezclas de amplificación y detección de los alelosDQA1 y DQB1 relevantes EC y un control negativo.
• Una combinación de cebadores y mezclas de reacción permitediscrimimar los alelos de DQ2 y DQ8 en geles de altaresolución
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• Cebadores secuencia especifica (sequence-specific primers,SSP)
• Sonda oligonucleotidos secuencia específica (sequence-specific oligonucleotide probe, SSOP) directo o indirecto
• Polimorfismo de conformación de la cadena simple (singlestrand conformation polymorphism, SSCP)
• Polimorfismo de la longitud de los fragmentos derestricción restriction (fragment-length polymorphism,RFLP)
• Secuenciación• Real Time PCR• Oligonucleotidos asociado a enzimas (enzyme-linked
oligonucleotide assay, ELONA)
Métodos moleculares
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Tipaje INNO-LiPA HLA
• Amplificación múltiplex de los exones 2 a 3 de locus DQB1 del HLA• Hibridació reversa
• Los productos de la amplificación se hibridan utilizando 1 tira de tipajeque lleva fijadas 37 sondas específicas de secuencia, así como 2 líneas decontrol
• Identificación a nivel de grupo de alelos (esto significa las dos primerascifras posteriores al asterisco en el nombre de un alelo cuando se siguela nomenclatura estándar para el HLA).
Sondas oligonucleótidosespecíficas sobre la
membrana de nitrocelulosa
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Tipaje INNO-LiPA HLA
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• Cebadores secuencia especifica (sequence-specific primers,SSP)
• Sonda oligonucleotidos secuencia específica (sequence-specific oligonucleotide probe, SSOP) directo o indirecto
• Polimorfismo de conformación de la cadena simple (singlestrand conformation polymorphism, SSCP)
• Polimorfismo de la longitud de los fragmentos derestricción restriction (fragment-length polymorphism,RFLP)
• Secuenciación• Real Time PCR• Oligonucleotidos asociado a enzimas (enzyme-linked
oligonucleotide assay, ELONA)
Métodos moleculares
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Tipaje con detección colorimétrica
• Amplificación del exones 2 y 3 de locus DQA1 y DQB1 del HLA• Hibridación directa
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Tipaje con detección colorimétrica
• Amplificación del exones 2 y 3 de locus DQA1 y DQB1 del HLA• Hibridació reversa
DQ2.5/DQ8
DQ2.5
DQ8
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Se propuso estudiarn=35
7 Fueron excluidosBiopsia pendientes
Fueron estudiadosn=28
Biopsia Positivan=15
Biopsia Positivan=0
Biopsia Positivan= 2
DQ2/DQ8 positivaSerología Positiva
Síntomasn=17
DQ2/DQ8 negativaSerología Negativa
Sin Síntomasn=4
DQ2/DQ8 positivaSerología negativa
Síntomasn= 5
DQ2/DQ8 negativaSerología positiva
Síntomasn= 1
Diagnostico final:Celiaco:15
No celiaco:1No concluyente:1
Diagnostico final:Celiaco:0
No celiaco:4No concluyente:0
Diagnostico final:Celiaco:2
No celiaco:2No concluyente:1
Biopsia Positivan= 0
Diagnostico final:Celiaco:0
No celiaco:0No concluyente:1
Biopsia noconcluyente
n=1
Biopsia noconcluyente
n=0
Biopsia noconcluyente
n=1
Biopsia noconcluyente
n=1
Biopsia Positivan=1
DQ2/DQ8 positivaSerología Positiva
Sin Síntomasn=1
Diagnostico final:Celiaco:1
No celiaco:0No concluyente:0
Biopsia noconcluyente
n=0
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Se propuso estudiarn=35
7 Fueron excluidosBiopsia pendientes
Fueron estudiadosn=28
Biopsia Positivan=15
Biopsia Positivan=0
Biopsia Positivan= 2
DQ2/DQ8 positivaSerología Positiva
Síntomasn=17
DQ2/DQ8 negativaSerología Negativa
Sin Síntomasn=4
DQ2/DQ8 positivaSerología negativa
Síntomasn= 5
DQ2/DQ8 negativaSerología positiva
Síntomasn= 1
Diagnostico final:Celiaco:15
No celiaco:1No concluyente:1
Diagnostico final:Celiaco:0
No celiaco:4No concluyente:0
Diagnostico final:Celiaco:2
No celiaco:2No concluyente:1
Biopsia Positivan= 0
Diagnostico final:Celiaco:0
No celiaco:0No concluyente:1
Biopsia noconcluyente
n=1
Biopsia noconcluyente
n=0
Biopsia noconcluyente
n=1
Biopsia noconcluyente
n=1
Biopsia Positivan=1
DQ2/DQ8 positivaSerología Positiva
Sin Síntomasn=1
Diagnostico final:Celiaco:1
No celiaco:0No concluyente:0
Biopsia noconcluyente
n=0
11 pacientes cumplencon las
recomendaciones deESPGHAN
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Se propuso estudiarn=35
7 Fueron excluidosBiopsia pendientes
Fueron estudiadosn=28
Biopsia Positivan=15
Biopsia Positivan=0
Biopsia Positivan= 2
DQ2/DQ8 positivaSerología Positiva
Síntomasn=17
DQ2/DQ8 negativaSerología Negativa
Sin Síntomasn=4
DQ2/DQ8 positivaSerología negativa
Síntomasn= 5
DQ2/DQ8 negativaSerología positiva
Síntomasn= 1
Diagnostico final:Celiaco:15
No celiaco:1No concluyente:1
Diagnostico final:Celiaco:0
No celiaco:4No concluyente:0
Diagnostico final:Celiaco:2
No celiaco:2No concluyente:1
Biopsia Positivan= 0
Diagnostico final:Celiaco:0
No celiaco:0No concluyente:1
Biopsia noconcluyente
n=1
Biopsia noconcluyente
n=0
Biopsia noconcluyente
n=1
Biopsia noconcluyente
n=1
Biopsia Positivan=1
DQ2/DQ8 positivaSerología Positiva
Sin Síntomasn=1
Diagnostico final:Celiaco:1
No celiaco:0No concluyente:0
Biopsia noconcluyente
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Yo no como pan y por lo tanto el trigo es para mí algo inútil. Loscampos de trigo no me recuerdan nada y eso me pone triste.¡Pero tú tienes los cabellos dorados y será algo maravillosocuando me domestiques! El trigo, que es dorado también, será unrecuerdo de ti. Y amaré el ruido del viento en el trigo.
Muchas gracias!!!