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ESTUDIO MOLECULAR EN PROCESOS DE RIESGO
TROMBOTICO
Amparo Benlloch SalcedoMercedes Egea RicoRosa Collado Nieto
David Ivars SantacreuMaria Ortuño Peñalver
Juana Serrallé Rodríguez Francisca Romero Lucas
Consorcio Hospital General Universitario de Valencia
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INTRODUCCIÓN
□ La trombofilia es una predisposición para padecer trombosis.
□ En cerca del 40 % de los casos hay una causa hereditaria que por sí sola puede no desembocar en un cuadro tromboembólico.
□ Sin embargo, cuando hay otros factores de riesgo combinados, como una inmovilización prolongada, una intervención quirúrgica, un embarazo, el uso de anticonceptivos orales o una terapia hormonal sustitutiva, existe un efecto aditivo que puede desencadenar un proceso trombótico o tromboembólico.
□ La trombofilia se ha asociado a abortos de repetición, por trombosis de la microvasculatura uteroplacentaria e hipoperfusión, a infertilidad y a diversas complicaciones obstétricas como preclampsia, desprendimiento prematuro de placenta o escaso desarrollo intrauterino del feto.
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INTRODUCCIÓN
□La mutación del Factor II (FII) o Protrombina (20210G>A) se asocia a un incremento de los niveles plasmáticos de Protrombina.
□Por su parte, la mutación del Factor V (FV) Leiden (1691G>A) la hace resistente a la acción inhibidora de la Proteína C Activada.
□Las mutaciones FII (20210G>A) y FV Leiden están presentes en el 2% y 5% respectivamente de la población general.
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INTRODUCCIÓN
GenFV
Gen FII
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OBJETIVOS (I)
□Analizar incidencia de las mutaciones del FII y FVL en diferentes grupos de riesgo
Procesos trombóticos
EstudiosFamiliares
Procesos ginecológicos
Tratamiento anticonceptivo
SMP
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OBJETIVOS (II)
□Comparación entre dos sistemas de análisis en nuestra unidad
Tiras reactivasXpert HemosIL
Factor II & Factor V
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MATERIAL Y METODO
□Periodo comprendido entre:
Marzo 2007 Mayo 2013
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MATERIAL Y METODO
□Hasta Diciembre de 2011
Tiras reactivas
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□A partir de sangre periférica
Tiras reactivas
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□Obtención del ADN
Tiras reactivas
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□Amplificación del gen (PCR)
Tiras reactivas
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□ Hibridación mediante tiras de Nitrocelulosa
Tiras reactivas
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□Detección de las mutaciones en las tiras
Tiras reactivas
DecoderTira delpaciente
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MATERIAL Y METODO
□Desde 2011 a 2013
Xpert HemosILFactor II & Factor V
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□Sistema automatizado que integra:□Purificación de la muestra.□Ampliación de los ácidos nucleicos□Detección de la secuencia objetivo
en sangre total, utilizando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real.
Xpert HemosILFactor II & Factor V
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Xpert HemosILFactor II & Factor V
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Xpert HemosILFactor II & Factor V
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Xpert HemosILFactor II & Factor V
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Xpert HemosILFactor II & Factor V
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Xpert HemosILFactor II & Factor V
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Xpert HemosILFactor II & Factor V
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MATERIAL Y METODO
□Población estudiada: 740 pacientes
266; 36%
474; 64%
Hombres
Mujeres
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MATERIAL Y METODO
266; 36%
21; 3%
453; 61%
Tiras reactivas
Sistema automatizado
Ambos
□Durante el año 2010, se realizaron determinaciones en paralelo.
CONFIRMATORIOCONFIRMATORIO
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MATERIAL Y METODOProcesos trombóticos 442
Estudios familiares 110
Procesos ginecológicos 70
Tratamientos anticonceptivos 4
Síndromes mieloproliferativos 114
60% 15%
9%
0,5%
15,5%
Procesos trombóticos
Estudios familiares
Procesos ginecológicos
Tratamientos anticonceptivos
Síndromes mieloproliferativos
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RESULTADOS
□Gen del factor II
655; 89%
84; 11%1; 0%
Ausencia de mutación
Heterocigoto
Homocigoto
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RESULTADOS
□Gen del factor V Leiden
663; 90%
75; 10%2; 0%
Ausencia de mutación
Heterocigoto
Homocigoto
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RESULTADOS
□Alteración en ambos genes
Casos: 3 0,41%
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RESULTADOS
□Mutacion del Gen del factor II, según grupos de riesgo
9,50% 29,09% 2,86% 0,00% 7,89%
0,00%
20,00%
40,00%
60,00%
80,00%
100,00%
Procesostrombóticos
Estudiosfamiliares
Procesosginecológicos
Tratamientosanticonceptivos
SMP
Ausencia de mutación Mutación
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RESULTADOS
□Mutacion del Gen del factor V Leiden, según grupos de riesgo
9,95% 22,73% 8,57% 0,00% 1,75%
0,00%
20,00%
40,00%
60,00%
80,00%
100,00%
Procesostrombóticos
Estudiosfamiliares
Procesosginecológicos
Tratamientosanticonceptivos
SMP
Ausencia de mutación Mutación
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RESULTADOS
□Repeticiones
Tiras reactivas Xpert HemosILFactor II & Factor V
11
Fallo en la tira
1
Fallo en el instrumento
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CONCLUSIONES
□ La incidencia de mutaciones del FII (11,49%) y del FVL (10,41%) durante el periodo estudiado en nuestro centro es similar al publicado en la literatura.
□ En el grupo de tratamiento con anticoncepción no se encontraron mutaciones en ninguno de los dos genes, lo cual cuestiona la utilidad del análisis en este grupo.
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CONCLUSIONES
□ El sistema automatizado es la técnica de elección para el estudio de mutaciones relacionadas con la trombofilia ya que presenta una serie de ventajas frente al sistema de detección por tiras de nitrocelulosa, entre las que destaca:
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CONCLUSIONES
□ Mayor sensibilidad□ Mayor trazabilidad de la técnica□ Menor manipulación técnica.□ Menor riesgo de contaminación□ Rapidez
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Gracias