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Escherichia coli Productora de Toxina Shiga
Escenario en chile
Dr. Juan Carlos Hormazábal O.Subdepto. Enfermedades Infecciosas
Instituto de salud Pública de Chile
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STEC en Chile
§Aspectos Microbiológicos
§ Aspectos Epidemiológicos
§ El Ambiente
§ Los Alimentos y el Marco regulatorio
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
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Escherchia coli
Es un grupo heterogéneo, cuyos miembros son generalmente nopatógenos y son parte de la flora normal del tracto intestinal de hombrey animales
Ciertas poblaciones de esta especie han adquirido genes que lespermiten causar enfermedad intestinal o extraintestinal
E. coli que causan enfermedad se han agrupado en patotipos, basadosen sus factores de virulencia y los mecanismos por los cuales causanenfermedad
Uno de estos patototipos es el grupo STEC
E coli que produce al menos un tipo de Toxina Shiga (Stx)
§Aspectos Microbiológicos
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E. coli Diarreogénicos, Determinantes en su Diferenciación
§Factores de Virulencia Específicos
§Características Clínicas Asociadas a la Infección
§Características Epidemiológicas
§Tendencia a Agruparse en Serotipos Definidos
Dra. V. Prado ICBM
§Aspectos Microbiológicos
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Grupos diarreogénicos E. coli
§Aspectos Microbiológicos
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Diagnóstico E. coli Diarreogénicos
§Cultivo
§Serotipificación
Solo Orienta, es necesaria la determinación de factores de virulencia
§Determinación de Factores de Virulencia
PCRInmunoensayos
§Aspectos Microbiológicos
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STEC
Shigatoxina (Stx): similitud con citotoxina producida por Shigella dysenteriae Serotipo1
Verotoxina: Efecto citotóxico en células Vero
STEC que causan colitis hemorrágica y SHU, se denominan Enterohemorrágicas EHEC
Determinantes de Virulencia EHEC:
Intimina (eae): Adhesinas bacterianas
Tir: Receptor para Intimina
Toxina shiga
§Aspectos Microbiológicos
Gyles, J. Anim Sci 2007, 85:E45-E62Bugarel et al. BMC Microbiol 2011,11:142
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Muestra de deposición
MacConkey + XLD
MacConkey sorbitol
Colonias sorbitol negativo
Bateria confirmar E.coli +
inmunocromatografía para O157 y/oSeroaglutinación
0157
Estudio de rutina con búsqueda dirigida de Salmonella
spp, Shigella spp y Yersinia
spp
Hasta 48 horasDe incubación
Dra. D. Benadof, Hosp. R del Río
§Aspectos Microbiológicos
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ImmunoCard STAT EHEC. Meridian
§Inmunoensayo cromatográfico en deposiciones§Stx 1 / Stx 2
Elisa Premier EHEC (Meridian)
Inmunoensayo enzimático en deposiciones y cultivosStx1 / Stx2
Detección de Toxina Shiga
ValidadosSolo en
O157
§Aspectos Microbiológicos
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stx2eae
stx1
bfp
Sitio blanco gen Tamaño (pb)shiga toxina2 stx2 584shiga toxina 1 stx1 348Intimina (factor adhesión al epitelio intestinal) eae 482
Determinante de adherencia (Bundle Forming Pilus) bfp 300
STEC: Factores de Virulencia PCR
§Aspectos Microbiológicos
Lab. Microbiología Molecular, Sección Bacteriología ISP
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Incidencia SHU en el Cono Sur respecto de otros Países
Incidencia por 100,000 niños < 4 años.
Laboratorio de Enteropatógenos (LEP). Universidad de Chile. Datos no publicados .Laboratorio de Enteropatógenos (LEP). Universidad de Chile. Datos no publicados .
§Aspectos Epidemiológicos
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1985: Implementación técnica Serológica y Biológica para E. coliEnterohemorrágico, confirmación voluntaria
1989: Primer caso confirmado de Serotipo O157:H7, toxina positiva.
1997: Implementación de técnicas moleculares para factores de virulencia
1999: Inicio de Sistema de vigilancia de Laboratorio para E. coli Verotoxigénico (O157 y otros)
STEC, Vigilancia de Laboratorio
§Aspectos Epidemiológicos
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STEC: Objeto de Vigilancia de Laboratorio, Decreto Nº158 MINSAL 2004Laboratorio de Referencia§ Confirmación Bioquímica de especie.§ Determinación de factores de virulencia por métodos moleculares§ Serotipificación: Somática O y Flagelar H.§ Estudio de clonalidad según estándar PulseNet CDC-OPS§ Informe de resultados a Autoridad Sanitaria y laboratorio local
§Aspectos Epidemiológicos
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STEC, Serogrupos en Casos Confirmados por el Lab. de Referencia
2006 - 24 de Junio 2011
n=413 Casos
§Aspectos Epidemiológicos
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0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
0 0
2
0 0 0 0
1 1
0
4
1
0 0 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0 0
1
0 0 0 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0 0
1
0 0 0 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0 0
1
0 0 0 0 00
6
0 0 0
1
0
12
1 1
15
0
1 1 1
2
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
1
0 0 0 0 0
5
0 0 0
3
0
1
17
0 0
20
2
0
1
0
1
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
1
0 0 0 0 00 0 0
1
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
NT
O111
O117
O124
O157
O25
O26
O5
O88
Serogrupo STEC por Servicio de Salud, ISP 2010
§Aspectos Epidemiológicos
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Situación Epidemiológica STECR. Metropolitana 2010
§ Se han confirmado 106 aislamientos. § 81 (76 %) provienen de la RM§ Sólo 2, provienen del sistema público de salud
39 (O26) y 30 (O157)
§ 5 % (4) han evolucionado a SHU§ Rango etareo: 1 a 6 años § Comunas de residencia: Lo Barnechea, Huechuraba
(2), La Reina, Peñalolen. § Factores de riesgo más probable:
hamburguesas, churrasco en carro ambulante, contacto con carne cruda.
§Aspectos Epidemiológicos
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Situación Epidemiológica STECR. Metropolitana 2011 (31 mayo 2011)
§ Se han confirmado 42 aislamientos § 25 provienen de la RM (14 O26 y 11 O157)§ 20 % (5) han evolucionado a SHU
O1571 por nexo epidemiológico O157 (brote familiar)
§ Rango etareo: 2 a 6 años § Comunas residencia: Las Condes (2), La Reina,
Huechuraba, Lampa
§ Factores de riesgo más probable: consumo de completos en restaurant, presencia de animales en el domicilio (bovinos, ovinos, animales domésticos), consumo de “crudo de carne” en restaurant
§Aspectos Epidemiológicos
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§ El Ambiente
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STEC: Reservorio
Rumiantes, especialmente ganado Bovino
Ganadería Intensiva y la industria de la carne representan la principales potenciales fuentes de infección.
Fundamental
Procesos Industriales
Faenamiento de animalesControl ambiental y de la autoridad sanitariaSistemas de control de riesgos
§ El Ambiente
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Presencia de ECEH aisladas de animales de abasto en Plantas Faenadoras de RM
Tipo Ganado Total Muestras Presencia ECEH
Bovinos 136 39 (28.7%)
Cerdos 120 82 (68.3%)
Fuente: Borie C,Arch. med. vet. v.29 n.2 Valdivia 1997
Tipo de Carne Nº muestras analizadas
Presencia E. coli O157:H7
Bovino 123 0
Equino 28 0
Cerdo 28 0
TOTAL 179 0
Fuente: Laboratorio Microbiología Alimentos ISP 2008
§ El Ambiente
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“En Chile, hemos descrito frecuencias de aislamiento deSTEC, desde el contenido intestinal de cerdos y bovinosfaenados, en un 7% y 17 % respectivamente. Así, si losprotocolos o procesos de faenamiento para estosanimales no son los adecuados, la carne se puedecontaminar cuando, por error, su contenido intestinaltiene contacto con la materia muscular”
§ El Ambiente
Comunicación Dr. Roberto Vidal, Microbiología ICBM, U. de Chile, 2011
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El control de los alimentos que se elaboran y se consumen en Chilelo realiza la SEREMI de Salud
Reglamento Sanitario de los Alimentos (RSA) DS 977/97:Indicadores de Higiene y detección de microorganismopatógenos, que se definen en el artículo Nº173 de este reglamento
El laboratorio de Alimentos de la Región Metropolitana realiza ladetección por PCR de Toxinas Shiga. El resto de los laboratorios notiene implementadas técnicas de Biología Molecular
STEC, y el control en los alimentos en Chile
§ Los Alimentos y el Marco regulatorio
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Quesillo, queso fresco, queso chacra, queso de sueroCaldos, sopas, cremas, salsas y puré de papas deshidratadas instantáneasCaldos, sopa, cremas, salsas y puré de legumbres deshidratadas que requieren cocciónCereales para desayunoMasas con relleno o coberturasFórmulas deshidratadas para niños menores a 12 mesesFórmulas deshidratadas para niños mayores de 12 mesesPreparaciones reconstituidas, listas para el consumo administradas exclusivamente por biberones o mamaderasPlatos preparados y papillas listos para el consumoCecinas cocidasCecinas crudas acidificadasPescados y mariscos crudos congeladosPescados y mariscos precocidos o cocidos congeladosPescados y mariscos ahumadosFrutas y verduras frescasFrutas y otros vegetales comestibles pre-elaborados, listos para el consumoFrutos y otros vegetales comestibles congelados, que no requieren cocciónZumos, néctares, bebidas a base de frutas y verduras no pasteurizadosFrutas y verduras desecadas o deshidratadasComidas y platos cocidos, que se sirven en caliente, listos para el consumo. Excepto emparedadosComidas y platos mixtos con ingrediente (s) crudo (s) o cocido (s), incluidos emparedados.Aguas minerales y aguas envasadas.
De acuerdo al RSA, la detección de E.coli en los siguientes alimentos:
§ Los Alimentos y el Marco regulatorio
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CODEX ALIMENTARIUS, FAO
Sistemas de Calidad y Alimentos Inocuos
Recomendaciones para la industria alimentaria:
Hazzard Analytical Critical Control Point (HACCP)
§ Los Alimentos y el Marco regulatorio
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L.
Puntos Críticos
Esencial Registros!
Gentileza Cecinas Winter
La Industria Alimentaria, Control Interno y Fizcalización
§ Los Alimentos y el Marco regulatorio
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O104:H4 Expansión Clonal en Europa
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Figure 1. Copy numbers variable regions of O104:H4 compared to DH10B if mapped to O157:H7. Red arrows: shiga toxin stx2 is amplified in O104:H4; Green arrows: tellurite gene cluster ter are present in O104:H4; Light blue arrow: intimin gene eae is missing in O104:H4.
Violet arrow: copy number 2 region from 675kbp to 770kbp detected in DH10B.
Ausencia Intimina
2 Copias Stx2
Resist. Telurito
Resist. Telurito
BGI/Univ. Medical Centre Hamburg-Eppendorf 2011
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
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Alta homología con EAEC (93%)
Adquisición Stx por tranferencia horizontal
E. coli Enteroagregativo Productor de toxina Shiga
BGI/Univ. Medical Centre Hamburg-Eppendorf 2011
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
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Dic e (O pt: 1.50 %) (Tol 1.5 %-1 .5% ) (H >0. 0% S>0 .0%) [0 .0%-98 .3%]PF GE -X ba I
100
99989796959493929190898887868584838281807978777675747372717069686665646362616059
PF G E- Xb aI
B R 19 8-0 6E 22 8- 10
E 42 0- 09
E 14 -0 6
E 14 3- 09
E 32 0- 10
B R 11 6-0 7B R 12 6-0 7
B R 12 7-0 7
B R 11 2-0 6
B R 11 8-0 6
B R 12 4-0 6
B R 12 7-0 6B R 13 0-0 6B R 14 2-9 8
B R 14 5-0 6
B R 14 6-0 6
B R 87 -06
B R 88 -06
B R1 01 -0 6B R 23 2-0 9
E 35 5- 09
E 11 9- 10
E 41 0- 10
E 00 2- 10
E 00 3- 10
B R 17 1-0 6B R1 07 -0 6
E 17 0- 06
E 38 0- 08
E 44 3- 09
E 12 1- 10
E 43 4- 10
E 10 0- 08B R 4-9 9
E 17 3- 05
E 33 -0 9
E 23 0- 09
P C 23 0-0 9
E 23 4- 08E 36 8- 08
E 44 -0 8
B R 19 5-0 6
B R 20 6-0 6
E 40 2- 09
B R 18 5-0 9B R 19 0-0 9
B R 27 0-0 9
B R 27 1-0 9
B R 32 1-0 9
B R 32 2-0 9
B R 32 3-0 9
B R 19 1-0 9B R 26 9-0 9
E 13 3- 09
B R 18 0-0 6
E 25 2- 06
E 32 0- 07
32 7- 10
37 1- 10E 06 6- 11
E 07 4- 11
E 08 3- 10
E 09 3- 10
E 09 6- 10
E 10 4- 08
E 11 1- 03E 11 1- 08
E 11 3- 07
E 11 6- 07
E 11 9- 08
E 12 1- 08
E 12 1- 09E 13 9- 04
E 14 3- 07
E 15 8- 04
E 15 9- 04
E 16 0- 05
E 16 1- 05
E 16 8- 04E 17 1- 05
E 17 1- 08
E 17 3- 04E 17 7- 04
E 17 9- 04
E 18 0- 09
E 18 1- 07E 18 6- 07
E 19 0- 08
E 19 5- 09
E 20 -0 7
E 20 1- 05
E 20 2- 08
E 20 5- 05E 20 9- 08
E 21 1- 03
E 21 6- 07
E 22 1- 09
E 23 1- 08
E 24 5- 05E 24 9- 08
E 25 1- 08
E 25 5- 08
E 25 7- 08
E 26 6- 10
E 27 4- 06
E 27 4- 10E 30 2- 03
E 15 3- 11
E 30 4- 09
E 30 5- 07
E 31 1- 06
E 32 -0 4 2E 32 4- 09
E 32 5- 09
E 32 6- 09
E 34 0- 09
E 34 4- 09
E 34 5- 09
E 34 9- 10E 36 0- 09
E 37 0- 09
E 37 3- 09
E 37 4- 09
E 38 3- 09
E 38 5- 09
E 38 6- 09E 15 4- 11
E 38 9- 09
E 39 1- 06
E 39 2- 09
E 39 8- 09
E 40 0- 09
E 44 1- 09E 44 2- 09
E 44 8- 09
E 48 -0 9
E 49 -0 8
E 53 -0 4
E 61 -0 4E 66 -0 6
E 67 -0 7
E 23 8- 05
E 70 -0 4
E 8- 04 2
E 8- 06E 92 -0 3
E 99 -0 4
P C 22 1-0 9
E 10 7- 04
E 39 6- 09
31 9- 10
E 10 8- 10
E 11 -0 6
E 11 3- 11
E 12 1- 03
E 13 6- 05
E 14 0- 07
E 14 2- 10E 15 6- 10
E 15 7- 05
E 16 5- 10
E 16 6- 10
E 17 -0 8
E 18 0- 08
E 18 3- 09E 19 1- 08
E 19 9- 10
E 20 1- 09
E 20 3- 08
E 23 5- 08
E 23 8- 10E 24 4- 10
E 24 9- 10
E 28 5- 08
E 33 1- 06
E 34 0- 08
E 35 -0 6
E 35 -0 7E 41 -0 5
E 42 -0 5
E 53 -0 8
E 58 -0 7
E 87 -0 8
E 96 -0 7
E 97 -0 5E 24 7- 08
E 72 -0 6
E 12 0- 05
E 12 8- 04
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20 06
20 06
20 06
20 10
Librería Genética
E coli STEC
PulseNet InternationalCDC - OPS
Protocolo O157
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
![Page 30: Escherichia coli Productora de Toxina Shiga Escenario en chile](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052202/586f4eb71a28ab4d418b4826/html5/thumbnails/30.jpg)
PulseNet International: Genotipo 0104:H4
PFGE protocolo para E. coli no-O157 (switch inicial 6.76s - switch final: 35.38s).
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
![Page 31: Escherichia coli Productora de Toxina Shiga Escenario en chile](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052202/586f4eb71a28ab4d418b4826/html5/thumbnails/31.jpg)
Robert Koch Institut
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
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caso sospechoso:Viajeros que ingresan a Chile provenientes de una zona de riesgo y quepresenten diarrea acuosa con o sin sangre, con o sin fiebre, en los 10primeros días siguientes a su arribo.
Muestra de deposiciones para coprocultivo informando al laboratorio de lasospecha clínica
Los cultivos con cepas sospechosas, deberán ser derivados rápidamenteal Instituto de Salud Pública para su confirmación microbiológica.
Las STEC son de vigilancia de laboratorio de acuerdo al DS 158/2004.Esta infección no es de notificación obligatoria (ENO) pero dado el contextoactual el caso sospechoso deberá ser reportado por la vía más expedita aEpidemiología de la SEREMI de Salud correspondiente.
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
Depto. Epidemiología, MINSAL
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Conservación y Transporte Muestras
La muestra de deposición debe colocarse en un frasco limpio y ser cultivada dentro de las 2 horas de recolección. Si el tiempo entre la recolección de la muestra y la siembra es mayor, poner la deposición en medio de transporte Cary-Blair, a temperatura ambiente.
Nivel LocalCoprocultivo Al día siguiente enviar al Laboratorio de Referencia, Sección Bacteriología del ISP la placa de coprocultivo debidamente sellada y rotulada. El envío se debe acompañar del formulario de envío de cepas de la sección Bacteriología
Laboratorio de Referencia§Seroagrupación O104§Determinación Stx§PFGE, patrón O104:H4 Alemán
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
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Aspectos Microbiológicos§Revisión Métodos Diagnósticos§ STEC no O157§ Inmunoensayos Stx§ Disponibilidad Métodos Moleculares
Aspectos Epidemiológicos§Notificación Casos SHU (MINSAL)§Vigilancia Laboratorio
El Ambiente§Reservorio O104?§Fisiopatología, Transmisión§Potencial Epidémico
Los Alimentos y el Marco regulatorio§Educación del Consumidor§Cumplimiento Reglamento Sanitario Alimentos
Vigilancia y Detección STEC O104:H4§Estandarización de Métodos Confirmatorios O104§Caso Sospechoso y Notificación Inmediata
Conclusiones
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Agradecimientos:
Dra. Valeria Prado, ICBM Univ. de Chile
Dr. Roberto Vidal, ICBM, Univ. de Chile
Dra. María Cristina Martínez, Subdepto. Microbiol. Alimentos ISP
Dra. Verónica Solari, SEREMI Metropolitana
Dra. Dona Benadof, Hosp. Roberto del Río
Sección Bacteriología, Laboratorio ETA, ISP
Subdepto. Genética Molecular ISP