Download - Determinación de Azúcares Reductores
CARLOS ALBERTO GARCIA MOGOLLÓN Ver 2.0
Contenido
• Procedimientospreliminares
• Fundamento
– Titulo
• Métodos
– Curvas patrón
¿Tipode
CHO´s?
Mezcla deCHO´s
CHO simple
Específicos(Caracterización)
Específicos(Generales)
Acondicionamiento
Procedimientos NOEspecíficos
CromatografíaElectroforesis
QuímicosReductométricos Instrumentales
DensitometriaRefractometría
PolarimetríaSacarimetría
Identificación y cuantificación
Métodos deseparación
Enzimáticos
Azúcares Reductores
Complejación
DNS
Degradación
FCB, Lane Eynon, MunsonWalker, Somogyi-Nelson, Luff-
Schoorl
Antrona
Fenol-sulfuro
Fehling
Determinación del titulo
Sln glucosa [conocida] = Xg de glucosa en 1000ml Sln.
Titulación
Xg -------------- 1000mlT -------------- G
Xg. GT=------------Titulo
1000
Sln Muestra [desconocida] = Yg en 1000ml Sln.
Titulación
G´ -------------- T1000ml ------------- Y
1000. TY=------------= g AR/L sln.
G´
Lane-Eynon(AOAC Method 923.09,920.183b)
(AOAC 1965, p. 495).
FCBFehling-Causse-Bonnans modificado
En el método FCB se titula con el reactivo de Fehlingcaliente en dos etapas, primero se añade una cantidadde reactivo de Fehling tal que se lleve a cabo la totalreducción y después se determina el punto final conazul de metileno por goteo, es necesario un control dela temperatura y se sugieren dos titulaciones.(Pomeranz y Meloan 2000)
Deben gastarse alrededor de 5-6 ml de la soluciónpatrón para decolorar 10 ml de reactivo de FCB. Si elvolumen gastado cae fuera de estos valores hay quemodificar la velocidad de adición hasta lograr el valorindicado. La velocidad de goteo encontrada como óptimaserá la empleada al valorar las soluciones problema
Solución de glucosa o azúcar invertido 0,5%
Valoración de Sln. muestra: Se titulan 10 ml de reactivo FCB según el procedimientoseguido en a) pero esta vez cargando la bureta con la solución de azúcares solubles obtenida
a partir de la muestra (filtrado). El gasto de esta valoración debe estarcomprendido entre 3 y 8 ml, si no es así hay que modificar laconcentración de la solución de azúcares.Nota 1: Es conveniente que el agregado de solución de azúcares (patrón y problema) se hagaal principio a razón de 1 gota/segundo y después del agregado de azul de metileno, a 1gota/3 segundos.Nota 2: Se debe tener sumo cuidado en la observación del punto final de la titulación, puesla coloración amarilla cambia rápidamente a parda.
1. Titulación
2. Titulación
Luff-Schoorl
Azúcar reductor
Fenol-Ácido sulfúrico(4, 7-9, AOAC Method 44.1.30)
Fenol
Under proper conditions, the phenol-sulfuric method is accurate to ~2%.
Color amarrillo-naranja
Ácidosulfúrico
Absorbance is measured at 490 nm
Lane- Eynon(AOAC Method 923.09,920.183b)
Munson-Walker
Somogyi-Nelson
(AOAC Method 906.03)
Is based on reductionof Cu2+ ions to Cu" ions by reducing sugars. TheCut ions then reduce an arsenomolybdate complex,which is prepared by reacting ammonium molybdate[(NHJ~~24] and sodium arsenate (Na2HAs07) insulfuric acid. Reduction of the arsenomolybdatecomplex produces an intense, stable, blue color thatis measured spectrophotometrically 520nm
Based on reduction of copper(lI} ions in alkaline solutionto copper(I) ions that precipitate as the brick-red oxideCU20.
The precipitate of cuprous oxide can be determinedgravimetrically (AOAC Method 31.039, 14th ed.), bvtitration with sodium thiosulfate (AOAC Method31.040, 14th ed.), by titration with potassiumpermanganate (AOAC Method 31.042, l"th ed.)
Antrona-Acido Sulfúrico
La reacción de Antronaconstituye la base de unmétodo conveniente para la
determinación de hexosas,aldopentosas y ácidoshexourónicos,.
Tomar 2 mL de muestra y agregar 2 mLde reactivo de antrona
Agitar y tapar el tubo firmemente
Colocar en baño de agua aebullición durante 15 min
Colocar en baño de agua a temperatura ambientepara equilibrar la y dejar en la oscuridad
Medir la absorbancia a 620 nmdespués de 20-30 min.
La solución azul verdosa muestra una absorción máximade 625 nm aunque algunos carbohidratos pueden mostrarotros colores.
DNSÁcido 3,5-dinitrosalicílico
color amarillo café
MÉTODO FUNDAMENTO PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Luff-schoorl Los azúcares reductores en presencia
de una solución de cobre (II), se
oxidan y el exceso de cobre (II) se
valorará por yodometría.
Se diluye la muestra, hasta que tenga de
15-60mg de azucares reductores se
clarifica y se filtra
Musson y Walker Gravimetrico. El oxido cuproso se
separa por filtración y se pesa.
Clarificar la muestra con acetato de
plomo y el exceso se precipita con
oxalato.
Antrona Se determinan azucares totales. Las
azucares forman un complejo azul
verdoso que se observa a 625nm.
Se realizan diluciones de manera que se
obtenga una concentración de azucares
en el rango de 5-50ppm.
DNS El ácido 3,5-dinitrosalicílico se reduce
a ácido 3-amino-5-nitrosalicílico en
presencia de azucares reductores
Se realizan diluciones de manera que se
obtenga una concentración de azucares
en el rango de 200-1000ppm
Somogyi-Nelson Utiliza el tartrato de cobre alcalino y
el yodato de potasio. El exceso de
yodo se valorará por yodometría.
Secado, diluir la muestra clarificar y filtrar
MÉTODO CONDICIONES OPERATIVAS CÁLCULOS
Luff-Schoorl Muestra de 12-25ml
25ml del reactivo de luff
almidón al 1% Na2S2O3 0.1N
KI al 30%m-v
H 2SO4 25ml al 25%
ml gastados = Vblanco -Vmuestra
En la tabla de luff se determina los mg de
azucares presentes.
Musson y Walker Feling 50ml, muestra 50ml, Éter En las tablas de musson y walker
Antrona 2,5ml de la muestra, 200mg de antrona,
100ml de H 2SO4 96% solución estándar de
glucosa
Realizar curva estándar y mediante esta
determinar la concentración de azucares
DNS 1ml de DNS, 1ml de la muestra solución
estándar de glucosa diluida de 200-
1000ppm
Realizar curva estándar y mediante esta
determinar la concentración de azucares
Somogyi-Nelson Tartatro de cobre, KIO3 almidón al 1%,
Na2S2O3 0.1N
DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES EN MIELPOR EL MÉTODO DE ÁCIDO DINITROSALICÍLICO (DNS).
Preparación de la muestraMielSe peso en un beaker 50 ml enuna balanza analítica y seadiciono 0.5gr de miel, luego seadiciono 40 ml de aguadestilada, se tomaron 20ml desolución y se depositaron en unmatraz y se aforo hasta 250 mlcon agua destilada.
Jugo Tampico•Medimos 0.96 ml y 1.44 ml dejugo Tampico y adicionamos cadamuestra a un matraz aforándolascon agua destilada hasta 500 ml,para reducir la concentración hasta400 ppm y 600ppmrespectivamente.• De la solución diluida tomamos20 ml y agregamos a cadamuestra 5 ml de agente clarificante(acetato de plomo). Yposteriormente filtramos.
Muestra1
(400ppm)
Muestra2
(400ppm)
Muestra3
(400ppm)
Muestra4
(600ppm)
Muestra5
(600ppm)
Muestra6
(600ppm)
Muestra7
(400ppm)
Muestra8
(400ppm)
Muestra9
(400ppm)Blanco
Cantidad dejugo utilizado
(ml.)0.96 0.96 0.96 1.44 1.44 1.44 0.96 0.96 0.96 x
Cantidad deacetato deplomo (ml.)
5 5 5 5 5 5 x x x x
Adición deagua destilada
(ml.)8 8 8 8 8 8 8 8 8 8
Reactivo DNSutilizado (ml.)
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
Tiempo deebullición
(min.)5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
Absorbanciamedida (nm.)
0.171 0.169 0.172 0.261 0.260 0.260 0.191 0.189 0.189 0
Datos DNS: Jugo Tampico
WALTER JOSÉ MARTÍNEZ BURGOS, LUIS JAIME PEREZ CORDOBA : 2006
Tubo ml. de s/nestándar
ml. de aguadestilada
Concentraciónfinal (ppm)
Absorbancia(575 nm)
1 0.0 1.0 0 -
2 0.2 0.8 200 -
3 0.4 0.6 400 -
4 0.6 0.4 600 -
5 0.8 0.2 800 -
6 1.0 0.0 1000 -
Solución estándar: Disolver 1 gr. de glucosa anhidra en 1000ml de agua destilada, luego se realizaron las diluciones.
Cálculos: DNS: Jugo Tampico
Cálculos: DNS: Jugo Tampico
Cálculos: DNS: Jugo Tampico
Cálculos: DNS: Jugo Tampico
Taller de estudio