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Desarrollo de una cepa mutante de Bacillus subtilis que muestra una mayor producción de acetoína
Vázquez Sánchez Jorge
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Objetivo Producción específica y mejorada de acetoína por la cepa
mutante de Bacillus subtilis. A través de la fermentación , se confirmó que la cepa mutante,
TH-49, no era capaz de utilizar acetoına como su fuente de energía para el crecimiento después de haber consumido la
glucosa
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Introducción La Acetoína es un compuesto orgánico producido de forma
natural por las levaduras del género saccharomyces durante la fermentación alcohólica. Es precursor en la biosíntesis del 2,3-
butadieno y el diacetílo.
Acetoina.s3d
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Método de obtención En comparación con la síntesis química y enzimática, la fermentación microbiana es el
método más competitivo en la producción a escala de Acetoína.
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Materiales y métodos. B. subtilis N-12 .
Medio de cultivo apropiado. Incubador agitador
Irradiación de rayos UV Aislamiento de las cepas mutantes.
Tratamiento por mutagenesis (NTG). 2 Aislamiento
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Radiación ultravioleta (UV)
Los mutantes fueron seleccionados en base a la velocidad de producción de Acetoína
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Tratamiento por mutagenesis con Nitrosoguanidina (NTG)
NTG
Los mutantes fueron seleccionados en base a la velocidad de producción de Acetoína
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Tratamiento compuesto
NTG
los mutantes de alto rendimiento fueron seleccionados de acuerdo a la tasa de producción de Acetoína
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Estabilidad de el mutante del mutante TH49
1643.8
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Fermentación a escala de banco de la cepa mutante TH-49
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Análisis GC de los productos de fermentación de mutante
cepa TH-49
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Análisis GC-MS de productos de fermentación del mutante
cepa TH-49
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Radiación ultravioleta
Los dímeros distorsionan la conformación del ADN inhibiendo la replicación
Agentes mutagénicos
EMS
Guanina6-Etilguanina
Enlace de hidrógeno
MUTÁGENOS FÍSICOSMUTÁGENOS FÍSICOS
• Radiaciones ionizantes
• Radiaciones no ionizantes
MUTÁGENOS QUÍMICOSMUTÁGENOS QUÍMICOS
• Ácido nitroso
• Agentes alquilantes
• Sustancias análogas a las bases nitrogenadas
• Sustancias intercalantes
Pueden provocar la rotura de los cromosomas y modificar las bases nitrogenadas.
Provocan la formación de enlaces covalentes entre dos bases pirimidínicas contiguas, dando origen a dímeros.
Transforma la citosina en uracilo y la adenina en hipoxantina provocando incorporación de bases erroneas en la replicación del ADN.
Añaden grupos etilo o metilo a las bases nitrogenadas alterando la replicación del ADN.
Sustituyen a las bases nitrogenadas del Adn y provocan transiciones.
Se intercalan entre las bases de una cadena dando origen a inserciones o delecciones de un solo par de bases.
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Aleatoria vs dirigida: test de fluctuación (Luria & Delbrück)
Mutación en el DNAMutación en el DNA
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Mutación en el DNAMutación en el DNA
Aleatoria vs dirigida: test de fluctuación
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Mutación en el DNAMutación en el DNA
Tasas y frecuencias de mutación espontáneas
Frecuencia por gen (gameto o replicación) (10-4-10-8)
Por nucleótido (10-8 - 10-9)
Frec. Mutación: 2/8Tasa mutación: 1/7 (número de divisiones celulares = número células finales - 1)