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8/10/2019 Cuaderno de Practicas de Microbiologia
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PRCTICAS DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGA:BACTERIOLOGA Y MICOLOGA
M PAZ MERINO JIMNEZ
MIREIA LLINARES MARCELO
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8/10/2019 Cuaderno de Practicas de Microbiologia
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Autoras: M Paz Merino jimenez, Mireia Llinares Marcelo
Maquetacin: Patricia Penavella Soto
Edita: Educlia Editorial, S.L.
Imprime: Publidisa SA
ISBN: En curso
Depsit Legal: En curso
Printed in Spain/Impreso en Espaa.
Todos los derechos reservados. No est permitida la reimpresin de ninguna parte de este libro, ni de imgenes ni de texto, ni tampoco su
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Alguna de las imgenes que incluye este libro son reproducciones que se han realizado acogindose al derecho de cita que aparece en el artculo 32
de la Ley 22/18987, del 11 de noviembre, de la Propiedad intelectual. Educlia Editorial agradece a todas las instituciones, tanto pblicas como
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PREFACIO
El Cuaderno de Prcticas de Microbiologa es un
trabajo fundamental en el desarrollo de la asignatura de
FUNDAMENTOS Y TECNICAS DE ANALISIS
MICROBIOLOGICOS. Dicha asignatura lleva una carga
terica que paralelamente tiene que ir desarrollada con
prcticas que se realizan en el laboratorio. Por ello debe
existir una consecucin en la ejecucin de las prcticas al
mismo tiempo que se vaya impartiendo la teora.
Con este cuaderno el desarrollo de las prcticas
seguira un orden, fundamental para cumplir los protocolos
de actuacin en el laboratorio de Microbiologa. El alumno
siguiendo los pasos de dicho cuaderno ir desarrollando la
prctica con correccin hasta la obtencin de los resultados
finales que es lo que se pretende.
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INDICE CUADERNO DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA
1. MANEJO DEL MICROSCOPIO
2. RECONOCIMIENTO DE MATERIAL
3. DISTRIBUCION DE MICROORGANISMOS EN LA NATURALEZA.
4. ESTERILIZACIN POR CALOR SECO.
5. ESTERILIZACIN POR CALOR HMEDO.
6. ACTIVIDADES DE ESTERILIZACIN Y DESINFECCIN.
7. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
8. CNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO
9. URINOCULTIVO
10.PLEGADO DE UN FILTRO
11.INDICA LA MORFOLOGIA, DISPOSICION Y MOVILIDAD DE LASBACTERIAS VIVAS QUE CONTIENE LA MUESTRA.
12.PREPARACIN DE COLORANTES Y REACTIVOS PARA LATINCION SIMPLE Y TINCION NEGATIVA.
13.PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARATINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE AAR
14.PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARATINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE AAR
15.PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARATINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE ESPORAS
16.PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARATINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE CAPSULAS
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17.REALIZACION DE UNA TINCION SIMPLE.
18.REALIZACION DE UNA TINCION NEGATIVA.
19.REALIZACION DE UNA TINCION DE GRAM
20.REALIZACION DE UNA TINCION DE ZIEHLNEELSEN O ACIDOALCOHOL RESISTENTE.
21.REALIZACION DE UNA TINCION DE ESPORAS
22.REALIZACION DE TINCION DE CAPSULAS. METODO DE BURRIO DE LA TINTA CHINA.
23.PRUEBAS BIOQUMICAS.
24.ANTIBIOGRAMA.
25.HACER UNA SIEMBRA EN CONDICIONES ANAEROBIAS
26.TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DELPORTAOBJETOS
27.TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DELCUADRADITO DE AGAR
28.TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL HOYO ENPLACA
29.TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL CUBREESCAVADO EN PLACA
30.TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DE LA GOTAPENDIENTE
31.TECNICA DE VISUALIZACION DE HONGOS: VISUALIZACINDIRECTA CON LA TCNICA DE LA CINTA ADHESIVA.
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PRCTICA 26. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL
PORTAOBJETOS.
VISIN MACROSCPICA
MATERIAL
- Alcohol
- Mechero Bunsen
- Portaobjetos
-
Placa Petri
- Papel filtro
-
Agua destilada
-
Medio de cultivo Sabouraud- Pipeta Pasteur estril
- Asa de siembra
-
Muestra de hongos
- Estufa Pasteur
TCNICA
1. Preparar 100 ml de medio de cultivo Sabouraud (Prctica 7.6).
2. Limpiar el portaobjetos con alcohol, secar y flamear.
3. Cubrir el portaobjetos con una fina capa de medio de cultivo (todava en estado lquido)
con la ayuda de una pipeta Pasteur estril.
4. Dejar secar el medio.
5. Recortar un crculo de papel de filtro de la misma medida que la placa de Petri.
6. Colocarlo en el fondo de la placa y humedecerlo con un poco de agua destilada paramantener el ambiente hmedo para el crecimiento del hongo.
7. Con el asa de siembra esterilizada y humedecida con agua estril tomar un poco de
muestra.
8. Colocar la muestra en el centro del portaobjetos realizando un pequeo movimiento
circular con el asa.
9. Colocar el portaobjetos en la placa de Petri.
10. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.
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VISIN MICROSCPICA
MATERIAL
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Cubreobjetos
- Pipeta Pasteur
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Colorante azul de lactofenol
- Muestra ya incubada (tcnica del portaobjetos)
- Pinzas
- Mechero Bunsen
-
Microscopio
TCNICA
1. En el portaobjetos donde habamos realizado la tcnica, echamos una gota de azul de
lactofenol.
2. Poner un cubreobjetos encima.
3. Observar al microscopio a 40x.
PROCEDIMIENTO EN IMGENES
Gota azul en porta
1 2
Cubre sobre la muestra
Observar al microscopio
3
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INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO
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PRCTICA 27. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL
CUADRADITO DE AGAR.
VISIN MACROSCPICA
MATERIAL
- Alcohol
- Mechero Bunsen
- Placa Petri con medio agar Sabouraud
-
Bistur
- Pinzas
-
Asa de siembra
-
Muestra con hongos- Portaobjetos
- Cubreobjetos
-
Placa Petri vaca
- Papel filtro
- Agua destilada
-
2 capilares de microhematocrito
- Estufa
- Regla
-
Tijeras
TCNICA
1. Dibujar en un papel un cuadradito de 15x15 cm. Colocar sobre el papel la placa con agar
Sabouraud y cortar un cuadrado siguiendo las lneas dibujadas anteriormente con la ayuda de
un bistur.
2. Con unas pinzas estriles coger el cuadradito de agar y ponerlo en el centro de un
portaobjetos. El portaobjetos deber haberse limpiado anteriormente con alcohol y flameado.
3. Coger con el asa de siembra, esterilizada y humedecida, un poco de muestra.
4. Sembrar tocando con el asa en los cuatro laterales del cuadrado.
5. Colocar un cubreobjetos limpio sobre el agar.
6. Colocar el portaobjetos en una placa con papel de filtro humedecido y dos capilares.
7. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.
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PROCEDIMIENTO EN IMGENES
Cortar cuadrado de agar
1 2
Colocar en portaobjetos
3
Co er muestra
4
Sembrar en los laterales
5
Colocar cubreobjetos Colocar en la cmara hmeda
6
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INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO
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VISIN MICROSCPICA
MATERIAL
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Portaobjetos
- Cubreobjetos
-
Pipeta Pasteur
- Colorante azul de lactofenol
- Muestra ya incubada (tcnica del cuadradito de agar)
- Pinzas
-
Mechero Bunsen
- Microscopio
TCNICA A
1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.
2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habamos puesto sobre el
cuadradito de agar.
3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.
4. Poner el cubre sobre la gota de azul.
5. Observar al microscopio a 40x.
PROCEDIMIENTO EN IMGENES
Limpiar portaobjetos
1 2
Coger el cubre
Poner gota de azul
3
Poner cubre sobre la gota de azul
4
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TCNICA B
1. Coger un cubreobjetos, limpiar con alcohol y flamear.
2. Con las pinzas esterilizadas retiramos el cuadradito de agar que quedar sobre el
portaobjetos.
3. En el portaobjetos ponemos una gota de azul de lactofenol.
4. Poner el cubreobjetos limpio sobre la gota de azul.
5. Observar al microscopio a 40x.
INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO
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PRCTICA 28. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL
HOYO EN PLACA.
VISIN MACROSCPICA
MATERIAL
- Alcohol
- Mechero Bunsen
- Placa de Petri (la que hemos usado en la prctica 27)
-
Cubreobjetos
- Asa de siembra
-
Muestra con hongos
-
Pinzas
TCNICA
1. Con un asa de platino esterilizada cogemos un poco de muestra.
2. Cogemos la placa que hemos usado en la prctica anterior, y sembramos en las paredes del
hoyo que ha quedado tras sacar el cuadradito de agar.
3. Con una pinza estril colocar sobre el hoyo sembrado un cubreobjetos (previamente lavado
con alcohol y flameado).
4. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.
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PROCEDIMIENTO EN IMGENES
INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO
Coger un poco de muestra
1 2
Sembrar paredes del hoyo
3
Colocar cubreobjetos
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VISIN MICROSCPICA
MATERIAL
-
Portaobjetos
- Pipeta Pasteur
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Colorante azul de lactofenol
- Muestra ya incubada (tcnica del hoyo en placa)
- Pinzas
- Mechero Bunsen
-
Microscopio
TCNICA
1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.
2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habamos puesto sobre el hoyo.
3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.
4. Poner el cubre sobre la gota de azul.
5. Observar al microscopio a 40x.
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PROCEDIMIENTO EN IMGENES
INDICA RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO
Limpiar portaobjetos
1 2
Coger el cubre
Poner gota de azul
3
Poner cubre sobre la gota de azul
4
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PRCTICA 29. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL
CUBRE ESCAVADO EN PLACA.
VISIN MACROSCPICA
MATERIAL
- Alcohol
- Mechero Bunsen
- Placa de Petri con medio de cultivo Sabouraud.
-
Cubreobjetos
- Asa de siembra
-
Muestra con hongos
-
Pinzas
TCNICA
1. Con unas pinzas estriles, colocar 3 4 cubreobjetos limpios en un ngulo de 45o en la
placa con medio Sabouraud.
2. Coger un poco de muestra con un asa de siembra estril.
3. Sembrar donde se juntan el cubreobjetos con la superficie del medio.
4. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo
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VISIN MICROSCPICA
MATERIAL
-
Portaobjetos
- Pipeta Pasteur
-
Colorante azul de lactofenol
- Muestra ya incubada (tcnica del cubre inclinado en placa)
- Pinzas
- Mechero Bunsen
-
Microscopio
TCNICA
1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.
2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos uno de los cubreobjetos que habamos puesto en la
placa.
3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.
4. Poner el cubre sobre la gota de azul.
5. Observar al microscopio a 40x.
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PROCEDIMIENTO EN IMGENES
INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO
Limpiar portaobjetos
1 2
Coger el cubre
Poner gota de azul
3
Poner cubre sobre la gota de azul
4
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PRCTICA 31. TCNICA DE VISUALIZACIN DE HONGOS.
VISUALIZACIN DIRECTA CON LA TCNICA DE LA CINTA
ADHESIVA.
MATERIAL
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Alcohol
- Mechero Bunsen
- Pipeta Pasteur estril
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Cinta adhesiva transparente
- Portaobjetos
- Azul de lactofenol
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Muestra con hongos
- Microscopio
TCNICA
1. Limpiar un portaobjetos con alcohol, secar y flamear.
2. Cortar un trozo de cinta adhesiva y pegarlo a la parte de la muestra donde se encuentran
los hongos.
3. Poner una gota de azul de lactofenol en el portaobjetos.
4. Colocar la cinta adhesiva sobre la gota de azul de lactofenol.
5. Observar al microscopio a 40x.
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PROCEDIMIENTO EN IMGENES
INDICAR EL RESULTADO MICROSCOPICO OBTENIDO
Limpiar portaobjetos
1 2
Tomar muestra
3
Gota de azul en orta Colocar cinta sobre la ota
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