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CONTAMINACION MICROBIANA DE CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISISAGUA PARA HEMODIALISIS
RELEVAMIENTORELEVAMIENTOPERIODO 7/02 - 06/05PERIODO 7/02 - 06/05
CONTAMINACION MICROBIANA DE CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISISAGUA PARA HEMODIALISIS
RELEVAMIENTORELEVAMIENTOPERIODO 7/02 - 06/05PERIODO 7/02 - 06/05
LABORATORIO BELTRAN - ZUNINOLABORATORIO BELTRAN - ZUNINOLABORATORIO BELTRAN - ZUNINOLABORATORIO BELTRAN - ZUNINO
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- Número de centros evaluados: 31
- Número total de muestras: 4.107
- Período de estudio: 1/7/02 - 30/6/05
- Número de centros evaluados: 31
- Número total de muestras: 4.107
- Período de estudio: 1/7/02 - 30/6/05
Evaluación de calidad microbiológica de agua para hemodiálisis
Evaluación de calidad microbiológica de agua para hemodiálisis
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Requisitos microbiológicos/ metodología Requisitos microbiológicos/ metodología
Fuente Especificación PuntodeMuestreo
Método
AAMIRD 62
Heterotróficos: < 200 ufc/mlEndotoxinas:< 2 UE/ml
Heterotróficos < 2,000/ml
Punto deentrada alequipo ozonareprocesado
Dializado
Medio:TSA o equivalenteMétodo: filtración osuperficie; No ansa;No Agar SangreTemp: 35-37ºCTiempo: mín 48 hs
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Requisitos microbiológicos/ metodología Requisitos microbiológicos/ metodología
Fuente Especificación PuntoDeMuestreo
Método
NormaISO13959(2002)
Heterotróficos: 100 ufc/ml
Endotoxinas: 5 UE/ml 1 UE/ml
Punto deentrada antesde dilución
Medio:TSA o equivalenteNo ansa;No Agar SangreTemp: 35-37ºCTiempo: mín 48 hsOpción: filtración eincubación R2A, 5días, 28 -32ºC
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Requisitos microbiológicos/ metodología Requisitos microbiológicos/ metodología
Fuente Especificación Puntode Muestreo
Método
USP27 2004
Heterotróficos:máx 100 ufc/mlEndotoxinas:máx.2 UE/ml
Punto deentrada alequipo
Medio: TSA oequivalente (PCA)Temp.: 30-35 ºCTiempo: mín 48 hs(A.P.H.A.)
Farm.Europea2004
Aerobios viablestotales:Máx 100 ufc/mlEndotoxinas: 0,25 IUE/ml agua 0,5 IU/ml soluciónde uso
Agua paradilución deconcentradosde hemodiálisis
Método: generalde la farmacopeapara recuento(placa o filtración)Medio: Agarcaseina Soya osimilarTemp.: 30-35ºCTiempo: 5 días omenos
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Análisis microbiológicosAnálisis microbiológicos
- Recuento de heterotróficos/ml
- Búsqueda de Pseudomonas fluorescens, putida y aeruginosa / 10 ml
- Recuento de coliformes totales /100 ml
- Búsquedas eventuales de microorganismos específicos
- Recuento de heterotróficos/ml
- Búsqueda de Pseudomonas fluorescens, putida y aeruginosa / 10 ml
- Recuento de coliformes totales /100 ml
- Búsquedas eventuales de microorganismos específicos
Análisis biológicosAnálisis biológicos
- Endotoxinas bacterianas- Endotoxinas bacterianas- Endotoxinas bacterianas- Endotoxinas bacterianas
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Metodología de Referencia :Metodología de Referencia : Metodología de Referencia :Metodología de Referencia :
Alcance y aplicación: métodos destinados al análisis de aguaAlcance y aplicación: métodos destinados al análisis de aguapertenecientes a un amplio rango de calidad: agua potable, pertenecientes a un amplio rango de calidad: agua potable, industrial, superficie, etc. Métodos tomados como referenciaindustrial, superficie, etc. Métodos tomados como referenciapor la USP para el análisis para uso farmacéutico.por la USP para el análisis para uso farmacéutico.
Endotoxinas bacterianas:Endotoxinas bacterianas:US Pharmacopeia 27 - 2004US Pharmacopeia 27 - 2004
Análisis microbiológicos:Análisis microbiológicos:Standard Methods for the Examination of Water and Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, American Public Health Association, (APHA), 20 Ed.Wastewater, American Public Health Association, (APHA), 20 Ed.
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Toma de muestraToma de muestra
Abrir llavedescartar
(según flujo)
Quemar o sanitizar pico
Descartaraprox. 200 ml
Recoger lamuestra(120 ml)
Refrigerar/transportar
Analizar (máx. 24 hs)
TécnicaAséptica
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Recuento de HeterotróficosRecuento de Heterotróficos
Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed., 9215 C.Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed., 9215 C.
0,1 ml0,1 ml 0,1 ml0,1 ml 0,1 ml0,1 ml
MuestraMuestra
Condiciones de Incubación: 72 horas a 35 +/- 1 º C
Examen de colonias con lente magnificador
Condiciones de Incubación: 72 horas a 35 +/- 1 º C
Examen de colonias con lente magnificador
Medio de cultivo: Plate Count AgarMedio de cultivo: Plate Count Agar
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Búsqueda de Pseudomonas aeruginosaBúsqueda de Pseudomonas aeruginosa
Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed., 9213 F.Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed., 9213 F.
10 ml10 ml
Caldo asparaginadoble concentraciónCaldo asparaginadoble concentración
48 horas a 35 º48 horas a 35 º
Luz UVLuz UV
Examinar fluorescencia(si hay dudas dejar24 hs a t. Amb.)
Examinar fluorescencia(si hay dudas dejar24 hs a t. Amb.)
ConfirmarP. aeruginosaConfirmarP. aeruginosa
++
MuestraMuestra
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Recuento de coliformes totalesRecuento de coliformes totales
Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed. , 9222 B.Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed. , 9222 B.
MuestraMuestra
100 ml 100 ml
Filtrarmembrana 0,45 micras
Filtrarmembrana 0,45 micras
++
ConfirmarC. totales
Incubar 24 hsa 35 +/- 1 ºCIncubar 24 hsa 35 +/- 1 ºC
Transferira m-EndoTransferira m-Endo
![Page 12: CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO 7/02 - 06/05 CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022070304/54e35f5a4a795950188b5359/html5/thumbnails/12.jpg)
P. aeruginosa P. aeruginosa en en caldo asparaginacaldo asparaginaal UV (258 nm)al UV (258 nm)
Coliformes totalesColiformes totales en m - Endoen m - Endo
Coliformes totalesColiformes totales en Lauril Triptosaen Lauril Triptosa
![Page 13: CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO 7/02 - 06/05 CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022070304/54e35f5a4a795950188b5359/html5/thumbnails/13.jpg)
Biofilm luego de un tratamiento desinfectanteBiofilm luego de un tratamiento desinfectante
![Page 14: CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO 7/02 - 06/05 CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022070304/54e35f5a4a795950188b5359/html5/thumbnails/14.jpg)
En presencia de endotoxinas bacterianas, el reactivo preparadoEn presencia de endotoxinas bacterianas, el reactivo preparado
por lisado enzimático de amebocitos lavados del cangrejo por lisado enzimático de amebocitos lavados del cangrejo
Limulus polifemus produce una reacción de coagulación enLimulus polifemus produce una reacción de coagulación en
cascada con la formación de un coágulo de naturaleza proteicacascada con la formación de un coágulo de naturaleza proteica
Principios biológicos:Principios biológicos:
Determinación de endotoxinas bacterianasDeterminación de endotoxinas bacterianas
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1. Confirmación de sensibilidad de reactivo LAL ()
Control -agua apírógena + LAL
12
34
½ 2 ¼
= 0.125 UE/ml
Criterio aceptación: obtenida entre ½ y 2 del valordeclarado
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- Ensayo por duplicado utilizando una dilución de la- Ensayo por duplicado utilizando una dilución de la
muestra, control positivo de endotoxina, muestra, control positivo de endotoxina,
verificación de ausencia de efecto inhibidor de verificación de ausencia de efecto inhibidor de
la muestra problema y control negativola muestra problema y control negativo
- Informe: menor (<) o mayor o igual (>=)que el límite - Informe: menor (<) o mayor o igual (>=)que el límite
dede
detección definido (2 UE/ml) detección definido (2 UE/ml)
2. Determinación de endotoxinas en muestra problema2. Determinación de endotoxinas en muestra problema
muestramuestra Controles + Control -
![Page 17: CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO 7/02 - 06/05 CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022070304/54e35f5a4a795950188b5359/html5/thumbnails/17.jpg)
ConfiabilidadConfiabilidad
MuestreadoMuestreador/r/
AnalistaAnalista
Condiciones Condiciones ambientalesambientales
MétodoMétodo
MediosMediosreactivos/reactivos/materiales materiales
EquiposEquipos- - autoclavesautoclaves- estufas- estufas- filtros- filtros
Confiabilidad de los resultadosConfiabilidad de los resultados
Sistema de gestión
de calidad
![Page 18: CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO 7/02 - 06/05 CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022070304/54e35f5a4a795950188b5359/html5/thumbnails/18.jpg)
RESULTADOS ANALITICOSRESULTADOS ANALITICOS
1º Julio 2002 - 30 Junio 20051º Julio 2002 - 30 Junio 2005
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% Heterotróficos < 200 ufc/ml según punto de muestreoPeríodo 7/02 - 6/05
% Heterotróficos < 200 ufc/ml según punto de muestreoPeríodo 7/02 - 6/05
7379,9
91,996,6
92,2 95,1 96
0
1020
3040
50
6070
8090
100
C
Ab
O
Pt
Ps
Sl
Rc
C Ab O Pt Ps Sl Rc
Nº Muestras = 4107Nº Centros = 31
Pretratamiento: 75,1 % Agua tratada: 93,2%
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83
9 8
93,2
5,51,3
010
203040
506070
8090
100
7/97 - 06/00 7/02 - 06/05
% < 200% 200 -1000% > 1000
% Heterotróficos - Circuito agua tratada Comparación de trieños 97-00 / 02-05% Heterotróficos - Circuito agua tratada Comparación de trieños 97-00 / 02-05
Nº muestras = 1384/2923Nº centros = 31 / 31
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58
7887
91 91 94
0102030405060708090
100
97-98 98-99 99-00 - 02-03 03-04 04-05
% < 200 ufc/ml
Pico de Sala% Heterotróficos < 200 ufc/ml
Evolución anual
Pico de Sala% Heterotróficos < 200 ufc/ml
Evolución anual
Nº muestras = 1.917Nº centros = 29
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Centro NºNº Muestras = 617Nº Centros = 23
Agua tratada Agua tratada % Heterotróficos según centro de % Heterotróficos según centro de
diálisisdiálisis
Enero 2004 - Junio 2005Enero 2004 - Junio 2005
0%
20%
40%
60%
80%
100%
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
% >1000
% 200-1000
%<200
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Centro Nº
Nº Muestras = 885Nº Centros = 21
Agua tratada Agua tratada % Heterotróficos según centro de % Heterotróficos según centro de
diálisisdiálisis
Julio 1997 - Junio 2000Julio 1997 - Junio 2000
0%
20%
40%
60%
80%
100%
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
% >1000
% 200-1000
%<200
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88
6 6
93,2
5,51,3
0
20
40
60
80
100
Cultivo baño Agua Tratada
% < 200% 200 -1000% > 1000
% Heterotróficos - Cultivo de baño% Heterotróficos - Cultivo de baño
Julio 2002 - Junio 2005Julio 2002 - Junio 2005
% Heterotróficos - Cultivo de baño% Heterotróficos - Cultivo de baño
Julio 2002 - Junio 2005Julio 2002 - Junio 2005Nº muestras baño = 171 Nº centros = 9
![Page 25: CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO 7/02 - 06/05 CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022070304/54e35f5a4a795950188b5359/html5/thumbnails/25.jpg)
% P.aeruginosa, fluorescens y putida (+) según punto de muestreo
% P.aeruginosa, fluorescens y putida (+) según punto de muestreo
3,14,3
7,5
2 1,90,5
14,5
0
2
4
6
8
10
12
14
%
Nº muestras = 3.932Nº muestras = 3.932Total (+) = 2,5 % (sin Bñ)Total (+) = 2,5 % (sin Bñ)
Nº centros = 30Nº centros = 30
Ose C Ab O Ps Sl R
7/02-6/057/02-6/05
Baño
Nº centros implicados = Nº centros implicados = 16 centros16 centros
![Page 26: CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO 7/02 - 06/05 CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022070304/54e35f5a4a795950188b5359/html5/thumbnails/26.jpg)
2 1,41,82,7
19
2 1,71,11,3
11
02468
101214161820
%
C Ab O Ps Baño C Ab O Ps
7/97 - 6/007/97 - 6/00
7/02-6/057/02-6/05
Baño
% P. aeruginosa (+) - Evolución % P. aeruginosa (+) - Evolución
![Page 27: CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO 7/02 - 06/05 CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022070304/54e35f5a4a795950188b5359/html5/thumbnails/27.jpg)
2,11,70,60,6
3,1
8,1
17,8
3,62,8
02468
101214161820
% P. aeruginosa , flourescens, putida (+) según punto de muestreo
% P. aeruginosa , flourescens, putida (+) según punto de muestreo
%
Nº muestras 2005 = 1.231Nº muestras 2005 = 1.231Total (+) 2005 = 5,4% Total (+) 2005 = 5,4%
Ose C Ab O PS Ose C Ab O PS
7/02 - 12/047/02 - 12/04 1/05 - 6/051/05 - 6/05
Nº centros implicadosNº centros implicadosaño 2005: 13 centrosaño 2005: 13 centros
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% Coliformes (+) según punto de muestreo% Coliformes (+) según punto de muestreo
1,61,5
1,1
0,4
0,8
0,3
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2%
Nº muestras = 3.645Total (+) = 0,8 %
Ose C Ab O Ps Sl Rc
7/02-6/057/02-6/05
Nº centros implicados: Nº centros implicados: 12 centros 12 centros
![Page 29: CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO 7/02 - 06/05 CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022070304/54e35f5a4a795950188b5359/html5/thumbnails/29.jpg)
% Coliformes (+) según punto de muestreo% Coliformes (+) según punto de muestreo
0,8
0,60,7
0,6
0
1,61,5
1,1
0,4
0,8
0,3
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6%
C Ab O Ps Sl
7/97 - 6/007/97 - 6/00 7/02-6/057/02-6/05
Ose C Ab O Ps Sl
Nº centros implicados: Nº centros implicados: 12 centros 12 centros
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% Coliformes (+) según punto de muestreo% Coliformes (+) según punto de muestreo
0
1 0,9
0,40,6
0,2
3,2
2,5
1,5
0,5
1,3
0,5
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5%
Nº muestras 2005 = 1.159Total (+) 2005 = 1,2%
Ose C Ab O Ps Sl
7/02 - 12/047/02 - 12/04 1/05-6/051/05-6/05
Ose C Ab O Ps Sl
Nº centros implicadosNº centros implicadosaño 2005: 9 centrosaño 2005: 9 centros
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Endotoxinas bacterianasEndotoxinas bacterianas
Nº Muestras: 13Nº Muestras: 13
Nº Centros: 5Nº Centros: 5
Resultados positivos: 0Resultados positivos: 0
Límites de detección: 5 y 2 UE/mlLímites de detección: 5 y 2 UE/ml
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CONCLUSIONESCONCLUSIONES
Mejora sistemática del nivel de heterotróficos en el agua Mejora sistemática del nivel de heterotróficos en el agua tratada: 93,2% muestras aceptablestratada: 93,2% muestras aceptables Mejora sistemática del nivel de heterotróficos en el agua Mejora sistemática del nivel de heterotróficos en el agua tratada: 93,2% muestras aceptablestratada: 93,2% muestras aceptables
Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en diversos centrosdiversos centros
Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en el Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en el agua de entradaagua de entrada
Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en diversos centrosdiversos centros
Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en el Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en el agua de entradaagua de entrada
No se ha extendido el control de endotoxinas bacterianasNo se ha extendido el control de endotoxinas bacterianas
No se ha extendido el control de endotoxinas bacterianasNo se ha extendido el control de endotoxinas bacterianas