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INMUNOMODULACIÓNINMUNODIAGNÓSTICO
Clase – Conferencia 11
César Morante ChavarryMédico Veterinario
Facultad de Medicina Veterinaria UNPRG
UNIVERSIDAD NACIONAL “PEDRO RUIZ GALLO”
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA
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Las citoquinas
Las citoquinas son proteínas que permiten la comunicación entre
las células.
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La mayor parte de las células producen citoquinas
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PROPIEDADES GENERALES Y FUNCIONESLas citoquinas son secretadas por varias células implicadas en la
respuesta inmune como respuesta a un estímulo, y actúan sobre
las células diana que expresan en su membrana receptores
específicos para una citoquina dada.
La unión de una citoquina a su receptor de membrana transmite
una señal hacia el interior celular que conduce a cambios en la
activación y expresión de genes. Además, en el suero se han
detectado receptores solubles para las distintas citoquinas cuya
acción es contribuir a la regulación de la actividad de las mismas.
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Las citoquinas pueden actuar sobre muchos objetivos celulares diferentes, con una acción: a) autocrina, uniéndose a la misma célula que la secreta; b) paracrina, actuando sobre una célula cercana y, c) en algunas ocasiones, con una acción endocrina, uniéndose a células distantes.
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Además, la acción de las citoquinas puede ser: Pleiotrópica, Redundante, Sinérgica o Antagonista.
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Las citoquinas tienen un papel importante en:
La reacción inflamatoria
La hematopoyesis
La respuesta inmune innata
La respuesta inmune adquirida
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Citoquinas de la respuesta inmune específica
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Citoquina
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PRINCIPALES CITOQUINAS
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INTERLEUCINAS
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INTERLEUCINAS
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Interleucina – 6
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La IL-12 es central en la respuesta inmune.
Es producida por macrófagos activados como
por células dendríticas.
En los macrófagos activa la lisis de los microorganismos
fagocitados gracias a la secreción de otras
citoquinas que amplifican la estimulación de los
macrófagos.
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Citoquinas que estimulan la hematopoyesis
• Producidas por células estromales de la médula ósea, leucocitos y otras células– Necesarias para la hematopoyesis
• Estimulan crecimiento y diferenciación de células progenitoras– Reposición de leucocitos consumidos en reacciones
inflamatorias e inmunes• Algunas citoquinas se denominan “factores
estimuladores de colonias”– CSF
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Citoquinas que estimulan la hematopoyesis
• Factor de células troncales (stem cell factor) – Sintetizado por células estromales de médula ósea– Hace stem cells sensibles a otras citoquinas
• IL-7 Sintetizada por células estromales de MO– Estimula la sobrevida y maduración de progenitores linfoides
• IL-3 producida por linfocitos T CD4– Actúa sobre progenitores inmaduros de médula ósea estimula
diferenciación a todos los tipos de células maduras• G-CSF, GM-CSF, M-CSF
– Producidas por LT, MØ, céls endoteliales y estromales de MO– Aumentan producción de leucocitos inflamatorios
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Quimioquinas
• Proteínas que estimulan los movimientos de leucocitos y regulan la migración de leucocitos desde la circulación a los tejidos
• Producidas por leucocitos y otras células• Reclutan células de defensa hacia sitios de infección
aumento afinidad de integrinas por ligandos, gradiente química
• Regulan tráfico de linfocitos y otros leucocitos a través de los tejidos linfoides periféricos
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Rol de las citoquinas en la inmunidad innata e inflamación
• Bacterias piógenas MØ producen TNF, IL-1 y quimioquinas– TNF e IL-1 en endotelio vascular moléculas adhesión
unión PMN y monocitos– Quimioquinas (MØ y células endoteliales)
extravasación de leucocitos hacia sitio de infección• MØ IL-12 (bacterias intracelulares y G-)
IFN (NK y LT) activación MØ para destrucción microorganismos fagocitados
– Diferenciación LT a TH1 inmunidad celular contra bacterias intracelulares
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Rol de las citoquinas en la inmunidad innata e inflamación
• Reclutamiento y activación leucocitos inducidos por citoquinas daño a tejidos normales (infecciones)– Manifestaciones sistémicas de la infección
• Infecciones virales células infectadas y MØ secretan IFN tipo I inhibe replicación e infección
• Citoquinas producidas en respuesta a diferentes tipos de infecciones influyen en naturaleza respuestas innatas– Bacterias piógenas PMN– Bacterias intracelulares MØ – Virus células NK
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SEROLOGÍA
• Definición: medición de las interacciones antígeno – anticuerpo.
• Objetivo: diagnóstico.• Se utilizan Ac específicos para detectar o
identificar un antígenos.• La detección de Ac específicos permite
establecer si el animal estuvo expuesto a un antígeno en especial.
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REACTIVOS EMPLEADOS EN LAS PRUEBAS SEROLÓGICAS
• Suero: puede guardarse congelado. Se inactiva a 56º C por 30 minutos.
• Complemento: Componente normal de los sueros. Puede congelarse. Suero de cobayo.
• Antiglobulinas: • Anticuerpos monoclonales.
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TIPOS DE PRUEBAS SEROLÓGICAS
• Unión primaria: miden directamente el enlace de antígenos y anticuerpos. Son muy sensibles.
• Unión secundaria: miden los resultados de la
interacción antígeno – anticuerpo in vitro . Suelen ser menos sensibles que las anteriores.
• Unión terciaria: son más complejas. Miden el efecto protector real de los anticuerpos en un animal.
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PRUEBAS DE UNIÓN PRIMARIA
• Se realizan combinando antígenos y anticuerpos.
• Luego se mide la cantidad de inmunocomplejos formados.
• Se utilizan marcadores: radioisótopos, colorantes fluorescentes o enzimas para identificar uno de los reactivos.
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Radioinmunoanálisis competitivo
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Inmunofluorescencia
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Principio de la prueba de inmunoadsorbente ligado a
enzima (ELISA)
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Electroinmunotransferencia(Western blotting)
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OTRAS PRUEBAS DE FIJACIÓN PRIMARIA
• Inmunoperoxidasa en tejidos fijados.• Avidina – biotina.• Enzimas utilizadas: fosfatasa alcalina,
peroxidasa del rábano picante, galactosidasa beta.
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PRUEBAS DE UNIÓN SECUNDARIA
• La reacción entre antígeno y anticuerpo por lo general va seguida de una segunda reacción.
• Si los anticuerpos son solubles los complejos pueden precipitar.
• Si los anticuerpos son particulados los complejos pueden aglutinar.
• Si el anticuerpo activa el complemento y el Ag se encuentra en la superficie celular, la célula se lisará.
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