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Clase: Proteobacteria Subclase: AlfaOrden: Rizobiales Familia: BrucellaceaeGénero: Brucella
TAXONOMIA
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GENERO BRUCELLAGENERO BRUCELLA
ESPECIE HUÉSPEDES HABITUALES
abortus (8 biovars)
suis (5 biovars)
melitensis (3 biovars)
canis (1 biovar)
ovis (1 biovar)
neotomae (1 biovar)
maris (2 biovars)
BOVINO
PORCINO
CAPRINO OVINO
CANINO
OVINO
ROEDORES
MAMÍFEROSMARINOS
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AISLAMIENTO DE LAS ESPECIES DE Brucella
1886 - Bruce - Br. melitensis del hombre
1897 - Bang - Br. abortus de bovinos
1914 - Traum - Br. suis de porcinos
1953 - Buddle y Boyes - Br. ovis de ovinos
1957 - Stoenner y Lackman - Br. neotomae de ratas
1966 - Carmichael - Br. canis de caninos
1994 – Ross et al – Br. cetaceae de delfines, bufeos
1994 – Ross et al – Br. pinnipediae de focas
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CARÁCTERÍSTICAS DEL MICROORGANISMO
COCOBACILO AEROBIO, GRAM NEGATIVO, INTRACELULAR FACULTATIVO.
INMOVIL, NO ESPORULADO, NO CAPSULADO.
SE TIÑE DE COLOR ROSADO CON LA TINCIÓNMODIFICADA DE ZIEHL-NIELSEN.
NECESIDAD DE CO2
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Intracelulares facultativos
Intracelulares obligados
Extracelulares
Membrana celular
Célula hospedadora
RELACIÓN CON LA CÉLULA RELACIÓN CON LA CÉLULA HOSPEDADORAHOSPEDADORA
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TIPOS CARACTERÍSTICOS DE TIPOS CARACTERÍSTICOS DE ENVOLTURAENVOLTURA
GRAM +
• GLUCOPÉPTIDO
• PROTEÍNAS
• ÁCIDO LIPOTEICOICO• ÁCIDOS TEICURÓNICOS
• POLISACÁRIDOS
AAR
• GLUCOPÉPTIDO
• POLIPÉPTIDOS
• GLUCOLÍPIDOS
• ÁCIDO MICÓLICO
• ARABINOGALACTANOS
• CERA DE
• SULFOLÍPIDOS
• MICÓSIDOS
GRAM -
• GLUCOPÉPTIDO
• LIPOPROTEÍNAS
• MEMBRANA EXTERNA
• LIPOPOLISACÁRIDOS
• PROTEÍNAS
• FOSFOLÍPIDOS
• POLISACÁRIDOS
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ESTRUCTURA ESTRUCTURA ANTIGÉNICAANTIGÉNICA
B. abortus
B. melitensis
B. suis
A
M
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NADPH NADP+ NADPH oxidasa
O-2
H+SOD
H2O2
Cl- MPO
HOCl
Lisozima
Proteasas
Defensinas
DEGRADACIÓNLisozima
Lactoferrina
Gránuloprimario
FAGOSOMAGránulo
secundario
Cl-
catalasa
5´GMP
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Bacteria Sideróforo Proteínas portadoras
Célula
Fe3+
Fe3+
Transferrina
Lactoferrina
Hemoglobina
Fe2+
Receptor
Fe3+
Fe3+
Fe2+
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POSIBLES MECANISMOS DE POSIBLES MECANISMOS DE SUPERVIVENCIASUPERVIVENCIA
• PERMANECE EN EL FAGOSOMA INTACTO Y BLOQUEA LA FUSIÓN POSTERIOR CON EL LISOSOMA
• DEBE RESISTIR POTENTES INTERMEDIARIOS DEL O2 (H2O2 Y RADICALES OXHIDRILOS)
• INHIBE EL ESTALLIDO RESPIRATORIO O LO PROVOCA MUY DÉBILMENTE Y DE CORTA DURACIÓN)
• SE PUEDE REFUGIAR FUERA DEL ALCANCE DEL LISOSOMA. SE DESCRIBIÓ SU PRESENCIA EN EL RER DE DIFERENTES CÉLULAS, AUNQUE NO EN MACRÓFAGOS
• PRODUCCIÓN DE GUANOSINA 5´MONOFOSFATO (GMP) Y ADENINA QUE INHIBEN FUSION FAGO-LISOSOMA, DEGRANULACIÓN, ACTIVACIÓN SISTEMA MIELOPEROXIDASA-HALURO Y LA PRODUCCIÓN DE TNF
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Cápsula externa Proteasas especificas
IgAasa
Peptidasa C5b
Modificación de la estructura del antigeno LPS O Exotoxina citolitica que matan
fagocitos
Produciendo y viviendo dentro de un biofilm Evitando la fagocitosis
Uniendo antigenos del hospedador a la superficie celular. Específicamente la
proteina A y G con el receptor Fc de las
inmunoglobulinas.
Supervivencia dentro de fagocitos
Producción de proteasa no especifica
Invasión no fagocítica de las células
Estrategias para evadir Estrategias para evadir el sistema inmuneel sistema inmune
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SELECCIÓN DE MUESTRASSELECCIÓN DE MUESTRAS
ANIMALES VIVOS
• SUERO, CALOSTRO, LECHE
• FLUJO VAGINAL, PLACENTA Y COTILEDONES
• SEMEN
• LIQ. ABCESOS, HIGROMAS, BURSITIS
PRODUCTOS DE
ABORTO
• CONTENIDO CUAJAR
• PULMÓN, BAZO
• MEMBRANAS FETALES
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DISTRIBUCIÓN DE B abortus EN EL DISTRIBUCIÓN DE B abortus EN EL ANIMAL INFECTADOANIMAL INFECTADO
TEJIDO O LIQ.
ORGÁNICO
PROBABILIDAD
EN %
CONT CUAJAR 98
PULMÓN
ÓRGANOS FETO
95
LIQ. HIGROMAS 90
GANG. RETROMAMARIOS
80
GANG. ILÍACOS 65
TESTÍCULOS 60
LECHE 50
OTROS GANG. 10-30
BAZO 10
HÍGADO 5
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DIAGNÓSTICO
1.HISTOPATOLÓGICO
2.SEROLÓGICO
3.BACTERIOLÓGICO
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DIAGNÓSTICO DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICOBACTERIOLÓGICO
TÉCNICAS BACTERIOSCÓPICAS
PROCEDIMIENTOS DE CULTIVO
INOCULACION EXPERIMENTAL
• Método de Köster
• Método de Ziehl-Neelsen modificado
• Inmunofluorescencia
• Medios sólidos
• Medios líquidos
• Medio difásico
• Cobayos
• Lauchas
• Hámsters
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Diferenciación de Diferenciación de especiesespecies
• Ureasa• requerimiento de CO2• producción de SH2• desarrollo en presencia de tionina• desarrollo en presencia de fucsina• aglutinación con sueros monoespecíficos• tipificación por bacteriófagos
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MEDIO DE CASTAÑEDA
Usado de humanos para hemocultivo
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INHIBICIÓN POR TIONINA
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INHIBICIÓN POR FUCSINA
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LISIS POR FAGO RESISTENCIA
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COLORACIÓN DE STAMP COLORACIÓN DE STAMP
COLORACIÓN DE STAMP
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PRUEBAS PARA MEDIR E IDENTIFICAR PRUEBAS PARA MEDIR E IDENTIFICAR LA RESPUESTA INMUNELA RESPUESTA INMUNE
PRIMARIAS
SECUNDARIAS
TERCIARIAS
• TEST DE ELISA
• INMUNOFLUORESCENCIA
• RADIOINMUNOENSAYO
• AGLUTINACIÓN
• PRECIPITACIÓN
• FIJ COMPLEMENTO
• NEUTRALIZACIÓN
• PROTECCIÓN
PRUEBAS BÁSICAS
MOLECULARES
• PCR
• HIBRIDACIÓN
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TÉCNICAS UTILIZADASTÉCNICAS UTILIZADAS
• PRUEBA TAMIZ: BPA
• PRUEBAS COMPLEMENTARIAS: 2 MERCAPTOETANOL - RIVANOL
• PRUEBA DEFINITORIA: FIJ COMPLEMENTO
• PRUEBA DE VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA: PRUEBA ANILLO EN LECHE (PAL)
• OTRAS: ELISA-I, ELISA-C
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SEROLOGÍA
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PRUEBA DE BPA (ANTÍGENO BUFFERADO)
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PRUEBA LENTA EN TUBO – 2 MERCAPTOETANOL
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FIJACIÓN DE COMPLEMENTO
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PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE (PAL)
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INMUNODIFUSIÓN EN GEL DE AGAR (AGID)
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