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Blastocystis spp y su papel patogénico
Jorge Iván Zapata Valencia,
MSc, MSc, DSc
Docente de Parasitología
Escuela de Bacteriología y Laboratorio Clínico
Universidad del Valle
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• Distribución cosmopolita
• Reportado en humanos, otros mamíferos (perro, gato, cerdo, vaca, orangután, chimpancé, macacos, mandriles, lémures, cobayos, ratas y otros), aves (gallinas, codornices, faisanes, pavos, gansos y patos, entre otros) y reptiles
• Su pleomorfismo y carecer de técnicas estandarizadas han generado confusión e interpretación errónea de los datos obtenidos y complica el Diagnóstico
Generalidades
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• Mecanismo de reproducción
• Ciclo de vida
• Prevalencia por subtipos
• Papel patogénico
• Datos epidemiológicos, in vivo e in vitro indican que es un patógeno
• Genotipos patógenos y no-patógenos (variación inter e intra subtipos)
Zonas grises en discusión
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• Reino Chromista • Sub-reino Chromobiota
• Infra-reino Heterokonta (Stramenopiles) - protistos “botánicos” heterótrofos y autótrofos.
• Sub-filo Opalinata • Clase Blastocystea • Blastocystis sp
Estudios filogenéticos usando genes homólogos muestran que, por distancia genética, Blastocystis sp. de humanos y
animales podría separarse en 12 o más especies
Clasificación actual
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• Variación entre regiones
• Países en desarrollo con mayor prevalencia - hasta >60%
• Países desarrollados - hasta >20%
• Asociado a:
• pobre higiene
• exposición a animales
• consumo de agua o alimentos contaminados
Prevalencia
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Algunas prevalencias
– Japón (0.5 to 1%)
– USA
– 2.6% 1989
– 23% 2000
– 11% 2004
• Indonesia (60%)
• Tailandia (0.19 a 45.2%)
• Brasil (40.9%)
• Cuba (38.5%)
• Egipto (33.3%)
• China (1.9 a 32.6%)
• Venezuela (29,2%)
• Argentina (27.2%)
• Malasia (25·7%)
• Turquia (1.04 a 18.3%)
• Singapur (3.3%)
–Armenia 6.1%
–Medellin 41.8%
–Calarcá 36.4%
Turistas en Nepal: 30%
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• PCR-RFLP (ssrRNA) - (riboprints) - (ribodemes)
• PCR + secuenciación didesoxi
• PCR + primers subtipo-específicos (STS)
• PCR-SSCP
• PCR con primers arbitrarios
• Cariotipificación
Al menos 13 Genotipos
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Genotipos en diferentes regiones
Subtipos 10 (primates y artiodactilos), 11 a 13 (animales de zoológico)
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• Modo de Transmisión: Fecal-Oral
• Agua
• Alimentos
• Manos
• Síntomas: Dx Sintómatico muy difícil por la inespecificidad y el amplio de los Sx.
Mecanismo de transmisión
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Características observables de las formas de Blastocystis
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Morfología: forma de vacuola central o cuerpo central – la más frecuente en cultivo y materia fecal – Usualmente hasta
4 núcleos
Vacuolar: 2 a 200 μm (media 4 a 15 μm)
MET
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Morfología: forma granular – parecida a la vacuolar pero contiene granulos en su citoplasma o con mayor frecuencia en
la vacuola central. Usualmente hasta 4 núcleos
MET
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Morfología: ameboide – raramente reportada – patogenesis - 2.6 a 7.8 µm
MET
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Morfología: Quiste – última descrita por su pequeño tamaño (2 a 5 μm) – 1 o 2 núcleos
Sobreviven en agua un mes a 25º y 2 meses a 4º
Susceptibles a Tº extremas y a los desinfectantes comunes
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• El pequeño tamaño y su morfología pueden deberse a variaciones en las cepas o son estadios intermedios en el proceso de formación de los quistes o de su desenquistamiento
Morfología: avacuolar y multivacuolar - MET de materia fecal fresca - 5 a 8 µm
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Varios observados en cultivo
Fisión binaria observada además en materia fecal
Algunos solo aceptan está última como el mecanismo de reproducción de Blastocystis
Mecanismos de reproducción
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Fisión binaria y múltiple
Endodiogenia y Plasmotomia
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Ciclo de vida
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Genotipos y hospederos principales
• Mamíferos y cerdos:
• Primates y cerdos:
• Humanos:
• Roedores:
• Ganado y cerdos:
• Aves:
• Monos, faisanes y humanos:
• Humanos:
• Subtipo 1
• Subtipo 2
• Subtipo 3 (más frecuente)
• Subtipo 4
• Subtipo 5
• Subtipos 6 y 7
• Subtipo 8
• Subtipo 9
Subtipos 8 y 9 más cerca de los subtipos 4 y 6, respectivamente
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• Mamíferos: subtipo 1 Sinto y Asintomático
• Primates y cerdos: subtipo 2 Sinto y Asintomático
• Humanos: subtipo 3 (más frecuente) Sinto y Asintomático
• Roedores: subtipo 4 Sintomático
• Ganado y cerdos: subtipo 5
• Aves: subtipos 6 y 7 Sinto y Asintomático
• Subtipos 8 y 9 (cercanos a subtipos 4 y 6, respectivamente) Un caso de Sx con el 8
Genotipos hallados en humanos
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Genotipos y patogenicidad
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Sub-tipos 3 y 1: SCI, EIC y diarrea crónica
Sub-tipo 3: rash y urticaria
Sub-tipo 2: urticaria
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Colombia: ST1, ST2 y ST3
Italia: pacientes sintomáticos
ST3 (47.1%)
ST2 (20.6%)
ST4 (17.7%) *España
ST1 (8.8%) **Tailandia
ST7 (2.9%) ***Japón, China, Egipto
ST8 (2.9%)
ST5
Francia
ST1 (25.6%)
ST2 (9.3%)
ST3 (53,3%)
ST4 (9.3%)
ST7 (2.3%)
Es probable que 2-15% infecciones sean mixtas
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• Usualmente asintomáticos
Depende genotipo del parásito, carga parasitaria y estado inmune del hospedero
En sintomáticos: auto-limitada, dura entre 1 y 14 días
Presentación clínica de la infección con Blastocystis spp
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• Diarrea acuosa (meses) Nauseas
• Dolor abdominal/cólicos Anorexia
• Prurito perianal (picazón) Distención
• Exceso de flatulencia Urticaria
• Leucocitos fecales Eosinofilia
• Pérdida de peso
Signos y Síntomas
Diarrea crónica leve o gastroenteritis aguda
Corrisis alcohólica y hepatitis B crónica
Proctosigmoidoitis hemorrágica (VIH) y artritis séptica (artritis reumatoidea)
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Síndrome de Colon Irritable
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• Cada vez hay más reportes
Propensión a ser colonizados por Blastocystis
Mayor carga parasitaria
Aislado con mayor frecuencia en ptes con SCI que en controles
• Serológicamente: • mayor nivel de IgG2 vs. Blastocystis en SCI positivos,
comparados con controles
• Positivos y negativos para Blastocystis en heces
Asociación con Síndrome de colon irritable
Paquistán: SCI con ST1
Turquía: SCI y EIC con ST3
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• Neurológicas: Fatiga, Depresión, cefalea
• Lesiones cutáneas: urticaria crónica, aguda (asociada a formas ameboides del subtipo 3) y tardía por presión, Prurito palmoplantar
• Inflamatorias: Rash cutáneo, dolor articular
• Angioedema
Otras manifestaciones extraintestinales
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Patología
• No invasivo
• No toxinas
• In vitro:
• Modulación de la RI – producción de IL-8
• Efecto apoptótico por contacto
• Cistein y aspartil proteasas que degradan IgA (subtipos 7 y 4)
• Casos y controles
• Tratamiento = mejoría y erradicación
• Metronidazol
• 35 of 40 (88%) con Tx
• Curación clínical y negativos parasitológicamente
• Un caso sin Tx (3%)
• Nitazoxanida
• TMP-SMX
Potencial patógeno emergente
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Resultado del tratamiento
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Modelos animales
• Ratas
• Aislados de pacientes sintomático – patología severa
• Aislados de asintomáticos – patología leve
• Subtipo 1: patógeno
• Subtipos 3 y 4: patógenos y no patógenos
• Pollos
• Ratones
• Cobayos
• 10 a 100 quistes dan inicio a infección
• Diarrea
• Hiperemia cecal
• Inflamación colónica
• Desprendimiento de mucosa
• Mortalidad en ratas (ST1)
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Células inflamatorias
Modelo de patogenicidad para Blastocystis
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Diagnóstico MICROSCÓPICO
• Cultivo de corto término (24 a 72 horas)
• Cultivo Xénico o monoxénico • Jones
• Solución de Locke-huevo-suero de caballo (Boeck y Drbohlav)
• Agar difásico
• Medio de Robinson
Cultivo axénico • Medio Dulbecco modif. Por
Iscove
• Medium esencial mínimo
• Medio bifásico de huevo y sln de Locke
• 6 a 23 h
• 50 h para los de origen aviar
• 4 días a 2 semanas para medio sólido
• Axenización (estudios moleculares y bioquímicos) - de 3 semanas a meses
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Comportamiento de aislados en cultivo:
Aislados de ptes asintomáticos
Menor rango de tamaño
Abundantes formas granularres
Tiempo de duplicación menor
Aislados de ptes sintomáticos
Mayor rango de tamaño
Abundantes formas ameboides
Multiplicación más lenta
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Otras técnicas para Dx directo
Tricrómica y Hematoxilina Férrica (Giemsa)
• Seriado en salina y lugol
• Gradiente de densidad Ficoll
Formol – éter
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Forma vacuolada
encapsulada, tamaño
12 μm.
Tinta China: cápsula,
8 µm
Tinta china modificada
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Diagnóstico SEROLÓGICO, MOLECULAR Y REPORTE
• ELISA e IFA – IgG e IgA
• Títulos altos asociados a cuadro clínico
• No recomendado por variación antigénica
• PCR
• PCR – secuenciación didesoxi
• Anidada para regiones intragénicas
• PCR-RFLP – ssu-rDNA
• DOT-ELISA • Pirosecuenciación de alto
rendimiento • RAPD – STS • PCR-SSCP • PCR en tiempo real
• Informar • Blastocystis spp • Blastocystis spp subtipo n • [carga parasitaria
• >5 parásitos/campo 400X o 1000X]
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Tratamiento
Emetina, arsenicales Stovarsol (acetarsona) y Narsonal
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Vacuola central en salina y lugol
http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/html/Blastocystis.htm
http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/html/Blastocystis.htm
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http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#1 http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#2
http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#3
![Page 45: Blastocystis spp y su papel patogénico - Colbav .:. Colegio de …colbav.com/wp-content/uploads/2012/09/Blastocystis... · 2013-02-06 · estadios intermedios en el proceso de formación](https://reader031.vdocumento.com/reader031/viewer/2022021515/5b1c75c17f8b9a1925901535/html5/thumbnails/45.jpg)
Vacuola central en lugol y Giemsa
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Granular en salina
http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php
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http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#8 http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#7
http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#9 http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/html/Blastocystis.htm
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![Page 49: Blastocystis spp y su papel patogénico - Colbav .:. Colegio de …colbav.com/wp-content/uploads/2012/09/Blastocystis... · 2013-02-06 · estadios intermedios en el proceso de formación](https://reader031.vdocumento.com/reader031/viewer/2022021515/5b1c75c17f8b9a1925901535/html5/thumbnails/49.jpg)
http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#4 http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#5
http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#6
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Quiste en cultivo
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• Las vacuolas tiñen de rojo a azul.
Blastocystis sp estructuras teñidas con tricrómica
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