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ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI 2010
Detección de Resistencia en
Bacterias Gram negativas
María Victoria Ovalle
Bacterióloga
![Page 2: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/2.jpg)
Mecanismo de Resistencia a los antibióticos β lactámicos
� Impermeabilidad: porinas
�Bombas de Eflujo
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Mecanismo de Resistencia a los antibióticos β lactámicos
�PBP: Poco usual
�Producción de enzimas: Más común
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Resistencia Natural
Germen R. Natural R. Inusual
E. coli -- Col, Imi, Me
Klebsiella spp Amp, Ti Col, Imi, Me
Proteus mirabilis Col, Te, C Imi, Me
Proteus vulgaris
Col, C1G, Te, Amp,
CXM Imi, Me
Enterobacter spp Amp, FOX, AMC,C1G Col, Imi, Me
Serratia spp
Amp, AMS, C,CXM,
C1G Imi, Me
![Page 5: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/5.jpg)
β lactamasas
Las β-lactamasas son enzimas catalíticas
que rompen el enlace amídico del anillo
betalactámico haciendo que el
antibiótico pierda su capacidad para
unirse a las proteínas de unión a la
penicilina y su acción bactericida
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Clasificación de β lactamasas
Clase Molecular
Bush-Jacoby -Medeiros
(2009) Substrato
Inhibido
por
AC ó TZ
Inhibido
por
EDTA
A (serina
penicilinasa)
2a Penicilina Si No
2b
Penicilina y cefalosporinas de corto
espectro Si No
2be
Penicilina y cefalosporinas de espectro
corto y espectro extendido Si No
2br Penicilina No No
2ber
Cefalosporinas de espectro extendido,
monobactam No No
2c Carbecilina Si No
2ce Carbecilina, Cefepime Si No
2e Cefalosporinas de espectro extendido Si No
2f Carbapenemes Variable No
B (metalo β-
lactamasas
3a Carbapenemes No Si
3b Carbapenemes No Si
C (cefalosporinasas)
1 Cefalosporinas No No
1e Cefalosporinas No No
D (oxacilinasas)
2d Cloxacilina Variable No
2de Cefalosporinas de espectro extendido Variable No
2df Carbapenemes Variable No
No clasificadas 4
Karen Bush* and George A. Jacoby.Antimicrob agents and chemotherapy.2010, 54 (3); 969–976
![Page 7: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/7.jpg)
β-lactamasas de espectro ampliado (grupo 2b) (Enzimas TEM-1,TEM-2 y SHV-1)
� Hidrolizan la penicilina y ampicilina y en menor grado
a carbecilina ó cefalotina.
� No son capaces de hidrolizar las cefalosporinas o
aztreonam y son inhibidas por el acido clavulánico.
![Page 8: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/8.jpg)
β-lactamasas de espectro extendido - BLEE Clase A(2be) Enzimas: (SHV-2 a SHV-6, TEM-3 a TEM-26, CTX-M)
� Las BLEE derivadas de TEM-1, TEM-2 ó SHV-1 difieren
en aa.
� Hidrolizan cefalosporinas de amplio espectro, de
tercera generación, antibióticos monobactámicos y
puedan ser inhibidas por el acido clavulánico
![Page 9: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/9.jpg)
β-lactamasas de espectro extendido - BLEE
CLSI
Según PK/PD se establecieron nuevos criterios de
interpretación para cefalosporinas
Antimicrobiano
Criterios de Interpretación
CLSI 2010
Criterios de Interpretación
CLSI 2009
Difusión en disco
(mm)
Concentración
Inhibitoria Mínima
µg/mL
Difusión en disco
(mm)
Concentración
Inhibitoria Mínima
µg/mL
S I R S I R S I R S I R
Cefotaxima ≥ 26 23-25 ≤ 22 ≤ 1 2 ≥ 4 ≥ 23 15-22 ≤ 14 ≤ 8 16-32 ≥ 64
Cefriaxona ≥ 23 20-22 ≤ 19 ≤ 1 2 ≥ 4 ≥ 21 14-20 ≤ 13 ≤ 8 16-32 ≥ 64
Ceftazidima ≥ 21 18-20 ≤ 17 ≤ 4 8 ≥ 16 ≥ 18 15-17 ≤ 14 ≤ 8 16 ≥ 32
Ceftizoxima ≥ 25 22-24 ≤ 21 ≤ 1 2 ≥ 4 ≥ 20 15-19 ≤ 14 ≤ 8 16-32 ≥ 64
Aztreonam ≥ 21 18-20 ≤ 17 ≤ 4 8 ≥16 ≥ 22 16-21 ≤ 15 ≤ 8 16 ≥ 32
![Page 10: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/10.jpg)
Equipos automatizados Vs nuevos criterios
Laboratorio Universidad Nacional de ColombiaLaboratorio Universidad Nacional de Colombia
Antimicrobiano
Criterios Interpretación
Diluciones Concentración Inhibitoria Mínima
µg/mL
Vitek MicroScan Phoenix
Cefotaxima 1,4,16,32 2,8,16,32 4,8,16,32
Ceftazidima 1,2,8,32 1,4,8,16 0,5, 1,2
Antimicrobiano
Concentración
Inhibitoria Mínima
µg/mL
Concentración Inhibitoria
Mínima µg/mL
CLSI 2009 CLSI 2010
S I R S I R
Cefotaxima ≤ 8 16-32 ≥ 64 ≤ 1 2 ≥ 4
Ceftazidima ≤ 8 16 ≥ 32 ≤ 4 8 ≥ 16
![Page 11: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/11.jpg)
Equipos automatizados Vs nuevos criterios
Laboratorio Universidad Nacional de ColombiaLaboratorio Universidad Nacional de Colombia
Antimicrobiano
Criterios Interpretación
Diluciones Concentración Inhibitoria Mínima
µg/mL
Vitek MicroScan Phoenix
Cefotaxima 1,4,16,32 2,8,16,32 4,8,16,32
Ceftazidima 1,2,8,32 1,4,8,16 0,5, 1,2
Antimicrobiano
Concentración
Inhibitoria Mínima
µg/mL
Concentración Inhibitoria
Mínima µg/mL
CLSI 2009 CLSI 2010
S I R S I R
Cefotaxima ≤ 8 16-32 ≥ 64 ≤ 1 2 ≥ 4
Ceftazidima ≤ 8 16 ≥ 32 ≤ 4 8 ≥ 16
![Page 12: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/12.jpg)
Equipos automatizados Vs nuevos criterios
Laboratorio Universidad Nacional de ColombiaLaboratorio Universidad Nacional de Colombia
Antimicrobiano
Criterios Interpretación
Diluciones Concentración Inhibitoria Mínima
µg/mL
Vitek MicroScan Phoenix
Cefotaxima 1,4,16,32 2,8,16,32 4,8,16,32
Ceftazidima 1,2,8,32 1,4,8,16 0,5, 1,2
Cefriaxona 2,4,8,16,32
Antimicrobiano
Concentración
Inhibitoria Mínima
µg/mL
Concentración Inhibitoria
Mínima µg/mL
CLSI 2009 CLSI 2010
S I R S I R
Cefotaxima ≤ 8 16-32 ≥ 64 ≤ 1 2 ≥ 4
Ceftazidima ≤ 8 16 ≥ 32 ≤ 4 8 ≥ 16
![Page 13: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/13.jpg)
β lactamasas de espectro extendido
CLSI
� Cuando se usan los nuevos criterios de
interpretación, la prueba de rutina de BLEE no es
necesaria realizarla. (No se editan resultados).
� Sin embargo hasta que el laboratorio implemente
los nuevos criterios, la prueba de BLEE puede ser
realizada como recomienda CLSI.
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Detección de BLEE por el LaboratorioTamizaje ResultadosCeftriaxona 30µg ≤≤≤≤ 25 mmCefotaxima 30µg ≤≤≤≤ 27 mmCeftazidima 30µg ≤≤≤≤ 22 mmAztreonam 30µg ≤≤≤≤ 27 mm
Sospecha de BLEE
Test Confirmatorio ResultadoCeftazidima 30µgCeftazidima + AC 30/10µg
≥≥≥≥ 5 mm BLEECefotaxima 30µgCefotaxima + AC 30/10µg
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Detección de BLEE por el LaboratorioTamizaje ResultadosCeftriaxona 1µg/mL ≥ 2 µg/mLCefotaxima 1µg/mL ≥ 2 µg/mLCeftazidima 1µg/mL ≥ 2 µg/mLAztreonam 1µg/mL ≥ 2 µg/mLCefpodoxima 4µg/mL ≥ 8 µg/mL
Sospecha de BLEE
Test Confirmatorio ResultadoCeftazidima 0.25-64µg/mLCeftazidima + AC 0.25/4-64/4µg/mL 3 ó más Dlnes
BLEECefotaxima 0.25-128µg/mLCefotaxima + AC 0.25/4-128/4µg/mL
![Page 16: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/16.jpg)
Detección de BLEE por el Laboratorio
Laboratorio Universidad Nacional de Colombia
Laboratorio Universidad Nacional de Colombia
![Page 17: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/17.jpg)
Otras Pruebas para la detección de BLEE por el Laboratorio
Prueba Doble Disco
Laboratorio Universidad Nacional de Colombia
![Page 18: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/18.jpg)
Otras Pruebas para la detección de BLEE por el Laboratorio
Prueba E test
Laboratorio Universidad Nacional de ColombiaLaboratorio Universidad Nacional de Colombia
![Page 19: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/19.jpg)
β-lactamasas AmpC Clase C (grupo 1) Enzimas AmpC: CMY-2, ACT-1, FOX
� También conocidas como cefalosporinasas
� Codificadas en cromosoma y unas pocas en plásmidos.
� Estas enzimas no son inhibidas por ácido clavulánico
� Son activas frente a cefalosporinas , cefamicinas,
aztreonam e Inhibidores
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β-lactamasas AmpC Clase C (grupo 1) Enzimas: AmpC, CMY-2, ACT-1
� AmpC cromosómica Inducible:
- Bajos niveles de AmpC -Inducción β lactámicos
- Hiperproducción AmpC Ej Enterobacter spp
AmpC cromosómica no inducible:
- Niveles bajos -Hiperproducción AmpC Ej E. coli
� AmpC Plasmídica: R variable al Azt Ej K. pneum
![Page 21: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/21.jpg)
Detección de AmpC por el Laboratorio
CLSI no tiene estandarizada la detección de AmpC
por el Laboratorio.
Prueba de Disco para AmpC
� Disco EDTA liberación de β lactamasa
� Disco de FOX
� E. coli ATCC 25922
� Sensibilidad 100%, especificidad 98%
Black J et al. J Clin Microbiol. 43:3110-3113.
![Page 22: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/22.jpg)
Detección de AmpC por el Laboratorio
Test Tridimensional� Cultivo en caldo a partir
de 0.5 McFarland
� Concentración de células
� E. coli ATCC 25922
� Disco FOX
� Hendidura en el agarCoudron P, et al. J Clin Microbiol. 38:1791-1796.
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Detección de AmpC por el Laboratorio
Prueba con Agar suplementado con FOX� Agar con FOX diferentes
concentraciones
�Extracto celular
�E. coli ATCC 25922
� Pozo con extracto celular
Nasim K, Et all. J Clin Microbiol. 2004 Oct;42(10):4799-802.
![Page 24: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/24.jpg)
Detección de AmpC por el Laboratorio
Prueba con acido borónico
� Acido borónico entre CTX y CAZ
Resultado: Sinergia
Beesley et al
� CAZ, CTX y CAZ/APB, CTX/APB
Resultado positivo: Ampliación del halo +5mm
Pasteran et al
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CASO No.1
Paciente varón de 78 años con litiasis biliar y colecistectomía, ha presentado varios
episodios de colangitis (Infección del conducto colédoco).
Acude a urgencias con fiebre de 3 días de evolución. Se tomó hemocultivo y líquido biliar
para cultivo, de los cuales se aisló E. coli.
El antibiograma por el laboratorio arrojo los siguientes resultados:
REPORTE DE LABORATORIO
Antibiótico Interpretación
Cefazolina R
Ceftazidima R
Cefotaxima I
Cefepime S
Aztreonam I
Piperacilina I
Imipenem S
Meropenem S
1. Que mecanismo de resistencia puede presentar el microorganismo?
Que prueba haría para confirmarlo?
![Page 26: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/26.jpg)
CASO No.1Respuesta No.1
El resultado del antibiograma sugiere una resistencia a
cefalosporinas de I y III generación y resistencia a
monobactam, lo cual podría generar sospecha de la
presencia de betalactamasas de espectro extendido ó
AmpC.
Se realizaría la prueba confirmatoria de BLEE
recomendada por CLSI.
![Page 27: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/27.jpg)
CASO No.1
La prueba confirmatoria de BLEE dio el siguiente resultado:
2. Como interpretaría esta prueba y que mecanismo de resistencia está
implicado en este caso?
3. Que pruebas adicionales podría utilizar en el laboratorio para confirmar
este mecanismo?
![Page 28: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/28.jpg)
CASO No.1Respuesta No.2 y 3
RESPUESTA 2. Al realizar la prueba tamiz de BLEE y
observar que no amplia con acido clavulánico, podría
sugerir la presencia de AmpC.
RESPUESTA 3. Podría realizarse si el laboratorio lo desea la
prueba de disco AmpC, test tridimensional, disco con
acido borónico.
Probar la resistencia a cefoxitin, ya que es predictor de
AmpC.
![Page 29: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/29.jpg)
Detección de Metalo β-lactamasas Clase B (grupo 3) Enzimas: IMP-1,VIM-1,CcrA, BcII , GIM
� Denominadas metalo β-lactamasas (MBLs)
� Hidrolizan carbapenemes, β lactámicos y los
inhibidores de β-lactámicos como acido
clavulánico y tazobactam. No aztreonam
� Susceptible a la inhibición de agentes quelantes
como EDTA, acido mercaptoacético y acido
mercaptopropiónico (MPA).
� Dependiente de Zinc
![Page 30: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/30.jpg)
Detección de metalo β lactamasas por el Laboratorio
CLSI no tiene estandarizada la detección
de metalo β lactamasas por el
Laboratorio.
E test� Tira con Imipenem e Imipenem/EDTA
� Reducción ≥3 diluciones en presencia de
EDTA es positivo para MBLs
� Falsos positivos P.aeruginosa
y A. baumannii
Timothy R. Walsh,et al. J Clin Microb. 20025. 40(8): 2755-2759
![Page 31: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/31.jpg)
Detección de metalo β lactamasas por el Laboratorio
Prueba de Sinergismo
� Suspensión del microorganismo
0.5 McFarland
� Dos discos de imipenem y
meropenem
� Se adiciona EDTA
� Varios agentes quelantes
� SinergiaSanchez A, et al. Rev Esp Quinioterap. 2004;17(4):336-340.
![Page 32: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/32.jpg)
Detección de β lactamasas tipo Oxacilinasa Clase D (grupo 2d) OXA-1, OXA-10
� Las β-lactamasas tipo OXA son enzimas dependientes
de serina.
� β-lactamasas de espectro amplio: penicilinas y
cefalosporinas
� β-lactamasas con espectro de hidrólisis expandido:
cefalosporinas de espectro extendido y carbapenemes
� No son inhibidas por el Ac. Clavulánico
� Inhibidas por NaCl
![Page 33: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/33.jpg)
Detección de β lactamasas tipo Oxacilinasa por el Laboratorio
CLSI no tiene estandarizada la detección de β
lactamasas tipo OXA por el Laboratorio
Literatura recomienda análisis
espectrofotométricos con extractos celulares
en presencia de NaCl.
Pruebas Moleculares
![Page 34: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/34.jpg)
Como reconozco?
BLEE
� Neta R a cefalotina
� Sensibilidad Imi, Mer
� Amplia con acido clavulánico
� Sensible a FOX
� Afecta la CIM de penicilina, C1,2, 3 y 4G y Azt
![Page 35: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/35.jpg)
Como reconozco?AmpC
�Neta R a cefalotina
� Sensibilidad Imi, Mer
� Resistencia ó sensibilidad disminuída a FOX
� CIM de Aztreonam y C3G (nivel bajo de R)
� C4G sensible
![Page 36: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/36.jpg)
Detección de β lactamasas tipo Carbapenemasas Clase A (grupo 2f) Enzimas: IMI, SME y KPC
� Enzimas que hidrolizan carbapenemes,
cefalosporinas, penicilinas y aztreonam.
� Son inhibidas por el clavulánico y tazobactam.
� Se encuentran en Enterobacter cloacae,
Serratia marcescens y K. pneumoniae.
� También en no fermentadores como P.
aeruginosa.
![Page 37: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/37.jpg)
Detección de β lactamasas tipo Carbapenemasas Clase A (grupo 2f) Enzimas: IMI, SME y KPC
� Sistemas automatizados presentan
limitaciones en la detección de
carbapenemasas
� Imipenem es afectado por el inóculo
![Page 38: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/38.jpg)
Detección de β lactamasas tipo Carbapenemasas Clase A (grupo 2f) Enzimas: IMI, SME y KPC
CLSI
Enterobacterias resistentes a una ó más
cefalosporinas de III generación (CIM elevada ó
reducida zona inhibición a carbapenemes)
“puede ser un aislamiento productor de
carbapenemasa”, a pesar de estar dentro del
rango de susceptible
![Page 39: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/39.jpg)
Detección de β lactamasas tipo Carbapenemasas Clase A (grupo 2f) Enzimas: IMI, SME y KPC
Antibiótico Difusión en disco(mm)
Microdilución en caldo
(µg/mL)
Imipenem -- 2-4
Meropenem 16-21 2-4
Ertapenem 19-21 2
Prueba tamiz
![Page 40: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/40.jpg)
Detección de β lactamasas tipo carbapenemasas por el Laboratorio
� Prueba Confirmatoria “Test de Hodge”
� E. coli ATCC 25922
� Disco ertapenem ó meropenem
� Estría del microorganismo
Laboratorio de Microbiología Universidad Nacional
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Detección de β lactamasas tipo carbapenemasas por el Laboratorio
CLSI REPORTE POR EL LABORATORIO
Los aislamientos positivos con el Test de Hodge pero
susceptibles a carbapenemes:
� Reportar CIM de los carbapenemes sin interpretación “Estos
aislamientos demostraron producción de carbapenemasas. La
eficacia clínica de los carbapenemes no ha sido establecida
para el tratamiento de infecciones causadas por
Enterobacteriaceae donde las pruebas para carbapenemes
(ertapenem ≤2µg/mL, meropenem e imipenem ≤4µg/mL)
fueron sensibles, pero demostraron producción de
carbapenemasa in vivo”
![Page 42: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/42.jpg)
Detección de β lactamasas tipo carbapenemasas por el Laboratorio
CLSI REPORTE POR EL LABORATORIO
Los aislamientos negativos con el Test de
Hodge:
� Reportar el dato de la CIM de los
carbapenemes de acuerdo a los criterios de
interpretación de CLSI.
![Page 43: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/43.jpg)
Otras Pruebas para la detección de β lactamasas tipo carbapenemasas por el Laboratorio
Prueba sinergismo con doble disco y acido borónico
� Suspensión del microorganismo al 0.5 McFarland
� Discos de imipenem, meropenem ó ertapenem y acido
borónico
� Sinergia
Pasteran F, et al. J. Clin. Microbiol. 2009 June47( 6):1631-1639
![Page 44: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/44.jpg)
Otras Pruebas para la detección de β lactamasas tipo carbapenemasas por el Laboratorio
Prueba con acido borónico
� Suspensión del microorganismo al 0.5 McFarland
� Discos de imipenem, meropenem ó ertapenem
� Acido borónico inhibidor reversible de enzima KPC
� Incremento ≥5mm
Pasteran F, J. Clin. Microbiol. 2009 June47(6):1631 -163
![Page 45: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/45.jpg)
CASO No.2Mujer de 45 años, VIH-positiva, fue ingresada por absceso del tubo ovárico. Durante el
procedimiento quirúrgico se tomó muestra del líquido peritoneal y se aislaron 2 fenotipos
de Klebsiella pneumoniae. Al realizar las pruebas de susceptibilidad por difusión en disco
se obtuvo el siguiente reporte para los dos fenotipos:
1. Que le sugieren a usted los resultados del antibiograma para los dos reportes?
2. Se requiere una prueba confirmatoria para el reporte No.1? En caso de ser una respuesta positiva
cual prueba realizaría para confirmarlo?
3. Se requiere una prueba confirmatoria para el reporte No.2? En caso de ser una respuesta positiva
cual prueba realizaría para confirmarlo?
REPORTE DE LABORATORIO
Aislamiento No 1
Antibiótico (mm)/Interpretación
Ceftazidima 15(R )
Cefotaxima 19 (R )
Cefepime 12( R)
Ceftriaxona 16(R)
Imipenem 21 (S)
Meropenem 18 (S)
Ertapenem 19 (S)
REPORTE DE LABORATORIO
Aislamiento No.2
Antibiótico Interpretación
Ceftazidima 15 (R )
Cefotaxima 19 (R )
Cefepime 12( R)
Ceftriaxona 16(R)
Imipenem 6 (R )
Meropenem 8 (R )
Ertapenem 10 (R )
![Page 46: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/46.jpg)
CASO No.2Respuesta No.1, 2 y 3
RESPUESTA 1. El reporte 1, se observa sensibilidad a carbapenemes, de acuerdo a los
rangos sugeridos por CLSI como sospechosos de carbapenemasa, debemos sospechar de la
presencia de una carbapenemasa
El reporte 2, de acuerdo a los halos de los carbapenemes se observa una franca resistencia.
Las carbapenemasas son enzimas capaces de hidrolizar todos los antibióticos beta-
lactámicos incluyendo carbapenemas como imipenem, meropenem y ertapenem.
RESPUESTA 2. Si se requiere una prueba confirmatoria ya que los halos sugieren una
sospecha de carbapenemasa. Se realizaría la prueba de Hodge.
RESPUESTA 3. No se requiere una prueba confirmatoria porque CLSI recomienda “No es
necesario probar un aislamiento para carbapenemes realizando el test de Hodge, cuando
todos los carbapenemes reportados por el laboratorio son intermedios o resistentes.
![Page 47: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/47.jpg)
CASO No.2El laboratorio realizo la prueba de Hodge para el aislamiento 1(C)
obteniéndose el siguiente resultado
1.Control Negativo
2.Control Positivo
3.Aislamiento estudiado
4. Como reportaría el aislamiento 1 y 2 al clínico? Realizaría algún cambio en
el reporte?
![Page 48: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/48.jpg)
CASO No.2Respuesta No.4
RESPUESTA 4. El reporte 1 da una prueba de Hodge positiva. Se
reportan los carbapenemes sin la interpretación con el siguiente
comentario:
“ Este aislamiento demuestra producción de carbapenemasas. La
eficacia clínica de los carbapenemes no ha sido establecida para el
tratamiento de infecciones causadas por Enterobacteriaceae donde
las pruebas para carbapenemes (ertapenem ≤2µg/mL, meropenem
e imipenem ≤4µg/mL) fueron sensibles, pero demostraron
producción de carbapenemasa in vivo”
Para el reporte 2 se debe informar las CIM de los carbapenemes con
la interpretación de criterios de acuerdo a CLSI.
![Page 49: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/49.jpg)
Resistencia a Quinolonas
Mecanismo de acción
� Ingreso a la célula: Porinas
� Sitio de acción: DNA girasa (Gram neg)
Topoisomerasa IV (Gram pos)
� Efecto: Cambio en el enrollamiento DNA
Mecanismo de Resistencia
� Alteración sitio blanco del AB
� Reducción permeabilidad
� Eflujo
![Page 50: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/50.jpg)
Detección de Resistencia a Quinolonas
CLSI
Aislamientos de Salmonella spp susceptibles a
fluoroquinolonas y con una prueba a acido nalidixico
resistente pueden estar asociados con fracaso clínico ó
respuesta tardía en pacientes tratados con fluoroquinolonas
con salmonelosis extrainstestinal. “aislamientos
extraintestinales de Salmonella extraintestinal pueden ser
probados para determinar resistencia a acido nalidixico”
![Page 51: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/51.jpg)
Resistencia en Pseudomonas aeruginosa
Mecanismo de Resistencia
� Impermeabilidad (OprD)
� Bombas de eflujo: MEXAB-OprM (R a mer)
β lactámicos, C, quinol, Te, SXT
MEXXY-OprM (S a mer)
Resistencia en P. aeruginosa
� BLEE (PSE) R Tic y Pip
� Carbapenemasas adquiridas (MBLs)
� AmpC
![Page 52: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/52.jpg)
Detección de Resistencia en Psedomonas aeruginosa
CLSI
Retira la recomendación de adicionar un comentario al
reporte en la parte de penicilinas, sugiriendo la adición de un
segundo agente antimicrobiano (ej fluoroquinolona,
aminoglucósidos) para infecciones con P. aeruginosa
![Page 53: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/53.jpg)
Resistencia en Acinetobacter spp
Mecanismo de Resistencia
� Impermeabilidad (CarO)
� Bombas de Eflujo
Resistencia en Acinetobacter
� BLEE (tipo OXA)
� Carbapenemasas (VIM, IMP)
� Cefalosporinasas (CAZ R)
![Page 54: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/54.jpg)
Stenotrophomonas maltophilia
� Patógeno oportunista
� Brotes Hospitalarios
� Uso de AB de amplio espectro
![Page 55: ACTUALIZACION EN RESISTENCIA BACTERIANA Y NORMAS CLSI …saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica... · 2010-06-29 · Aztreonam ≥21 18-20 ≤17 ≤4 8 ≥16 ≥22 16-21](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022042108/5e8851369a004e1d780f15c8/html5/thumbnails/55.jpg)
Resistencia en Stenotrophomonas maltophilia
Mecanismo de Resistencia
� Impermeabilidad
� Bombas de eflujo
Resistencia en Stenotrophomonas maltophilia
� β lactamasas inducibleL1: R a amp, R Inh β lactámicos,
R carbap, S aztreonam
� β lactamasas L2 inducible: R a amp y azt, S a carbap e
inh β lactámicos